miR-23b-3p靶向PALM3对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的研究miR-23b-3p对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症的作用及机制。方法将肺泡上皮细胞A549细胞分为对照组、感染组、转染组、感染组+转染组;对照组A549细胞常规培养,感染组用1×108 CFU/mL肺炎链球菌培养A549细胞,转染组转染不同载体,感染组+转染组在A549细胞被肺炎链球菌处理前48h进行转染。qRT-PCR检测细胞中miR-23b-3p和paralemmin-3(PALM3)mRNA的水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中PALM3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax),酶联免疫法(ELISA)检测肺炎链球菌诱导后细胞培养上清中白介素-6(interleukin 6,IL-6)和白介素-10(interleukin 10,IL-10)的含量;双荧光素酶报告系统验证miR-23b-3p与PALM3的关系。结果与对照组相比,感染组A549细胞中miR-23b-3p、IL-10、Bcl-2含量明显降低(P0.05),PALM3、IL-6、Bax水平及细胞凋亡率明显升高(P0.05);过表达miR-23b-3p和干扰PALM3表达均可抑制肺炎链球菌诱导的A549细胞凋亡和炎症;miR-23b-3p靶向负调控PALM3的表达;过表达PALM3逆转了过表达miR-23b-3p对肺炎链球菌诱导的A549细胞凋亡和炎症的作用。结论 miR-23b-3p靶向PALM3抑制肺炎链球菌诱导的A549炎症和细胞凋亡。     

miR-24-3p靶向CHD5影响甲状腺癌细胞迁移能力、侵袭能力和放射敏感性

目的 探讨miR-24-3p调控染色体质域解螺旋酶DNA结合蛋白5(CHD5)表达对甲状腺癌细胞迁移能力、侵袭能力和放射敏感性的影响。方法 选取2018年9月—2020年9月杭州市萧山区第一人民医院首次确诊为甲状腺癌的患者125例,收集其癌组织和癌旁组织（距肿瘤边缘>4 cm）和相关临床病理资料。选取人正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1和人甲状腺癌细胞系KTC1、SW579、TPC-1。检测癌组织、癌旁组织和4种细胞中miR-24-3p、CHD5蛋白的表达。对SW579细胞分别转染miR-24-3p抑制物anti-miR-24-3p(anti-miR-24-3p组)和阴性对照物anti-miR-NC(anti-miR-NC组)、miR-24-3p模拟物miR-24-3p mimics(miR-24-3p mimics组)和阴性对照物miR-NC(miR-NC组)、共转染anti-miR-24-3p和si-NC(anti-miR-24-3p+si-NC组)、共转染anti-miR-24-3p和si-CHD5(anti-miR-24-3p+si-CHD5组)。分析各组细胞的迁移...     

MiR-103a-3p靶向FLOT2调控甲状腺癌细胞增殖、 凋亡的分子机制

目的:研究miR-103a-3p对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:运用RT-q PCR法检测甲状腺癌细胞SW579,FTC-133及人甲状腺上皮细胞TEC中miR-103a-3p、脂筏结构蛋白2(FLOT2)的表达。将miR-NC(miR-NC组)、miR-103a-3p mimics(miR-103a-3p组)、anti-miR-NC(anti-miRNC组)、anti-miR-103a-3p(anti-miR-103a-3p组)、si-NC(si-NC组)、si-FLOT2(si-FLOT2组)、miR-103a-3p+pc DNAmimics(miR-103a-3p+pc DNA组)、miR-103a-3pmimics+pc DNA-FLOT2(miR-103a-3p+pc DNA-FLOT2组)用脂质体法转染至SW579细胞。蛋白质印迹法检测细胞中FLOT2、多肿瘤抑制基因(P16)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶[poly-(ADPr i bose)poly merase,PA R P]、裂解的PA R P(cleaved-PA R P)、半胱天冬酶-3的前体(pro-caspase-3)、裂解的半胱天冬酶3(cleaved-caspase-3)的蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果:与人甲状腺上皮细胞TEC相比,甲状腺癌细胞中miR-103a-3p的表达明显下调,FLOT2的表达明显上调(P0.05);过表达miR-103a-3p、敲减FLOT2均可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡;miR-103a-3p明显抑制野生型FLOT2细胞的荧光活性,且负向调控FLOT2的表达;过表达FLOT 2逆转miR-103a-3p对甲状腺癌细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:miR-103a-3p可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向FLOT2相关,可为甲状腺癌的治疗提供参考。     

circBIRC6靶向miR-449b-5p调控胃癌SUN-1细胞的增殖、细胞周期及凋亡

目的 探讨circBIRC6对胃癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响及可能的作用机制。方法 收集2020年1月至5月武汉科技大学附属孝感医院收治的53例胃癌患者的癌组织及其癌旁组织标本,RT-qPCR法检测胃癌组织、癌旁组织与人胃黏膜细胞GES1、人胃癌细胞SNU-1、AGS、HS-746T中circBIRC6、miR-449b-5p的表达量;以SNU-1细胞为研究对象,随机分组为si-NC组、si-circBIRC6组、miR-NC组、miR-449b-5p组、si-circBIRC6+anti-miR-NC组、si-circBIRC6+anti-miR-449b-5p组;CCK-8法、流式细胞仪分别检测细胞增殖、细胞周期及凋亡率;双荧光素酶报告实验检测miR-449b-5p过表达对野生型载体WT-circBIRC6荧光素酶活性的影响;western blot检测cleaved caspase-3蛋白表达量。结果 与癌旁组织比较,胃癌组织中circBIRC6的表达量升高(P<0.05),miR-449b-5p的表达量降低(P<0.05);与GES1细胞比较,SNU-1、AGS...     

华蟾素通过miR-106a-5p/STAT3信号通路调控肺癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的研究华蟾素对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以0. 15μg/ml华蟾素处理肺癌A549细胞,qRT-PCR和Western blot检测miR-106a-5p和STAT3表达量,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡。转染miR-106a-5p模拟剂(mimic)和STAT3 siRNA至A549细胞中,检测细胞增殖和凋亡。靶基因预测软件预测miR-106a-5p和STAT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-106a-5p抑制剂(inhibitor)和pc DNA-STAT3至A549细胞中,并用0. 15μg/ml华蟾素处理,检测细胞增殖和凋亡。结果华蟾素处理的A549细胞中,miR-106a-5p上调表达,STAT3下调表达,细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高。过表达miR-106a-5p和抑制STAT3的表达,均可提高A549细胞增殖抑制率和凋亡率。双荧光素酶报告基因实验证实miR-106a-5p和STAT3的靶向结合关系。抑制miR-106a-5p或过表达STAT3,可逆转华蟾素对A549细胞的增殖的抑制和凋亡的促进作用。结论华蟾素可抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控miR-106a-5p/STAT3信号通路有关,上述结论可为华蟾素治疗肺癌的分子机制提供新依据。     

miR-15b-5p通过靶向LATS2基因调控 前列腺癌细胞侵袭、迁移以及凋亡的分子机制

目的探讨miR-15b-5p靶向大肿瘤抑制分子(LATS2)基因对前列腺癌PC-3细胞侵袭、迁移及凋亡的影响及机制。方法将anti-miR-15b-5p及anti-miR-15b-5p+si-LATS2(同时抑制miR-15b-5p和LATS2表达)转染前列腺癌PC-3细胞,48 h后,通过qRT-PCR检测miR-15b-5p mRNA表达,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡率。双荧光素酶报告系统检测miR-15b-5p与LATS2的靶向关系。Western blotting检测LATS2、β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达。结果 PC-3细胞转染anti-miR-15b-5p后,miR-15b-5p mRNA表达明显降低,细胞侵袭和迁移能力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P 0. 05)。miR-15b-5p与LATS2存在靶向关系,抑制LATS2表达后可明显减弱anti-miR-15b-5p对PC-3细胞侵袭、迁移、凋亡及β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达的影响(P 0. 05)。结论抑制miR-15b-5p可明显降低前列腺癌PC-3细胞的侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其机制与靶向LATS2抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的〓探讨miR-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法：收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,qRT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中miR-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM 3000 将miR-103a-3p mimic、mimic NC、miR-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,qRT-PCR检测miR-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。 结果：miR-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织（p＜0.01）;qRT-PCR结果显示,转染miR-103a-3p mimic组细胞中miR-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染miR-103a-3p inhibitor 组细胞中miR-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。 结论：miR-103a-3p在肺癌组织中低表达,miR-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-92a-3p靶向同源盒蛋白13对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响

目的 探讨miR-92a-3p靶向同源盒蛋白13(Homeobox protein 13,HOXA13)对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响及其作用机制。方法 实验分组：对照组、高糖组、anti-miR-NC+高糖组、antimiR-92a-3p+高糖组、pcDNA+高糖组、pcDNA-HOXA13+高糖组、anti-miR-92a-3p+si-NC+高糖组、anti-miR-92a-3p+si-HOXA13+高糖组;qRT-PCR法与Western blot法分别检测miR-92a-3p、HOXA13的表达量;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测miR-92a-3p与HOXA13的靶向关系;Western blot法检测Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-12蛋白表达量。结果 与对照组比较,高糖组miR-92a-3p的表达量升高（P <0.05）,HOXA13 mRNA及蛋白水平降低（P <0.05）,细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-12蛋白水平升高（P <0.05）;转染a...     

circ＿0008039调控乳腺癌细胞自噬、增殖及细胞周期机制研究

目的 分析circ＿0008039对乳腺癌细胞自噬、增殖、细胞周期的影响及其机制。方法 选取2018年1月至2019年10月西北妇女儿童医院诊治的30例乳腺癌患者作为研究对象,收集其乳腺癌组织和癌旁组织进行检测。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测乳腺癌组织、癌旁组织中circ＿0008039及微小RNA(miR)-1287-5p表达水平。体外培养健康人乳腺上皮细胞(MCF-10A)与乳腺癌细胞系(SKBR3、BT474、MCF-7、BT-20),分别将si-NC、si-circ＿0008039、si-circ＿0008039、anti-miR-NC、si-circ＿0008039与anti-miR-1287-5p转染至BT-20细胞,按照转染方式的不同分为si-NC组、si-circ＿0008039组、si-circ＿0008039+anti-miR-NC组及si-circ＿0008039+anti-miR-1287-5p组。采用qRT-PCR检测各组细胞中circ＿0008039、miR-1287-5p表达水平;采用CCK-8法检测细胞增殖、吸光度(A),采用流式细胞仪检测...     

lncRNA RPL34-AS1调控miR-670-5p/SMAD4对胃癌细胞生物学行为的影响

目的探讨lncRNA RPL34-AS1对胃癌细胞生物学行为的影响及其对miR-670-5p/SMAD4分子轴的调控作用。方法回顾性收集2018年5月至2019年6月期间临沂市肿瘤医院收治的33例胃癌患者的癌组织及其癌旁组织标本。QRT-PCR检测RPL34-AS1、miR-670-5p的表达量,蛋白质印迹法检测SMAD4表达。体外培养人胃癌细胞HGC-27,实验分组:pc DNA组(转染RPL34-AS1过表达载体的阴性对照)、pc DNA-RPL34-AS1组(转染RPL34-AS1过表达载体)、anti-miR-NC组(转染miR-670-5p特异性寡核苷酸抑制剂的阴性对照)、anti-miR-670-5p组(转染miR-670-5p特异性寡核苷酸抑制剂)、pc DNA-RPL34-AS1+miR-NC组(共转染pc DNA-RPL34-AS1与阴性对照mimic NC序列)、pc DNA-RPL34-AS1+miR-670-5p组(共转染pc DNA-RPL34-AS1与miR-670-5p寡核苷酸模拟物)。MTT与平板克隆形成实验检测细胞增殖与克隆形成数,流式细胞术检测细胞凋...     

miR-22修饰的骨髓间充质干细胞外泌体抑制急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡

目的探讨miR-22修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法扩增培养从SD大鼠骨髓中分离的BMSCs,将携带miR-22重组慢病毒载体及其阴性对照(miR-NC)载体分别转染至BMSCs,并提取转染后BMSCs的外泌体。将60只SD大鼠随机分为Sham组、AMI组、Exo BMSCs组、Exo BMSCs/miR-NC组和Exo BMSCs/miR-22组,每组12只。采用冠状动脉左前降支结扎术构建AMI大鼠模型,于心肌梗死区原位注射外泌体进行干预。干预72 h后,采用超声心动图监测大鼠心脏功能;TTC染色观察大鼠心肌梗死情况;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡水平;qRT-PCR检测心肌组织中miR-22及p53 mRNA表达水平;Western blot检测心肌组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶剪切体(Cleaved-caspase-3)及p53蛋白表达水平。结果与Sham组比较,AMI组大鼠心脏功能明显降低(P <0.05),心肌梗死面积(%:1.16±0.84 vs.38.68±5.31)和心肌细胞凋亡率(%:9.04±1.95 vs.66.70±5.92)明显增加(P <0.05),心肌组织中miR-22和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P <0.05),而p53、Bax和Cleavedcaspase-3等蛋白表达水平明显升高(P <0.05);与AMI组比较,各外泌体干预组大鼠心功能明显改善(P <0.05),心肌梗死面积(%:38.68±5.31 vs.23.54±3.94,22.33±4.12,13.79±2.25)和心肌细胞凋亡率(66.70±5.92 vs.43.73±3.39,42.67±2.87,30.73±2.97)明显降低(P <0.05),心肌组织中miR-22以及Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P <0.05),而p53、Bax和Cleaved-caspase-3等蛋白表达水平明显降低(P <0.05),其中Exo BMSCs/miR-22组大鼠各指标改善情况均优于Exo BMSCs组和Exo BMSCs/miR-NC组。结论 miR-22修饰的BMSCs外泌体可有效抑制p53介导的心肌细胞凋亡,从而改善AMI大鼠的心功能。     

mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药的关系

目的探讨mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药关系。 方法以人非小细胞肺癌细胞系A549及其耐药株A549/DDP为研究对象,采用RT-PCR法检测mir-17-5p、mir-92a及let-7b在细胞中的表达水平,采用cck8检测其细胞存活情况,采用细胞克隆平台方法,检测转染前后细胞的增殖情况,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡情况。 结果（1） A549/DDP细胞mir-17-5p的表达水平是A549细胞的2.11±0.25倍（P＜0.05）;A549/DDP细胞mir-92a的表达水平是A549细胞的 7.40 ± 1.05 倍（P＜0.05）;而A549/DDP 细胞let-7b 的表达水平是A549 细胞的（26.54 ± 2.90）%（P＜0.05）;（2）A549 转染mir-17-5pmimic,mir-92a mimic 以及let-7b inhibitor 后对顺铂的敏感性下降（P＜0.05）;A549/ddp 转染mir-17-5p inhibitor, mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后对顺铂的敏感性增加（P＜0.05）;（3）A549转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor 后,细胞形成克隆集落数量数量多于对照组（P＜0.05）;而A549/ddp 转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor 以及 let-7b mimic 后,细胞形成克隆集落数量数量少于对照组（P＜0.05）;（4）A549 转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic 以及let-7b inhibitor后,细胞凋亡率明显低于对照组（P＜0.05）;而a549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后, 细胞凋亡率明显高于对照组（P＜0.05）。结论Mir-17-5p、mir-92a表达水平升高,let-7b表达水平下降,可以促进肺癌细胞增殖, 抑制其凋亡以及使肺癌细胞对顺铂敏感性下降。      

土贝母含药血清对人肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察土贝母含药血清对人肺癌细胞增殖、凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法采用灌胃SD大鼠土贝母水提物的方法制备其含药血清。应用不同浓度(0.0%、2.5%、5.0%、10.0%、20.0%、40.0%)含药血清处理人肺癌A549和H1299细胞。采用MTT、免疫荧光法观察含药血清对人肺癌细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测含药血清对人肺癌细胞凋亡的影响,采用Western blot方法检测含药血清对肺癌细胞中凋亡相关的裂解型胱天蛋白酶(Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-8、Cleaved-Caspase-9、Bax和Bcl-2)蛋白表达水平的影响。结果土贝母含药血清可明显抑制人肺癌A549和H1299细胞的增殖,诱导其凋亡;土贝母含药血清处理人肺癌细胞的Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9和Bax蛋白水平增加,Bcl-2蛋白水平降低。结论土贝母含药血清可明显抑制人肺癌A549和H1299细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与细胞线粒体途径诱导细胞凋亡有关。     

miR-101-3p and miR-199b-5p promote cell apoptosis in oral cancer by targeting BICC1

microRNAs (miRNAs) are involved in the carcinogenesis and progression of oral cancer. In this research, we aimed to identify the DE_miRNAs in oral cancer and the related molecular mechanisms. Using the GEO2R online tool, we identified 19 DE_miRNAs from the GSE115117 dataset and 3343 the DEGs from GSE74530 dataset. GO enrichment analysis of DE_miRNAs were performed using FunRich online analysis. Venn diagrams of the overlapping genes regulated by miR-204-5p, miR-199b-5p, and miR-101-3p were constructed using Draw Venn Diagram, FunRich, miRDB, TargetScan and GSE74530 databases. Cytoscape was used to construct a miRNAs-mRNAs network. RT-PCR and western blotting showed downregulation of miR-199b-5p and miR-101-3p, and upregulation of BICC1 in oral cancer cell lines and tissues. Spearman correlation analysis further demonstrated a positive correlation between miR-101-3p and miR-199b-5p levels and that miR-199b-5p and miR-101-3p were negatively correlated with BICC1 mRNA levels. miR-199b-5p and BICC1 were significantly related to survival rate of patients with oral cancer. Upregulation of miR-199b-5p and miR-101-3p inhibited the viability and promoted the apoptosis in TSCCA and SCC-9 cells, as shown by the CCK8 assay and flow cytometry analysis, respectively. Inhibition of BICC1 reduced viability and promoted apoptosis in TSCCA cells. Additionally, the relationship between BICC1 and both miR‐101-3p and miR-199b-5p was assessed by a luciferase reporter assay. The effects of miR-101-3p and miR-199b-5p upregulation on the promotion of cell apoptosis and the inhibition of tumor growth were reversed by overexpression of BICC1. In conclusion, the increased levels of miR-199b-5p and miR-101-3p enhanced apoptosis and suppressed cell viability in oral cancer by suppressing BICC1 expression.     

LncRNA NEAT1/miR-23b-3p/KLF3 轴调控结直肠癌细胞的生物学功能研究

目的 探究长链非编码核糖核酸（long non-coding RNAs,LncRNAs）NEAT1/miR-23b-3p/KLF3 调控轴对结直肠癌细胞生物学功能的影响。方法 利用癌症基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库分析结直肠癌组织和癌旁组织NEAT1,miR-23b-3p 和KLF3 表达水平,并计算三者之间的相关性。以结直肠癌细胞系（HT29 细胞）作为实验对象,实验被分为Control 组（空白对照组）、NC 组（空载体组）和si-NEAT1 组（NEAT1 干扰组）。CCK8 检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测各组细胞的凋亡、周期情况,Transwell 检测各组细胞的侵袭情况,划痕实验检测各组细胞的迁移情况。在线工具starbase 等预测能与miR-23b-3p 靶向结合的基因,采用人胚胎肾细胞293（humanembryonic kidney cells 293,HEK293）进行双荧光素酶报告基因实验验证。qRT-PCR 检测NC 组、si-NEAT1 组、si-NEAT1+miR-23b-3p inhibitor 组（共转染si-NEAT1 和miR-23b-3p inhibitor）的miR-23b-3p 和KLF3 转录水平,免疫印记法检测以上三组KLF3 蛋白质表达水平。结果 结直肠癌组织NEAT1[5.29（4.55,5.95）], KLF3[4.94（4.62,5.24）] 表达高于癌旁组织[4.79（4.26,5.19）, 4.49（4.24,4.80）],差异有统计学意义（U=6 677, P=0.001;U=28 257.5, P ＜ 0.001),miR-23b-3p 表达低于癌旁组织[9.99（9.49,10.6） vs 10.80（10.62,10.88）],差异有统计学意义（U=2 906, P=0.004）。结直肠癌组织中,NEAT1 和KLF3 表达呈正相关（r =0.26, P ＜ 0.01）,miR-23b-3p 和NEAT1, KLF3 表达量均呈负相关（r=-0.14, P=0.008; r =-0.17, P=0.001）。与对照组相比,si-NEAT1 组使结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的能力降低,凋亡增加,细胞被阻滞在S 期,结果差异均有统计学意义（均P ＜ 0.05）。starbase 预测miR-23b-3p 靶基因为NEAT1 和KLF3。双荧光素酶报告基因实验也证实miR-23b-3p 分子能互补结合NEAT1 和KLF3 3’UTR。与NC 组相比,si-NEAT1组miR-23b-3p 表达上调,KLF3 转录和蛋白水平下调;与si-NEAT1 组相比,si-NEAT1+miR-23b-3p inhibitor 组miR-23b-3p 表达下调,KLF3 转录和蛋白水平上调。结论 NEAT1 可通过直接靶向HT29 细胞中的miR-23b-3p 上调KLF3 表达,增强结直肠癌细胞的增值、侵袭和迁移等。     

miR-802对叉头框转录因子M1抑制A549/DDP细胞顺铂耐药性的靶向调控作用

目的探讨miR-802抑制非小细胞肺癌A549/DDP细胞的顺铂耐药性及其对叉头框转录因子M1(forkhead box protein M1, FoxM1)的靶向调控作用。方法 A549、A549/DDP细胞采用反转录PCR法检测miR-802相对表达量。将A549/DDP细胞分为空白转染组和miR-802过表达组(过表达组),分别转染miR-NC和miR-802类似物(miR-802 mimics),转染24、48、72、96 h后,采用反转录PCR法检测2组细胞miR-802相对表达量,并采用CCK-8法检测2组细胞增殖率;转染48 h后,CCK-8法检测转染后A549/DDP细胞对DDP的敏感性,采用流式细胞仪检测2组细胞凋亡率和细胞周期,采用Western blot法检测转染后A549/DDP细胞内FoxM1蛋白相对表达量。结果 A549/DDP细胞miR-802相对表达量(0.21±0.03)低于A549细胞(0.85±0.12)(P<0.05);转染24、48、72、96 h,过表达组细胞miR-802相对表达量依次增高(P<0.05),且均高于空白转染组(P<0.05);转染48、72、96 h,空白转染组细胞增殖率依次增高(P<0.05),且均高于过表达组(P<0.05);转染48 h,过表达组细胞半数抑制浓度[(35.28±2.17)mg/L]和细胞早期凋亡率[(17.2±1.1)%]均高于空白转染组[(14.22±1.28)mg/L、(9.0±0.8)%](P<0.05),S期和G2/M期细胞比率[(21.30±0.20)%、(8.35±0.33)%]及细胞内FoxM1蛋白相对表达量(0.21±0.04)均低于空白转染组[(27.54±0.52)%、(14.67±0.70)%、0.44±0.06](P<0.05)。结论 miR-802可能通过抑制FoxM1表达而降低非小细胞肺癌A549/DDP细胞的顺铂耐药性。     

miR-26b-3p靶向调控TRA2B表达抑制神经胶质瘤细胞的增殖和转移

目的探讨miR-26b-3p在神经胶质瘤细胞中的表达,以及其对神经胶质瘤细胞增殖和转移的影响。方法采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测神经胶质瘤组织与癌旁组织中miR-26b-3p与TRA2B的表达水平;通过向神经胶质瘤细胞细胞系中转染miR-26b-3p mimic和inhibitor干扰内源miR-26b-3p的表达,同时检测其靶基因TRA2B蛋白的表达变化;采用CCK-8法检测各组神经胶质瘤细胞增殖能力的变化,以及划痕实验对癌细胞迁移能力进行评估。结果神经胶质瘤患者组织与癌旁组织比较,miR-26b-3p的表达水平显著上调,TRA2B的表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,在32例神经胶质瘤患者神经胶质瘤组织中,TRA2B的表达水平与miR-26b-3p表达呈显著负相关(r=-0.510;P<0.05);SHG-44细胞体外转染实验结果发现,降低细胞内源miR-26b-3p的表达时,TRA2B的表达水平显著升高,细胞的增殖活性以及转移能力会被抑制;而上调细胞内源miR-26b-3p的表达时,TRA2B的表达水平显著下降,细胞的增殖活性与转移能力会显著提高,相比于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-26b-3p在神经胶质瘤组织中高表达,其可能靶向调控TRA2B的表达抑制神经胶质瘤细胞的增殖活性与转移能力,在神经胶质瘤的发生发展过程中起着重要的生理功能。     

m6A甲基转移酶METTL3介导miR-127调控非小细胞肺癌细胞系自噬的机制研究

目的　分析N6 甲基腺苷（m6A）甲基转移酶 3（methyltransferase-like 3, METTL3）和miR-127 在非小细胞肺癌（non small cell lung cancer cells, NSCLC）细胞系中的表达及其相关性,并探究METTL3 介导miR-127 调控非小细胞肺癌自噬的作用机制。方法　采用qRT-PCR 法检测正常肺上皮细胞BEAS-2B 与非小细胞肺癌细胞HCC827,A549 和H460 中METTL3 和miR-127 的表达水平;通过Linked Domics 数据库筛选出肺癌中与miR-127 共表达的基因,并分析METTL3 和miR-127 之间的相关性;选择H460 细胞传代培养至对数生长期后,将浓度接近的细胞随机分为三组,分别转染METTL3-siR,NC-siR 及Control,验证转染后H460 细胞中METTL3 和miR-127 表达;通过吖啶橙染色,Lyso-Tracker Red 染色观察METTL3 对细胞自噬的影响;利用Western blot 检测PTEN,AKT,mTOR,ULK1,Beclin-1等自噬相关蛋白的表达。结果　非小细胞肺癌细胞HCC827,A549,H460 中METTL3 相对表达分别为1.35±0.17,1.54±0.11 和1.78±0.21,明显高于正常肺上皮细胞BEAS-2B 中表达水平（0.91±0.11）,差异有统计学意义(F=34.037,P=0.002)。非小细胞肺癌细胞HCC827,A549,H460 中miR-127 相对表达分别为1.56±0.21,1.85±0.19 和2.11±0.25,较正常肺上皮细胞BEAS-2B 中表达（1.02±0.20）亦显著升高,差异有统计学意义（F=28.152,P=0.005）。肺癌中METTL3 与miR-127 共同表达呈正相关性（r=0.452,P ＜ 0.001）。METTL3-siR 组细胞中METTL3 表达水平（0.61±0.15）较Control 组（1.71±0.28） 和NC-siR 组（1.65±0.19） 显著降低, 差异有统计学意义（F=78.357,P ＜ 0.001）。METTL3-siR 组细胞中miR-127 表达水平（0.48±0.15）较Control 组（2.02±0.33）和NC-siR 组（1.97±0.25）亦显著下降,差异有统计学意义（F=105.216,P ＜ 0.001）;吖啶橙和Lyso-Tracker Red 染色分别观察到METTL3-siR 组细胞酸性自噬小泡增多,自噬溶酶体数量也明显增加。与Control 组和NC-siR 组相比,METTL3-siR 组细胞中PTEN,ULK1,Beclin1 蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义（F=62.420~175.615,均P<0.001）;p-AKT 和p-mTOR 表达水平显著下降,差异均有统计学意义（F=148.781,87.147,均P<0.001）。结论　METTL3 和miR-127 在非小细胞肺癌细胞系中均呈高表达,且它们之间呈正相关性,沉默METTL3 基因可以抑制miR-127 表达,促进非小细胞肺癌H460 细胞发生自噬,其调控机制可能与PTEN/AKT/mTOR 通路有关。