消痰散结方对人结直肠癌HCT116细胞增殖和凋亡及Caspase3蛋白表达的影响

目的探讨消痰散结方对结直肠癌细胞系增殖、凋亡的影响。方法消痰散结方浸膏冻干粉末溶解在细胞培养液中,制备消痰散结方保存液。以不同浓度消痰散结方作用HCT116细胞72 h,CCK-8法检测细胞增殖;取0.94、1.88 mg/m L消痰散结方作用于HCT116细胞24、48、72 h,CCK-8法检测细胞增殖;消痰散结方(0.24、0.47、0.94、1.88 mg/m L)作用细胞72 h后,TUNEL法原位检测细胞凋亡,计算细胞凋亡率;Western blot检测药物干预后Caspase3蛋白表达变化。结果消痰散结方对HCT116细胞增殖有抑制作用,作用72 h IC50为0.94 mg/m L,抑制作用呈浓度-时间依赖性,药物浓度和作用时间有交互作用;消痰散结方促进HCT116细胞凋亡,随药物浓度增高,凋亡率增高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01);药物作用后Pro-Caspase3蛋白表达量降低,Cleaved Caspase3蛋白表达量增加。结论消痰散结方在体外对HCT116细胞有抑制增殖、促进凋亡的作用,其机制可能与增强Caspase3活性相关。     

解毒消痰散结方对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的　观察解毒消痰散结方在不同时间内对S1 80 荷瘤小鼠的抑瘤作用。方法　用解毒消痰散结方汤药给予昆明小鼠灌胃 ,1次 日 ,剂量为 17g kg ,给药 6d后 ,皮下种植S1 80 肉瘤建立动物模型 ,分别再给药 7、14、2 1d后处死取瘤体。疗效评价采用瘤体称重法。结果　解毒消痰散结方在接种后给药 7、14d对S1 80 荷瘤小鼠的抑瘤率各为 87.5 7%、73.37% ,分别高于其在接种后给药 2 1d的抑瘤率 (4 2 .2 7% ) (P <0 .0 1)。结论　解毒消痰散结方在种植性肿瘤早期的抑瘤效果较好 ,随着肿瘤进展其抑瘤率有所下降     

消痰散结方治疗中晚期胃癌的疗效观察

目的：观察消痰散结方治疗中晚期胃癌的疗效．方法：将78例中晚期胃癌患者随机分为中药组和化疗组，中药组给予消痰散结方，化疗组给予FM方案化疗，观察对比两纽疗效．结果：中药组总有效率82．5%，化疗组总有效率51．3%，两组有显著统计学差异（P〈0．05）．结论：中药消痰散结方治疗中晚期胃癌有良好作用．     

解毒消痰散结方对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的观察解毒消痰散结方在不同时间内对S 180荷瘤小鼠的抑瘤作用.方法用解毒消痰散结方汤药给予昆明小鼠灌胃,1次/日,剂量为17 g/kg,给药6 d后,皮下种植S 180肉瘤建立动物模型,分别再给药7、14、21 d后处死取瘤体.疗效评价采用瘤体称重法.结果解毒消痰散结方在接种后给药7、14 d对S 180荷瘤小鼠的抑瘤率各为87.57%、73.37%,分别高于其在接种后给药21 d的抑瘤率(42.27%)(P＜0.01).结论解毒消痰散结方在种植性肿瘤早期的抑瘤效果较好,随着肿瘤进展其抑瘤率有所下降.     

健脾消痰散结方治疗中晚期原发性肝癌临床观察

目的:观察中晚期原发性肝癌经皮穿刺肝动脉化疗栓塞术(TACE)后的中医药治疗疗效,为筛选有效的治疗肝癌的中药提供一定的理论依据。方法:运用前瞻性队列研究观察健脾消痰散结方治疗中晚期原发性肝癌行TACE术后的患者32例,对照组30例,治疗疗程12周,观察并比较患者治疗前后的临床症状、中医证候、生活质量情况及治疗组1年、2年、3年的生存率。结果:①在证候疗效方面,治疗组和对照组治疗后分别为78.13%、63.33%;在证候积分方面,治疗组和对照组治疗后的积分分别为20.31±9.19、24.63±5.66,均有统计学差异(P<0.05);②生活质量改善比较,治疗组和对照组治疗后的生活质量积分分别为74.06±7.96、66.97±8.02,有统计学差异(P<0.05);③甲胎蛋白(AFP)比较,治疗组和对照组治疗后分别为(818.63±327.13)ng/mL、(744.88±235.46)ng/mL,无统计学差异(P>0.05)。结论:中晚期原发性肝癌患者行介入术后多表现为虚实夹杂证候,应用健脾消痰散结方治疗可以有效改善患者的症状,提高其生活质量及生存率。     

消痰散结方对裸鼠人胃癌细胞增殖相关蛋白表达的影响

目的:探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,观察消痰散结方干预胃癌组织NF-κBP65蛋白、COX-2蛋白表达的影响及相关性。结果:①消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κBP65蛋白的阳性表达与模型组相比P0.05,有统计学意义;②消痰散结方中剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比P0.05,有统计学意义,消痰散结方高剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比有显著统计学差异,P0.01;③胃癌细胞中NF-κBP65蛋白与COX-2蛋白表达存在正相关(r=0.952,P0.01)。结论:胃癌MKN-45细胞中存在着活化的NF-κB及高表达的COX-2蛋白,并且存在线性相关,消痰散结方可能通过其抑制NF-κB活性,阻断了NF-κB对COX-2的活性调控,使胃癌细胞增殖受到抑制,从而阻断胃癌发展,控制胃癌复发与转移。     

消痰散结方对胃癌基质金属蛋白酶表达的影响

目的：观察消痰散结方对裸鼠胃癌组织及体外培养的胃癌细胞中基质金属蛋白酶表达的影响，探讨消痰散结方抑制胃癌浸润转移的可能作用机理。方法：体外常规培养人胃癌MKN-45细胞株；体内建立裸鼠人胃癌皮下种植模型，采用免疫组化(SP法)检测裸鼠胃癌组织和胃癌细胞中基质金属蛋白酶的表达。结果：中药组胃癌组织和胃癌细胞中基质金属蛋白酶(MMP2、MMP14)的表达水平明显低于生理盐水组和空白对照组。结论：消痰散结方具有抑制胃癌细胞浸润转移作用的机理可能与其影响基质金属蛋白酶的表达，减少对细胞外基质和基底膜的降解有关。     

消痰散结方对裸鼠胃肿瘤中ICAM-1表达的影响

观察消痰散结方对裸鼠胃癌组织中胃癌细胞粘附分子ICAM 1表达的影响。建立裸鼠MKN 4 5人胃癌模型 ,采用免疫组化S P法检测胃癌组织中ICAM 1的表达。结果 ,中药组胃癌组织中ICAM 1表达水平明显低于空白对照组。说明 ,消痰散结方抑制胃癌细胞转移的环节可能与影响粘附分子的表达 ,进而影响细胞的粘附性机制有关。     

消痰散结方对血管生成拟态相关蛋白表达的影响

目的探讨消痰散结方对血管生成拟态（VM）相关蛋白表达的影响。方法30只裸鼠皮下移植人胃癌瘤块建立荷瘤模型。造模后的荷瘤鼠随机分为生理盐水组、消痰散结组、盐酸多西环素组,每组10只,分别给予相应药物灌胃治疗4周后,脱颈椎处死荷瘤鼠。观察移植瘤中VM的形态结构,计数VM的数量;运用免疫组织化学法检测肿瘤中基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和层黏连蛋白5γ2链（LN-5γ2）等VM相关蛋白的表达。结果人胃癌裸鼠移植瘤可以形成VM。消痰散结组和盐酸多西环素组VM数量明显少于生理盐水组,差异有统计学意义（P〈0．01）。消痰散结组和盐酸多西环素组MMP-2、MMP-9和LN-5γ2蛋白的阳性表达低于生理盐水组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论消痰散结方可抑制裸鼠移植瘤VM的形成,其机制可能与下调MMP-2、MMP-9和LN-5γ2蛋白表达有关。     

消痰散结方对MKN-45人胃癌细胞E-Cad表达的影响

目的:观察消痰散结方对裸鼠胃癌组织中胃癌细胞粘附分子E-Cad表达的影响,初步探讨消痰散结方抑制胃癌细胞转移的作用环节.方法:制备消痰散结药物血清,体外培养MKN-45人胃癌细胞,拟消痰散结方药物血清干预培养细胞,采用免疫组化ABC法检测胃癌组织中E-Cad的表达.结果:中药组胃癌组织中E-Cad表达水平明显高于空白对照组.结论:消痰散结方抑制胃癌细胞转移的环节可能和影响粘附分子的表达,从而影响细胞的粘附性机制有关.     

消痰散结方对人胃癌裸鼠移植瘤血管生成拟态的影响

目的 探讨消痰散结方对人胃癌裸鼠移植瘤血管生成拟态（vasculogenic mimicry,VM）的影响及其机制。 方法 30只裸鼠右前肢腋部皮下移植人胃癌瘤块建立荷瘤模型。造模后的荷瘤鼠随机分为模型组（10只）、消痰散结组（10只）和多西环素组（10只）,分别给予相应药物灌胃治疗4周后,脱颈椎处死荷瘤鼠。剥取肿瘤,称取瘤质量,计算抑瘤率;计数肿瘤中VM的数量;运用免疫组织化学法检测肿瘤中基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）和基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）蛋白的表达。     

消痰散结方对胃癌组织核转录因子活性表达影响的研究

目的：通过建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,观察消痰散结方对胃癌组织核转录因子（NF-κB）活性表达的影响,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法：采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型,随机分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,采用EMSA方法检测胃癌组织NF-κB活性的表达。结果：①消痰散结方低、中、高剂量组的平均瘤重与模型组相比,有显著差异（P〈0.01）;②消痰散结方低、中、高剂量组NF-κB的活性表达与模型组相比逐渐降低,且呈明显的剂量依赖效应。消痰散结方低剂量组NF-κB的活性表达与模型组相比有统计学意义（P〈0.05）,消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κB的活性表达与模型组相比,P〈0.01,有显著统计学意义,但组间相比无统计学意义。结论：①消痰散结方有明显的抑制胃癌细胞生长的作用;②消痰散结方可能通过抑制NF-κB活性而阻断胃癌细胞增殖进程,可有效抑制胃癌发展。     

消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星不稳定的影响

目的探讨消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星不稳定的作用机制。方法采用MKN-45人胃癌细胞株建立裸鼠皮下瘤模型皮下传3代作为实验模型的瘤源,采用0B胶黏合法建立人胃癌裸鼠原位移植瘤模型。20只模型裸鼠分为模型组和中药组。中药组予消痰散结方干预6周后,测瘤质量,计算抑瘤率并检测5个微卫星不稳定位点（D17S250、D2S123、D5S346、Bat-25和Bat-26）。结果中药组的瘤质量明显低于模型组（P〈0．01）,其抑瘤率为40．84％。模型组的肿瘤组织中能扩增到5个微卫星位点,其中微卫星位点D2S123、D5S346出现某些延长和缩短。使用消痰散结方干预6周后,微卫星位点D2S123、D5S346的变异趋于稳定。结论消痰散结方能抑制MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤的微卫星不稳定。     

消痰散结方对MKN—45人胃癌细胞ICAM—1表达的影响

目的：观察水痰散结方对体外培养的胃癌细胞粘附分子ICAM－1表达的影响，初步探讨消痰散结方抑制胃癌细胞转移的作用环节。方法：制备消痰散结药物血清，体外培养MKN－45人胃癌细胞，拟消痰散结方药物血清干预培养细胞，采用免疫组化ABC法检测胃癌组织中ICAM－1的。结果：中药组胃癌组织中ICAM－1表达水平明显低于空白对照组。结论：消痰散结方抑制胃癌细胞转移的环节可能和影响粘附分子的表达，从而影响细胞的粘附性机能有关。     

消痰散结方对裸鼠人胃癌组织环氧化酶(COX-2)蛋白表达的影响

目的:通过观察消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型COX-2蛋白表达的影响,探讨其抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法,建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型,随机分成模型组,消痰散结方低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,运用免疫组化方法检测胃癌组织环氧化酶(COX-2)蛋白的表达。结果:①消痰散结方低、中、高剂量组的平均瘤重与模型组相比,有显著差异(P<0.01);②消痰散结方中剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比P<0.05,有统计学意义;③消痰散结方高剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比有显著统计学意义,P<0.01,与5-Fu组相比无统计学差异,P>0.05。结论:消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45细胞原位移植瘤有较好的抗肿瘤作用,抑制胃癌细胞增殖作用是多靶点的,有较好稳定下调胃癌细胞COX-2蛋白表达的作用,并且呈剂量依赖性。     

消痰散结方对裸鼠胃癌原位移植瘤模型P16基因甲基化的影响

目的观察消痰散结方对胃癌裸鼠原位移植瘤模型P16基因甲基化的影响,探讨消痰散结方抗癌作用机制。方法培养胃癌细胞系MKN-45,制备胃癌裸鼠原位移植瘤模型,分为模型对照组和中药组。中药组给予消痰散结方水煎剂(含原药材2.51g/mL),模型对照组给予生理盐水,连续6周。称重法测定抑瘤率,RT-PCR法测定P16基因表达,Methylight法测定P16基因甲基化水平。结果消痰散结方能抑制肿瘤生长,抑瘤率达54.82%。消痰散结方能逆转P16基因甲基化,增加P16mRNA表达,与模型对照组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论消痰散结方可以有效抑制胃癌细胞生长,逆转P16基因甲基化可能是其作用机制之一。     

泽泻醇-B-乙酸酯对结直肠癌HCT116细胞增殖和周期的影响

目的:研究泽泻提取物泽泻醇-B-乙酸酯对人结直肠癌细胞株HCT116生长的影响。方法:采用不同浓度的泽泻醇-B-乙酸酯分别作用于大肠癌HCT116细胞24、48、72小时后,应用MTT(四氮甲基唑蓝)测定细胞生长抑制效应,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期变化。结果:泽泻醇-B-乙酸酯能显著抑制HCT116细胞增殖,且在一定的浓度范围内呈时间和浓度依赖性。FCM检测结果显示随着作用时间的延长或者药物剂量的增加,G_0/G_1期的细胞显著增加,使细胞发生G_1期阻滞,进入S期、M期的比例降低,细胞增殖受抑。结论:泽泻醇-B-乙酸酯能以时间和浓度依赖的方式抑制HCT116细胞生长;泽泻醇-B-乙酸酯将细胞阻止在G_0/G_1期,进入S期、M期的比例降低,从而通过影响细胞周期进程来抑制细胞增殖。     

消痰散结方对鼠胃移植瘤相关炎性因子表达的影响

目的观察消痰散结方对小鼠胃移植瘤和瘤旁胃组织中炎性因子白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素8（IL-8）表达的调节作用,探讨消痰散结方抑瘤、防复发的部分作用机制。方法 40只昆明小鼠随机分为正常组、模型组、喃氟啶组、消痰散结方组;除正常组外,其余各组通过移植S180瘤块,建立小鼠胃移植瘤模型;实验3周后,剥取肿瘤,称取瘤质量,计算抑瘤率;运用RT-PCR及ELISA方法分别检测瘤及瘤旁胃组织中IL-6mRNA及IL-8蛋白表达。结果正常胃组织-瘤旁胃组织-瘤组织中IL-6、IL-8表达呈递增趋势;消痰散结方较喃氟啶可明显抑制肿瘤生长、下调肿瘤及瘤旁胃组织中IL-6、IL-8的表达。结论消痰散结方可明显下调胃肿瘤及瘤旁胃组织中IL-6、IL-8表达,是其抑瘤、防复发的可能机制之一。     

解毒消痰散结方对荷瘤小鼠肉瘤S_(180)PCNA表达的影响

消痰散结方是导师魏品康教授研究总结的经验方，在我科前期的临床及实验研究中已经证明此方具有明显的抗胃癌增殖转移的作用。解毒消痰散结方是在消痰散结方的基础上．再加蛇莓、白花蛇舌草等清热解毒的中药配制而成。本实验选用生理盐水组、5-Fu组、消痰散结组(生南星、生半夏、枳实、茯苓、炙甘草等)及解毒组(蛇莓、白花蛇舌草等)作为对照组，来观察解毒消痰散结方在不同时期内对荷瘤小鼠S180PCNA表达的影响。