青藤碱对 FLS增殖及α7nAChR、TLR2和TLR4表达的影响

摘要：目的 探讨青藤碱(sinomenine, SIN)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激的大鼠成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes , FLS）增殖及α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7 nicotinic acetylcholine receptors, α7nAChR）、Toll样受体2(toll-like receptor 2, TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达的影响。 方法 组织块法分离培养原代FLS,流式细胞术检测FLS表面标志物CD90。FLS设对照组、TNF-α组、SIN组（剂量分别为100,200,400μmol·L-1）,SIN组给予SIN干预30min后,TNF-α组、SIN组均给予20ng·mL-1 TNF-α刺激24h,采用MTT法检测各组 FLS增殖,酶联免疫吸附（ELISA）法检测细胞上清白细胞介素-6（interleukin-6, IL-6)分泌量,RT-PCR检测α7nAChR、TLR2和TLR4 mRNA表达、Western bolt检测α7nAChR、TLR2和TLR4蛋白表达。 结果 TNF-α刺激FLS后,细胞明显增殖,分泌IL-6明显增加,α7nAChR、TLR2和TLR4 mRNA及蛋白表达增加,SIN（200,400μmol·L-1）能抑制FLS增殖,抑制IL-6分泌,并且下调α7nAChR、TLR2和TLR4 mRNA及蛋白表达。 结论 FLS增殖与α7nAChR、TLR2和TLR4表达相关,且SIN能抑制FLS增殖,并下调α7nAChR、TLR2和TLR4表达。     

针刺对自发性高血压大鼠下丘脑室旁核炎症因子含量及Toll样受体4表达的影响

目的观察针刺对自发性高血压大鼠(SHR)下丘脑室旁核(PVN)炎症因子含量及Toll样受体4(TLR4)表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法 10周龄SHR 30只,随机分为SHR组、针刺组和非穴组,每组10只,另取同周龄WKY大鼠10只为正常组。针刺组针刺双侧"太冲",采用捻转泻法刺激,非穴组针刺其足背侧,采用平补平泻捻转法刺激,2周后取材。每日检测1次大鼠平均动脉压;RT-PCR检测PVN中TLR4 m RNA的表达;Western blot检测PVN中TLR4蛋白的表达;ELISA检测PVN肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量。结果与正常组比较,SHR组大鼠平均动脉压升高,PVN中TLR4 m RNA和蛋白表达明显升高,TNF-α、IL-6含量明显增加(P0.05);与SHR组比较,针刺组大鼠平均动脉压明显下降,PVN中TLR4 m RNA和蛋白表达明显降低,TNF-α、IL-6含量明显减少(P0.05);而非穴组无明显变化。结论针刺"太冲"可能通过抑制SHR PVN中TLR4的表达,减少TNF-α、IL-6分泌,从而降低SHR血压。     

针刺对脑缺血再灌注大鼠梗死灶边缘区顶叶皮质TLR9、TNF-α、IRF7和IFN-β的mRNA表达的影响

[目的]检测脑缺血再灌注模型早期梗死灶边缘区Toll样受体9(TLR9)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素调节因子7(IRF7)、干扰素-β(IFN-β)的m RNA表达,阐明针刺对脑梗死的TLR9通路作用机制。[方法]使用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)脑缺血模型,缺血90 min后行再灌注,治疗组予针刺干预,于再灌注6h、5d后将大鼠取材,进行荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测,观察局灶性脑缺血模型大鼠脑组织TLR9、TNF-α、IRF7、IFN-β的m RNA表达及针刺的干预作用。[结果]针刺能明显增强神经保护因子IFN-βm RNA的表达(P0.05)。TLR9信号通路m RNA的表达对比均无统计学差异(P0.05)。[结论]本针刺法治疗脑梗死通过增强神经保护因子IFN-βm RNA的表达,改善脑缺血再灌注造成的神经功能活动障碍。本研究尚不能表明该针刺法能抑制TLR9信号通路m RNA的表达。     

三叶香茶菜对四氯化碳致肝纤维化大鼠TLR4信号通路的影响

目的探讨三叶香茶菜对四氯化碳(CCl_4)致肝纤维化大鼠toll样受体-4(TLR4)信号通路的影响。方法采用CCl4致肝纤维化大鼠模型,生化检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶水平(AST),HE、Masson染色病理检查评价三叶香茶菜对肝组织的保护作用,酶联免疫吸附实验检测血清白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,荧光定量PCR法检测大鼠肝组织TLR4m RNA、My D88m RNA的表达。结果三叶香茶菜能够显著抑制肝纤维化大鼠血清ALT和AST的水平,改善大鼠肝组织纤维化,抑制肝纤维化大鼠IL-1β、TNF-α的表达,对肝纤维化大鼠肝组织TLR4 m RNA的表达具有显著的下调作用,与模型对照组比较,差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01),对My D88 m RNA的表达无显著抑制作用(P0.05)。结论三叶香茶菜对CCl4致大鼠肝纤维化具有一定的抑制作用,机制之一是下调TLR4信号通路的活化。     

补肾解毒通络方对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠TLR4/IκBα/NF-κB信号通路相关因子的影响

目的观察补肾解毒通络方对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠TLR4/IκBα/NF-κB信号通路相关因子的影响,探讨其抗炎作用机制。方法 32只SPF级雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、甲氨喋呤组和补肾解毒通络方组,每组8只。除正常组外,其余各组均采用牛Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂注射制备CIA大鼠模型。模型制备成功后,各给药组分别给予相应药物干预,连续21 d。每隔7 d测量大鼠体质量、关节炎指数和左后足趾厚度,HE染色观察膝关节滑膜组织病理变化,ELISA检测血清白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,Western blot检测滑膜组织Toll样受体4(TLR4)、核因子(NF)-κB p65、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)表达,RT-PCR检测滑膜组织TLR4、NF-κBp65、IκBαm RNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠体质量减轻,四肢关节明显肿胀,关节炎指数明显升高(P0.01),滑膜组织增生显著,大量炎性细胞浸润;血清IL-6、IL-8和TNF-α含量明显增加,IL-10含量明显减少(P0.01);膝关节滑膜组织TLR4、NF-κBp65蛋白和m RNA表达明显升高,IκBα蛋白和m RNA表达明显降低(P0.01)。与模型组比较,补肾解毒通络方组大鼠体质量明显增加,关节肿胀减轻,关节炎指数降低,滑膜增生改善,炎性细胞浸润减少;血清IL-6、IL-8和TNF-α含量明显减少,IL-10含量明显增加(P0.01);膝关节滑膜组织TLR4、NF-κBp65蛋白和m RNA表达明显降低,IκBα蛋白及m RNA表达明显升高(P0.01,P0.05)。结论补肾解毒通络方可显著减轻CIA大鼠炎症反应,改善滑膜组织损伤,其机制可能与抑制TLR4/IκBα/NF-κB信号通路激活有关。     

青藤碱通过糖皮质激素受体发挥抗炎作用的研究

目的观察阻断及沉默Raw264.7细胞糖皮质激素受体(GR)对青藤碱(SIN)抗炎作用的影响。方法采用小鼠巨噬细胞系Raw264.7为研究对象,以脂多糖(LPS)诱导细胞炎症模型,选择糖皮质激素药地塞米松(Dex)作为阳性药,选用GR特异性拮抗剂米非司酮(Ru486)进行干预,并采用si RNA技术沉默GR。ELISA检测细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的变化,Western blot检测GR的表达,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测TNF-α、IL-6 m RNA水平的变化。结果 q RT-PCR和ELISA检测结果显示LPS刺激下Raw264.7细胞的TNF-α与IL-6在m RNA和蛋白水平均升高(P0.05),Dex和SIN作用后均可明显降低其表达(P0.05),但在GR拮抗剂干预下,Dex和SIN的抗炎作用被抑制,与LPS组比较,差异无统计学意义(P0.05)。炎症状态下,GR蛋白表达较正常组明显降低(P0.05),Dex和SIN对GR蛋白表达的影响不明显(P0.05)。si RNA技术成功沉默GR蛋白表达后,Dex和SIN的抗炎作用明显被减弱(P0.05)。结论SIN能通过作用于GR发挥抗炎作用,具有类皮质激素样作用,GR是SIN发挥抗炎作用的靶点之一。     

二妙散对TNF-α诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞功能的影响

目的:二妙散(EMS)对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导的人类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖、迁移、黏附、侵袭、分泌功能的作用及其可能机制。方法:TNF-α(20μg·L~(-1))体外诱导RA患者FLS,加入不同质量浓度二妙散(0.2,0.4,0.8 g·L~(-1))作用后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法,transwell迁移、黏附及侵袭实验检测FLS细胞的增殖活性、迁移、黏附及侵袭能力,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清中白细胞介素(IL)-1β的含量。提取FLS中的蛋白,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化Janus激酶1(p-JAK1),p-信号转导与转录激活因子(STAT)1,p-STAT6的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,TNF-α(20μg·L~(-1))能增加FLS细胞的增殖、迁移、黏附、侵袭能力及IL-1β分泌(P0.01);与TNF-α组比较,二妙散(0.2,0.4,0.8 g·L~(-1))作用24 h对TNF-α诱导的FLS细胞增殖活性没有明显影响,作用24 h内还能明显降低TNF-α诱导升高的FLS细胞迁移、黏附、侵袭能力及分泌IL-1β(P0.05);与空白组比较,TNF-α能分别诱导p-JAK1,p-STAT1,p-STAT6在FLS中的异常升高(P0.01),0.2,0.4,0.8 mg·L~(-1)的二妙散能明显降低p-JAK1,p-STAT1,p-STAT6的表达水平(P0.05,P0.01)。结论:二妙散可降低FLS细胞增殖、迁移、黏附、侵袭及IL-1β的分泌,而其机制可能与JAK/STAT信号通路相关。     

黄芪多糖对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚中TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨黄芪多糖抑制异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚中Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)炎症信号通路的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为6组(每组10只):对照组,异丙肾上腺素组,异丙肾上腺素+黄芪多糖(低、中和高剂量)组,异丙肾上腺素+普萘洛尔组。各给药组连续腹腔注射3周,并于给药1 d后腹腔注射异丙肾上腺素2周。给药3周后,各组动物分别检测全心质量指数(HMI)、左心质量指数(LVMI);取左心室组织进行苏木精—伊红染色法(HE)染色;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织心钠素(ANP)和TLR4的mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测心肌组织TLR4、p65蛋白(p65)和核因子κB抑制蛋白α(IκBα)的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中TNF-α、IL-6的水平。结果与对照组相比,异丙肾上腺素组大鼠的HMI和LVMI显著增加,ANP、TLR4m RNA表达增加,TLR4、p65的蛋白水平增加和IκBα蛋白水平减少,血清中TNF-α、IL-6明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。与异丙肾上腺素组相比,黄芪多糖400、800mg/(kg·d)和普萘洛尔40 mg/(kg·d)组HMI和LVMI降低,ANP、TLR4 mRNA和TLR4、p65蛋白和血清中TNF-α、IL-6表达显著降低,IκBα蛋白的表达明显增加(P<0.01)。黄芪多糖200 mg/(kg·d)组ANP、TLR4 mRNA和TLR4、p65蛋白和血清中TNF-α的表达降低(P<0.05,P<0.01),IκBα蛋白的表达增高(P<0.05)。结论黄芪多糖能改善异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB炎症信号通路有关。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨刺芒柄花素对LPS诱导的大鼠子宫内膜上皮细胞损伤的影响

目的:探讨刺芒柄花素通过调控Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的大鼠子宫内膜上皮细胞损伤的影响。方法:以LPS诱导大鼠子宫内膜上皮细胞损伤,采用CCK8法检测细胞活性;采用RT-qPCR法检测TLR4过表达效率;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6含量;Western Blot法检测TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞抑制率、细胞凋亡率、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量明显增加,p-P65/P65、p-IκBα/IκBα、MyD88和TLR4蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比,刺芒柄花素12μmol/L组细胞抑制率、细胞凋亡率、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量明显降低,p-P65/P65、p-IκBα/IκBα、MyD88和TLR4蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);TLR4过表达...     

清热活血方对胶原诱导关节炎大鼠miR-140、TLR4、NF-κB的影响

目的 探讨清热活血方对胶原诱导关节炎(collagen type Ⅱ-induced arthritis, CIA)大鼠miR-140/Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路的影响。方法 6周龄SPF级大鼠24只,随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤组(0.2 mg/kg)、清热活血方组(34 g/kg),每组6只,通过对大鼠尾根部注射Ⅱ型胶原乳剂构建类风湿关节炎动物模型,连续给药6周。连续监测大鼠关节肿胀程度,Elisa法测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、IL-6含量白细胞介素6(interleukin 6,IL-6),TRAP染色观察破骨细胞(osteoclast,OC)数量,Western blot法检测大鼠骨组织中TLR4、NF-κB的蛋白表达,实时荧光定量PCR检测大鼠骨组织中miR-140、TLR4、NF-κB的mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠...     

电针对功能性消化不良肝郁脾虚模型大鼠十二指肠TLR4、NF-κB p65的影响

目的:探讨治疗功能性消化不良(FD)的作用机制。方法:将30只SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、电针组各10只。模型组及电针组采用多因素干预法造模20 d,空白对照组不给予任何处置。造模成功后电针组针刺足三里穴、太冲穴后接电针治疗14 d,余组不采用任何干预措施。采用ELISA(酶联免疫吸附剂测定)检测各组血清IL-6(白介素-6)、TNF-α(肿瘤坏死因子α)水平,WB(免疫印迹法)检测大鼠十二指肠TLR4(Toll样受体4)、 NF-κB p65 (核转录因子κB p65)表达。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠十二指肠TLR4、NF-κB p65表达显著增高,血清IL-6、TNF-α水平显著升高;与模型组比较,电针组大鼠十二指肠TLR4、NF-κB p65及血清IL-6、TNF-α水平显著降低。结论:电针可能通过下调十二指肠TLR4、NF-κB p65表达,降低血清IL-6、TNF-α等炎性因子水平抑制炎症反应,发挥治疗FD作用。     

通腑泻肺法对ALI/ARDS大鼠炎症反应的调控作用

目的探讨通腑泻肺中药对ALI/ARDS大鼠炎症反应的可能作用机制。方法 27只大鼠随机分为空白组、模型组、中药组,每组9只。模型组与中药组尾静脉注射内毒素8 mg/kg,空白组大鼠静脉注射生理盐水。中药组在造模完成后给予通腑泻肺中药灌胃,每次0.01 m L/g,每日1次,共7 d,空白组与模型组予等量生理盐水灌胃。通过ELISA法检测大鼠血清及BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10表达,免疫组化染色及Real-Time PCR方法检测肺组织PPARγ、NF-κB p65、TLR4蛋白及其m RNA表达。结果模型组大鼠肺组织中NF-κB p65和TLR4的m RNA表达升高,PPARγ的m RNA表达下降(P0.05),炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10显著升高(P0.05);与模型组相比,中药组NF-κB p65、TLR4的m RNA表达降低,PPARγ的m RNA表达升高(P0.05),炎症因子显著降低(P0.05)。结论通腑泻肺中药可以上调ALI/ARDS状态下PPARγ的表达,降低TLR4及NF-κB表达,减轻TLR4介导的炎症反应。     

TLR4/NF-κB信号通路在佐剂性关节炎大鼠心肌组织的表达及新风胶囊对其影响

目的基于TLR4/NF-κB信号通路探讨新风胶囊对佐剂性关节炎(AA)大鼠心肌组织的保护机制。方法建立AA大鼠模型,大鼠按随机数字表法分为模型组、新风胶囊(XFC)组、雷公藤多苷(TPT)组、甲氨喋呤(MTX)组,每组10只;另取10只SD大鼠为正常组。XFC组给予XFC混悬液(浓度0.24 g/m L)按1m L/100 g灌胃,每天1次;TPT组给予TPT混悬液(浓度1 mg/m L)按1 m L/100 g灌胃,每天1次;MTX组给予MTX混悬液(浓度0.3 mg/m L)按1 m L/100 g灌胃,每周1次;正常组及模型组予生理盐水灌胃,每天1次。各组连续用药30天。观察新风胶囊对AA大鼠心功能的影响,并采用免疫组化法、Real-time PCR法检测大鼠心肌组织Toll样受体4(TLR4)、白细胞介素-1受体相关激酶(IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、核转录因子kappa B(NF-κB)及TNF-α的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠的左室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、心率(HR)水平升高(P0.01),左室内压上升/下降最大速率(±dp/dtmax)、心肌收缩能力指数(CI)水平下降(P0.01),TLR4、IRAK1、TRAF6、NF-κB、TNF-α蛋白及m RNA表达升高(P0.01)。与模型组比较,XFC组的LVSP、LVEDP、HR水平下降,±dp/dtmax、CI水平提高,TLR4、IRAK1、TRAF6、NF-κB、TNF-α蛋白表达降低(P0.05,P0.01)。TPT组及MTX组LVEDP水平下降,±dp/dtmax、CI水平升高,TLR4、IRAK1蛋白表达降低(P0.05,P0.01);TPT组NF-κB、TNF-α蛋白表达降低(P0.05);3组大鼠心肌组织各指标m RNA表达均显著下降(P0.01)。与XFC组比较,TPT组LVSP水平、IRAK1、TNF-α蛋白表达及TRAF6、TNF-αm RNA表达升高,MTX组LVSP水平、LVEDP水平、TLR4、IRAK1、NF-κB、TNF-α蛋白及IRAK1、TRAF6、TNF-αm RNA表达升高,dp/dtmax水平降低(P0.05,P0.01)。结论新风胶囊可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路活性,减少TNF-α等致炎因子的分泌,改善AA大鼠心肌损害。     

萆薢总皂苷对尿酸钠诱导THP-1细胞Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路的影响

目的:研究萆薢总皂苷(TSD)对尿酸钠(MSU)诱导THP-1细胞Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路的影响,探讨其抗痛风性关节炎的可能作用机制。方法:佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,分为正常组,模型组,TSD低、中、高质量浓度组(1,3,10 mg·L~(-1))和秋水仙碱组(0.2 mg·L~(-1)),除正常组外,其余各组均用400 mg·L~(-1)MSU刺激6 h,诱导体外炎症反应。噻唑蓝(MTT)比色法检测TSD对细胞活力影响;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液炎性因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的分泌水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TLR4,髓样分化因子88(MyD88)及NF-κB蛋白表达;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测TLR4,NF-κB及IL-1β前体(Pro-IL-1β)mRNA表达水平;免疫荧光法检测NF-κB p65的核位移情况。结果:0～32 mg·L~(-1)TSD对细胞活力基本无影响;与正常组比较,模型组炎性因子TNF-α及IL-1β的分泌水平显著升高(P0.01),通路关键蛋白(TLR4,MyD88及NF-κB)和基因(TLR4,NF-κB及Pro-IL-1β)的表达显著升高(P0.01);与模型组比较,1～30 mg·L~(-1)TSD可显著下调炎性因子TNF-α及IL-1β的分泌(P0.01),通路关键蛋白(TLR4,MyD88及NF-κB)和基因(TLR4,NF-κB及Pro-IL-1β)的表达明显降低(P0.05,P0.01),细胞核内NF-κB p65叠加减少,部分转位至胞浆,抑制NF-κB p65核转位。结论:TSD可能通过下调TLR4,NF-κB及Pro-IL-1βmRNA的表达,减少炎性因子TNF-α及IL-1β分泌而发挥抗炎作用。     

酸枣仁汤对慢性睡眠剥夺大鼠学习记忆及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨酸枣仁汤改善睡眠剥夺诱导学习记忆障碍的作用机制。方法:将实验大鼠随机分为正常组、模型组、褪黑素组(2. 5×10~(-4)g·kg~(-1)·d~(-1))和酸枣仁汤组(12. 96 g·kg~(-1)·d~(-1)),除正常组外,其他各组构建慢性睡眠剥夺模型。各组连续给药28 d后,采用Morris水迷宫评价大鼠的学习记忆力,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测大鼠海马中TLR4,NF-κB p65及核转录因子抑制蛋白α(IκBα)的m RNA表达水平,采用免疫组化(IHC)检测大鼠海马中TLR4,IκBα,p-IκBα和NF-κB p65的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间明显增加(P 0. 01),而穿越平台次数和目标象限时间显著减少(P 0. 01);与模型组比较,褪黑素组和酸枣仁汤组大鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间减少(P 0. 05,P 0. 01),而穿越平台次数和目标象限时间增加(P 0. 05,P 0. 01)。与正常组比较,模型组大鼠血清中TNF-α,IL-1β,IL-6表达水平显著升高(P 0. 01);与模型组比较,褪黑素组和酸枣仁汤组大鼠血清中TNF-α,IL-1β,IL-6表达水平下降(P 0. 05,P 0. 01)。与正常组比较,模型组大鼠海马中TLR4,NF-κB p65 m RNA及蛋白表达水平升高(P 0. 01),而IκBαm RNA及蛋白表达水平下降(P 0. 01)。与模型组比较,褪黑素组和酸枣仁汤组大鼠海马中TLR4,NF-κB p65 m RNA及蛋白表达水平降低(P 0. 05,P 0. 01),而IκBαm RNA及蛋白表达水平升高(P 0. 05,P 0. 01)。与正常组比较,模型组大鼠海马中p-IκBα的蛋白表达水平显著升高(P 0. 01);与模型组比较,褪黑素组和酸枣仁汤组大鼠海马中IκBα的蛋白表达水平升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:酸枣仁汤具有改善睡眠剥夺大鼠学习记忆的作用,其机制可能与其抑制海马中TLR4/NF-κB信号通路相关。     

苗药金乌健骨方对类风湿关节炎滑膜细胞IL-17/IL-17R的影响

目的探讨苗药金乌健骨方总提物对类风湿关节炎滑膜组织成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)白细胞介素6(IL-6)、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素17(IL~(-1)7)分泌及IL~(-1)7受体(IL~(-1)7R)蛋白的影响。方法采用组织块法体外培养原代RA-FLS;分为金乌健骨方低、中、高剂量组(0.06,0.6,6.0 mg·m L~(-1)),雷公藤多苷组(0.03 mg·m L~(-1))及空白对照组,共5组。采用ELISA法检测IL-6、TGF-β、IL~(-1)7含量;PCR法检测IL~(-1)7R m RNA表达;Western Blot法检测IL~(-1)7R蛋白表达。结果与空白对照组比较,各给药组细胞培养上清液中IL-6、TGF-β、IL~(-1)7的浓度均有不同程度的降低(P0.01),IL~(-1)7R m RNA及蛋白表达水平均明显下降(P0.01)。与雷公藤多苷组比较,金乌健骨方高剂量组IL-6、TGF-β、IL~(-1)7水平及IL~(-1)7R蛋白表达量明显降低(P0.05),金乌健骨方中、高剂量组IL~(-1)7R m RNA表达水平明显降低(P0.05)。结论苗药金乌健骨方总提物能够下调RA-FLS中IL-6、TGF-β、IL~(-1)7的分泌,降低IL~(-1)7R m RNA及蛋白表达量。     

从TLR2/4正负免疫通路探讨益气清湿化瘀法调节PID反复发作患者免疫稳态的影响

目的从TLR2/4通路入手探讨益气清湿化瘀法对盆腔炎性疾病(PID)反复发作气虚血瘀夹湿证患者免疫机制的影响。方法随机选择PID反复发作患者,采用益气清湿化瘀综合方案治疗3个月。检测治疗前后外周血白细胞中TLR2/4蛋白及血清TLR2/4 mRNA,MyD88、Gas6、INF-α、IL-6表达水平。健康者作为对照组不做任何干预。结果①疗前治疗组外周血白细胞中TLR2/4蛋白阳性比率、TLR2/4mRNA、MyD88、Gas6、TNF-α、IL-6表达水平均高于健康对照组;②治疗前后自身对照比较,治疗后外周血单核细胞中TLR2/4蛋白及血清TLR2/4 mRNA、MyD88、Gas6、TNF-α、IL-6表达水平均降低(P0.05)。③相关性分析:治疗组TLR2/4蛋白比率及TLR2/4mRNA的表达变化均呈正相关,血清MyD88与TNF-α、IL-6表达呈正相关,Gas6与TLR2 mRNA的表达变化呈负相关,相关系数-0.327,而Gas6与TLR2/4蛋白、TLR4 mRNA变化无明显的相关性。结论推测益气清湿化瘀综合方案对PID反复发作患者的免疫调节作用机制可能是通过下调MyD88/Gas6介导的TLR2/4正负免疫通路相关因子表达及抑制下游炎性因子释放,维持患者机体的免疫稳态有关。     

葛根素通过circ-TLK1/miR-367-3p/TLR4抑制SK-N-SH细胞氧糖剥夺损伤

目的探讨葛根素对缺血性脑卒中(ischemicstroke,IS)神经细胞损伤的保护作用及机制。方法建立氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)诱导的人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH损伤模型,以葛根素进行干预,采用q RT-PCR法检测细胞circ-丝氨酸/苏氨酸蛋白扰动样激酶1(tousled-like kinase1,TLK1)和miR-367-3p mRNA表达情况;采用MTT法检测细胞存活率;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;采用Western blotting检测细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)蛋白表达情况。采用生物信息学在线软件预测miR-367-3p与circ-TLK1、TLR4之间的靶向关系;采用双荧光素酶标记实验和RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)实验验证靶向结合关系。结果与模型组比较,葛根素能够明显提高OGD诱导的SK-N-SH细胞存活率(P0.05、0.01、0.001),显著降低细胞凋亡率(P0.01、0.001),显著降低IL-6和TNF-α水平(P0.01、0.001)。模型组circ-TLK1 mRNA表达水平显著升高(P0.001),葛根素抑制circ-TLK1 mRNA表达水平(P0.001),过表达circ-TLK1能够逆转葛根素对OGD诱导的SK-N-SH细胞损伤保护作用(P0.01、0.001)。circ-TLK1能够靶向负调控miR-367-3p表达,模型组miR-367-3p mRNA表达水平显著降低(P0.001),葛根素显著上调miR-367-3p m RNA表达水平,抑制miR-367-3p能够逆转葛根素对OGD诱导的SK-N-SH细胞损伤保护作用(P0.05、0.001)。miR-367-3p能够靶向负调控TLR4蛋白表达,模型组TLR4蛋白表达水平显著升高(P0.001),葛根素显著下调TLR4蛋白表达水平(P0.001),过表达TLR4能够逆转葛根素对OGD诱导的SK-N-SH细胞损伤保护作用(P0.05、0.001)。circ-TLK1能够通过结合miR-367-3p调控TLR4表达。结论葛根素能够通过作用于circ-TLK1/miR-367-3p/TLR4对IS神经细胞损伤起到保护作用。     

黄芪甲苷通过TLR4/NF-κB通路改善脂多糖诱导的急性血管内皮损伤

目的:研究黄芪甲苷对脂多糖(LPS)诱导的急性血管内皮损伤的保护作用并探讨其可能分子机制。方法:在动物实验中,黄芪苷治疗组经连续灌胃给药14天后,除正常组外,其余各组均通过腹腔注射脂多糖(10mg/kg)以建立急性血管内皮损伤模型,DMT系统记录张力以评估血管舒张功能,ELISA法检测大鼠血清TNF-α和IL-6的含量,免疫组化法检测大鼠血管NF-κB p65蛋白的表达和分布,Western-blot法检测主动脉TLR4蛋白的表达;细胞水平采用CCK-8试剂盒检测人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖能力;ELISA法检测HUVEC上清液TNF-α和IL-6的含量;硝酸还原酶法检测HUVEC上清液一氧化氮(NO)的含量;Western-blot法检测HUVEC TLR4和核NF-κB p65蛋白的表达。结果:在动物水平,与模型组相比,40mg/kg和80mg/kg黄芪甲苷均能显著改善血管的舒张功能;40mg/kg以上组黄芪苷降低血清TNF-α和IL-6的含量、下调TLR4和NF-κB p65的表达水平。在细胞水平,与模型组相比,50μM和100μM黄芪甲苷能显著促进HUVEC的增殖能力,降低HUVEC上清液中TNF-α和IL-6的含量,增加上清液中NO的释放量,下调TLR4和核NF-κB p65蛋白的表达,而且,黄芪甲苷对LPS诱导的HUVEC损伤作用与NF-κB p65抑制剂相似。结论:黄芪甲苷对LPS诱导的急性血管内皮损伤具有保护作用,其可能通过TLR4/NF-κB p65信号通路发挥作用。     

藏茵陈对重症胰腺炎大鼠TLR9/MyD88/NF-κBp65信号通路的影响

目的:探讨藏茵陈对重症胰腺炎大鼠TLR9/MyD88/NF-κBp65信号通路的影响。方法:将大鼠分为假手术组、模型组及藏茵陈高、中、低剂量组,连续灌胃给药14天后造模。采用酶联免疫吸附法测定各组大鼠白细胞介素1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)及Toll样受体(toll-like receptors 9,TLR9)、髓样分化因子(Myeloid differentiation primary response gene,MyD88)、核转录因子kappa B p65(nuclear factor kappa Bp65,NF-κBp65)的蛋白表达;实时荧光定量PCR测定IL-1、IL-6、TNF-α及TLR9、MyD88、NF-κBp65的基因表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠IL-1、IL-6、TNF-α及TLR9、MyD88、NF-κBp65的蛋白和基因表达均升高(P0.05);与模型组比较,藏茵陈高剂量组能够降低大鼠胰腺组织IL-1、IL-6、TNF-α及TLR9、MyD88、NF-κBp65的蛋白和基因表达(P0.05)。结论:藏茵陈能阻断TLR9/MyD88/NF-κBp65信号通路,减轻重症胰腺炎大鼠炎症反应。