BMP-7对TGF-β_1诱导人肾小管上皮细胞外基质表达的影响

目的观察骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对TGF-β1诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2)细胞外基质(ECM)成分表达的影响,以探讨其延缓肾间质纤维化病变的作用机制。方法将体外培养的HK-2细胞分为空白对照组,3μg.L-1TGF-β1组,BMP-7组,TGF-β1加不同浓度BMP-7组。免疫荧光检测FN的表达;RT-PCR和Western blot分别检测FN、ColⅠα1mRNA及蛋白的表达。结果免疫荧光检测结果显示,3μg.L-1TGF-β1刺激HK-2细胞48h后,FN表达明显增强;加入200μg.L-1BMP-7干预后荧光明显减弱。RT-PCR和Western blot结果显示,TGF-β1刺激HK-2细胞48h后,FN、ColⅠα1mRNA及蛋白表达均明显高于对照组(P<0.01);BMP-7(100～400μg.L-1)可在mRNA及蛋白水平呈剂量依赖性下调TGF-β1诱导的FN、ColⅠα1的表达。结论BMP-7能抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞FN、ColⅠα1的合成。表明BMP-7抑制肾小管间质纤维化的进展、改善肾功能的作用,部分是通过抑制肾小管上皮细胞分泌细胞外基质实现的。     

曲格列酮对转化生长因子-β_1诱导的HK-2细胞纤连蛋白和胶原Ⅰ型基因表达的影响

目的观察曲格列酮对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞外基质纤连蛋白和胶原Ⅰ型的影响,探讨曲格列酮抗肾间质纤维化的潜在作用。方法将曲格列酮0,0.25,0.5,1,2.5,5和10μmol.L-1预处理HK-2细胞2h,随后加入TGF-β15mg.L-1作用24h,利用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测曲格列酮对HK-2细胞的毒性作用;曲格列酮0,1,2.5,5和10μmol.L-1预处理HK-2细胞2h,再加入TGF-β15mg.L-1作用24h,通过实时荧光定量PCR检测HK-2细胞外基质主要成分胶原Ⅰ型mRNA和纤连蛋白mRNA表达。结果曲格列酮0.25～5μmol.L-1对HK-2细胞膜完整性无影响,LDH的释放与正常对照组无明显差异,曲格列酮10μmol.L-1组LDH释放率为(10.7±5.3)%,明显高于正常对照组(P<0.01)。与正常对照组相比,曲格列酮1,2.5,5和10μmol.L-1单独作用并没有增加HK-2细胞外基质中胶原Ⅰ型纤维和纤连蛋白的表达,而TGF-β1刺激下胶原Ⅰ型纤维和纤连蛋白表达明显上调,曲格列酮提前干预下纤连蛋白mRNA及胶原Ⅰ型mRNA表达下降,曲格列酮2.5,5和10μmo.lL-1可显著下调纤连蛋白mRNA表达(P<0.05,P<0.01);曲格列酮5和10μmol.L-1可显著下调胶原Ⅰ型mRNA表达(P<0.05)。结论曲格列酮可能具有拮抗肾间质纤维化的潜在作用,其作用机制可能与抑制HK-2细胞纤连蛋白和胶原Ⅰ型纤维的增加有关。     

二甲双胍对高糖诱导的肾小管上皮细胞TGF-β/ERK/MMP-9通路及上皮间质转化的影响

目的探讨二甲双胍对高糖诱导的肾小管上皮HK-2细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其机制。方法以0、7.5、15.0、30.0、60.0、120.0mmol/L二甲双胍作用48h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测HK-2细胞活力以筛选合适的二甲双胍作用浓度;将体外培养的HK-2细胞分为对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高渗组(24.5 mmol/L甘露醇和5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+7.5 mmol/L二甲双胍组(30 mmol/L D-葡萄糖+7.5 mmol/L二甲双胍)和高糖+15 mmol/L二甲双胍组(30 mmol/L D-葡萄糖+15 mmol/L二甲双胍),倒置显微镜观察各组HK-2细胞形态,免疫印迹法(Western blotting)检测各组HK-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、转化生长因子-β(TGF-β)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化(p)-ERK、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测α-SMA、E-cadherin、TGF-β、ERK、MMP-9 mRNA表达水平。结果与对照组相比,30.0、60.0mmol/L二甲双胍作用后HK-2细胞活力明显升高,120.0mmol/L二甲双胍作用后HK-2细胞活力明显降低(P0.05),而7.5、15.0mmol/L二甲双胍作用后HK-2细胞活力差异无统计学意义(P0.05);与对照组比较,高渗组细胞形态无明显改变,且细胞中α-SMA、E-cadherin、TGF-β、MMP-9蛋白和mRNA表达水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表达水平差异均无统计学意义(P0.05),但高糖组细胞失去原有形态变为长梭形,且细胞中α-SMA、TGF-β蛋白和mRNA表达水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表达水平明显升高,而MMP-9、E-cadherin蛋白和mRNA表达水平明显降低(P0.05);与高糖组比较,高糖+7.5mmol/L二甲双胍组、高糖+15.0mmol/L二甲双胍组细胞形态由长梭形逐渐变成圆形或椭圆形,且α-SMA、TGF-β蛋白和mRNA表达水平以及p-ERK/ERK蛋白、ERK mRNA表达水平明显降低,而MMP-9、E-cadherin蛋白和mRNA表达水平明显升高(P0.05),且高糖+15.0 mmol/L二甲双胍组细胞上述指标变化幅度大于高糖+7.5 mmol/L二甲双胍组。结论二甲双胍可抑制高糖诱导的肾小管上皮HK-2细胞EMT,其作用机制可能与抑制TGF-β/ERK/MMP-9通路活化有关。     

曲格列酮对转化生长因子-β1诱导的HK-2细胞纤连蛋白和胶原I型基因表达的影响

目的 观察曲格列酮对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞外基质纤连蛋白和胶原I型的影响,探讨曲格列酮抗肾间质纤维化的潜在作用.方法 将曲格列酮0,0.25,0.5,1,2.5,5和10μmol·L-1预处理HK-2细胞2 h,随后加入TGF-β1 5 mg·L-1作用24 h,利用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测曲格列酮对HK-2细胞的毒性作用;曲格列酮0,1,2.5,5和10 μmo·L-1预处理HK-2细胞2 h,再加入TGF-β1 5 mg·L-1作用24 h,通过实时荧光定量RT-PCR检测HK-2细胞外基质主要成分胶原I型mRNA和纤连蛋白mRNA表达.结果 曲格列酮0.25～5 μmol·L-1对HK-2细胞膜完整性无影响,LDH的释放与正常对照组无明显差异,曲格列酮10 μmol·L-1组LDH释放率为(10.7±5.3)%,明显高于正常对照组(P<0.01).与正常对照组相比,曲格列酮1,2.5,5和10μmo·L-1单独作用并没有增加HK-2细胞外基质中胶原I型纤维和纤连蛋白的表达,而TGF-β1刺激下胶原I型纤维和纤连蛋白表达明显上调,曲格列酮提前干预下纤连蛋白mRNA及胶原I型mRNA表达下降,曲格列酮2.5,5和10 μmo·L-1可显著下调纤连蛋白mRNA表达(P<0.05,P<0.01);曲格列酮5和10 μmol·L-1可显著下调胶原I型mRNA表达(P<0.05).结论 曲格列酮可能具有拮抗肾间质纤维化的潜在作用,其作用机制可能与抑制HK-2细胞纤连蛋白和胶原I型纤维的增加有关.     

法舒地尔对高糖培养的肾小管上皮细胞转分化的抑制作用

目的探讨法舒地尔对高糖培养人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响及可能作用机制。方法人肾小管上皮细胞同时加入葡萄糖60 mmol·L-1和法舒地尔20μmol·L-1。配体结合沉淀法检测葡萄糖60mmol·L-1作用0～24 h后细胞Rho A活性,免疫细胞化学技术检测上皮钙黏素表达,Western印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,ELISA法检测细胞培养上清液转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。结果在一定时间范围内,高糖能刺激细胞Rho A分子活化;与正常对照组比较,葡萄糖60 mmol·L-1培养HK-2细胞72 h后上皮钙黏素表达明显减少(P<0.01),α-SMA表达明显增多(P<0.01),TGF-β1分泌增多(P<0.01),而葡萄糖5.5 mmol·L-1+甘露醇54.5 mmol·L-1高张组无明显差异。法舒地尔20μmol·L-1同步干预后,与高糖组比较,细胞上皮钙黏素表达明显增多〔(0.03±0.01)vs(0.08±0.02),P<0.05〕,α-SMA表达下降(P<0.05),48 h时TGF-β1分泌明显减少〔(128±11)vs(49±5)μg.g-1(P<0.05)〕。结论法舒地尔能抑制高糖培养的肾小管上皮细胞转分化,可能部分通过减少TGF-β1的分泌发挥作用。     

全反式维甲酸对HFL-Ⅰ细胞α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、热休克蛋白47表达的影响

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ),热休克蛋白47(HSP47)mRNA和蛋白表达的影响。方法体外培养HFL-Ⅰ细胞,MTT法检测不同浓度TGF-β1和ATRA分别作用3 d对HFL-Ⅰ细胞增殖能力的影响。随后分为6组:对照组、5μg·L-1 TGF-β1组、10μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1TGF-β1+0.1μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1 TGF-β1+1μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1 TGF-β1+10μmol·L-1 AT-RA组,RT-PCR和Western blot方法分别检测各实验组细胞中α-SMA,Collagen-Ⅰ,HSP47 mRNA和蛋白的表达。结果①MTT法检测结果显示不同浓度的TGF-β1可刺激HFL-Ⅰ细胞增殖,呈浓度依赖性(P<0.05);不同浓度的ATRA对HFL-Ⅰ细胞增殖能力均有明显抑制作用,并随药物浓度的增加而增强(P<0.05)。②5μg.L-1 TGF-β1诱导后,HFL-Ⅰ细胞中α-SMA,Collagen-I,HSP47 mRNA和蛋白表达均明显上调(P<0.05)。③ATRA以浓度依赖性方式下调经TGF-β1诱导的HFL-Ⅰ细胞中α-SMA,Collagen-I,HSP47 mR-NA和蛋白的表达(P<0.05)。结论 ATRA能够抑制TGF-β1诱导的HFL-Ⅰ细胞的分化,其作用机制可能与降低Col-lagen-I、HSP47表达有关。     

生长抑制因子AcSDKP对转化生长因子β1促活化肝星状细胞合成和分泌细胞外基质的影响

目的:观察生长抑制因子N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β(1TGF-β1)促活化肝星状细胞(HSC)合成和分泌细胞外基质(ECM)的影响,探讨其抗纤维化作用机制。方法:大鼠HSC经原代分离培养活化后,分为空白对照组、TGF-β1组(5μg.L-1)、AcSDKP组(1nmol.L-1)、混合处理组(AcSDKP1nmol.L-1+TGF-β15μg.L-1),每组6个复孔,加入相应药物培养72h后,观察各组HSC形态学变化,检测其中Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达及HSC上清液中玻璃酸(HA)的含量。结果:与空白对照组比较,TGF-β1组HSCColⅠmRNA表达、HA含量均明显升高(P<0.05),AcSDKP组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05);与TGF-β1组比较,混合处理组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:AcSDKP可能通过抑制TGF-β1介导的活化HSC合成和分泌ECM,从而发挥其抗肝纤维化作用。     

PGF_(2α)对NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌的影响

目的探讨PGF2α对葡萄糖刺激性胰岛素分泌和[Ca2+]i变化的影响。方法运用放免方法检测不同浓度的PGF2α在不同情况下对NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌量的变化,并以F luo-3AM为探针,利用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙的改变。结果在16.5 mmol.L-1葡萄糖刺激下,0.1、1、5μmol.L-1的PGF2α剂量依赖性的促进了NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌,其中5μmol.L-1时作用最强(P<0.01),而在10μmol.L-1时,PGF2α却抑制了葡萄糖刺激的胰岛素分泌(P<0.05);预先加入0.5 mmol.L-1EGTA后,5μmol.L-1的PGF2α不能促进胰岛素分泌,同样在预先加入n ifed ip ine或EGTA+n ifed ip ine后,PGF2α也无促进胰岛素分泌(P>0.05)。在0、5.5 mmol.L-1葡萄糖刺激下,5μmol.L-1的PGF2α无促进胰岛素分泌作用(P>0.05)。另外,应用5μmol.L-1的PGF2α能够引起β细胞内钙升高(P<0.01),在无钙环境下,PGF2α只引起缓慢的幅度较小的细胞内钙升高,恢复细胞外钙浓度时,β细胞内钙升高(P<0.01)。结论在NIT-1β细胞,一定范围浓度的PGF2α能够促进高浓度葡萄糖刺激下的胰岛素分泌,可能与PGF2α增加细胞外钙内流有关。     

亚硝酸钠诱导人肝癌SMMC-7721细胞上皮-间质转化

探讨亚硝酸盐诱导人肝癌SMMC-7721细胞发生上皮-间质转化(EMT)的作用。0.25～25 mmol·L-1亚硝酸钠处理细胞48 h后,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中的TGF-β1、IL-6和IL-8水平,相差倒置显微镜下观察细胞形态学变化,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞移动和侵袭能力,同时采用Western blotting方法检测EMT相关标记蛋白和p-AKT及下游信号分子的蛋白表达水平。结果表明,亚硝酸钠处理人肝癌细胞48 h,可以引起TGF-β1的分泌显著升高,并呈现剂量依赖性。亚硝酸钠对IL-8及IL-6的分泌也具有一定的增加作用,但不具有剂量依赖性。0.25 mmol·L-1亚硝酸钠作用48 h,诱导细胞形态向间质转化,增强波形蛋白和p-AKT及其下游信号蛋白的表达,抑制E型钙黏素蛋白的表达,促进细胞迁移和侵袭能力。结果提示,亚硝酸钠可能通过促进细胞分泌TGF-β1和IL-8,诱导人肝癌SMMC-7721细胞上皮-间质转化。     

屋尘螨提取液对哮喘气道上皮细胞间质转化的影响

目的探究屋尘螨提取液(House dust mite extracets,HDM)对人支气管上皮16-HBE细胞间质转化(Epithelia-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法以16-HBE细胞株为研究对象,分别加入HDM和转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1),应用MTT法和Western blot法,检测细胞增殖情况以及EMT过程中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果 (1)HDM刺激后,16-HBE细胞形态改变不显著,同时对细胞增殖无显著影响;与TGF-β1联合作用后,细胞形态发生EMT变化,并且显著促进细胞增殖(P<0.05)。(2)HDM刺激对16-HBE细胞中E-cadherin、Vimentin和α-SMA蛋白表达均无显著影响;与TGF-β1联合作用后,E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05),Vimentin和α-SMA蛋白表达升高(P<0.05),效果较TGF-β1单独应用更为明显。结论 HDM不能直接刺激上皮细胞发生EMT改变,但可通过促进TGF-β1诱导的上皮细胞EMT改变而发挥作用。     

滴滴涕对人大肠癌DLD1细胞上皮间充质转化的影响

目的探究滴滴涕(DDT)对人结直肠腺癌上皮细胞(DLD1)上皮间充质转化的影响及机制。方法DLD1细胞用DDT 0.01,0.1,1.0,10.0和100.0 nmol·L~(-1)处理48 h后,倒置显微镜下观察细胞形态;实时荧光定量PCR法检测E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白、波形蛋白和锌指转录因子Snail1的mRNA表达。Western蛋白质印迹法检测信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路主要蛋白STAT3和p-STAT3的蛋白水平。用STAT3抑制剂WP1066(5μmol·L~(-1))处理,通过Western印迹法和实时荧光定量PCR法检测其对DDT诱导的STAT3/Snail1信号通路中p-STAT3、STAT3的蛋白水平和上皮间充质转化关键因子E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白、波形蛋白和锌指转录因子Snail1的mRNA水平的影响。结果与正常对照组相比,DLD1细胞在DDT处理48 h后,细胞形态由卵圆形逐渐变为长梭形,E-钙黏着蛋白mRNA相对表达显著降低(P<0.01),为正常对照组的(42.4±2.8)%。N-钙黏着蛋白和波形蛋白mRNA相对表达显著提高(P<0.01),为正常对照组的1.91±0.1倍和(1.5±0.2)倍。STAT3信号通路蛋白STAT3和p-STAT3蛋白表达均升高(P<0.01),为正常对照组的2.1和1.8倍。锌指转录因子Snail1的mRNA相对表达显著升高(P<0.01),是正常对照组的(1.5±0.1)倍。STAT3抑制剂WP1066 5μmol·L~(-1)处理后,锌指转录因子Snail1 mRNA的表达明显下调(P<0.01),为DDT 1.0 nmol·L~(-1)处理组的(56.3±0.9)%,同时抑制DDT诱导的E-钙黏着蛋白mRNA表达升高(P<0.01),为DDT 1.0 nmol·L~(-1)处理组的2.5±0.1倍,N-钙黏着蛋白和波形蛋白mRNA表达降低(P<0.01),分别为DDT 1.0 nmol·L~(-1)处理组的(50.2±2.9)%和(61.6±6.1)%。结论 DDT可能通过STAT3/Snail1信号通路改变上皮间充质转化子E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白和波形蛋白的表达,进而促进大肠癌细胞上皮间充质转化。     

小檗碱调控NLRP3炎症小体对TGF-β1诱导HK-2细胞转分化的影响

摘要：目的:探讨小檗碱（BBR）调控NLRP3炎症小体对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）转分化的影响。方法:计算机分子对接预测BBR与NLRP3炎症小体的结合情况;采用CCK8法检测不同浓度的BBR对HK-2细胞增殖的影响;将HK-2细胞分为正常组、模型组和小檗碱低、中、高剂量组(10,25,50μmol·L-1),小檗碱预孵18 h后加入TGF-β1刺激48 h,镜下观察各组细胞形态;采用Western blotting法检测E-钙粘蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、NOD样受体蛋白3（NLRP3）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（caspase-1）的表达; caspase-1活性检测试剂盒检测caspase-1的酶活力;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素-1β（IL-1β）的含量。结果:分子对接显示BBR与NLRP3、pro-caspase-1存在结合,可靠性较高。与正常组比较,BBR对HK-2细胞的增殖呈浓度和时间依赖性抑制（P<0.05）。与模型组比较,BBR(10,25,50μmol·L-1)可改善HK-2细胞形态,使其趋向椭圆形;上调E-cadherin蛋白和下调α-SMA、NLRP3及caspase-1蛋白的表达（P<0.05）;并可降低caspase-1的酶活力、减少IL-1β的分泌（P<0.05）。结论:BBR能改善TGF-β1诱导HK-2细胞的转分化,可能与抑制NLRP3炎症小体活化有关。     

丹酚酸B对肾小管上皮细胞转分化的影响及机制

目的:用转化生长因子(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化,观察丹酚酸B(SA-B)对HK-2细胞转分化过程的干预作用并初步探讨其机制。方法:TGF-β1(5 ng.mL-1)刺激HK-2细胞,用丹酚酸B(SA-B)(10μmol.L-1)干预;用免疫荧光法检测各组HK-2细胞黏着斑激酶(FAK)、整合素β1(β1-integrin)的表达。结果:TGF-β1成功诱导HK-2转分化;相比空白对照组,SA-B可抑制HK-2转分化,且SA-B可有效降低HK-2细胞FAK及β1-integrin蛋白的表达(P均小于0.05)。结论:SA-B可有效调节人肾小管上皮细胞转分化过程,其机制可能与其能调控HK-2细胞FAK及β1-integrin蛋白的表达有关。     

红花黄色素通过活性氧影响TGF-β1诱导的卵巢癌SKOV-3细胞生物学特性的机制学研究

摘要：目的:探讨红花黄色素对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的卵巢癌SKOV-3细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法:采用噻唑蓝法检测不同浓度(0.15,0.25,0.50,1.00 mg·L-1)红花黄色素对SKOV-3细胞增殖活力的影响,并根据红花黄色素抑制作用结果将SKOV-3细胞分为对照组、红花黄色素组(0.25 mg·L-1)、TGF-β1组(10 ng·ml-1)和红花黄色素+TGF-β1组(0.25 mg·L-1+10 ng·ml-1),采用噻唑蓝法、Transwell小室实验和划痕实验分别检测各组细胞增殖、侵袭和迁移能力,免疫印迹法检测各组细胞中E-钙黏素、N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达,活性氧检测试剂盒检测各组细胞内活性氧水平。结果:红花黄色素可呈浓度依赖性抑制SKVO3细胞增殖。与对照组相比,10 ng·ml-1TGF-β1处理后SKVO3细胞增殖、侵袭、迁移能力和细胞中N-钙黏蛋白、波形蛋白表达水平以及细胞内活性氧水平明显增强（P<0.05）,且细胞中E-钙黏素蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;而0.25 mg·L-1红花黄色素处理后SKVO3细胞则与TGF-β1处理后的结果相反（P<0.05）;与TGF-β1组相比,红花黄色素联合TGF-β1可明显降低TGF-β1对SKVO3细胞的影响（P<0.05）。结论:红花黄色素可抑制TGF-β1诱导的卵巢癌SKOV-3细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制细胞内活性氧水平,减弱其介导的上皮间质转化有关。     

槲皮素抑制TGF-β1诱导SMMC-7721人肝癌细胞发生EMT的效果研究CSCD

目的旨在研究槲皮素抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导SMMC-7721人肝癌细胞发生上皮-间质转化(EMT)的效果。方法将肝癌细胞分为对照组(10 ng/ml TGF-β1)、低剂量组(50 nmol/l槲皮素+10 ng/ml TGF-β1)、高剂量组(10 ng/ml TGF-β1+100 nmol/l槲皮素),分别处理6 h,光学显微镜观察肝癌细胞形态学变化。6、12和24 h后,观察肝癌细胞迁移及侵袭能力。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定肝癌细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)mRNA表达。Western blot法测定肝癌细胞E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白。结果经TGF-β1诱导后,肝癌细胞发生明显EMT。划痕实验结果显示,12和24 h时,高剂量组和低剂量组肝癌细胞迁移划痕空隙长度明显低于对照组(P<0.05)。侵袭实验中,与对照组比较,低和高剂量组每视野穿膜肝癌细胞数明显降低,且高剂量组穿膜高于低剂量组(P<0.05)。RT-PCR实验结果显示,对照组E-cadherin mRNA表达明显低于高剂量组和低剂量组(P<0.01),N-cadherin和Vimentin mRNA表达明显高于高剂量组和低剂量组(P<0.01)。低剂量E-cadherin mRNA表达明显低于高剂量组(P<0.01),N-cadherin和Vimentin mRNA表达明显高于高剂量组(P<0.01)。Western blot实验结果显示,对照组E-cadherin蛋白表达明显低于高剂量组和低剂量组(P<0.01),N-cadherin、Vimentin蛋白明显高于高剂量组和低剂量组(P<0.01)。高剂量组E-cadherin蛋白表达明显高于低剂量组(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显低于低剂量组(P<0.01)。结论槲皮素通过增加E-cadherin蛋白表达表达,降低N-cadherin、Vimentin蛋白表达,使得TGF-β1诱导的肝癌细胞EMT得到明显抑制。     

抑制血清应答因子表达影响转化生长因子β1介导的食管癌上皮细胞-间质转化的作用研究

目的研究血清应答因子( serum response factor,SRF)小干扰 RNA(small interference RNA,siRNA)影响转化生长因子 β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的 Eca-109食管癌细胞发生上皮间质转化( epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用机制。方法体外培养 Eca-109食管癌细胞,实验分组为阴性对照 siRNA组、 TGF-β1+阴性对照 siRNA组、 TGF-β1+SRF- siRNA组。划痕实验检测细胞迁移能力;免疫细胞化学染色法检测 E-钙黏蛋白( E-cadherin)的表达;蛋白质印迹法检测 E-钙黏蛋白、 SRF、N-钙黏蛋白( N-cadherin)、 α-平滑肌肌动蛋白( α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白的表达。结果与阴性对照 siR- NA组细胞迁移百分比( 10.00±2.00)%相比较, TGF-β1+阴性对照 siRNA组细胞迁移百分比为( 50.67±4.73)%,迁移能力增强;与 TGF-β1+阴性对照 siRNA组相比较, TGF-β1+SRF-siRNA组细胞迁移百分比为(29.00±3.00)%,迁移能力下降,均差异有统计学意义( P＜0.001)。与阴性对照 siRNA组的 E-钙黏蛋白( 1.07±0.12)、 N-钙黏蛋白( 0.28±0.25)、 SRF(0.25±0.06)、 α-SMA(1.19±0.37)蛋白相比较, TGF-β1+阴性对照 siRNA组 E-钙黏蛋白( 0.45±0.06)表达下调,而 N-钙黏蛋白( 3.27±0.67)、 SRF(2.48±0.05)、 α-SMA(4.23±0.53)蛋白表达上调(均 P＜0.001);与 TGF-β1+阴性对照 siRNA组相比较, TGF-β1+SRF-siRNA组 E-钙黏蛋白(0.82±0.05)表达上调, N-钙黏蛋白( 1.31±0.13)、 SRF(1.46±0.16)、 α-SMA(2.60±0.28)蛋白表达下调(均 P＜0.001)。结论基因沉默 SRF能够抑制 TGF-β1介导的食管癌细胞发生 EMT。     

雷公藤多苷对高糖诱导人肾小管上皮细胞凋亡及CXCL10/CXCR3轴的影响

目的 探讨雷公藤多苷（TG）对高糖诱导人肾小管上皮细胞HK-2凋亡及CXC趋化因子配体10(CXCL10)/CXC趋化因子受体3(CXCR3)轴的影响。方法 体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,并分为对照组（含5.5 mmol/L葡萄糖培养基）、高糖组（含25 mmol/L葡萄糖培养基）和12.5、25、50 mg/L TG组（分别用12.5、25、50 mg/L的TG和25 mmol/L葡萄糖培养基）。四甲基偶氮唑盐比色法检测HK-2细胞活力;流式细胞术检测HK-2细胞凋亡情况;2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯法检测HK-2细胞活性氧（ROS）水平;黄嘌呤氧化酶法检测HK-2细胞超氧化物歧化酶（SOD）水平;酶联免疫吸附试验检测HK-2细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;蛋白免疫印迹法检测HK-2细胞凋亡蛋白[胱天蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-9]以及CXCL10、CXCR3蛋白表达。结果 与对照组比较,高糖组HK-2细胞活力、SOD水平显著降低,凋亡率、ROS、TNF-α、TGF-β1水平及Caspase-3、Casp...     

桦木酸对人胃癌MKN-45细胞上皮-间充质转化的影响北大核心CSCD

目的观察桦木酸(betulinic acid,BA)对转化生长因子-β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)诱导的人胃癌MKN-45细胞迁移与侵袭能力的影响,并从上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)方面探讨相关作用机制。方法体外培养MKN-45细胞,采用CCK-8法分别检测24、48和72 h不同浓度BA对MKN-45细胞增殖的影响;通过细胞划痕实验和Transwell侵袭实验观察BA(5、10、20μmol·L^(-1))和TGF-β1抑制剂LY2109761(10μmol·L^(-1))对TGF-β1(10μg·L^(-1))诱导后MKN-45细胞侵袭与转移水平的影响;采用Western blot法检测各组MKN-45细胞中TGF-β1、E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、N-钙黏蛋白(N-Cadherin)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达情况。结果BA能以时间及浓度依赖性地抑制MKN-45细胞的增殖,干预24、48、72 h后的IC 50值分别为212.8、22.72、13.17μmol·L^(-1)。与空白组相比,TGF-β1诱导后MKN-45细胞的划痕迁移(P<0.05)与Transwell侵袭(P<0.01)水平明显增加;MKN-45细胞中TGF-β1(P<0.01)、N-Cadherin(P<0.05)、MMP-2(P<0.01)明显上调,E-Cadherin(P<0.01)明显下调。与TGF-β1组相比,LY2109761能明显逆转TGF-β1诱导的MKN-45细胞迁移与侵袭能力(P<0.01),下调TGF-β1、N-Cadherin、MMP-2(P<0.01),并上调E-Cadherin(P<0.01);BA能呈浓度依赖性地抑制TGF-β1诱导下MKN-45细胞的迁移与侵袭能力(P<0.01),下调TGF-β1(P<0.01)、N-Cadherin(P<0.01)、MMP-2(P<0.05或P<0.01),并上调E-Cadherin(P<0.01)。结论BA能抑制胃癌MKN-45细胞的迁移与侵袭能力,其机制可能与阻滞TGF-β1诱导的EMT进程有关。     

贝那普利对氧化低密度脂蛋白诱导的肾小管上皮细胞间质转化及转化生长因子-β/Smad通路的影响

目的探讨贝那普利对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化(EMT)及转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分为对照组、ox-LDL组(50μg/mL ox-LDL)、贝那普利组(50μg/mL ox-LDL+10μmol/L贝那普利)、TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1)、贝那普利+TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1+10μmol/L贝那普利)。高倍光学显微镜观察各组NRK-52E细胞表型变化;免疫荧光染色法检测EMT标志性蛋白α-SMA、E-cadherin荧光强度;免疫印迹法检测各组NRK-52E细胞中α-SMA、E-cadherin蛋白及TGF-β/Smad通路蛋白表达水平。结果与对照组比较,ox-LDL组梭形或不规则形细胞增多,α-SMA荧光强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05);E-cadherin荧光表达强度减弱,蛋白量明显降低(P0.05)。与ox-LDL组比较,贝那普利组细胞表型改变明显减轻,α-SMA荧光表达强度明显减弱,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05);TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),Ecadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与贝那普利组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度明显增强,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与TGF-β1组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、pSmad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05)。结论贝那普利可逆转ox-LDL诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化的发生,机制可能是通过抑制TGF-β/Smad通路活化而发挥作用。