阿霉素免疫脂质体对前列腺癌的体外抗癌活性

本研究将载阿霉素的脂质体与抗HER2单抗连接制成免疫脂质体,导向前列腺癌细胞并考察其体外抗癌活性。1材料与方法1.1免疫脂质体的制备人源化单抗HER2-Fab’按Iden的方法[1]与Mal-PEG-DSPE相联接,然后按适当的比例与阿霉素脂质体于55℃水浴30min。未结合的抗体及游离阿霉素经Sephrose CL-4B层析。脂质体中包裹的阿霉素的浓度用分光光度仪确定(A=490nm)。1.2免疫脂质体的稳定性测定将载药脂质体及免疫脂质体分别与50%人血浆混合并置于10孔微透析器中,放入37℃的50%人血浆中温浴,分别于4,8,24h取出部分载药脂质体及免疫脂质体,经Sepha…     

R8多肽修饰表阿霉素与双氢青蒿素脂质体处方优选及含量测定

目的:优选R_8多肽修饰表阿霉素与双氢青蒿素脂质体的处方,并建立脂质体中表阿霉素的含量测定方法。方法:以薄膜分散法-硫酸铵梯度法制备R_8多肽修饰表阿霉素与双氢青蒿素脂质体,采用星点设计-响应面法对卵磷脂/胆固醇(EPC/Chol)质量比、超声功率、卵磷脂/表阿霉素(EPC/EPI)质量比进行优选,采用高效液相色谱法(HPLC)法测定脂质体中表阿霉素的含量。结果:优选后卵磷脂/胆固醇(EPC/Chol)质量比为4∶1,超声功率为300 W,卵磷脂/表阿霉素(EPC/EPI)质量比为25∶1,所得脂质体平均包封率为(94.5%±0.51%)(n=3);脂质体中表阿霉素的平均含量为(150.01±1.26)μg/mL(n=3)。结论:优化所得处方稳定,适用于制备R_8多肽修饰表阿霉素与双氢青蒿素脂质体;建立的HPLC法准确可靠,简单快速,可用于测定脂质体中表阿霉素的含量。     

PEG修饰脂质体对阿霉素载药量的影响

目的:在以阿霉素为模型药物用复乳法制备PEG修饰脂质体实验中,发现当制备完毕立即上柱分离时,包封率约为50%;但当样品放置过夜后再测包封率却为98%.本文通过实验分析该现象产生的原因.方法:用不同方法制备PEG修饰的空白脂质体,考察是否仍能吸附阿霉素;制备无PEG修饰的空白脂质体,考察对阿霉素有无吸附作用;设计不同的PEG-阿霉素配比,在不同的孵育时间取样测定对阿霉素的吸附量;将阿霉素溶液直接与PEG20000混合孵育,考察无脂质体时PEG对阿霉素的吸附; 另选土霉素为模型药物,考察是否仍然存在吸附作用.结果:不同方法制备的PEG修饰的空白脂质体对阿霉素都有吸附;无PEG修饰的空白脂质体对阿霉素无吸附作用;PEG对阿霉素的吸附进程受PEG-阿霉素配比、孵育时间的影响;单独的PEG20000对阿霉素也能很好地吸附; 以土霉素代替阿霉素,这种吸附作用仍然存在.结论:该现象是由于PEG链对体相中阿霉素或土霉素的吸附而引起的;这种吸附可能是阿霉素的羟基或氨基对PEG链上氧原子之间的氢键作用.提示这种相互作用的存在能够提高PEG修饰的长循环脂质体,以及含PEG材料的微囊、微球等对这类多羟基或多氨基小分子药物的载药量.     

CMCT-FA修饰阿霉素纳米脂质体的制备与体外pH敏感释放

利用1乙基3(3二甲基丙基)碳二亚胺 (EDC)介导反应合成了叶酸偶联的羧甲基壳聚糖（CMCTFA）,以阿霉素为模型药物,采用薄膜分散pH梯度法制备CMCTFA修饰的阿霉素纳米脂质体。考察了CMCTFA修饰阿霉素纳米脂质体的包封率、粒径、ζ电位以及在不同pH释药介质中的释放特性。结果表明：CMCTFA修饰阿霉素纳米脂质体的ζ电位较未修饰脂质体明显减小,但较CMCT修饰阿霉素纳米脂质体无明显差别;与阿霉素纳米脂质体和CMCT修饰的阿霉素纳米脂质体相比,CMCTFA修饰的阿霉素纳米脂质体在酸性条件下的药物释放速率和药物释放量均有明显提高。     

pH敏感阿霉素纳米脂质体的制备及性能

以阿霉素为模型药物,采用薄膜分散-pH 梯度法制备羧甲基壳聚糖修饰的纳米脂质体,并研究了该纳米脂质体的包封率、形态、粒径、稳定性和 pH 敏感性.结果表明:羧甲基壳聚糖修饰后阿霉素脂质体的ζ电位、酸性条件下药物渗漏速率、渗漏百分率比未修饰的阿霉素脂质体均有明显提高.所制pH敏感阿霉素纳米脂质体包封率达87%左右,体积粒径为(74.7±11.5)am;4℃冷藏保存3个月稳定性良好.     

穿膜肽修饰表阿霉素与五味子乙素脂质体的处方优选及细胞毒性评价

目的构建穿膜肽修饰表阿霉素与五味子乙素脂质体,通过正交试验设计优选出最佳制备工艺,并对构建的脂质体进行细胞毒性评价。方法采用硫酸铵梯度法制备脂质体,采用高效液相色谱仪测定脂质体包封率,利用正交设计优选出脂质体的最佳制备工艺,最后采用SRB染色法进行细胞毒性实验以考察脂质体对肿瘤细胞的杀伤效果。结果脂质体的最优处方为磷脂:胆固醇=5∶1(质量比),磷脂:表阿霉素=25∶1(质量比),水化环境pH=7.3,细胞粉碎功率为500 W。穿膜肽修饰表阿霉素与五味子乙素脂质体对LLT细胞的IC50值为(2.65±1.57)μmol/L,对U87细胞的IC50值为(4.96±3.46)μmol/L。结论优选出的穿膜肽修饰表阿霉素与五味子乙素脂质体的制备工艺条件的重复性良好,操作简便,构建的脂质体具有明显的肿瘤细胞毒性。     

奥曲肽靶向阿霉素脂质体的制备及其体外性质

探讨奥曲肽靶向脂质体的制备方法。首先采用乙醇注入法和硫酸铵梯度载药法制备阿霉素普通脂质体(P-L),单因素研究多种处方组成及工艺参数对脂质体性质的影响。随后在阿霉素脂质体表面插入奥曲肽-聚乙二醇₄₀₀₀-氢化磷脂酰乙醇胺（Octreotide- PEG_{4000-HSPE）,获得奥曲肽靶向阿霉素脂质体(Oct-L)。采用柱分离法和粒径仪考察脂质体包封率、粒径分布、稳定性,透射电镜观察脂质体形态,透析法测定其释放性质。所制备的奥曲肽靶向脂质体外形圆整,粒径略小于100 nm,药物包封率约100%,48 h释放约20%;与阿霉素普通脂质体相比,提高了对生长抑素受体表达阳性的NCI H-446细胞的毒性及其阿霉素摄取量。本实验表明,乙醇注入、硫酸铵梯度及后插入法可应用于阿霉素脂质体的制备及脂质体奥曲肽靶向的修饰。}     

羧甲基壳聚糖修饰阿霉素纳米脂质体的pH敏感性研究

目的研究一种由羧甲基壳聚糖修饰的pH敏感阿霉素纳米脂质体,并考察羧甲基壳聚糖的分子参数对其敏感性的影响.方法采用逆相蒸发-pH梯度法制备羧甲基壳聚糖修饰的阿霉素脂质体;用反透析-UV分光光度法测定包封率;用TEM和激光粒度仪分别考察脂质体形态与粒径分布;由药物渗漏实验考察pH敏感性.并研究羧甲基壳聚糖取代度、相对分子质量和质量分数对脂质体pH敏感性的影响.结果所制纳米脂质体的包封率达87%,形态圆整,粒径分布为(74.7±11.5)nm;羧甲基壳聚糖的羧甲基取代度、相对分子质量、质量分数对修饰的纳米脂质体药物渗漏有不同程度的影响.结论逆相蒸发-pH梯度法可成功制备羧甲基壳聚糖修饰pH敏阿霉素纳米脂质体;调变羧甲基壳聚糖的取代度、相对分子质量和质量分数均可实现羧甲基壳聚糖修饰阿霉素纳米脂质体的pH敏智能控释.     

卵巢癌单抗·脂质体·阿霉素对荷瘤裸鼠导向治疗的研究

本文用自制卵巢上皮癌单抗COC166-9与包载阿霉素的脂质体结合制备成免疫脂质体MLA。通过应用MLA对24只荷人卵巢癌裸鼠进行导向治疗,初步结果证明,导向治疗效果明显高于非导向治疗,具有研究价值和临床应用前景。     

单克隆抗体连接表阿霉素导向治疗胃癌的实验研究

作者首次报道了胃癌单克隆抗体MGb_2-表阿霉素结合物的制备及其对胃癌细胞的体外杀伤作用。首先用高碘酸钠氧化葡聚糖,使其成为多醛基葡聚糖,并以此为中间载体将表阿霉素与MGb_2连接。经测定,每一抗体能携带45个药物分子,且其抗体活性保存良好。该结合物对胃癌细胞SGC-7901杀伤作用优于游离药物及无关抗体结合物,且对非靶细胞(Hep-2)毒性作用很弱。说明表阿霉素-葡聚糖-MGb_2对胃癌细胞具有较强选择性杀伤作用,并可能成为胃癌导向治疗的免疫抗癌药物。     

基于ELISA的阿霉素免疫分析药物监测方法的建立

目的制备阿霉素有效免疫抗原,获得特异性阿霉素多克隆抗体,初步建立阿霉素检测方法。方法采用阿霉素有效免疫抗原免疫小鼠,待小鼠血清效价达到要求后取血,小鼠血清经Protein G纯化后获取特异性多克隆抗体,利用特异性多克隆抗体初步建立阿霉素ELISA定量检测分析方法。结果阿霉素特异性多克隆抗体效价良好,与卵清蛋白(OVA)无交叉反应;自制试剂中剂量-反应曲线线性相关系数为0.995,回收率为92.5%～108.9%,分析内变异系数和分析间变异系数分别为11.5%～13.9%和13.2%～14.3%,与5-氟尿嘧啶、紫杉醇和吉西他滨均无交叉反应。结论本研究制备的阿霉素多克隆抗体性能尚可,初步建立的阿霉素药物检测方法有望用于阿霉素药物监测并指导阿霉素临床精准给药。     

HER-2靶向光敏免疫脂质体增强乳腺癌化疗效果的实验研究

目的：构建对紫外线反应的靶向人类表皮生长因子2（human epidermal growth factor receptor 2, HER-2)的免疫脂质体,提高化疗药物对乳腺癌细胞的杀伤效果。方法：薄膜分散法制备脂质体,表面修饰上抗HER-2抗体（曲妥珠单抗）的Fab片段,并将脂质体用紫外线进行交联,制备光敏免疫脂质体。透射电镜观察脂质体的形态,动态光散射测定脂质体的粒径和血液学稳定性,倒置荧光显微镜和流式细胞术检测乳腺癌细胞MCF-7对脂质体药物的摄取能力,CCK-8试剂盒测定并比较脂质体与游离药物对乳腺癌细胞的体外杀伤效应,皮下肿瘤抑制实验比较脂质体药物与游离药物对乳腺癌细胞的体内杀伤效应。结果：本研究制备出的对紫外线敏感的HER-2靶向脂质体具有规整的球状结构、合适的粒径大小和较强的稳定性。乳腺癌细胞MCF-7对免疫脂质体的摄取能力较非靶向脂质体和游离DOX显著增强（P均<0.05）。进一步研究显示,光敏免疫脂质体药物对MCF-7细胞的体外杀伤能力明显优于非靶向脂质体药物和游离药物（P均<0.05）。体内研究结果显示,与非靶向脂质体药物和游离药物相比,免疫脂质体药物能够显著降低荷瘤小鼠的皮下肿瘤负荷（P均<0.05）。结论：本研究制备的靶向HER-2的光敏免疫脂质体拥有较好的稳定性和极强的肿瘤杀伤效果,具有广阔的临床应用前景。     

阿苯达唑免疫脂质体的制备

目的制备阿苯达唑免疫脂质体,提高阿苯达唑治疗包虫病的靶向特异性.方法采用注入-pH梯度法制备了脂质体;接着进一步采用戊二醛法将单克隆抗体与脂质体偶联制备免疫脂质体.结果脂质体的包封率为(64.02±3.10)%,粒径20～80 nm;用ELISA法检测了免疫脂质体抗体效价,其活性仍保留近80%.结论阿苯达唑免疫脂质体可成为抗细粒棘球蚴病特异靶向药物.     

转铁蛋白修饰的阿霉素隐形脂质体的制备及体外细胞试验

目的:用转铁蛋白(Tf)修饰盐酸阿霉素隐形脂质体(SL),以增加药物在肿瘤部位的积蓄,从而增加药物向肿瘤细胞内的转运.方法:采用薄膜超声法制备空白脂质体,硫酸铵梯度法装载盐酸阿霉素(DOX);通过膜材DSPE-PEG2000-COOH上的活性羧基末端与Tf上的氨基连接制备Tf修饰的隐形脂质体(Tf-SL);采用凝胶柱-UV法测定脂质体中DOX的包封率.双辛丁酸试剂盒测定蛋白结合效率;通过流式细胞试验和激光共聚焦显微试验考察肝癌细胞HepG2对SL包封的DOX(DOX-SL)及Tf-SL包封的DOX(Tf-DOX-SL)的结合或摄取情况,并观察两种脂质体对HepG2细胞的体外杀伤作用.结果:Tf-DOX-SL的平均粒径为(62±17)nm,药物平均包封率为96.4%,蛋白结合效率为100.28 μg Tf/μmol磷脂.与DOX-SL相比,Tf-DOX-SL与肝癌细胞HepG2的结合及摄取均增加.48 h细胞毒试验表明Tf-DOX-SL对HepG2细胞的杀伤作用(IC50=20.4 μmol/L)明显优于DOX-SL(IC50=166.2 μmol/L)(P<0.01).结论:Tf修饰的隐形脂质体可作为肿瘤靶向的载体通过受体介导的方式促进DOX向肿瘤细胞内的传递.     

单克隆抗体-阿霉素免疫交联物在脑胶质瘤裸鼠模型体内导向治疗的初步研究

将本室制备的免疫导向药物-抗人脑胶质瘤单克隆抗体SZ-39和阿霉素交联物在脑胶质瘤裸小鼠模型NHG-1体内进行导向治疗研究。实验显示免疫交联物对胶质瘤的抑制作用显著优于游离药物、游离抗体及药物和抗体的混合物。免疫交联物治疗后肿瘤组织~3H-TdR掺入量显著低于各对照组,表明肿瘤细胞DNA合成被明显抑制。而免疫交联物对正常小肠上皮细胞DNA合成影响较小,提示其副作用较小。     

CELISA法的建立及其在免疫导向药物制备过程中的应用

用细胞ＥＬＩＳＡ（ＣＥＬＩＳＡ）法测定了导向药物Ｂ１５９－表阿霉素结合物和Ｂ１５９－阿霉素结合物制备过程中含单抗Ｂ１５９腹水、Ｂ１５９纯化物和结合物的抗体活性。结果表明，ＣＥＬＩＳＡ法较活细胞免疫荧光法有更高的敏感性，是导向药物制备过程中鉴定免疫活性的一种稳定、实用、经济而简单的方法。     

抗人脑胶质瘤单克隆抗体导向药物的选择性细胞毒作用

采用DextranT-40桥联法将抗人脑胶质瘤单克隆抗体SZ-39与抗肿瘤药物阿霉素进行化学交联,制备成免疫交联物。SZ-39单抗和阿霉素的摩尔结合比为1:48。~3H-TdR掺入细胞毒性试验表明,免疫交联物对靶细胞SHG-44的细胞毒作用显著优于游离药物、游离抗体及药物和抗体的混合物。其半数抑制剂量IC_(50)为1.75×10~(-8)mol/L。免疫交联物对非靶细胞SP_2/O的细胞毒作用不及游离药物。实验显示免疫交联物有良好的靶选择性细胞毒作用。     

乳糖酰磷脂酰乙醇胺修饰的阿霉素脂质体体外杀伤肝癌细胞的实验研究

目的 :探讨乳糖酰磷脂酰乙醇胺修饰的阿霉素脂质体对肝癌细胞的杀伤作用。方法 :在NaBH4 还原作用下连接乳糖和磷脂酰乙醇胺制备乳糖酰乙醇胺 (Lac_PE) ,反应 40 0h测定偶联率为 48.6 % ,硅酸柱层析得到纯品。用 10 %的Lac_PE整合到超声法制备的小单层脂质体 (由PC :chol:PE以 7∶2∶1摩尔比组成 )脂膜上。结果 :其插入率为 99.6 % ,乳糖脂阿霉素脂质体体外杀瘤试验 (MTT法 )表明 :48h细胞毒试验乳糖脂阿霉素脂质体对人肝癌细胞系SMMC - 772 1的杀伤作用显著优于无糖脂脂质体 (P <0 .0 1) ,以IC50 计 ,乳糖脂脂质体的杀伤作用是对照组的 16 .3倍 ,而对非靶细胞 (B16黑色素瘤细胞 )的杀伤作用二者相近。 0 .5h预处理试验表明 :缩短药物与细胞接触时间后 ,乳糖脂阿霉素脂质体仍保持较强的杀伤肝癌作用 ,IC50 为 2 .74μg/ml,而对照组为 48.7μg/ml。 结论 :表明乳糖脂阿霉素脂质体的杀伤作用来自半乳糖基配体的特异性介导和人肝癌细胞上肝凝集素的识别内吞作用。     

基于点击化学修饰的肿瘤靶向阿霉素脂质体的制备与表征

首先合成了叠氮化的胆固醇和炔基化的奥曲肽,并基于叠氮化的胆固醇制备了叠氮修饰的阿霉素脂质体Dox@N₃-L;随后利用点击反应在其表面修饰了具有肿瘤靶向功能的奥曲肽,得到奥曲肽靶向阿霉素脂质体Dox@Oct-L;最后考察了点击反应的进程、点击修饰对药物包封率的影响以及脂质体的体外靶向性。结果表明,通过点击反应能成功将奥曲肽修饰到载药载体表面,点击修饰对脂质体中荷载的药物没有影响,包封率为99.8%,与点击前无显著差异。细胞毒性实验结果显示,Dox@Oct-L对肿瘤细胞HepG2的杀伤作用强于Dox@N₃-L,表明Dox@Oct-L对HepG2细胞具有一定的靶向性。因此,利用点击化学在荷载药物的载体表面修饰是一种温和有效的方式,可方便地实现载药载体表面的功能化。     

采用溶剂分散和挤压器联动装置制备阿霉素脂质体的稳定性研究

目的:考察溶剂分散和挤压器联动装置制备阿霉素脂质体制剂的稳定性.方法:使用联动装置制备空白脂质体,联动装置将阿霉素采用pH梯度法载药于空白脂质体中,评价其在体外不同影响因素下的制剂稳定性.测定了阿霉素脂质体理化性质,用透析法检测阿霉素脂质体的药物包封率,用HPLC考察阿霉素脂质体在大鼠体内药代动力学行为.结果:该联动装置可使脂质体的制备工艺简化,投料成品一步完成,同时可在线监控粒径,采用此装置制备的脂质体阿霉素的粒径为(98±9 nm),药物包封率为98.3%.结论:溶剂分散和挤压器联动装置可用于工业化生产阿霉素脂质体制剂,设备实用性强,产品质量可控性好.