当归芍药散神经保护作用的实验研究

目的 观察当归芍药散(DSS)的神经保护作用,为阿尔茨海默病(AD)防治提供理论依据.方法 按DSS经典方制备DSS水煎剂后以5%、10%、20%三种体积分数分别灌服家兔1 d和10 d(观察1组～观察6组),对照组灌服等量生理盐水.末次灌胃给药1 h后处死家兔,由枕骨大孔处抽取脑脊液(DSS脑脊液和空白脑脊液).分别采用上述各组脑脊液及Aβ1-40处理嗜铬细胞瘤细胞株PC12细胞,MTT比色法观察细胞活性变化,免疫组化法观察α4烟碱型乙酰胆碱能受体(α7nAchR)阳性表达情况.结果 Aβ1-40处理者PC12细胞活性和α7nAchR阳性细胞数明显小于空白脑脊液处理者(P<0.01);灌服20%DSS脑脊液处理者PC12细胞活性及α74nAchR阳性细胞数明显高于Aβ1～40处理者.结论 DSS可能通过抑制β-淀粉样多肽的神经毒性作用而改善AD患者的学习记忆功能,机制为调节细胞α7nAChR表达.     

α7神经型尼古丁受体激动剂PNU282987对小鼠海马组织突触相关蛋白的影响

目的探讨特异性激动小鼠α7神经型尼古丁受体(α7n AChR)水平对海马组织中突触相关蛋白表达的影响。方法选取6月龄非转基因C57雄性小鼠32只,随机分为对照组(Control),腹腔注射0.5、1.0 mg/kg、3.0 mg/kg PNU282987组各8只。采用Real-time PCR法和蛋白免疫印迹(Western印迹)法分别测定小鼠海马组织中囊泡相关蛋白突触素(Syn)、突触小体相关蛋白(SNAP)-25和突触后致密物(PSD)-95 mRNA及蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,1.0 mg/kg PNU282987组、3.0 mg/kg PNU282987组中突触相关蛋白Syn、PSD-95、SNAP-25的mRNA和蛋白表达水平均显著增高。结论特异性激动小鼠α7n AChR能够使海马组织中突触相关蛋白水平表达增加。这可能提示了α7n AChR与突触密切相关,这可能与其神经保护作用有关。     

宁夏枸杞全果对自然衰老小鼠认知及其脑组织中α7nAChR表达的影响

目的观察宁夏枸杞（FL）全果对自然衰老小鼠认知及脑组织中α7型神经烟碱胆碱能受体（α7nAChR）表达的影响。方法将30只15月龄自然衰老ICR小鼠分为NS组和FL高（FL1组）、低剂量组（FL2组）;另将10只3月龄ICR小鼠为青年对照组（青年组）。FL1组、FL2组分别用20%、10%FL汁灌胃,0.2 ml/（10 g.d）,NS组和青年组灌胃等量NS,连续42 d。用Morris水迷宫实验检测各组小鼠学习记忆能力;黄嘌呤氧化酶法测定其血清超氧化物歧化酶（SOD）活性;硫代巴比妥酸法测定其血清丙二醛（MDA）水平;用免疫组化法检测其大脑组织中α7nAChR的表达变化。结果与青年组比较,NS组小鼠的学习记忆能力下降,血清SOD活性降低,MDA水平提高,脑组织中α7nAChR表达下调（P均〈0.05）。与NS组比较,FL1、FL2组的学习记忆能力均提高,血清SOD活性均增加,MDA水平均降低,脑组织中α7nAChR表达均上调（P均〈0.05）。结论 FL能够改善自然衰老ICR小鼠的学习记忆能力,其机制可能与FL的抗氧化和上调脑组织中α7nAChR表达有关。     

α7烟碱型受体兴奋剂、拮抗剂对胆管癌细胞侵袭能力的影响及机制

目的观察α7烟碱型受体兴奋剂尼古丁、拮抗剂银环蛇毒素（d．BTX）对胆管癌细胞侵袭能力的影响,并探讨机制。方法取对数期胆管癌细胞,去血清培养12h,取200μL浓度分别为0．5X10^5、1．0X10^5、1．5×10^5、2．0×10^5／mL的胆管癌细胞加入Transwell上室,下室加入10％血清的RPMll640培养液600μL,于12、24、36、48h观察侵袭细胞数。结果随细胞浓度及作用时间的增加,侵袭细胞数逐渐增加,但当浓度超过1．5×10^5／mL,时间超过36h后,侵袭细胞数增长缓慢,据此筛选出1．5X10^5／mL细胞浓度、作用时间36h用于后续实验。①取1．0×10^5／mL的胆管癌细胞加入Transwell上室,分为实验1、2、3、4组,分别加入尼古丁0、1×10^-2、1×10^-3、1×10^-4g／L,培养36h后0．1％结晶紫染色并于倒置显微镜下计数侵袭细胞数。②取1．0×10^5／mL的胆管癌细胞加入Tran．swell上室,分为实验1、2、3、4组,分别加入尼古丁0、1×10^-2、1×10^-2、1×10^-2g／L,α-BTX分别为2、2、4、6μ／mL,培养36h后0．1％结晶紫染色并于倒置显微镜下计数侵袭细胞数。结果单纯尼古丁作用后穿过基质胶的细胞数增多,实验1、2、3、4组细胞侵袭数分别为（17．90±1．70）、（25．56±1．02）、（26．03±1．32）、（23．22±1．24）个,实验1组与后三组比较,p均〈0．05;尼古丁联合a-＇BTX共同作用后穿过基质胶的细胞数减少,实验1、2、3、4组细胞侵袭数分别为（16．89±1．27）、（18．16±0．89）、（18．20±1．46）、（18．15±2．01）个,实验1组与后三组比较,P均〈0．05。结论尼古丁可明显增强胆管癌细胞的侵袭能力,α-BTX可明显抵消尼古丁所产生的促侵袭能力,其机制可能通过改变斫烟碱型受体活性而发挥作用。     

胆碱能抗炎通路对肝脏炎性反应的影响

胆碱能抗炎通路是调节免疫系统的一种神经生理机制,其在脾脏、肝脏和胃肠道等网状内皮系统中通过乙酰胆碱抑制细胞因子的合成,控制炎性反应。肝脏的天然免疫紊乱常导致肝脏炎性细胞的产生增多,引起慢性炎性反应,乙酰胆碱与巨噬细胞和其他分泌细胞因子的细胞表面的α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7 nAChR）相互作用,抑制致炎细胞因子的合成和释放,防止组织损伤。此文综述胆碱能抗炎通路调节炎性反应的神经生理机制及其对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的影响。     

经耳迷走神经刺激对急性创伤性颅脑损伤大鼠神经功能的改善作用及其机制

目的 观察经耳迷走神经刺激(t-VNS)对急性创伤性颅脑损伤大鼠的神经功能改善作用,并探讨其相关机制.方法 成年SD大鼠36只,随机分为假手术组、模型组、治疗组各12只.模型组和治疗组采用改良Feeney自由落体法建立颅脑创伤模型;假手术组仅切开头皮打开骨窗,不实施撞击.治疗组于造模30 min后给予t-VNS(强度1...     

电针对阿尔茨海默病模型大鼠海马区蛋白激酶C和β-淀粉样蛋白表达的影响

目的 探讨电针对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力改善的机制.方法 将雄性SD大鼠60只随机分成正常组、模型对照组、模型组、西药组和电针组,每组12只.除正常组、模型对照组外,其余3组侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)制备动物模型,模型对照组以同等剂量注射生理盐水.电针组治疗3个疗程.以Morris水迷宫评价大鼠学习记忆能力,用免疫组化法观测大鼠海马区蛋白激酶C(PKC)、β-淀粉样蛋白(Aβ)积分光密度值(IOD)和阳性细胞表达情况.结果 电针组大鼠海马区等神经元PKC光密度值、阳性细胞增多,Aβ光密度、阳性细胞数减少,与模型组比较有统计学意义(P＜0.05).结论 电针治疗显著改善AD模型大鼠学习记忆能力,其机制可能通过激活PKC减少脑内Aβ沉积.     

α7尼古丁受体mRNA表达抑制对SH-SY5Y细胞氧化应激水平的影响

目的探讨通过RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达后细胞氧化应激水平的变化,以了解该受体的神经保护作用。方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7 nAChR的小分子干扰RNA,Real-time PCR法检测转染细胞中α7 nAChR mRNA水平蛋白质印迹方法检测蛋白表达水平;并用Aβ1～42处理培养细胞,比色法测定细胞脂质过氧化产物水平、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果转染siRNA后,α7 nAChR mRNA水平和蛋白表达水平分别降低了81.7%和76.9%;细胞脂质过氧化水平升高38.4%;SOD和GSH-PX活性分别降低30.3%和21.1%。用Aβ1～42处理细胞后氧化应激水平升高,且转染siRNA后能增强Aβ的神经毒性作用。结论α7 nAChR基因表达抑制后能增强细胞氧化应激水平,同时增强Aβ的神经毒性作用。     

α7神经型尼古丁受体基因抑制对SH-SY5Y细胞Tau和配对螺旋样纤维蛋白1水平的影响

目的探讨α7神经型尼古丁受体(n AChR)基因沉默对SH-SY5Y细胞Tau和配对螺旋样纤维蛋白(PHF)1水平的影响及α7n AChR在阿尔茨海默病(AD)发病机制中的作用。方法 SH-SY5Y细胞转染α7 n AChR shRNA重组质粒,用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别测定细胞中α7 n AChR在mRNA和蛋白表达水平的变化;用Western印迹法检测细胞Tau和PHF1蛋白水平。结果α7 n AChR基因沉默组与空质粒组相比,α7 n AChR mRNA和蛋白质表达水平分别降低了94%(P0.01)和82%(P0.01);Tau蛋白水平升高了65%(P0.01);PHF1蛋白水平升高了58%(P0.05)。结论α7 n AChR基因表达抑制后Tau和PHF1蛋白水平明显升高,Tau蛋白和PHF1蛋白表达增加直接促进神经元纤维缠结的形成,这可能与AD的病理进程有一定关系。     

应用CRISPR/Cas9技术制备阿尔茨海默病小鼠模型

目的敲除α7烟碱型胆碱能受体(α7nAChR)基因构建阿尔茨海默病(AD)小鼠模型,验证成年敲除(KO)鼠是否有AD表征。方法利用CRISPR/Cas9技术,针对α7nAChR基因靶序列设计单链向导RNA(sgRNA),将sgRNA和Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6J小鼠受精卵。通过检测DNA序列,鉴定和筛选出KO小鼠进行行为学测试。结果 KO鼠α7nAChR基因有531 bp片段敲除;与野生型(WT)组相比,KO组有高架十字迷宫开壁区活动时间短、条件性恐惧表现出僵直时间百分比增高的趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。结论成功制备AD模型鼠,成年KO鼠学习记忆功能正常,但有焦虑样行为趋势。     

低频电针对阿尔茨海默病大鼠炎症因子表达的影响

目的观察低频电针对β淀粉样蛋白(Aβ)_(25-35)所致阿尔茨海默病(AD)大鼠海马及血清白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响,探讨电针改善AD学习记忆障碍的炎症机制。方法将雄性SPF级的Wistar大鼠30只,随机分为假手术组、模型组和电针组各10只。AD模型大鼠采用双侧海马一次性注射聚集态Aβ_(25-35)的方法制备,电针组选取"肾俞"、"大椎"、"内关"穴,接韩式电针仪,2 Hz连续波,强度为1 m A,通电20 min,1次/d,6 d为1个疗程,疗程间休息1 d,共2个疗程。运用放射免疫法检测各组血清IL-1β、TNF-α的变化,运用免疫组化法检测大鼠海马区IL-1β、TNF-α的变化。结果与假手术组相比,模型组海马CA1区及血清IL-1β、TNF-α表达明显增强(P0.01);与模型组比较,电针组海马CA1区及血清IL-1β、TNF-α含量明显减少(P0.01,P0.05)。结论电针改善AD学习记忆障碍的机制可能通过调节中枢及外周的炎症过程实现的。     

电针对去卵巢大鼠学习记忆及海马乙酰胆碱转移酶的影响

目的研究电针对去卵巢大鼠学习记忆和海马乙酰胆碱转移酶的影响。方法采用卵巢切除大鼠模型,造成低雌激素记忆障碍,去势2 w后进行电针刺激,连续治疗3个月。Morris水迷宫测试空间学习记忆能力,竞争性抑制酶免疫分析法(ELISA)检测血清雌二醇(E2)浓度,Western印迹检测乙酰胆碱转移酶(CHAT)蛋白的表达量。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期时间明显延长,跨越平台次数明显减少(P<0.01),与模型组比较,电针组治疗后逃避潜伏期缩短,跨越平台次数增加(P<0.01);与假手术组比较,模型组大鼠血清E2浓度显著降低(P<0.01),与模型组比较,电针组和假电针组血清E2浓度显著升高,电针组升高更明显(P<0.01);与假手术组比较,模型组大鼠海马CHAT蛋白表达显著降低(P<0.01),与模型组比较,电针组CHAT蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论电针能够提高去卵巢大鼠学习记忆能力,其机制可能与升高体内雌激素从而调节脑内CHAT的表达有关。     

激活星形胶质细胞α7乙酰胆碱能受体抑制β-淀粉样蛋白的聚集

目的研究在星形胶质细胞内加入尼古丁后能否激活细胞内α7尼古丁乙酰胆碱能受体(n AChR)以及激活的α7n AChR对β-淀粉样蛋白(Aβ)的降解作用。方法分离新生乳鼠大脑皮质培养原代星形胶质细胞并纯化、传代,使用细胞免疫荧光法鉴定细胞的纯度。凝胶银染方法鉴定寡聚体聚集情况。试验分为正常对照组、激动剂组、拮抗剂组以及Aβ组激动剂+Aβ组、拮抗剂+Aβ组,用蛋白印迹法检测α7n AChR蛋白表达情况以及激活细胞内受体后对Aβ的降解作用。结果经过传代培养细胞得以纯化。体外制备好的Aβ1~42除了含少量的未聚集的单体(4 k D)外,主要以二聚体、三聚体、九聚体等不同聚集形式的寡聚体存在。尼古丁组与对照组相比α7n AChR表达明显升高(P0.01),尼古丁组与拮抗剂组相比α7n AChR表达升高(P0.05);收集的蛋白与上清液,尼古丁组与Aβ组相比Aβ的表达均明显降低(P0.01),激动剂+Aβ组与拮抗剂+Aβ组相比Aβ的表达均明显降低(P0.01)。结论尼古丁可以激活星形胶质细胞内的α7n AChR,激活的α7n AChR对Aβ具有明显的降解作用,能够为预防和治疗阿尔茨海默氏病(AD)提供一个可能的方向。     

电针对拟老年性痴呆大鼠学习记忆功能和海马CA1区突触可塑性的影响

目的 探讨电针对拟老年性痴呆(AD)大鼠学习记忆功能和海马CA1区突触可塑性的影响.方法 采用腹腔注射D-半乳糖、东莨菪碱,胃饲三氯化铝(AlCl3)制备多因素损伤拟AD动物模型,在造模同时给予电针干预,应用跳台实验检测大鼠学习和记忆能力,HE染色观察海马CA1区形态学变化,免疫组化测定海马区CA1区突触素表达水平,透射电镜测定突触面数密度、面积密度和体积密度变化.结果 电针能明显改善拟AD大鼠学习记忆能力,增加海马CA1区神经元数目,上调突触素表达.结论 ①多因素损伤能成功制备拟AD大鼠动物模型.②电针促进海马CA1区重建而提高突触素表达可能是改善拟AD鼠的学习记忆功能的机制之一.     

电针对阿尔茨海默病大鼠海马胶质细胞源性神经营养因子及受体的影响

目的探讨电针对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)及受体GFR-a1表达的影响。方法通过Morris水迷宫筛选56只健康Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组、西药组和电针组,每组14只。正常组常规饮水和饲料,不给予任何处理。其余三组大鼠均采用聚集态Aβ25~35所致AD模型,模型组造模后不给予任何处理。电针组施以电针双肾俞、双太溪、双足三里、百会、大椎等穴位治疗。西药组采用盐酸多奈哌齐灌胃,疗程4 w。治疗后各组大鼠灌注固定后取海马,用免疫组化和RT-PCR检测大鼠海马GDNF及受体的表达。结果与正常组大鼠比较,模型组大鼠海马GDNF及其受体GFR-a1阳性细胞表达降低明显(P0.05);与模型组比较,电针组和西药组大鼠海马GDNF、GFR-a1阳性细胞及GDNF mRNA表达增加(P0.05)。结论电针可能通过对AD大鼠海马GDNF及其受体GFR-a1表达增强的影响,对神经元起到保护作用。     

电针改善血管性痴呆大鼠学习记忆及其与海马神经细胞谷氨酸、NMDAR表达的关系

目的 观察电针对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆功能和海马谷氨酸及其NMDA受体表达的影响,探讨电针的治疗作用机制.方法SD大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、模型组、电针组.在建立VD大鼠模型后,电针“百会”、“大椎”穴,水迷宫观察大鼠学习记忆能力,免疫组织化学染色技术观察脑组织海马谷氨酸及其NMDA受体染色结果.结果 与模型组比较,经电针治疗后水迷宫潜伏期明显缩短(P＜0.01),相同时间内在原平台象限跨越相应平台次数明显增多(P＜0.01);谷氨酸及其NMDA受体免疫阳性细胞积分光密度显著增加(P＜0.01).结论 电针大鼠“白会”、“大椎”穴能改善大鼠学习记忆能力,其机制可能与提高海马谷氨酸及其NMDA受体表达有关.     

α7nAchR 713T>C突变对阿尔茨海默病小鼠认知功能和tau蛋白磷酸化的影响

目的研究α7n AchR 713TC突变对阿尔茨海默病(AD)小鼠认知功能和tau蛋白磷酸化的影响。方法 3月龄敲除α7n AchR基因的APPSwe小鼠(APPa7KO小鼠)20只,随机分为2组,每组10只,分别在AD小鼠海马注射突变型和野生型7nAchR cDNA,注射后采用Morris水迷宫检测APPa7KO小鼠认知功能的变化,免疫组化方法检测AD小鼠tau(Thr231)表达。结果与注射野生型7nAchR cDNA小鼠相比,注射突变型7nAchR cDNA小鼠的逃避潜伏期和游泳距离延长,小鼠海马tau(Thr231)阳性细胞数显著增多(P0.01)。结论α7n AchR 713TC突变加重了AD小鼠的认知功能损害和tau蛋白磷酸化。     

SH-SY5Y细胞α7尼古丁受体基因抑制对APP代谢的影响

目的采用RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7神经型尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达,了解对β淀粉样前体蛋白(APP)代谢中的γ-分泌酶两个重要组分早老蛋白(PS)及单过性跨膜蛋白(NCT)水平的影响。方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7nAChR的小干扰RNA(siRNA),用实时PCR法和Western印迹法分别测定细胞中α7 nAChR、PS及NCT在mRNA和蛋白表达水平的变化。结果转染α7 nAChR siRNA后,与对照组相比,α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平明显降低;PS蛋白mRNA及蛋白水平均升高,而NCT水平无明显变化。结论α7 nAChR基因表达抑制后γ-分泌酶组分之一PS的水平明显升高,这种改变可能与α7 nAChR基因表达抑制后β-淀粉样蛋白(Aβ)的产生增多有关,可能与阿尔茨海默氏病(AD)的发病有一定的关系。