CO_2气腹压力和持续时间对人结肠癌细胞增殖的影响

目的：研究CO2气腹压力和持续时间对人结肠癌SW480细胞增殖的影响。方法：建立体外模拟CO2气腹环境,在全自动气腹机作用下,维持密闭真空压缩袋内不同压力（9、12、15 mmHg）,不同持续时间（1、2、4 h）作用于SW480细胞,作用后12 h,流式细胞仪观察细胞周期变化;作用后12、24、36、48、60和72 h,MTT法检测细胞增殖情况。结果：流式细胞仪检测细胞周期结果显示,CO2气腹压力对于人结肠癌G0/G1期细胞数值有显著影响（P〈0.01）,对于S期、G2/M期细胞周期无影响。而不同CO2气腹持续作用时间对于各细胞周期无影响（P〉0.05）,CO2气腹压力与作用时间对于各细胞周期不存在交互作用（P〉0.05）;MTT法结果显示CO2气腹下各组人结肠癌SW480细胞在不同压力和持续时间作用后12～72 h检测的平均D（490）值均小于对照组。通过析因设计的方差分析,在CO2气腹作用后12、24、36、48、60和72 h,压力与作用时间对SW480细胞的增值无交互作用（P〉0.05）。压力在24、36 h对SW480细胞的增值有一过性抑制作用（P〈0.01）,在SW480细胞增殖初、后期都无影响（P〉0.05）;不同作用时间对SW480细胞的增值无影响（P〉0.01）。结论：CO2气腹不同压力对结肠癌细胞的增殖有一过性抑制作用,CO2气腹72 h内不同作用时间对结肠癌细胞的增殖未见明显影响。     

丙谷胺、阿司匹林对人结肠癌HT-29细胞增殖的抑制作用

目的 探讨丙谷胺和阿司匹林对人结肠癌细胞株HT-29增殖的协同抑制作用及可能的机制.方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法检测胃泌素受体拮抗剂丙谷胺和非甾体类抗炎药阿司匹林分别及联合应用对HT-29细胞增殖的影响;采用实时定量逆转录聚合酶链反应（Real-time PCR）和蛋白印迹法（Western blot）检测丙谷胺和阿司匹林分别干预以及联合用药48h后COX-2和15-PGDH mRNA和蛋白质的表达情况.结果 丙谷胺和阿司匹林分别呈时间和剂量依赖性地抑制HT-29细胞的增殖,且二者具有协同作用;丙谷胺单一用药时,COX-2mRNA和蛋白质表达下调,15-PGDH mRNA和蛋白质表达上调（P＜0.05）;阿司匹林单一用药时,COX-2、15-PGDH mRNA和蛋白质的表达均无明显变化;两药联合应用时,COX-2 mRNA和蛋白质的表达显著下调,15-PGDH mRNA和蛋白质的表达显著上调,与对照组以及各单一用药组比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）.结论 丙谷胺、阿司匹林联合应用协同抑制HT-29细胞增殖,此作用可能通过下调COX-2表达,上调15-PG-DH表达这一机制来实现.     

昆布多糖硫酸酯抑制结肠癌细胞增殖

现行用于治疗结肠癌的化疗药物都存在一定的缺陷,昆布多糖硫酸酯(laminarin sulphate,LAMS)是一具有多种生物功能的多糖酯[1].现报告LAMS对抑制体外培养人结肠癌细胞株(human colon carcinoma cell line,LOVO)细胞的增殖、诱导凋亡及有关基因表达的影响,为LAMS用于治疗结肠癌提供理论依据.     

雌三醇对人结肠癌细胞增殖的影响及其机理探讨

目的探讨雌三醇(E3)对人结肠癌细胞增殖的影响及其机理.方法采用钙离子荧光指示剂flour-3/Am,流式细胞仪动态检测E3作用后,人结肠癌细胞内游离钙离子[Ca2+]i水平的变化,同时用MTT比色法测定细胞增殖情况.结果①E3使细胞内[Ca2+]i水平在1分钟内下降,以后维持在一个较低水平(27.88nmol/L),与静息状态细胞内[Ca2+]i水平(94.4nmol/L)相比有显著性差异(P＜0.05).②E3对癌细胞有促增殖作用,其浓度对数值与细胞增殖率呈显著性正相关(r=0.975,P＜o.05),其中1×10-5mmol/L浓度的E3促增殖作用最大.结论E3有促人结肠癌细胞增殖作用,但不引起细胞内[Ca2+]i水平升高.E3的促癌细胞增殖作用未见与经钙离子通道引起的非基因的快速调节作用有关,推测是基因调节作用的结果.     

过表达miR-18a靶向ATM对结肠癌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究miR-18a通过靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因 (ataxia telangiectasia mutated gene, ATM)调控结肠癌细胞的生物学特性。方法 通过软件预测miR-18a其中一个靶基因。设计合成miR-18a的模拟剂（mimics）和抑制剂（inhibitor）,通过转染不同组分上调或下调内源性miR-18a在结肠癌细胞株HCT116中的表达。采用实时荧光定量（qRT）-PCR、Western blot、 MTT法、克隆形成实验、Transwell等方法,检测过表达miR-18a调控ATM基因的表达对体外结肠癌细胞增殖及迁移能力的影响。结果 软件预测发现miR-18a的其中一个靶基因是ATM。通过瞬时转染,过表达内源性miR-18a,可降低HCT116细胞内靶基因ATM蛋白的表达水平。 转染miR-18a mimics后能够下调HCT116细胞的增殖活力,同时显著降低HCT116细胞的克隆形成能力、横向迁移能力及纵向侵袭能力,以上各项改变均与miR-18a过表达有关。结论 证实了miR-18a通过负向调控ATM的表达,抑制结肠癌细胞HCT116的增殖和迁移能力。     

胃泌素及其受体拮抗剂对结肠癌HT29细胞生长的调节

目的：探讨胃泌素类似物五肽胃泌素（ＰＧ）及胃泌素受体拮抗剂丙谷胺（ＰＧＬ）对体外培养的人结肠癌细胞株ＨＴ２９生长的影响。方法：采用ＭＴＴ法检测细胞增殖情况用流式细胞术（ＦＣＭ）分析细胞周期变化。结果：高浓度的ＰＧ（１０－５～１０－７Ｍ）能明显促进ＨＴ２９细胞的增殖（Ｐ＜００５），低浓度的ＰＧ（１０－８～１０－１０Ｍ）对ＨＴ２９细胞无明显促增殖作用（Ｐ＞００５）。ＰＧＬ能抑制ＰＧ对ＨＴ２９细胞的刺激作用，并对ＨＴ２９细胞的增殖有直接抑制作用（Ｐ＜００５）。细胞周期分析显示ＰＧ能缩短细胞Ｇ３／Ｇ１期，ＰＧＬ则延长细胞Ｇ０／Ｇ１期（Ｐ＜００５）。结论：胃泌素对体外培养的ＨＴ２９细胞的生长具有调节作用，胃泌素受体拮抗剂可能在结肠癌的治疗中发挥重要作用。     

噻唑蓝还原法测脂肪乳剂对人结肠癌细胞增殖的影响

目的:测定脂肪乳剂和5-FU单独或共同培养情况下对人结肠癌细胞增殖的影响,为肿瘤患者应用脂肪乳剂作为营养支持手段提供必要的理论基础。方法:应用噻唑蓝还原法(MTT法)观察LoVo结肠癌细胞株与不同浓度脂肪乳剂和5-FU单独或共同培养情况下,脂肪乳剂和5-FU对LoVo细胞增殖的影响。结果:5-FU对LoVo细胞增殖的抑制随其浓度的增加而增加;较高浓度脂肪乳剂对LoVo细胞的增殖有促进作用;不同浓度的脂肪乳剂与5-FU联合应用并不影响5-FU对LoVo细胞的抑制作用。结论:体外实验表明,脂肪乳剂并不影响化疗药物抑制肿瘤细胞增殖的作用,化疗期间可应用脂肪乳剂提供必要的营养支持。     

胃泌素,丙谷胺对大肠癌细胞作用的体外实验研究

胃泌素是广泛存在于人胃肠粘膜的一类小分子肽类激素,与胃肠功能密切相关。近年来一些研究表明胃肠激素对胃肠肿瘤的发生、发展有着重要影响,其中以胃泌素与大肠癌的关系已成为人们研究的热门课题。     

短程全反式维甲酸对人结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨短程全反式维甲酸(ATRA)对人结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测ATRA对LoVo细胞的生长抑制率并筛选合适的药物用量,流式细胞仪检测ATRA诱导的肿瘤细胞周期和凋亡率变化。结果选择1.0μmol·L-1ATRA作为进一步实验的工作浓度。1.0μmol·L-1ATRA作用12 h后G1期细胞开始增多,48 h后G1期细胞明显增多并伴S期、G2/M期细胞减少(P<0.05)。1.0μmol·L-1ATRA作用48、72 h组的早期凋亡率和总凋亡率与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);ATRA作用48、72 h组的早期凋亡率和总凋亡率的组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论短程1.0μmol·L-1ATRA主要通过阻滞LoVo细胞于G1期并诱导其细胞发生早期凋亡,可明显抑制肿瘤细胞的增殖。     

小干扰RNA沉默β-catenin基因对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)沉默人结肠癌SW480细胞β-catenin基因表达对SW480细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用脂质体转染法合成靶向β-catenin的双链siRNA(β-catenin-siRNA),转染SW480细胞,RTPCR及Western blotting检测SW480细胞中β-catenin mRNA及蛋白的表达,MTT实验和流式细胞术分别检测SW480细胞的增殖和凋亡。结果:RT-PCR及Western blotting检测结果显示β-catenin-siRNA转染后,与空白组、阴性对照组及实验组相比,β-catenin-siRNA转染组SW480细胞中β-catenin mRNA水平明显下降,其蛋白表达也明显下调。β-catenin-siRNA转染后,SW480细胞的凋亡率明显高于阴性对照组及实验组,细胞增殖能力明显下降。结论:siRNA沉默β-catenin的表达可诱导SW480细胞凋亡,抑制细胞的增殖,为结肠癌的临床治疗提出新的思路,可以作为结肠癌治疗的一个新靶点。     

姜黄素对人结肠癌细胞SW480增殖周期及凋亡的影响

目的探讨姜黄素对人结肠癌细胞SW480细胞生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法采用甲基噻唑（MTT）比色法和生长曲线测定不同浓度姜黄素在不同作用时间内对在体外培养SW480细胞增殖的影响，同时应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化。结果姜黄素可在G0／G1期阻滞人结肠癌细胞SW480的增殖，使S期细胞比率降低；在一定范围内，姜黄素的浓度越高、作用时间越长，对肿瘤细胞生长的抑制作用越强，凋亡率也越高。结论姜黄素能抑制人结肠癌细胞SW480细胞生长，并诱导细胞凋亡而阻止细胞周期。     

STAT6基因沉默对结肠癌细胞增殖的影响

目的:研究细胞信号传导子和转录激活子6(STAT6)信号传导通路与结肠癌细胞增殖的关系及其可能机制。方法:构建STAT6特异的shRNA慢病毒表达载体,转染人结肠癌细胞HT-29,以阻断STAT6信号通路;用RT-PCR方法检测STAT6 mRNA表达和流式细胞术检测磷酸化STAT6蛋白(pSTAT6)表达来验证构建效果;流式细胞术分析细胞周期变化;MTT法检测肿瘤细胞增殖状况;RT-PCR和Western blot观察p21^(WAF1)、p27(WAF1)、p27^(KIP1)基因表达。结果:成功构建STAT6特异的shRNA慢病毒表达载体;STAT6基因沉默的结肠癌细胞中细胞增殖受到明显抑制(F=62.527,P<0.001);STAT6信号通路被阻断的结肠癌细胞中p21(KIP1)基因表达。结果:成功构建STAT6特异的shRNA慢病毒表达载体;STAT6基因沉默的结肠癌细胞中细胞增殖受到明显抑制(F=62.527,P<0.001);STAT6信号通路被阻断的结肠癌细胞中p21^(WAF1)、p27(WAF1)、p27^(KIP1)基因表达明显增多(P<0.01)。结论:STAT6信号传导通路能促进结肠癌细胞增殖,可能是通过调节p21(KIP1)基因表达明显增多(P<0.01)。结论:STAT6信号传导通路能促进结肠癌细胞增殖,可能是通过调节p21^(WAF1)、p27(WAF1)、p27^(KIP1)基因的表达起作用。     

苯乙酸钠对肺癌A549细胞生长的影响

目的:研究抗肿瘤药物苯乙酸钠(NaPA)对体外培养的人肺腺癌细胞株A549抑制率、细胞周期和凋亡的影响。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色、流式细胞仪等方法,观察不同浓度NaPA对人肺腺癌A549细胞株生长、细胞周期和凋亡的影响。结果:NaPA对A549有明显的生长抑制作用,且呈剂量时间依赖性,最大抑制率可达79%。NaPA可阻滞A549细胞的细胞周期,使G1/G0期细胞增多,S期细胞减少,同时诱导A549细胞的凋亡,凋亡率最高可达30.5%。结论:苯乙酸钠抑制A549细胞生长,其抑制作用可能是通过NaPA使细胞周期抑制于G1/G0期和诱导细胞凋亡而实现。     

CXCR1调控STAT3信号通路对结肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨化学趋化因子受体1（CXCR1）对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 收集结肠癌组织和对应的癌旁组织,提取组织蛋白,Western blot法检测组织中CXCR1表达水平。以人结肠癌细胞HCT116为研究对象,细胞转染CXCR1小干扰RNA（CXCR1 siRNA组）,同时转染siRNA对照组。设置对照组,对照组中只加入转染试剂。培养48h后,Western blot法检测细胞中CXCR1、Bcl-2、Bax、STAT3、p-STAT3表达水平,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。人结肠癌细胞与STAT3信号通路抑制剂AG490作用后,检测细胞增殖凋亡情况。结果 CXCR1在结肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织（P<0.01）。CXCR1 siRNA组细胞中CXCR1、p-STAT3、Bcl-2蛋白水平和细胞存活率明显低于对照组（P<0.01）。CXCR1 siRNA组细胞中Bax水平和细胞凋亡率明显高于对照组（P<0.01）。siRNA对照组细胞中CXCR1、Bcl-2、Bax、STAT3、p-STAT3水平和细胞凋亡率、细胞存活率与对照组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。抑制剂作用后的细胞增殖凋亡趋势与CXCR1 siRNA组细胞相一致。结论 CXCR1在结肠癌组织中表达上调。抑制CXCR1的表达可以抑制结肠癌细胞增殖,促进结肠癌细胞凋亡,作用机制与STAT3信号通路有关。     

鸦胆子素D对结肠癌HT29细胞株增殖的抑制及诱导其凋亡的机制

目的 探讨鸦胆子素D对结肠癌细胞株HT29增殖的抑制及诱导其凋亡的机制。方法 人结肠癌细胞株HT29经不同浓度鸦胆子素分别作用24、48、72h后,应用CCK-8（Cell Counting Kit-8）法检测鸦胆子素D对HT29细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测鸦胆子素D对HT29凋亡的影响;Western blot法检测HT29细胞株经不同浓度鸦胆子素D处理24h后以及20μmol/L的鸦胆子素D处理24、48、72h后,细胞中JNK、p-JNK的表达。结果 不同浓度鸦胆子素D分别作用结肠癌HT29细胞24、48、72h后,细胞存活率随药物浓度升高,细胞存活率降低,细胞的凋亡率增加。HT29细胞株经不同浓度鸦胆子素D处理24h后以及20μmol/L的鸦胆子素D处理24、48、72h后,JNK蛋白表达随鸦胆子素D作用时间延长而下调,p-JNK则相应上调。结论 不同浓度的鸦胆子素D随着浓度的增加及时间的延长,结肠癌HT29细胞的存活率降低、凋亡率增高,呈明显的作用-时间-药物浓度依赖性。     

青藤碱对人结肠癌细胞株SW480增殖和细胞周期的影响

目的 研究青藤碱对人结肠癌SW480细胞增殖和细胞周期的影响.方法 用不同浓度的青藤碱处理体外培养的人结肠癌SW480细胞24、48、72h后,采用CCK法检测细胞的增殖活性,采用流式细胞术检测细胞的细胞周期分布,并用光镜和透射电镜观察SW480细胞的形态学变化.结果 青藤碱在体外可抑制SW480细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性.干预48h后,中、低浓度的青藤碱（8mmol/L、4mmol/L）可诱导SW480细胞G1期细胞比例增加,而高浓度的SIN（16mmol/L、10mmol/L）可诱导G1期、G2期细胞比例增加.光镜与电镜下均见凋亡细胞增多.结论 青藤碱在体外能抑制人结肠癌SW480细胞增殖和诱导该细胞系的凋亡,其机制可能与其阻滞细胞周期进程有关.     

川芎嗪对人肾癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 分析不同浓度川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）对人肾癌细胞系（786-O）增殖及凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法 体外培养786-O细胞,与不同浓度川芎嗪溶液（0.5mmol/L、5mmol/L）及溶剂组（DMSO组）作用24、48和72h后,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖率;细胞计数法检测药物作用48h后的细胞数量变化;DAPI染色观察药物作用48h后细胞核形态;半定量RT-PCR技术和Western blot法检测药物作用48h后凋亡相关基因在转录和翻译水平的改变。结果 随着川芎嗪药物浓度的增加,786-O细胞增殖率显著降低,凋亡率增加,细胞数量也显著减少,且胞核出现皱缩或肿胀,核裂增多;凋亡相关基因AIF、caspase-3在转录及翻译水平上均显著增强,无论与空白对照组还是溶剂对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 本研究证实TMP可以显著抑制人肾癌细胞系786-O细胞的增殖,促进其凋亡,为中药抗癌方面的研究提供实验室证据。     

土家药东方蠊对荷H22小鼠肝癌皮下移植瘤生长的抑制作用

目的:研究土家药东方蠊提取物对荷肝癌H22小鼠的抑瘤作用,探求民族药对肝癌的治疗价值。方法:取对数生长期的H22细胞接种于BALB/c小鼠皮下,建立荷肝癌H22小鼠模型。随机分为对照组和中药大、中、小剂量组,分别灌胃0.9%生理盐水及东方蠊提取物大中小剂量(52,26,13 mg/10g)。2周后,各组小鼠称体质量,剥离皮下移植瘤,称瘤重,计算抑瘤率;并用TUNEL的流式细胞仪分析移植瘤细胞凋亡率。结果:东方蠊各组抑瘤率及细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论土家药东方蠊可抑制肝癌小鼠移植瘤的生长,促进肿瘤细胞凋亡,这可能是东方蠊抗肝癌的作用机制之一。     

2-甲氧基雌二醇对肝癌huh7细胞增殖与凋亡的作用及机制

目的:观察2-甲氧基雌二醇(2ME2)对肝癌huh7细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子机制。方法:采用不同浓度的2ME2作用于肝癌huh7细胞,以噻唑蓝(MTT)法测定其细胞毒作用;流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;Western blot观察血管内皮生长因子(VEGF)及Bcl-2蛋白的表达。结果:2ME2可抑制肝癌细胞huh7的生长,具有浓度和时间依赖性;2ME2能抑制huh7细胞分裂,大部分细胞阻滞在G2/M期,S期细胞减少;2ME2能诱导huh7细胞凋亡,主要是诱导huh7细胞发生早期凋亡;免疫印迹检查结果显示,2ME2能下调VEGF及Bcl-2蛋白的表达。结论:2ME2能抑制肝癌细胞huh7的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与通过下调VEGF及Bcl-2表达有关。