色氨酸酶基因工程菌固定化及其培养条件的研究

目的 :对色氨酸酶基因工程菌ＷＷ 11进行固定化及培养条件研究 ,为工业化生产Ｌ 色氨酸奠定基础。方法 :通过色氨酸酶活力测定 ,考察三种固定化材料及温度、ｐＨ、单价阳离子降乙醇对固定化ＷＷ 11色氨酸酶活力的影响。结果 :以聚乙烯醇作为ＷＷ 11的固定化载体 ,其活力回收为 6 0 9%。固定化ＷＷ 1色氨酸酶降解反应最适 ｐＨ为 9 0、最适温度为 5 0℃ ;固定化ＷＷ 1色氨酸酶合成反应最适 ｐＨ为 7 5、最适温度为 45℃。Ｋ 、ＮＨ 4对固定化工程菌色氨酸酶有明显激活作用 ,而Ｎａ 则有一定的抑制作用。结论 :固定化工程菌色氨酸酶对温度…     

大肠杆菌色氨酸酶基因的克隆与表达

应用ＰＣＲ技术从Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０５中扩增出长约１．４Ｋｂ的色氨酸酶基因,将其插入高表达载体ｐＥＴ３ａ的ＮｄｅＩ／ＢａｍＨＩ位点,转化Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）,构建高产色氨酸酶基因工程菌。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和薄层扫描表明,工程菌色氨酸酶的表达量占细胞总可溶性蛋白的６９．８％。酶活测定结果表明,７株工程菌色氨酸酶的活力比宿主菌均有不同程度的提高,其中ＷＷ－１１号比宿主菌高１６倍。     

3-异硫氰酸酯氧化吲哚的合成及其在构建螺环氧化吲哚类化合物中的应用

目的合成3-异硫氰酸酯氧化吲哚并用其构建一系列螺环氧化吲哚类化合物。方法以靛红为原料,经过4步合成3-异硫氰酸酯氧化吲哚,并通过其与C=O,C=N,C=C双键的加成环化反应,合成一系列螺环氧化吲哚类化合物。结果经过4步反应,以高达51%的总收率得到3-异硫氰酸酯氧化吲哚,而用其构建螺环吲哚的收率高达90%~99%。结论利用3-异硫氰酸酯基氧化吲哚可构建多种螺环氧化吲哚类化合物。     

创新霉素对大肠杆菌色氨酸途径酶合成的抑制

在含有过量色氨酸的培养基中培养的大肠杆菌BT(Trp,积累邻氨基苯甲酸),没有色氨酸合成酶和邻氨基苯甲酸合成酶的活性(被阻遏)。当转入含限制量色氨酸或吲哚的培养基培养时,这两种酶的活性都十分显著(去阻遏)。利用BT菌株从阻遏转入去阻遏这一条件,我们研究了创新霉素或色氨酸对这两种酶生物合成的影响。实验结果说明:当菌浓度为10~9菌/毫升,色氨酸浓度大于45nM/毫升时,出现阻遏作用。创新霉素和过量色氨酸一样,能够抑制这两种酶的生物合成。创新霉素对色氨酸合成酶生物合成的抑制浓度曲线为双曲线,其50％抑制浓度为0.32微克/毫升,显然,创新霉素具有对色氨酸合成途径中的酶(简称色氨酸途径酶)合成的阻遏作用。     

酶法合成L—丝氨酸及反应液中氨基酸的分离

含ｇｌｙＡ的基因工程菌所表达的ＳＨＭＴ可催化甲醛和甘氨酸特异地合成Ｌ－丝氨酸。对酶法合成的部分条件进行了优化,并根据甲醛滴定的原理,确定了通过检测ｐＨ变化控制甲醛流加速度的方案,最终的反应液中Ｌ－丝氨酸浓度达０．２ｍｏｌ／Ｌ。反应结束后的酶反应液中同时含有甘氨酸和丝氨酸,利用国产７１７树脂获得较为理想的分离效果,丝氨酸的收率达７７％,高效液相分析表明其中不含甘氨酸等杂质。     

3-卤代氧化吲哚的合成及其在构建3,3-二取代氧化吲哚反应中的应用

目的 合成3-卤代氧化吲哚,并将其用于合成3,3-二取代氧化吲哚类化合物.方法 以碱为催化剂,以β-酮酸、肟及对甲苯亚磺酸钠为亲核试剂,分别与3-卤代氧化吲哚反应合成3,3-二取代氧化吲哚.结果 合成了一类3-卤代氧化吲哚,构建了一系列C3位含C、O以及S原子的3,3-二取代氧化吲哚类化合物.结论 该方法具有原料简单易得,反应条件温和的优点,为合成3,3-二取代氧化吲哚类化合物提供了一条很好的途径.     

三尖杉碱吲哚类似物的全合成

目的 合成三尖杉碱吲哚类似物。方法 以色胺为原料经缩合、环合、水解与脱羧反应得吲哚哌啶酮化合物,经Ｂｉｓｃｈｌｅｒ－Ｎａｐｉｅｒａｌｓｋｉ反应得烯胺。通过烯胺的化与氧化－重排反应得到吲哚氮杂Ｚｈｕｏ化合物。用溴苄与吲哚氮杂Ｚｈｕｏ反应在吲哚环上引入苄基保护基,经还原、环合反应合成了三尖杉碱吲哚类似物。结果 经１０步反应合成了三尖杉碱吲哚类似物。总收率１４．３％。结论 合成得三尖杉碱吲哚类似物,并对     

消炎痛治疗类风湿性关节炎的评价

十几年前人们发现风湿病人的色氨酸破坏和排泄增多,后来经过多种动物实验和数百种吲哚衍生物的筛选,发现Indomethacin具有抗炎和解热作用,1963年Shen氏合成此药。我国石家庄制药厂1971年已经生产,定名为消炎痛(Antinfan),即Indomet-hacin。化学名:1—(对氯苯甲酰)—2—甲基—5—甲氧基吲哚—3—醋酸。又名吲哚酸、吲哚甲新、Indocin、Indacin、Inteban等。化学结构式:     

萝芙木Srictosidine合成酶cDNA克隆:核苷酸序列确定及在大肠杆菌中的表达

1968年人们发现生物碱糖苷,strictosidine,是类单萜吲哚生物碱生物合成的前体。然而对于类单萜吲哚生物碱生物合成途径第一个中间产物的strictosidine立体化学,直到发现和鉴定色胺和双联色木鳖酸立体专一性缩合反应的酶后才被弄清楚。 Strictosidine是1800种以上吲哚生物碱的前体,在这些吲哚生物碱中有些有很高的商业价值。Strictosidine已被证实带有3α(S)一构型。催化strictosidine形成的酶被命名为strictosidine合成酶。一个方便的试     

吲哚与肿瘤(综述)

吲哚为色氨酸分解产物.早在本世纪初,人们对吲哚与肿瘤的关系就开始研究.Centanni等于1913年提出,吲哚是一种内源性的促癌物质.70多年来,从积累的大量研究资料中表明,吲哚在不同器官中对肿瘤的发生具有不同的作用,对某些器官可促进化学或病毒的致癌作用,对另一些器官却有抑制肿瘤的作用,甚至吲哚自身即为一种化学致癌剂. 1 吲哚致/促癌作用的动物实验 1.1 吲哚与白血病Mallory氏白血病就是一种由吲哚、苯和木焦油诱发的小鼠白血病.吲哚对小鼠自发性白血病的影响与     

新型吲哚类衍生物的合成及体外免疫抑制活性的初步研究

目的:以土槿乙酸结构特征为模板,吲哚为母核合成类土槿乙酸化合物,以期得到有更高免疫抑制活性的吲哚类衍生物。方法:对5-醛基吲哚和5-羧基吲哚的1,3,5位进行改造。1位进行烷基化改造,3位通过维尔斯迈尔－哈克反应与醛胺缩合反应进行延长,5位通过克脑文格尔反应与缩合酰化反应进行延长,得到吲哚类衍生物。经氢谱和高分辨质谱对其进行结构表征。采用噻唑蓝（MTT）法检测目标化合物对小鼠T、B淋巴细胞增殖的抑制作用。结果:合成得到两个系列共7个化合物,所有的化合物都经过HR-ESI-MS和¹H-NMR验证,其中化合物5c对T细胞和B细胞有一定的增殖抑制活性,化合物9a,9b对B细胞有一定增殖抑制活性。结论:通过模拟土槿乙酸的两个长链结构合成了新的吲哚的类似物,发现了具有一定的免疫抑制活性的先导化合物。     

液相色谱-电喷雾串联质谱法分析大肠癌患者尿液色氨酸及其代谢产物

目的：通过液相色谱-电喷雾串联质谱（LC-ESI-MS/MS）测定尿液色氨酸及其代谢产物浓度,探讨大肠癌患者体内色氨酸代谢变化及其与机体免疫之间的关系。方法通过 LC-ESI-MS/MS法测定大肠癌患者和健康者（对照组）尿液色氨酸代谢物浓度,并通过犬尿氨酸/色氨酸比值来评估代谢过程中的酶活性。结果大肠癌患者尿液犬尿氨酸、3-羟基犬尿氨酸（HK）、羟基氨茴酰酸（HAA）、吲哚-3-乳酸（ILA）、吲哚-3-丙酸（IPA）、邻氨基苯甲酸（AA）浓度显著升高（P＜0．05,P＜0．01）;而大肠癌患者尿液犬尿烯酸浓度较对照组显著下降（P＜0．05）;大肠癌患者犬尿氨酸/色氨酸比值较对照组显著提高（P＜0．01）。结论大肠癌患者尿液色氨酸代谢发生紊乱,色氨酸代谢物检测或可为大肠癌发病机制、预测和防治研究奠定基础。     

色氨酸代谢异常与肝性脑病的关系

色氨酸系人体的一种必需氨基酸,为维持细胞内核蛋白体的功能及作为烟酸、5-羟色胺的前体在生理上具有重要的意义。临床及动物试验表示:血清色氨酸浓度和脑组织中吲哚胺浓度相平行,而5-羟色胺是一种神经递质,对中枢神经有兴奋和抑制两种作     

吲哚美辛栓直肠给药预防ERCP术后胰腺炎的临床分析

目的:探讨直肠应用吲哚美辛栓剂对内镜逆行胰胆管造影术(ERCP)术后胰腺炎的预防作用。方法:将ERCP手术的287例患者随机分为吲哚美辛术前组、吲哚美辛术后组以及对照组。观察术后血尿淀粉酶变化情况、术后胰腺炎及高淀粉酶血症发生率。结果:术后胰腺炎发生率:吲哚美辛术前组(6.3%)低于吲哚美辛术后组(12.6%)及对照组(13.4%),有统计学差异(P<0.05);术后24h血清淀粉酶情况:吲哚美辛术前组121±107μ/L、低于吲哚美辛术后组187±139μ/L及对照组201±301μ/L,有统计学意义(P<0.05);术后高淀粉酶血症发生率:吲哚美辛术前组15.7%明显低于吲哚美辛术后组24.2%及对照组25.8%,有统计学意义(P<0.05)。结论:术前30min吲哚美辛栓剂直肠给药可有效预防ERCP术后胰腺炎及高淀粉酶血症的发生率。     

空气氧化法制备3-羟基季碳氧化吲哚

目的 为了获得具有潜在生物活性的3-羟基氧化吲哚.方法 以N-甲基-3-取代氧化吲哚为起始原料,以空气为氧化剂,在碳酸钾和相转移催化剂TBAB条件下,合成3-季碳羟基氧化吲哚.结果 设计合成了8个未见文献报道的3-季碳羟基氧化吲哚,其结构经过1H NMR,13C NMR和HRMS等技术确定.结论 高效合成了8个未见文献报道的3-季碳羟基氧化吲哚,合成产率在85％ ～92％.     

含吲哚三级醇的合成和抗肿瘤活性评价

目的合成一系列含吲哚环的三级醇,进行抗肿瘤活性测试,考察其结构与活性的关系。方法 (1)制备目标产物:吲哚,1,3-二羰基化合物和2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧自由基(TEMPO)一锅法合成吲哚3-位取代的三级醇;(2)抗癌活性筛选:用四唑盐比色法对制备的3-位取代的吲哚衍生物进行多种癌瘤细胞株的体外细胞毒活性试验。结果共合成14个化合物,通过对人类神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)、食管癌细胞系(109)、乳腺癌细胞(MCF)和胃癌肿瘤细胞(MGC)4种细胞系的测定,发现部分化合物具有不同程度的抗肿瘤活性。其中吲哚衍生物5、6、7对SHSY5Y、109、MCF、MGC 4种肿瘤细胞抑制效果逐渐增强;吲哚衍生物中化合物15对109细胞的IC50达到8.42μmol·L-1。结论丙酰乙酸乙酯衍生7、6-氯及6-溴吲哚衍生物14和15有较好的抗肿瘤活性。     

L—色氨酸酶基因工程菌的构建

应用ＰＣＲ技术从Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ－１２染色体ＤＮＡ中扩增出长约１．４ｋｂ的Ｌ－色氨酸酶基因，将其插入到高表达载体ｐＴｒｃ９９Ａ的Ｎｃｏｌ／ＨｉｎｄⅢ位占中，转化宿主菌Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０５。经质粒大小比较和酶切鉴定，筛选出重组质粒。     

糖尿病肾病患者血清色氨酸代谢谱的靶向研究*

目的: 研究糖尿病肾病(DKD)患者与健康对照人群血清色氨酸不同代谢通路中代谢物的差异,分析差异代谢物与临床指标之间的相关性。方法: 以包头医学院第一附属医院肾内科和内分泌科住院部患者为研究对象,选取10例DKD患者为疾病研究组,10例健康体检者为正常对照组,收集血液标本。采用靶向代谢组学方法分析两组人群中血清色氨酸及其代谢物的差异,进行生物信息学和统计学分析,阐明其在DKD中的意义。结果: 在两组血清中鉴定出5个差异代谢物,其中DKD患者血清中L-色氨酸(L-TRP)、5-羟色胺(5-HT)的水平明显低于健康对照组(P＜0.05),而5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)、犬尿氨酸(KYN)和3-吲哚丙酸(IPA)的水平则增加,差异具有统计学意义(P＜0.05),5-HIAA和IPA均与血肌酐呈显著正相关,与肾小球滤过率呈显著负相关。结论: DKD患者血清色氨酸代谢物水平与健康对照组相比具有明显的差异,其中的某些差异代谢物还与DKD的发生发展具有明显的相关性。     

油菜吲哚硫苷降解物对S180小鼠抗肿瘤作用的实验研究

目的 探讨油菜资源中吲哚硫苷降解物对肿瘤的抑制作用及对免疫功能的影响。方法 分别将两种不同提取法制备的高、低浓度的吲哚硫苷对S180小鼠ig给药，ip环磷酰胺。结果 吲哚硫苷降解物2号高浓度和吲哚硫苷降解物1号低浓度治疗组与生理盐水对照组相比有明显的抑制作用，能增加淋巴细胞转化率。结论 吲哚硫苷降解物可能是通过增强机体免疫功能来抑制移植性肿瘤生长，起到抗肿瘤的作用。     

吲哚在日本血吸虫虫卵的检出及其对人羊膜细胞程序外DNA合成的诱发

为了探索日本血吸虫虫卵的化学致癌性,我们分析了虫卵中含有的某些色氨酸衍生物。虫卵匀浆抽提物经双向纸层析分离,观察到有一个斑点,其Rf值与Ehrlich试验显色,以及斑点洗脱液的可见、紫外和荧光光谱均与标品吲哚相同,表明虫卵中含有吲哚。实验进而利用检测化为物质致突变性╱致癌性的UDS检测法,对吲哚进行检测。吲哚浓度为10~(-4)～10~(-6)M时能诱发FL细胞的UDS。结果表明,虫卵中含有DNA损伤剂吲哚,提示虫卵中存在着促进肿瘤发生的化学因素。