转染p53抑癌基因体外抑制K562细胞克隆的形成

目的：构建ｐ５３表达质粒，研究ｐ５３基因对白血病细胞Ｋ５６２细胞生长的抑制作用。方法：以Ｔ４连接酶把２１６０ｂｐ的ｐ５３ｃＤＮＡ片段插入ｐＲｃ／ＣＭＶ质粒，重组构建ｐＲｃ／ｐ５３表达质粒，以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导ｐＲｃ／ｐ５３质粒转染Ｋ５６２细胞，以甲基纤维素半固体培养方法作Ｋ５６２细胞体外克隆培养，观察转染ｐ５３基因后Ｋ５６２细胞克隆形成改变。结果：ｐ５３ｃＤＮＡ质粒转染的Ｋ５６２细胞，体外培养克隆形成能力明显减低。在接种１×１０４细胞时，未转染的空白对照组及空质粒对照组白血病细胞集落数分别是２７９７±２６４和２７２５±２６１；而ｐ５３质粒转染组细胞集落数是１０６１±１６０；与空质粒转染组及未转染的Ｋ５６２细胞组比较有非常显著性差异（Ｐ＜０００１，ｎ＝１０）。结论：转染ｐ５３基因能抑制Ｋ５６２细胞的生长。     

肿瘤抑制基因P53

肿瘤抑制基因ｐ５３吴岩，舍英（组织胚胎学教研室）对ｐ５３基因的研究是目前肿瘤抑制基因研究中的一个热点，这项研究无疑将促进我们对肿瘤抑制基因在细胞正常生长中增殖与调控的作用及其与癌基因一起构成癌细胞生长调节系统的理解。下面，就ｐ５３的研究情况作一综述。...     

野生型p53基因的表达及其对子宫颈癌细胞株的生长抑制作用

构建了可在哺乳动物细胞中表达人ｐ５３蛋白的重组质粒ｐ５３─ｐＳＶ２ｎｅｏ，分别转染猴肾细胞株ＣＶ─１及人子宫颈癌细胞株ＳｉＨａ。用ＰＣＲ法检测出转染细胞中的ｐ５３ｃＤＮＡ；用免疫组化ＡＢＣ法检测出ｐ５３蛋白的表达定位于细胞核内，用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测出转染细胞中存在ｐ５３蛋白。结果表明，外源性野生型ｐ５３基因的表达可以使ＳｉＨａ细胞的细胞克隆形成效减少５０％，使细胞生长速度降低，但对ＳｉＨａ细胞的软琼脂克隆形成效无明显影响。提示ｐ５３基因的肿瘤抑制作用与野生型ｐ５３蛋白的量有关，并且是细胞类型特异性的。     

乙型肝炎病毒基因组中p53应答成分结合序列的确定及意义

目的：探讨ＨＢＶ与肿瘤抑制基因ｐ５３相互作用的机制及其在原发性肝癌发生中的意义．方法：应用计算机程序对ＨＢＶ全基因组进行比较分析，合成含ＤＮＡ－蛋白质结合位点的基因片段作为探针，与肝癌细胞核蛋白作用．通过凝胶电泳移动试验，凝胶电泳超移动试验，原位紫外线交联试验，确定ＨＢＶ与ｐ５３蛋白的特异性结合．应用带报道基因ＣＡＴ与ｐ５３，ＨＢＶＸ基因共转染，观察ＨＢＶ与ｐ５３蛋白相互作用的生物学功能．结果：ＨＢＶ基因组增强子Ｉ上游区域（１０４７～１０５９）存在ｐ５３基因应答成份结合位点序列，能特异性地与ｐ５３蛋白结合，使ｐ５３蛋白在细胞内积聚．结论：ＨＢＶ与ｐ５３存在ＤＮＡ－蛋白质结合关系，在ＨＢＶ感染相关的肝癌发生中具有非常重要的理论意义．     

逆转录病毒介导的野生型p53基因转入对慢粒多药耐药细胞恶性表型的影响

以Ｋ５６２／ＨＨＴ 细胞为模型,采用重组逆转录病毒载体介导的基因转移技术,将人野生型ｐ５３ｃＤＮＡ转入该细胞系,研究外源性野生型ｐ５３ 基因在白血病多药耐药细胞表达的意义。结果显示,外源性野生型ｐ５３ 基因抑制细胞增殖,一般形态学观察见细胞明显向成熟型分化。流式细胞仪分析还显示ｐ５３ 基因诱导Ｋ５６２／ＨＨＴ细胞死亡且伴有细胞周期Ｇ１ 期的生长阻滞。结果表明,野生型ｐ５３ 基因对多药耐药的白血病细胞能部分降低其恶性表型     

抑制人喉癌细胞生长的p53基因反转录病毒重组体的构建

野生型ｐ５３基因在细胞增殖与分化的调控过程中起着重要作用。已有研究表明，人喉癌中存在ｐ５３基因的结构异常或表达异常。本实验根据这一特点，设计出能整合在人喉癌细胞染色体上并适宜表达的野生型ｐ５３基因反转录病毒重组体Ｐｃ５３Ｎ２Ａ。通过体外实验证明，这一重组体能够以基因替代的方式，恢复ｐ５３基因的功能，抑制人喉癌细胞的生长。     

重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验

目的：将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株，研究野生型ｐ５３蛋白在诱导瘤细胞凋亡中的作用。方法：用ＤＮＡ转染技术将７重组野生型ｐ５３基因ＰＭ４７质粒导入人骨肉瘤细胞株ＨＯＳ８６０３中，用ＰＣＲ技术监测外源性ｐ５３基因在瘤细胞中存在的稳定性；用免疫组化方法检测在地塞米松的诱导下瘤细胞中ｐ５３的表达情况；用相差显微镜去观察凋亡瘤细胞的形态特点；用细胞凋亡原位检测技术标记并统计凋亡的瘤细胞数。结果：成功地将重组野性型ｐ５３基因ＰＭ４７质粒导入人骨肉瘤细胞株ＨＯＳ８６０３中，在ｇｐｔ选择培养基中培养两周后，分离生长出阳性细胞克隆；经ＰＣＲ证实外源性ｐ５３基因在瘤细胞内稳定存在并可随瘤细胞分裂而传给子代；当向培养液中加入１μｍｏｌ／Ｌ地塞松（Ｄｅｘ）后，８ｈ即可用免疫组化方法检测到ｐ５３蛋白的表达并可观察到瘤细胞出现凋亡的一系列形态学改变，转染后的瘤细胞凋亡率高达９０％。结论：当人骨肉瘤细胞株中重组野生型ｐ５３基因诱导过表达时，瘤细胞呈现凋亡，本实验为骨肉瘤的基因治疗提供了理论依据。     

抑癌基因p53与癌基因mdm2在肺腺癌细胞系GLC—82中的相互作用

探讨抑癌基因ｐ５３和癌基因ｍｄｍ２在肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２中的相互关系和作用。方法；采用脂质体Ｌｉｐｏｆｅｔｉｎ介导的ＤＮＡ转染法。用含有野生型ｐ５３基因和ｍｄｍ２基因的ＰＤＯＲ－ｎｅｏ逆转录病毒载体分别或共转染ＧＬＣ－８２细胞。结果：转染野生型ｐ５３基因可阻止ＧＬＣ－８２细胞生长；抑制ＧＬＣ－８２细胞ＤＮＡ合成；软琼脂培养集落形成率减少及裸小鼠成瘤性减慢，而ｍｄｍ２转染可拮抗野生     

MDM2癌基因和p53抑癌基因在肉瘤组织中的表达及相关性

ＭＤＭ２癌基因和ｐ５３抑癌基因在肉瘤组织中的表达及相关性李挺张波罗杰陆哲明王颖王泰龄ＭＤＭ２基因是１９８７年从自然转化的ＢａＬＢ／Ｃ小鼠细胞株中发现的新的癌基因，其产物与抑癌基因产物ｐ５３蛋白结合并抑制介导的转录活性，部分阻断其细胞生长抑制作用［１］...     

重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验

目的：将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株，研究野生型ｐ５３蛋白在诱导瘤细胞凋亡中的作用。方法：用ＤＮＡ转染技术将７重组野生型ｐ５３基因ＰＭ４７质粒导入人骨肉瘤细胞株ＨＯＳ－８６０３中，用ＰＣＲ技术监测外源性ｐ５３基因在瘤细胞中存在的稳定性；用免疫组化方法检测在地塞米松的诱导下瘤细胞中ｐ５３的表达情况；用相差显微镜去观察凋亡瘤细胞的形态特点；用细胞凋亡原位检测技术标记并统计凋亡的瘤细胞数。结     

人乳腺癌MCF—7细胞凋亡过程中p53与bcl—2表达的时序性

目的：研究细胞凋亡过程中ｐ５３与ｂｃｌ－２基因表达变化的时序关系，以探索ｐ５３调控ｂｃｌ－２的可能性。方法：选择具有野生型ｐ５３的人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系，用５－Ｆｕ为诱导剂诱导细胞凋亡；用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测细胞凋亡过程中ｐ５３与ｂｃｌ－２表达变化的时序性。结果：ｐ５３表达增高出现在ｂｃｌ－２表达降低之前。结论：ｐ５３在时序上具有作为ｂｃｌ－２基因负调控转录因子的可能性     

p^53cDNA突变和突变型p^53蛋白表达与大肠癌预后的关系

目的 探讨ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变和突变型ｐ＾５３基因蛋白表达与大肠腺癌预后的关系。方法 ＲＴ－ＳＳＣＰ检测大肠腺癌组织ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变，ＰＡｂ２４０单抗免疫组化检测腺癌组织突变型ｐ＾５３基因蛋白表达，比较两者与大肠腺癌预后的关系。结果 １００例大肠腺癌中，ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变５１例（５１％），突变型ｐ５３基因蛋白高表达７６例（７６％），两者同步阳性４９例：ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变与突     

野生型p53基因转移预防血管成形术后再狭窄的实验研究

目的探讨逆转录病毒载体介导的人野生型ｐ５３基因转移对预防血管成形术后再狭窄的作用。方法构建野生型ｐ５３基因逆转录病毒载体，通过逆转录病毒载体介导，将野生型ｐ５３基因转导至大鼠球囊损伤的颈动脉再狭窄模型中，２１ｄ后观察其对新生内膜形成的影响，并检测ｐ５３蛋白表达水平。结果构建和包装了人野生型ｐ５３基因的重组逆转录病毒载体，并在体外细胞中表达；用逆转录病毒载体转导野生型ｐ５３基因至大鼠球囊损伤的颈动脉，免疫组化检测表明转导血管局部表达人野生型ｐ５３蛋白，且与对照组相比，损伤血管新生内膜／中层面积比降低了４４％。结论人野生型ｐ５３基因治疗对血管成形术后再狭窄有一定的预防作用     

p53基因与肺癌

１　抑癌基因ｐ５３　基因ｐ５３基因是位于人染色体１７Ｐ１３区域,其一级结构是含三个结构区：１个酸性的氨基末端区（１～７５个氨基酸）和１个碱基多螺旋的羧基末端区（２７６～３９０个氨基酸）。ｐ５３最初被认为是一个显性癌基因,因为它能与激活的ｒａｓ基因共同作用,促进小鼠原始胚胎细胞转化。随后发现野生型ｐ５３能抑制ｒａｓ基因和突变型ｐ５３基因引起的细胞转化［１,２］。野生型ｐ５３基因的抑癌作用,可能包括在某种程度上直接或间接抑制ＴＧＦα的表达,而ＴＧＦα一旦高表达,则可能不再受野生型ｐ５３基因的控制…     

胃癌组织中突变型p53基因产物的表达及其临床意义

胃癌组织中突变型ｐ５３基因产物的表达及其临床意义张忠彪１赵凤凯辛彦闫瑞芳１（肿瘤研究所，沈阳１１０００１）关键词胃癌；突变型ｐ５３基因产物；免疫组化ｐ５３基因可分为野生型（ｐ５３－ｗｔ）和突变型（ｐ５３－ｍｔ）。ｐ５３－ｗｔ在细胞从Ｇ１后期进入Ｓ期中...     

p53蛋白表达与喉癌颈淋巴结转移关系的研究

ｐ５３蛋白表达与喉癌颈淋巴结转移关系的研究任重王琰关超（第一临床学院耳鼻咽喉科，沈阳１１０００１）关键词基因表达；喉肿瘤；淋巴转移；ｐ５３蛋白质ｐ５３基因是近年发现的肿瘤抑制基因。本研究应用免疫组化法检测声门上型喉癌ｐ５３蛋白的表达，以探讨ｐ５３蛋白...     

肺腺癌高、低转移细胞系Anip973、AGZY83-a中野生型p53基因过表达研究

目的探讨野生型ｐ５３基因及其表达产物ｐ５３蛋白在恶性肿瘤基因治疗中的作用。方法应用腺病毒为载体将野生型ｐ５３基因转入高、低转移的肺癌细胞系Ａｎｉｐ９７３、ＡＧＺＹ８３－ａ,并且对各组转染细胞进行生长曲线、原位末端标记、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ等技术检测分析。结果野生型ｐ５３蛋白的过表达对上述肺腺癌细胞系均呈现出较强的生长抑制作用,野生型ｐ５３蛋白的过表达对高转移肺癌细胞系Ａｎｉｐ９７３的抑制作用明显高于低转移细胞系ＡＧＺＹ８３－ａ。结论外源性野生型ｐ５３基因的过表达,可以有效抑制上述肿瘤细胞的增殖,同时对高转移肺腺癌细胞系的抑制作用更加显著。     

膀胱移行细胞癌p21,p185,p53蛋白表达及临床意义

目的：探讨膀胱移行细胞癌癌基因蛋白表达与预后的关系。方法：应用免疫组织化学，检测１５０例膀胱移行细胞癌，ｐ２１，ｐ１８５，ｐ５３三种蛋白表达。结果：膀胱移行细胞癌ｐ２１，ｐ１８５，ｐ５３蛋白表达阳性率分别为５９．３％，５５．３％，２９％，其中７３例膀胱移行细胞癌存在两种以上蛋白共同表达，ｐ２１，ｐ１８５蛋白表达阳性率与膀胱移行细胞癌分级呈负相关（Ｐ〈０．０５），ｐ５３蛋白表达阳性率与膀胱移行细胞癌     

肺腺癌高,低转移细胞系Anip973,AGZY83—a中野生 …

目的 探讨野生型ｐ５３基因及其表达产物ｐ５３蛋白在恶生肿瘤基因治疗中的作用。方法 应用腺病毒为载体将野生型ｐ５３基因转入高、低转移的肺癌细胞系Ａｎｉｐ９７３、ＡＧＺＹ８３－ａ，并且对各组转染细胞进行生长曲线、原位ｅｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ等技术检测分析。结果 野生型ｐ５３蛋白的过表达对上述肺腺癌细胞系均呈现出较强的生长抑制作用，野生型ｐ５３蛋白的过表达对高转移肺癌细胞系Ａｎｉｐ９７３的抑制作用明显     

维医成熟、清除剂诱导人Hela细胞凋亡时p53与bcl-2基因的表达

近年来,发现细胞凋亡对造血、免疫和肿瘤发生机制具有重要的作用,肿瘤抑制基因是当前肿瘤遗传学及分子生物学的研究热点。而其中ｐ５３基因与肿瘤关系最为密切,６０％以上的人类肿瘤细胞中存在ｐ５３基因的突变失活。野生型ｐ５３能抑制肿瘤发生,是抗癌基因．而突变型则反而促进肿瘤发生,成为癌基因。Ｐ５３与ｂｃｌ－２基因都是细胞凋亡的关键基因。ｐ５３基因可促进细胞凋亡,ｂｃｌ－２基因则可抑制凋亡。 ｂｃｌ－２基因下凋是细胞凋亡的重要环节,因而探讨其下调机制极为重要。ＦＡＳ和ｂｃｌ－２蛋白是确认的２个与淋巴Ｔ细胞凋…