安君宁对吗啡依赖大鼠相关脑区基因表达的影响

药物滥用已成为当今世界的一个严重社会问题。有研究表明 ,当个体对阿片类形成依赖时 ,脑内内阿片肽系统和多巴胺系统功能会产生适应性变化 ,当阿片类戒断时其功能难以尽快恢复 ,从而出现一系列的戒断综合征 ,目前这被认为是产生稽延性戒断症状和渴求的关键之一[1,2 ] 。本研究选取脑内在依赖形成中起关键作用的一些核团为研究靶点 ,以多巴胺系统相关基因表达为研究重点 ,探求安君宁 (湖南泰尔制药有限公司生产 ,主要成份 :延胡素、夏天吾等 ,批号 :2 0 0 10 1)发挥治疗作用的生物学机制。材料与方法一、动物分组选取体重在 180～ 2 2 0g雄…     

安君宁对吗啡依赖大鼠脑内前脑啡肽原表达的影响

目的研究安君宁对雄性SD大鼠吗啡依赖相关脑区前脑啡肽原表达的影响。方法30只体质量180～220g的雄性SD大鼠,设对照并建立吗啡依赖模型后随机均衡分为5组:淀粉正常对照组,吗啡戒断并安君宁治疗12d、30d组,吗啡戒断并淀粉治疗12d、30d组。吗啡依赖模型的建立采用剂量递增10日法(5mg·kg-1·次-1～50mg·kg-1·次-1,2次/d,腹腔注射)。安君宁干预方法:灌胃1g·kg-1·次-1,2次/d;对照组灌等量的淀粉。各组大鼠按预定时间麻醉、灌注、留取脑组织。采用原位杂交技术测定腹侧被盖区(VTA)、伏隔核(NAs)、前额皮质(PFC)前脑啡肽原(PENK)mRNA水平。结果安君宁干预组与干预对照组相比,VTA、NAs、PFC中PENKmRNA水平显著升高(P<0.05)。吗啡戒断12d,安君宁干预组VTA、NAs、PFC中PENKmRNA水平分别为(14.74±4.81)×10-2、(16.09±4.94)×10-2、(20.47±7.03)×10-2,而干预对照组分别为(9.74±0.87)×10-2、(5.94±0.91)×10-2、(10.87±3.96)×10-2;戒断30d,安君宁干预组分别为(17.46±8.27)×10-2、(25.73±8.24)×10-2、(26.58±6.29)×10-2,而干预对照组分别为(12.36±6.95)×10-2、(10.31±0.78)×10-2、(19.78±7.08)×102。结论安君宁能促进吗啡依赖大鼠依赖相关脑区前脑啡肽原表达的恢复。     

安君宁对吗啡依赖大鼠脑内前脑啡肽原表达的影响

目的研究安君宁对雄性SD大鼠吗啡依赖相关脑区前脑啡肽原表达的影响.方法 30只体质量180～220 g的雄性SD大鼠,设对照并建立吗啡依赖模型后随机均衡分为5组:淀粉正常对照组,吗啡戒断并安君宁治疗12 d、30 d组,吗啡戒断并淀粉治疗12 d、30 d组.吗啡依赖模型的建立采用剂量递增10日法(5 mg·kg-1·次-1～50 mg·kg-1·次-1,2次/d,腹腔注射).安君宁干预方法:灌胃1 g·kg-1·次-1,2次/d;对照组灌等量的淀粉.各组大鼠按预定时间麻醉、灌注、留取脑组织.采用原位杂交技术测定腹侧被盖区(VTA)、伏隔核(NAs)、前额皮质(PFC)前脑啡肽原(PENK)mRNA水平.结果安君宁干预组与干预对照组相比, VTA、NAs、PFC中PENK mRNA水平显著升高(P <0.05).吗啡戒断12 d,安君宁干预组VTA、NAs、PFC中PENK mRNA水平分别为(14.74±4.81)×10-2、(16.09±4.94)×10-2、(20.47±7.03)×10-2,而干预对照组分别为(9.74±0.87)×10-2、(5.94±0.91)×10-2、(10.87±3.96)×10-2;戒断30 d,安君宁干预组分别为(17.46±8.27)×10-2、(25.73±8.24)×10-2、(26.58±6.29)×10-2,而干预对照组分别为(12.36±6.95)×10-2、(10.31±0.78)×10-2、(19.78±7.08)×10-2.结论安君宁能促进吗啡依赖大鼠依赖相关脑区前脑啡肽原表达的恢复.     

不同时程吗啡依赖大鼠依赖相关脑区的病理组织学观察

目的:观察不同时程吗啡依赖大鼠脑内依赖相关脑区的病理组织学变化.方法:背部皮下递增注射吗啡建立吗啡依赖大鼠模型,应用光镜和透射电镜对吗啡依赖鼠依赖相关脑区兰斑核、中脑导水管周围灰质、黑质、豆状核、杏仁核、海马进行观察,并与空白对照组进行比较.结果:吗啡依赖组大鼠六个依赖相关脑区神经细胞固缩或肿胀,神经纤维肿胀,线粒体肿胀、畸形,内质网扩张,多聚核糖体解聚,轴突、树突数量增多;胶质细胞、脑膜下淋巴细胞增多,随依赖时间的延长而更加显著,并可见胶质结节形成.结论:随着依赖时间的延长,依赖相关脑区病理组织学损害更加明显;胶质细胞与吗啡依赖存在有一定的关系.     

地卓西平对吗啡依赖大鼠部分脑区腺苷酸环化酶基因表达的影响

目的研究谷氨酸受体拮抗剂地卓西平对吗啡依赖大鼠某些脑区腺苷酸环化酶Ⅷ(AC-Ⅷ)基因转录水平的影响.方法24只雄性SD大鼠随机等分为吗啡组及干预组.末次注射后3h及72h各随机处死6只,取脑并冰冻切片,留取中脑腹侧被盖区(VTA)、伏隔核(NAc)、中脑导水管灰质(PAG)、杏仁核(AMG)、海马CA1区(HIPCA1)等脑区的切片.利用原位杂交及图像分析技术检测各脑区AC-ⅧmRNA吸光度(A)值并作同期平行比较.结果末次注射后3h及72h,干预组大鼠5个被检脑区AC-ⅧmRNA吸光度(A)值均明显低于吗啡组.结论合并使用谷氨酸受体拮抗剂地卓西平可明显降低吗啡依赖大鼠多个脑区AC-Ⅷ基因转录水平,这可能是谷氨酸受体拮抗剂抑制吗啡耐受及依赖的分子机制之一.     

安君宁对吗啡依赖大鼠脑内酪胺酸羟化酶和胶质原纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察安君宁对吗啡依赖大鼠腹侧被盖区(VTA)内酪胺酸羟化酶(TH)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法选择体质量在180~220g雄性SD大鼠30只为研究对象,动物随机分为5组(每组动物6只),即单用生理盐水正常对照组(Normal组)、其余四组大鼠则先制成吗啡成瘾模型:以5mg/kg/次开始,每天增加5mg,一直增加到第10天50mg·kg-1·次-1,每天腹腔注射吗啡2次。第11天开始自然戒断,四组成瘾大鼠随机分成吗啡成瘾后戒断并安君宁治疗12d组(P12E)、吗啡成瘾后戒断并淀粉治疗12d组(P12EC),吗啡成瘾后戒断并安君宁治疗30d组(P30E)、吗啡成瘾后戒断并淀粉治疗30d组(P30EC)。安君宁和淀粉均为每天灌胃2次,安君宁剂量为3g·kg-1·次-1,对照组喂等量淀粉。用ABC法测VTA的TH与GFAP的免疫组织化学反应;测定阳性神经元的平均光密度(OD)值。结果5组大鼠(Normal、P12EC、P12E、P30EC、P30E组)VTA中TH免疫反应的强度分别为(0.1888±0.045)、(0.4471±0.063)、(0.1834±0.039)、(0.3224±0.044)、(0.1788±0.042),VTA中GFAP免疫反应的强度分别为(0.1538±0.045)、(0.2768±0.056)、(0.1808±0.036)、(0.2512±0.051)、(0.1427±0.034)。吗啡成瘾大鼠VTA中TH和GFAP免疫反应的强度持续高于淀粉组(P<0.05),安君宁治疗12d或30d能显著性降低VTA中TH、GFAP免疫反应强度(P<0.05),逐渐接近淀粉对照组。结论吗啡成瘾能导致大鼠VTA内的一些可塑性的损伤,而安君宁能促进这些损伤的修复,提示其可用于阿片类成瘾的治疗。     

地卓西平对吗啡依赖大鼠部分脑区腺苷酸环化酶基因表达的影响

目的研究谷氨酸受体拮抗剂地卓西平对吗啡依赖大鼠某些脑区腺苷酸环化酶Ⅷ (AC Ⅷ )基因转录水平的影响。方法 2 4只雄性SD大鼠随机等分为吗啡组及干预组。末次注射后 3h及 72h各随机处死 6只 ,取脑并冰冻切片 ,留取中脑腹侧被盖区 (VTA)、伏隔核 (NAc)、中脑导水管灰质 (PAG )、杏仁核(AMG)、海马CA1区 (HIPCA1)等脑区的切片。利用原位杂交及图像分析技术检测各脑区AC ⅧmRNA吸光度 (A)值并作同期平行比较。结果末次注射后 3h及 72h ,干预组大鼠 5个被检脑区AC ⅧmRNA吸光度(A)值均明显低于吗啡组。结论合并使用谷氨酸受体拮抗剂地卓西平可明显降低吗啡依赖大鼠多个脑区AC Ⅷ基因转录水平 ,这可能是谷氨酸受体拮抗剂抑制吗啡耐受及依赖的分子机制之一。     

糖皮质激素对吗啡依赖大鼠脑区阿片μ受体的影响

目的:观察吗啡成瘾大鼠脑区内阿片μ受体的定位分布,研究糖皮质激素(地塞米松)控制阿片戒断症状的分子机制.方法:剂量递增腹腔注射吗啡建立大鼠成瘾模型,给予地塞米松干预,纳洛酮促瘾后观察戒断症状,采用免疫组化实验观察成瘾后阿片μ受体的分布定位变化.结果:吗啡依赖大鼠经地塞米松干预后,由纳洛酮催促戒断症状评分明显低于未经地塞米松处理组;吗啡成瘾后的阿片μ受体在各脑区的表达下调,尤以蓝斑、伏隔核、下丘脑、腹侧被盖区、海马等脑区明显.结论:吗啡成瘾后阿片μ受体在奖赏中枢和海马的表达下降.地塞米松能抑制吗啡依赖大鼠戒断症状及脑区阿片μ受体的表达.     

安君宁对吗啡依赖大鼠脑内酪胺酸羟化酶和胶质原纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察安君宁对吗啡依赖大鼠腹侧被盖区(VTA)内酪胺酸羟化酶(TH)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法选择体质量在180～220g雄性SD大鼠30只为研究对象,动物随机分为5组(每组动物6只),即单用生理盐水正常对照组(Normal组)、其余四组大鼠则先制成吗啡成瘾模型:以5mg/kg/次开始,每天增加5mg,一直增加到第10天50mg·kg-1·次-1,每天腹腔注射吗啡2次.第11天开始自然戒断,四组成瘾大鼠随机分成吗啡成瘾后戒断并安君宁治疗12d组(P12E)、吗啡成瘾后戒断并淀粉治疗12d组(P12EC),吗啡成瘾后戒断并安君宁治疗30d组(P30E)、吗啡成瘾后戒断并淀粉治疗30d组(P30EC).安君宁和淀粉均为每天灌胃2次,安君宁剂量为3 g·kg-1·次-1,对照组喂等量淀粉.用ABC法测VTA的TH与GFAP的免疫组织化学反应;测定阳性神经元的平均光密度(OD)值.结果5组大鼠(Normal、P12EC、P12E、P30EC、P30E组)VTA中TH免疫反应的强度分别为(0.1888±0.045)、(0.4471±0.063)、(0.1834±0.039)、(0.3224±0.044)、(0.1788±0.042),VTA中GFAP免疫反应的强度分别为(0.1538±0.045)、(0.2768±0.056)、(0.1808±0.036)、(0.2512±0.051)、(0.1427±0.034).吗啡成瘾大鼠VTA中TH和GFAP免疫反应的强度持续高于淀粉组(P＜0.05),安君宁治疗12d或30d能显著性降低VTA中TH、GFAP免疫反应强度(P＜0.05),逐渐接近淀粉对照组.结论吗啡成瘾能导致大鼠VTA内的一些可塑性的损伤,而安君宁能促进这些损伤的修复,提示其可用于阿片类成瘾的治疗.     

吗啡依赖及戒断大鼠相关脑区Bcl-2的表达研究

目的:明确吗啡依赖及戒断两种状态时大鼠相关脑区Bcl-2的表达特征.方法:将18只Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为吗啡依赖组、吗啡戒断组和空白对照组,每组6只.采用递增法皮下注射吗啡建立大鼠吗啡依赖模型,纳络酮注射戒断,应用免疫组化和地高辛标记寡核苷酸探针原位杂交技术检测三组大鼠不同脑区Bcl-2的表达水平.结果:连续给予吗啡5天及纳络酮戒断后,中脑腹侧被盖区、海马、蓝斑、前额叶皮质脑区Bcl-2及其mRNA较对照组显著降低(P＜0.05),而吗啡戒断组伏隔核脑区内Bcl-2及其mRNA的表达较依赖组显著增加(P＜0.05),结论:吗啡依赖及戒断大鼠Bcl-2蛋白及其mRNA的表达在不同脑区有选择性的改变,可能是吗啡依赖及戒断的分子机制之一.     

地卓西平对吗啡依赖大鼠部分脑区突触素ImRNA表达的影响

目的：研究地卓西平对吗啡依赖大鼠部分脑区突触素ImRNA表达的影响。方法：雄性SD大鼠24只，随机等分为2组。吗啡组大鼠腹腔注射盐酸吗啡，2次／d，起始剂量5mg／kg，逐d递增5mg／kg，至第10d达50mg／kg；干预组大鼠在每次注射吗啡（同吗啡组）前30min腹腔注射地卓西平0．075mg／kg。末次注射后3h及72h，2组各取6只大鼠取脑并冰冻切片，留取中脑腹侧被盖区（VTA）、伏隔核（NAc）、中脑导水管灰质（PAG）、杏仁核（AMG）、海马CA1区（HIPCA1）的脑片，利用原位杂交技术检测突触素ImRNA的表达。结果：末次注射后3h．干预组大鼠AMG、HIPCA1突触素ImRNA的表达高于吗啡组；72h时，干预组大鼠NAc、HIPCA1突触素ImRNA的表达高于吗啡组（P均〈0．05）。其他脑区2组间差异无统计学意义（P〉0．05），结论：地卓西平可促进吗啡依赖大鼠部分脑区突触素I基因的表达，这可能是其抑制吗啡依赖效应的机制之一。     

Cedemex对自然戒断吗啡依赖大鼠脑内β-内啡肽和多巴胺含量的影响

目的观察Cedemex对自然戒断吗啡依赖大鼠的内啡肽含量和多巴胺含量的影响。方法以剂量递增法连续皮下注射吗啡7d，建立吗啡依赖大鼠模型。用放射免疫法分别测定大鼠下丘脑和垂体中β-内啡肽（β-EP）的含量；用高效液相-荧光检测法测定大鼠伏隔核多巴胺的含量。结果（1）与停用吗啡组比较，Cedemex中、高剂量组能够显著升高下丘脑、垂体的β-EP水平（P〈0．05）。其中Cedemex中剂量分别升高的平均百分数为50％、印％；高剂量分别升高的平均百分数为55％、36％；（2）与停用吗啡组比较，Cedemex中、高剂量组能够显著降低吗啡戒断大鼠伏隔核的多巴胺水平（P〈0．05），降低的平均百分数分别为10％、17％。结论机体内啡肽和多巴胺的改变与吗啡依赖和戒断症状有关，Cedemex能够促进机体内啡肽和多巴胺水平的恢复。     

吗啡依赖和戒断大鼠行为及垂体阿黑皮源基因表达

目的 :结合行为学观察从分子水平上研究吗啡依赖和戒断机理及丁丙诺啡对吗啡戒断的影响。方法 :观察吗啡戒断大鼠的戒断体征及条件性位置偏爱情况 ;利用核酸分子杂交技术研究其垂体阿黑皮源 ( POMC)基因表达的变化。结果 :停用吗啡后 ,大鼠条件性位置偏爱的消失迟于戒断体征 ,吗啡依赖及戒断时垂体 POMC m RNA含量下降。结论 :垂体 POMC基因表达的改变可能是精神依赖产生的生理基础之一     

电针对吗啡戒断大鼠不同脑区FosB基因表达的影响

目的:观察电针对吗啡戒断大鼠戒断症状及不同脑区内FosB基因表达的影响。方法:采用逐日增量背部皮下注射盐酸吗啡注射液,末次注射后3h给予纳洛酮快速戒断建立吗啡戒断大鼠模型,随后治疗组采用电针穴位干预。戒断后1、3、7d,分别采用戒断症状评分表评定各组大鼠戒断症状,应用RT-PCR测定大鼠前额叶皮质、伏隔核内FosB基因的表达水平。结果:戒断后各组症状评分显示:与空白组比较,戒断后1、3、7d模型组与电针组评分均明显升高(P<0.01),而随戒断时间增加模型与电针组评分均逐渐下降;与模型组比较,戒断后1、3、7d电针组戒断评分均明显降低(P<0.01);实时荧光定量PCR结果表明:戒断后1、3、7d电针组大鼠伏隔核FosB mRNA表达较模型组显著下降(P<0.01),且呈先快后慢的趋势;前额叶皮质内FosB mRNA表达较模型组下降(P<0.05),但呈先慢后快的趋势。结论:电针可以逐渐改善吗啡戒断后大鼠戒断症状,同时下调不同脑区内FosB mRNA的表达,且其表达变化规律在奖赏环路不同脑区内存在差异。     

吗啡依赖和戒断大鼠行为及垂体阿黑皮源基因表达

目的：结合行为学观察从分子水平上研究吗啡依赖和戒断机理及丁丙诺啡对吗啡戒断的影响。方法：观察吗啡戒断大鼠的戒断体征及条件性位置偏爱情况;利用核酸分子杂交技术研究其垂体阿黑皮源（POMC）基因表达的变化。结果：停用吗啡后,大鼠条件性位置偏爱的消失迟于戒断体征,吗啡依赖及戒断时垂体POMCmRNA含量下降。结论：垂体POMC基因表达的改变可以是精神依赖产生的生理基础之一。     

地卓西平对吗啡依赖大鼠部分脑区突触素Ⅰ mRNA表达的影响

目的:研究地卓西平对吗啡依赖大鼠部分脑区突触素Ⅰ mRNA表达的影响.方法:雄性SD大鼠24只,随机等分为2组.吗啡组大鼠腹腔注射盐酸吗啡,2次/d,起始剂量5 mg/kg,逐d递增5 mg/kg,至第10 d达50mg/kg;干预组大鼠在每次注射吗啡(同吗啡组)前30 min腹腔注射地卓西平0.075 mg/kg.末次注射后3 h及72h,2组各取6只大鼠取脑并冰冻切片,留取中脑腹侧被盖区(VTA)、伏隔核(NAc)、中脑导水管灰质(PAG)、杏仁核(AMG)、海马CA1区(HIPCA1)的脑片,利用原位杂交技术检测突触素Ⅰ mRNA的表达.结果:末次注射后3 h,干预组大鼠AMG、HIPCA1突触素Ⅰ mRNA的表达高于吗啡组;72 h时,干预组大鼠NAc、HIPCA1突触素Ⅰ mRNA的表达高于吗啡组(P均＜0.05).其他脑区2组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:地卓西平可促进吗啡依赖大鼠部分脑区突触素Ⅰ基因的表达,这可能是其抑制吗啡依赖效应的机制之一.     

人体慢性吗啡依赖对内分泌的影响

采用放射免疫法对３０例慢性吗啡依赖者进行了治疗前、后血中皮质醇及生长激素水平的测定，并以３０例健康人作对照。结果表明：人体慢性吗啡依赖者体内ＣＯＲ、ＧＨ水平显著升高，经一个月的戒毒治疗后体内ＣＯＲ、ＧＨ水平下降，     

褪黑素对吗啡依赖催促戒断大鼠不同脑区谷氨酸和γ-氨基丁酸含量的影响

目的 观察褪黑素(melatonin,MT)对吗啡催促戒断大鼠不同脑区谷氨酸(glutamate,Glu)和γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)水平变化的影响.方法 以剂量递增法连续5 d背部皮下注射盐酸吗啡复制慢性吗啡依赖模型.实验分生理盐水对照组(normal saline,NS)、吗啡依赖组(morphine,MOR)、催促戒断组(naloxone,NAL)和褪黑素治疗组(MT组),采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatograph,HPLC)测定大鼠脑桥、中脑、海马、间脑和纹状体Glu和GABA含量.结果 与NS组相比,MOR组大鼠脑桥Glu含量明显升高(P＜0.01)而中脑、海马、间脑和纹状体则未见明显变化,脑桥、中脑、间脑和纹状体GABA含量明显升高(P＜0.05,P＜0.01);NAL组脑桥、中脑、海马、间脑和纹状体Glu含量进一步显著升高(P＜0.05,P＜0.01),而GABA含量则迅速下降(P＜0.05,P＜0.01);与NAL组相比,MT抑制吗啡催促戒断大鼠脑内Glu水平的升高(P＜0.05,P＜0.01)和GABA水平的下降(P＜0.05,P＜0.01).结论 MT对吗啡依赖纳洛酮催促戒断大鼠不同脑区的Glu和GABA水平具有调节作用.     

吗啡依赖和戒断大鼠脊髓内NA能神经元变化的研究

目的探讨慢性吗啡处理及戒断后大鼠脊髓内NA能神经元的形态变化.方法24只雄性SD大鼠随机分为吗啡依赖组、吗啡戒断组和生理盐水对照组,每组8只.依赖组大鼠以腹腔注射吗啡方法建立吗啡依赖模型.戒断组大鼠在依赖模型建立后于腹腔注射纳洛酮5 mg/kg诱导戒断症状,对照组大鼠注射等量生理盐水.注射24 h后取脑和脊髓作冰冻切片.利用免疫组化方法检测各组大鼠脊髓及LC内NA能神经元的变化.结果正常组LC内DBH阳性细胞数为(98±17),吗啡依赖组和戒断组LC内DBH阳性细胞数分别为(212±20)和(229±27),明显高于正常组(P＜0.01),但平均灰度值无明显差异.慢性吗啡处理后脊髓前角DBH阳性神经元数量增多,染色加深,后角和侧角新增加大量阳性神经元,吗啡依赖组和戒断组DBH阳性神经元增加具有极显著意义(P＜0.01).结论慢性吗啡处理和戒断引起LC和脊髓内NA能神经元增多,提示NA与吗啡依赖和戒断的形成有关,其可能是吗啡依赖及戒断的分子机制之一.