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10例原发性肝癌手术切除的肿瘤标本用于分离培养肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)。分离制备TIL采用机械剪切,酶消化和用Ficoll-Hypaque分离结合的方法。分离制得的TIL以一定浓度于含rIL-21000U/ml,PHA20μg/ml的RPMI1640完全培养液中,在5%CO2,37℃条件下培养30~40d。实验观察了TIL悬液中的细胞组成、TIL的体外扩增及肿瘤细胞的消失情况;用透射电镜观察了培养前后TIL的超微结构变化;实验采用免疫组化和单克隆抗体技术(ABC法)检测了培养前后TIL的主要淋巴细胞亚群变化;还采用3H-TdR释放法测定了TIL的体外抗肿瘤活性。实验结果表明,原发性肝癌(HCC)的TIL在体外培养可以得到较好扩增并显示其在体外对新鲜自体瘤靶细胞的抗肿瘤活性。 相似文献
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原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的抗肿瘤活性 总被引:3,自引:0,他引:3
对原发性肝癌的肿瘤浸润淋巴细胞进行了研究。用中性红摄入法测其对靶细胞的杀伤活性,APAAP桥联免疫酶标法测TIL的亚型。结果表明:经IL-2体外诱导的PHC-TIL具有较哟的抗肿瘤活性,且较AK细胞明显强,PHC-TIL对自体肿瘤的杀伤活性明显高于对同种异体肿瘤的杀伤活性。 相似文献
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目的 :对 IL -12 + IL -2培养的肝癌肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)与 IL-2诱导的 TIL作对照研究观察 TIL的特异性杀伤力、增殖能力、细胞因子的改变及临床疗效。方法 :将手术切除的原发性肝癌进行体外分离 ,分别用含 IL -2的培养液和含 IL-12 +IL-2的培养液培养 ,诱导 TIL的生长。培养 10~ 14天测定细胞杀伤率、细胞因子和增殖能力 ,待细胞扩增达 10 8~ 9· ml- 1 时进行回输 ,随访观察临床疗效。结果 :(1) IL-12 + IL -2组 TIL对自体肝癌细胞的细胞杀伤率比 IL -2组明显增高 (P<0 .0 1) ;(2 ) IL -12+ IL -2组 TIL比 IL-2组扩增能力明显增强 (P<0 .0 5 )。 (3 ) IL-12 + IL -2组较 IL-2组细胞因子γ干扰素 (IFN-γ)和肿瘤坏死因子 α(TNF-α)水平明显增高 (P<0 .0 5 )。 (4 ) TIL 回输后 IL-12 + IL-2组与 IL-2组 CD3+、CD4 +、CD8+均升高 ,以 CD3+、CD8+ 升高为主。与输注前比较差异均有显著性。 IL-12 + IL-2组与 IL-2组间比较 ,前者 CD3+ 、CD8+ 、CD56 + 上明显高于后者 ,差异显著 (P<0 .0 5 )。 (5 )患者的临床症状改善明显。 (6) IL-12 + IL-2组 1年、3年、5年生存率与 IL-2组 TIL回输肝癌患者对比差异均显著且复发率降低。结论 :白介素 12诱导肝癌 TIL可明显增强 TIL细胞的特异性细胞毒作用且增殖能 相似文献
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原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的分离培养及抗瘤活性研究 总被引:4,自引:0,他引:4
为了解原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞治疗肝癌的临床价值及应用前景,采用Rosenberg法,对TIL细胞的分离,培养及抗瘤活性进行了研究。结果8例肝癌病人的TIL细胞分离,培养均获得成功,并在培养3-5周后扩增到临床治疗肝癌后需的TIL细胞数量。 相似文献
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肿瘤浸润淋巴细胞在肝癌患者的术后应用 总被引:7,自引:0,他引:7
肿瘤浸润淋巴细胞在肝癌患者的术后应用张一心尤其汪晓莺作者从1993年5月~1996年6月对我院15例原发性肝癌手术切除患者中的12例进行了肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)回输治疗,现将结果报道如下。一、对象和方法1.对象:15例原发性肝癌患者均来自于我院... 相似文献
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肿瘤患者血清及淋巴细胞培养上清sIL—2R与淋巴细胞转化相关… 总被引:1,自引:0,他引:1
本通过微量全血、氚标记胸腺嘧啶掺入法测定14名肿瘤患和14名正常人淋巴细胞的增殖反应。结果,肿瘤患患PBMC对PHA诱导的增殖反应较正常人明显下降(P〈0.01)。采用ELISA双抗体夹心法对其血浆(或血清)及PHA诱导的72h淋巴细胞培养上清sIL-2R含量检测。结果,肿瘤患淋巴细胞培养上清sIL-2R含量显地低于正常对照组,其水平与淋巴细胞增殖反应呈正相关,其相关系数有非常显意义 相似文献
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肝癌术后应用白介素12及白介素2诱导的自体肿瘤浸润淋巴细胞的临床观察 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 观察肝癌患者术后单用白细胞介素2(IL-2)培养和IL-12+IL-2培养的自体肝癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)输注后,其特异性杀伤力、增殖能力、细胞因子的改变以及细胞免疫功能和临床症状的变化.方法 将手术切除的原发性肝癌组织进行体外分离,分别用含IL-2的培养液和含IL-12+IL-2的培养液培养,诱导TIL的生长.培养10-14 d测定细胞杀伤率、细胞因子和增殖能力,待细胞扩增达108-9/ml时进行输注,随访观察临床疗效.结果 ①输注IL-12+IL-2组TIL对自体肝癌细胞的细胞杀伤率、细胞扩增能力、细胞因子IFN-γ和TNF-α水平均比IL-2组明显增高;②输注IL-12+IL-2诱导的TIL组与IL-2诱导的TIL组输注后CD3+、CIM+、CD8+均升高,以CD3+、CD8+升高为主.与输注前比较,差异均有统计学意义;IL-12+IL-2组与IL-2组间比较,前者CD3+、CD8+、CD 56+上明显高于后者,差异均有统计学意义.③输注后两组患者的临床症状均比输注前改善明显,但两组间比较无明显差异.④接受TIL自体输注治疗的患者,其1年、3年、5年生存率均有所提高,IL-12+IL-2组与IL-2组与同期非TIL治疗组相比较(P<0.05).结论 白介素12诱导肝癌TIL可明显增强TIL细胞的特异性细胞毒作用且增殖能力明显增强.肝癌患者术后输注IL-12+IL-2诱导的自体肝癌肿瘤浸润淋巴细胞比输注IL-2诱导的肝癌肿瘤浸润淋巴细胞能更有效地提高肝癌患者机体免疫机能,延长1年生存期,减少复发. 相似文献
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应用过继性免疫疗法治疗人类晚期恶性肿瘤的研究,现已取得了长足的进展。从应用淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)进行过继性免疫治疗,到目前已发展至应用自身肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)进行肿瘤的过继性免疫治疗。我们在人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的分离、制备及体内... 相似文献
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目的:观察肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)体外扩增速度及对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:肿瘤组织经处理后,用淋巴细胞分离液可分离得到TIL,用含rIL2的完全培养基培养TIL,并作TIL对肿瘤细胞的杀伤率。结果:培养40d的黑色素瘤TIL,扩增达9773倍。TIL对黑色素瘤、卵巢囊腺癌、大网膜转移性腺癌和癌性腹水等自体瘤细胞的效靶比例为40∶1时,培养15d的TIL对肿瘤细胞的杀伤作用明显高于20∶1;当效靶比例相同(20∶1)时,培养20d的TIL对肿瘤细胞的杀伤作用高于15d,而在40∶1时培养20d与15d的杀伤率无差别。TIL对K562肿瘤细胞株也有较强的杀伤作用。结论:TIL在含rIL2的完全培养基中可大量扩增,TIL对肿瘤细胞的杀伤作用与效靶比例及培养时间有关。 相似文献
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目的:研究体外快速制备的自体肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)联合白细胞介素2(IL-2)疗法对癌性胸腔积液的治疗作用.方法:对2003年8月至2004年11月间确诊的22例癌性胸腔积液患者,采用该作者实验室建立的胸腔积液TIL体外快速制备技术制备TIL,胸腔输注,后续胸腔内灌注IL-2,每天100万单位,连续4d为1治疗周期,观察其疗效和不良反应.结果:采用该疗法治疗1个周期,22例患者中8例完全缓解(36.4%),11例部分缓解(50.0%),3例无效(13.6%),总有效率达86.4%.有效的病例随访中均未见治疗侧胸腔积液复发或增加;除极少数患者治疗中出现低热和胸痛外,未见有其他不良反应发生.结论:自体TIL联合IL-2治疗癌性胸腔积液,具有良好的临床应用价值. 相似文献
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小鼠肝癌浸润性淋巴细胞的生物学特性 总被引:1,自引:0,他引:1
对小鼠肝癌肿浸润性淋巴细胞(Tumor-infltratinglymphote,TIL)生物学特性研究表明:(1)TIL是一群异质性细胞,其细胞表型随培养时间的延长而变化;(2)新鲜分离的TIL对植物血凝素(PHA)的反应极低(P<0.01);(3)新鲜分离的TIL的自然杀伤细胞(Natural killer cell)活性很低,经白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)培养后明显增高;(4)经IL-2培养后的TIL能分泌某种(些)因子抑制肿瘤细胞的生长。上述资料将有助于对TIL的认识和对其抗瘤机理的探讨。 相似文献
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原发性肝癌患者外周血IL—2系统分析 总被引:1,自引:0,他引:1
作者对26例原发性肝癌患者(PHC)及30名正常人外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液IL-2水平、IL-2R及sIL-2R表达和血清sIL-2R水平进行检测。发现,患者PBMC的IL-2水平及IL-2R表达明显下降,而血清的sIL-2R水平呈显著升高,但患者PBMC培养上清sIL-2R与正常人相比,差异不显著;而患者与正常人PBMC的IL-2R与sIL-2R呈正相关,血清sIL-2R与上清IL 相似文献
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人rIL—2,rIL—4及rIL—6联合诱导肿瘤浸润性淋巴细胞抗肿瘤活性的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
为研究肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)抑制状态的去除及进一步提高IL-2/TIL的杀肿瘤活性,本文应用人重组IL-2、IL-4及IL-6分别配伍及联合诱导TIL的杀伤活性。结果表明,200U/ml的IL-4及IL-6能显著增强TIL的杀肿瘤活性;增殖的TIL细胞以CD8^+阳性细胞为主,其表面IL-2受体(CD25)的表达显著增多。以上结果提示,多种细胞因子联合诱导TIL,有助于TIL抑制状态的作及杀 相似文献
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王炜 朱明华 倪灿荣 陈颖 郑建明 WANG Wei ZHU Ming-hu NI Can-rong CHEN Ying ZHENG Jian-ming 《第二军医大学学报》2005,26(10):1095-1098
目的:探讨胰腺癌神经组织浸润与肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)各亚型之间的关系.方法:随机选取胰腺癌外检标本54例,其中28例存在神经组织浸润,26例无神经组织浸润.H-E染色观察TIL的分布和密度,EnVision方法标记胰腺癌组织中TIL各亚型,并对阳性TIL进行计数,同时进行CD4、CD8免疫双标记,分析神经组织浸润与TIL亚型的相关性.结果: CD20 TIL呈簇状分布在间质内或散在于癌性上皮间;CD7 TIL散在于癌巢或间质内,一般不聚集呈簇状;CD4 TIL多散在于癌巢内,间质内较少;CD8 TIL多散在于癌性间质内.CD4 TIL为主的胰腺癌组织未见CD8阳性表达,CD8 为主的胰腺癌组织未见CD4阳性表达.有、无神经组织浸润的胰腺癌TIL中CD20、CD7、CD4、CD8、CD56、Fas阳性率分别为100%(28/28)、100%(26/26),100%(28/28)、100%(26/26),60.7%(17/28)、84.6%(22/26),96.4%(27/28)、50%(13/26),39.2%(10/28)、57.69%(15/26),92.85%(26/28)、53.84%(14/26). CD4、CD8、Fas阳性TIL数在有、无神经组织浸润的胰腺癌中差异显著(P=0.001、0.000和0.004),各TIL亚型的免疫组化阳性强度与胰腺癌有无神经组织浸润无显著相关性(P=0.993、0.990、1.000、0.991、0.993、0.997).结论:CD4、CD8和Fas阳性的TIL与胰腺癌神经组织浸润的发生关系密切;神经组织浸润时TIL分型的不同与其浸润至肿瘤组织中的先后次序有关,也可能与肿瘤对宿主的免疫逃避机制有关,还有待进一步研究. 相似文献
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目的:模拟体内环境,摸索出应用自体胸水上清培养肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)时所需白细胞介素-2(IL-2)的最适剂量。方法:恶性胸水中的TIL经贴壁法分离后,分成A、B、C三组,分别应用含有细胞因子IL-2、CD3单克隆抗体(OKT3)及外源凝集素(PHA)的自体胸水上清进行培养,其中A组IL-2终浓度为6000u/ml;B组IL-2首剂终浓度为6 000u/ml,其后换液时改为1000u/ml;C组IL-2终浓度为1000u/ml,比较不同剂量IL-2培养的TIL增殖速率、培养前后免疫表型变化和对自体肿瘤细胞的杀伤活性。结果:培养的第3、7、14和21 d检测发现,三组TIL均发生明显扩增,其中A、B两组间TIL的生长速度无差异,但均明显快于C组;TIL免疫表型变化和对自体肿瘤细胞杀伤活性经组间比较无显著差异。结论:TIL培养时,首剂IL-2的终浓度6000u/ml有着非常重要的意义,它有助于早期解除TIL的免疫抑制状态,使其在培养的第3 d就发生明显的活化和扩增,为自体TIL体外分离后仅作短期培养即回输胸腔,后续胸腔内注入IL-2,使其进一步生长,发挥杀瘤效应,从而为治疗恶性胸水奠定了理论基础。 相似文献
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提高肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的增殖能力和杀伤活性,是其临床应用前需解决的关键问题。为此,作者对TIL的分离和培养条件进行了探讨,建立了以机械分散法,0.05%胶原酶和0.003%DNA酶室温消化6小时加冷消化18小时的酶消化法和75%与100%Ficoll非连续密度梯度离心法相结合的分离纯化TIL方法。分离出的TIL在体外条件培养基中多数能扩增到109以上的应用标准,NK、LAK活性分别可达58.3±11.7%和48.6±10.6%,其中发挥主要作用的是CD8T细胞。因此,本法不失为一种有效的分离培养TIL的方法。它的建立为应用TIL治疗恶性肿瘤奠定了良好的实验基础。 相似文献
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目的:研究白细胞介素-18(IL-18)与白细胞介素-12(IL-12)对肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)杀伤功能的影响.方法:IL-18与IL-12共同刺激的TIL与人的胃癌细胞系SGC-7901共孵育后接种于BALB/c SCID小鼠皮下,测定小鼠肿瘤的生长大小并观察荷瘤小鼠的生存时间,酶联免疫吸附试验(ELISA方法)检测小鼠血清中Th1型细胞因子TNF-α、IFN-γ及Th2型细胞因子IL-10、IL-4的表达水平,同时体外测定NK细胞及CD8+T细胞的肿瘤杀伤活性.结果:IL-18与IL-12共同作用于TIL后,与对照组相比,SGC-7910细胞的荷瘤小鼠皮下肿瘤生长明显减慢,小鼠生存率明显延长;同时,两种细胞因子联合处理组荷瘤小鼠血清中细胞因子TNF-α、IFN-γ的水平明显增高,而IL-10与IL-4水平明显降低;体外LDH杀伤实验证实IL-18联合IL-12处理组NK细胞及CD8+T细胞杀伤活性明显提高.结论:IL-18与IL-12协同刺激能增强TIL对胃癌胞的杀伤功能. 相似文献