前列腺炎SB203580镇痛模型大鼠脊髓p38MAPK的表达变化及意义

目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)活性抑制剂SB203580鞘内注射对前列腺炎镇痛模型大鼠脊髓p38MAPK表达的影响.方法 45只SPF级雄性国大鼠随机分为3组:对照组(5只)、前列腺炎组(IO只)和前列腺炎SB203580鞘内注射镇痛组(镇痛组,30只).镇痛组再均分3个亚组,通过前列腺注射完全弗氏佐剂(CFA),并经脊髓鞘内分别注射SB2035800.5、2.5和12.5μg/10μl.前列腺炎组和各镇痛亚组分别于给药或建模后5、10d处死5只大鼠,采用Western blotting和ELISA法检测各组大鼠L5-S2脊髓背角组织磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、神经胶质酸性蛋白(GFAP)蛋白含量及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)水平和一氧化氮合酶(iNOS)的活性变化.结果 前列腺炎组大鼠L5-S2脊髓背角中p-p38MAPK、GFAP、TNF-α、NO水平和iNOS活性在5d和10d均明显高于对照组,并随时间延长增高(P<0.01).镇痛组大鼠L5-S2脊髓背角中p-p38MAPK、GFAP、TNF-α、NO水平和iNOS活性在5d和10d均低于前列腺炎组,且呈剂量依赖效应(P<0.01).结论 脊髓p38MAPK信号通路参与了大鼠前列腺炎发生后的脊髓痛觉传导及SB203580镇痛机制,阻断p38MAPK信号通路可有效降低脊髓炎性因子水平.     

外周神经损伤对脊髓背角与中枢-外周移行区星形胶质细胞反应的影响

目的 应用免疫组化技术及电镜观察外周神经损伤后脊髓背角中枢--外周移行区星形胶质细胞反应。方法 51只成年wistar大鼠随机分为3组：A组（n=7）正常对照组;B组（n=24）背根压榨伤组;C组（n=20）坐骨神经压榨伤组。损伤组按存活期不同各分为4个亚组,每亚组5例,大鼠分别于伤后3天、2周、1月和2月处死取材。A组、B组3天、2月时相点各取2例用于电镜标本制作。免疫组化染色观察L5脊髓背角及中枢-外周移行区胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达,电镜观察中枢-外周移行区星形胶质细胞反应。结果（1）背根和坐骨神经损伤可引起脊髓背角GFAP的显著表达,其中后者的GFAP表达随时间延长而减弱,而前者整个观察期持续高水平表达;（2）坐骨神经损伤不引起中枢-外周移行区GFAP的表达增强,但背根损伤可导致该区域GFAP的显著表达且持续整个观察期;（3）超微结构观察示背根压榨伤后中枢-外周移行区星形胶质细胞突起大量增生,占据了背根传入纤维的径路。结论 外周神经损伤引起的脊髓背角及中枢-外周移行区的反应性胶质化可能是背根再生不能重建脊髓和外周联系的重要原因。     

前列腺炎性疼痛与脊髓胶质细胞活化关系的初步研究

目的探讨前列腺炎性疼痛与脊髓胶质细胞活化的关系。方法用完全弗氏佐剂（CFA）刺激SD大鼠前列腺,用免疫组织化学技术对不同时间段大鼠相应脊髓节段（L6和S1）星形胶质细胞和小胶质细胞活化情况进行检测。结果CFA刺激大鼠前列腺后3、10、28天,L6、S1脊髓背角浅层和深层星形胶质细胞和小胶质细胞的活化与对照组相比均显著增加。结论胶质细胞活化在前列腺炎性疼痛的神经病理过程可能具有重要作用。     

鞘内注射氢水对病理性疼痛大鼠脊髓背角p38MAPK和TNF-α影响的实验研究

目的探讨在坐骨神经窄缩引起的神经病理性疼痛模型(CCI)中鞘内注射氢水的镇痛效果以及对脊髓背角p38MAPK、TNF-α的影响。方法将30只SD大鼠随机均分为三组:假手术组、CCI对照组(予以鞘内注射生理盐水)和实验组(予以鞘内注射氢水)。于复制CCI术前半小时以及术后第1³天鞘内注射药物,剂量为0.1 ml/kg。于复制CCI术前2 h以及术后第43天鞘内注射药物,剂量为0.1 ml/kg。于复制CCI术前2 h以及术后第4¹0天测定大鼠右足机械痛阈值;术后第10天检测损伤侧脊髓背角p38MAPK、TNF-αmRNA水平。结果与假手术组比较,CCI对照组和实验组机械痛阈值显著降低(P<0.01)。CCI对照组与实验组比较CCI术后第410天测定大鼠右足机械痛阈值;术后第10天检测损伤侧脊髓背角p38MAPK、TNF-αmRNA水平。结果与假手术组比较,CCI对照组和实验组机械痛阈值显著降低(P<0.01)。CCI对照组与实验组比较CCI术后第4⁶天两组机械痛阈值有统计学差异(P<0.05),术后第76天两组机械痛阈值有统计学差异(P<0.05),术后第7¹0天两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与CCI对照组比较,实验组在CCI术后第10天损伤侧脊髓背角TNF-α及p38MAPK水平表达降低。结论鞘内注射氢水可降低CCI动物模型损伤侧脊髓背角的p38MAPK和TNF-α水平,从而减轻CCI疼痛模型术后神经病理性痛。     

脊髓损伤后星型胶质细胞活化与线粒体融合蛋白2表达变化

目的探索脊髓损伤后星型胶质细胞(AS)活化与线粒体融合蛋白2(Mfn2)的表达规律及其意义,为脊髓损伤修复寻求合适的干预靶点及时机。方法建立成年SD大鼠脊髓损伤(SCI)模型,运用免疫荧光和Western Blotting方法,检测Mfn2及AS活化相关蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化。清洁级成年雄性SD大鼠48只,随机分为两组:假手术组(sham组,n=24),脊髓损伤组(SCI组,n=24),SCI组采用Allen’s法建立大鼠胸段脊髓损伤模型,sham组只行椎板切除术,分别于术后第1天、第3天、第7天、第14天4个时间点分批处死大鼠,取大鼠胸段脊髓组织,行组织免疫荧光染色观察脊髓形态变化,Western Blotting检测各个时间点Mfn2与GFAP的表达变化。结果脊髓损伤后,大鼠胸段脊髓灰质两背角之间会形成结构紊乱、边界不清的损伤灶;Western Blotting及免疫荧光结果显示脊髓损伤后,大鼠胸段脊髓Mfn2蛋白表达从第1天开始下降,与sham组相比,脊髓损伤组胸段脊髓Mfn2表达整体呈下降趋势,术后第3天开始明显下降,差异有统计学意义(P0.05);而GFAP表达随时间延长则逐渐增加,术后第3天开始差异有统计学意义(P0.05)。结论脊髓损伤后,AS的特异性标志物GFAP表达整体呈上升趋势,提示此时AS出现大量增殖;与此相反,Mfn2(增殖抑制基因)表达产物则明显减少。     

大鼠脑缺血再灌注后海马组织中GFAP和p－STAT3表达研究

目的：检测脑缺血再灌注（I／R）后海马齿状回区（dentate gyrus, DG）星形胶质细胞活化增殖及其磷酸化信号转导与转录激活子3（phosphorylated STAT3,p－STAT3）表达情况,为调控星形胶质细胞异常活化增殖提供理论依据。方法线栓法制作大鼠脑局部I／R模型,48只Sprague－Dawley（SD）大鼠随机分为假手术（Sham）组、I／R－24 h组、I／R－72 h组及I／R－7 d组。免疫荧光法及Western 印迹检测缺血后不同时间点患侧海马区胶质原纤维酸性蛋白（ glial fibrillary acidic protein , GFAP）标记阳性细胞及p－STAT3表达情况。结果与Sham组比较,I／R－72 h和I／R－7 d组海马区GFAP蛋白表达增加（P＜0．05）;随缺血时间延长,GFAP蛋白表达增加呈上升趋势,且24 h、72 h和7 d各时间点之间两两比较差异均具有统计学意义（P＜0．05）。与Sham组比较,脑I／R后海马区各时间点p－STAT3表达量均显著增加（P＜0．05）;p－STAT3表达在24 h最高,72 h开始下降,7 d仍有一定量表达,与I／R－24 h组比较, I／R－72 h组和I／R－7 d组p－STAT3表达量均显著降低（ P＜0．05）。结论脑I／R损伤后,海马区星形胶质细胞大量增殖及其p－STAT3表达增加;且p－STAT3的表达高峰在时间上早于星形胶质细胞的大量增殖。     

特异性p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对哮喘气道黏液高分泌的抑制作用

目的观察p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)特异性抑制剂SB203580对哮喘模型小鼠气道黏液高分泌的抑制作用。方法取BABL/C小鼠40只,按随机数字表法分为哮喘组、SB203580治疗组、地塞米松治疗组和正常对照组,每组10只。高碘酸希夫(AB-PAS)特染法检测各组小鼠小支气管杯状细胞的数量,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液中黏蛋白MUC5AC含量,RT-PCR法检测小鼠肺组织MUC5AC mRNA表达水平,并采用图像分析法进行灰度分析。结果与正常对照组相比,哮喘组的上皮杯状细胞数量、支气管肺泡灌洗液中MUC5AC含量、肺组织MUC5AC mRNA表达水平均显著增加(P<0.01)。经过SB203580和地塞米松分别干预后,上述指标均明显低于哮喘组(P<0.01),而且SB203580对杯状细胞、肺组织MUC5AC mRNA的抑制能力比地塞米松更强(P<0.01)。结论p38 MAPK特异性抑制剂SB203580在一定程度上能够抑制杯状细胞增生与MUC5AC合成,在哮喘气道黏液高分泌的防治中具有潜在的临床应用前景。     

p38 MAPK信号途径在高糖诱导的大鼠肾系膜细胞中激活的意义

目的 探讨高糖状态下肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号途径与其下游因子cAMP反应元件结合蛋白1(CREBI)、转化生长因子β1(TGF-β1)及细胞外基质表达的关系. 方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予低糖和/或甘露醇、高糖和/或SB203580(p38 MAPK特异性抑制剂)干预.采用免疫细胞化学法观察p38 MAPK蛋白的表达情况;Westernblotting检测p38 MAPK和CREB1及其磷酸化蛋白(p-p38 MAPK、p-CREB1)的表达;RT-PCR榆测TGF-N和FN mRNA的表达;放免法测定细胞上清液中层黏连接蛋白(LN)和Ⅳ型胶原的含量. 结果 与低糖组、低糖+甘露醇组相比,高糖刺激可使p38 MAPK蛋白发生核转移,p-p38 MAPK、p-CREB1表达明显上调,TGF-β1和FN mRNA的表达增强,LN和Ⅳ型胶原含量增加.SB203580能明显抑制p38 MAPK蛋白的核转移,降低p38 MAPK和CREB1的磷酸化,并抑制TGF-β1和FN mRNA表达,使LN和Ⅳ型胶原的分泌减少. 结论 高糖状态激活p38 MAPK信号途径参与了高糖诱导的肾小球系膜细胞TGF-β1的表达和细胞外基质的分泌.     

高压氧通过p38丝裂原激活蛋白激酶信号通路调节大鼠脑claudin-3蛋白的表达及血脑屏障的通透性

目的 探讨高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)通过p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路调节大鼠脑缺血再灌注紧密连接蛋白claudin-3的表达及血脑屏障的通透性.方法 240只雄性Wistar大鼠,按数字表法随机分成5组:假手术(sham)组、脑缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)组、脑缺血再灌注+ HBO( IR+ HBO)组、脑缺血再灌注+SB203580 (IR+ SB203580)组、HBO+脑缺血再灌注+ SB203580( IR+ HBO+ SB203580)组,每组48只.复制局灶性脑缺血再灌注模型,IR+ SB203580组和IR+ HBO+ SB203580组于脑缺血再灌注前30 min经侧脑室注射100μl p38 MAPK信号传导通路抑制剂SB203580,IR+ HBO组与IR+ HBO+ SB203580组于再灌注期间行0.25 MPa HBO治疗5次,在处死动物前1h经尾静脉注射2％伊文思蓝(Evans blue,EB),采用EB法检测缺血再灌注后血脑屏障通透性的变化.分别应用免疫组织化学的方法和Western blot法观察缺血再灌注72 h后脑组织中claudin-3蛋白的分布及表达水平的变化.结果 与sham组相比,其他4组再灌注后72 h claudin-3蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01),同时伴有脑组织EB的含量显著增高,差异有统计学意义(P＜0.01).IR+ HBO组(平均面密度值:0.330±0.12)和IR+SB203580组(平均面密度值0.190±0.011)与IR组(平均面密度值:0.120±0.08)比较脑组织claudin-3蛋白表达水平明显增加,脑组织EB的含量显著降低;与IR+ HBO组相比IR+ HBO+ SB203580组(平均面密度值:0.240±0.011)脑组织中claudin-3蛋白表达明显减少;脑组织EB的含量明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).IR+ HBO+ SB203580组与IR+ SB203580组比较claudin-3含量明显增加,EB的含量明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HBO从蛋白水平可明显增加脑缺血再灌注脑组织中紧密连接相关蛋白claudin-3的表达,从而降低血脑屏障通透性.p38 MAPK信号传导通路可能是其发挥作用的机制之一.     

血管活性肠肽（VIP）通过调控脑组织IFN－γ、IL－17A 因子水平对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠防治作用的研究

目的：探讨血管活性肠肽（VIP）通过调控脑组织IFN－γ、IL－17A因子水平对实验性自身免疫性脑脊髓炎（ EAE）大鼠防治作用。方法将60只健康雌性Wistar大鼠随机分成4组（正常对照组、EAE对照组、VIP低剂量防治组和VIP高剂量防治组）,利用髓鞘碱性蛋白（ MBP）＋完全弗氏佐剂（ CFA）诱导建立EAE模型。自造模当日起,每隔1 d分别对VIP低、高剂量防治组大鼠腹腔注射VIP 4 nmol／kg（0．2 ml）、16 nmol／kg（0．8 ml）,正常对照组及EAE对照组注射0．8 ml生理盐水,连续10 d。观察大鼠发病情况;HE染色观察脑组织基本病理改变;通过免疫组化技术,利用抗胶质纤维酸性蛋白抗体（ GFAP）检测脑组织内的星形胶质细胞活化情况;ELISA法检测脑组织匀浆中IFN－γ、IL－17A因子含量变化。结果 VIP各剂量防治组大鼠发病潜伏期延长、进展期缩短、发病高峰期神经功能障碍评分（ NDS）降低,脑组织中炎症细胞浸润程度明显下降、活化的星形胶质细胞即GFAP＋细胞数量减少,脑组织匀浆中IFN－γ、IL－17A含量降低,且高剂量组变化更明显。结论 VIP通过降低脑组织中IFN－γ、IL－17A含量,减轻脑组织炎症细胞的浸润程度,抑制星形胶质细胞活化,发挥对EAE的防治作用。