恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1C末端19ku片段(MSP1-19)的表达及免疫效应检测

目的 探讨恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1C末端19ku片段（MSP1-19）重组蛋白的免疫活性。方法 利用毕赤酵母高效表达系统分泌表达MSP1-19，表达产物纯化后免疫新西兰兔，3次免疫后ELISA检测其血清中IgG滴度的变化，观测重组MSP“。免疫效应。结果 MSP1-19在毕赤酵母高效表达；重组MSP1-19免疫后，兔血清中IgG滴度的变化与对照组有显著差异。结论 MSP1-19重组蛋白具有较好的免疫原性。     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1 DNA与改良痘苗病毒组合疫苗诱导小鼠抗体应答

目的?摇探索DNA与改良痘苗病毒(MVA)组合免疫对增强恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1（MSP1）抗体应答的作用。 方法 以人工合成MSP1全基因为基础分别构建DNA免疫质粒VR1020/190和重组MVA，单用VR1020/190或与表达质粒GM-CSF共同对小鼠进行初始免疫后，用重组病毒追加强化，采用DNA/MVA组合方案免疫BALB/c小鼠，ELISA测定血清IgG及其亚类水平，经腹腔接种转基因伯氏疟原虫Pb-PfM19进行攻击。 结果 DNA免疫能有效诱导小鼠产生抗MSP1-190抗体，其终点稀释度为1∶2 500，GM-CSF质粒共免疫组抗体的终点稀释度为1∶11 150，抗体亚类的测定表明GM-CSF质粒显著促进了IgG1类抗体应答， MVA追加可使单独免疫组和共免疫组抗体分别增加53和10倍；两实验组产生了水平相近的抗19 000抗体（1∶32 000），其含量占血清中MSP1总IgG的1/4-1/3。经转基因伯氏疟原虫Pb-PfM19攻击后小鼠的存活时间并没有明显延长（P＞0.05）。 结论 采用合成MSP1全基因进行DNA/MVA组合免疫可诱导小鼠产生显著的抗体应答，抗体的详细特性和保护作用正在进一步研究中。     

大肠埃希菌表达的恶性疟原虫裂殖子表面蛋白MSP1-42的免疫原性

目的纯化大肠埃希菌Rosettagami（DE3）表达的可溶性裂殖子表面蛋白1C末端蛋白（MSP1-42,3D7株）,检测其体外抑制恶性疟原虫生长的效果。方法利用大肠埃希菌Rosettagami（DE3）为宿主菌诱导表达MSP1-42,用带组氨酸标签的镍柱纯化可溶性的MSP1-42。6只新西兰白兔随机分为免疫组和对照组,每组3只。用MSP142与弗氏佐剂乳化后,皮下注射,抗原免疫剂量每次为200“g／只,共免疫4次,每次间隔2周。佐剂对照组以PBS代替抗原同法免疫。免疫前及末次免疫2周后取血,用酶联免疫吸附试验和间接荧光抗体试验检测血清中特异性抗体及其与天然抗原的反应,用含10％和20％免疫血清的培养基体外培养恶性疟原虫（海南分离株,Fcc1／HN）,检测免疫血清体外抑制恶性疟原虫生长的效果。结果经镍柱纯化后获得纯度为95％以上的MSP1-42蛋白;免疫组个体在第4次免疫后血清特异性抗体的滴度依次为1：640000、1：640000、1：160000,间接荧光抗体试验检测表明MSP1-42免疫兔血清与恶性疟原虫表面蛋白有阳性反应;免疫血清能抑制恶性疟原虫在体外生长,在10％浓度时,3只免疫兔血清的抑制率依次为（51．94-24．2）％、（29．4±8．6）％和（86．7±7．4）％,在20％浓度时,抑制率分别为（93．3±7．5）％、（65．3±10．6）％和（96．4±1．0）％。结论大肠埃希菌Rosettagami（DE3）表达的MSP142蛋白免疫血清能识别恶性疟原虫天然抗原,体外培养能抑制恶性疟原虫的生长。     

重组约氏疟原虫裂殖子表面蛋白4/5对小鼠致死性攻击的免疫保护

尽管人类在疫苗研制方面已经取得长足的进展,但还未发现有效的人类疟疾疫苗。目前认为寄生虫的暴露部位如裂殖子表面、棒状体、被感染红细胞表面的蛋白质是最有效的疫苗成份。已知约氏疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSP1)能激发小鼠产生抗体保护免疫,抗体主要针对C末端的两个表皮生长因     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白-1 19 kDa羧基末端片段以折叠蛋白在大肠杆菌的表达

纯化的裂殖子表面蛋白-1(MSP1)在动物模型中已经显示出对疟原虫有部分或全部的保护作用。已知某些抗MSP1的抗体在体外能抑制裂殖子侵入红细胞,鼠约氏疟原虫的MSP1羧基末端片段能在宿主诱导产生保护性免疫应答。用蛋白水解酶裂解后的恶性疟原虫MSP1,仅含羧基末端的19kDa片段(MSP1_(19))残留在裂殖子表面,并被带进新     

以恶性疟原虫MSP1和AMA1疫苗组合免疫小鼠诱导保护性免疫

目的以MSP1和AMA1的DNA疫苗、重组痘苗病毒疫苗和重组蛋白疫苗组合免疫小鼠,诱导针对疟疾红内期抗原MSP1和AMA1的保护性抗体。方法将编码恶性疟原虫MSP1全片段和AMA1胞外域的DNA免疫质粒(VR1020/190.3和VR1020/E)、痘苗病毒载体(rMVA/190.3和rMVA/E)及重组蛋白(d-GX190H和E)的同种类型疫苗混合,作为核酸疫苗(D)、病毒疫苗(V)及蛋白疫苗(P)按照“初始-强化”策略免疫小鼠。间接ELISA测血清中抗MSP1和AMA1抗体;用免疫血清进行体外原虫入侵红细胞抑制实验;由转基因伯氏疟原虫Pb-PfM19和P.bANKA株分别对免疫鼠进行体内攻击。结果各组免疫血清中均产生了较强的抗体应答,抗MSP1抗体与抗AMA1抗体滴度的变化趋势一致。实验组免疫小鼠血清在体外对两株原虫入侵红细胞均有较大程度的抑制。体内攻击实验中实验组小鼠平均存活时间较对照组略长。结论采用以MSP1和AMA1为基础的DNA、重组痘苗病毒和重组蛋白疫苗的组合免疫小鼠能诱导出有效的保护性抗体。以上结果为疟疾红内期疫苗合理免疫方案提供了重要的实验依据。     

伯氏疟原虫红内期融合抗原的构建、表达及其免疫原性研究

目的 合成伯氏疟原虫红内期融合抗原基因PbCP-2.9，在毕赤酵母真核系统中表达其产物，并进行免疫原性分析。 方法 选取与恶性疟原虫红内期融合抗原基因PfCP-2.9具有同源性的伯氏疟原虫AMA1（Ⅲ）和MSP1-19序列，融合形成PbCP-2.9基因。基因序列经密码子优化，在毕赤酵母中分泌表达。60只BABL/c小鼠均分为6组，其中蛋白免疫组3组，分别用PbCP-2.9蛋白与福氏佐剂、ISA206和IMS1312佐剂乳化后，皮下注射免疫小鼠，抗原免疫剂量20 μg/只·次，注射体积200 μl，共免疫3次，每次间隔2周。佐剂对照组3组，以 PBS代替免疫抗原同法免疫。免疫前及每次免疫后1周鼠尾取血，分离血清。用ELISA和IFAT方法检测血清中特异性抗体的滴度及其与天然抗原的反应结果。 结果 PbCP-2.9基因在毕赤酵母中分泌表达出Mr约26 400的 PbCP-2.9蛋白，其与抗伯氏疟原虫红内期原虫的血清能进行特异性反应；ELISA检测PbCP-2.9蛋白免疫组结果表明，福氏佐剂组第2次免疫后特异性抗体滴度为(52.62±11.26), 第3次免疫后为( 94.50±52.84); ISA206 组第2次免疫后为(7.59±5.61), 第3次免疫后为( 25.60±16.92) ; IMS1312组第2次免疫后为(9.41±8.86), 第3次免疫后为( 28.92±12.98)。福氏佐剂组第2次免疫后特异性抗体滴度分别为ISA206 组的6.9和IMS1312组的5.6倍（F＝81.06，P＜0.01），第3次免疫后分别为ISA206 组的3.7和IMS1312组的3.3倍（F＝13.29，P＜0.01）。IFAT检测结果显示，经PbCP-2.9免疫的鼠血清与Pb ANKA株虫体表面抗原有阳性反应。 结论 PbCP-2.9基因在毕赤酵母中高效表达，重组抗原免疫原性强，其免疫血清能识别伯氏疟原虫天然抗原。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶的表达及免疫活性鉴定

目的　在大肠杆菌中表达恶性疟原虫乳酸脱氢酶 (LDHp)与谷胱甘肽S 转移酶 (GST)融合蛋白 ,测定重组蛋白的免疫活性。方法　采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫 (海南株 )乳酸脱氢酶基因 ,经双酶切后克隆入 pGEX 4T 1表达载体中 ,重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清 ,并用琼脂双向扩散法检测效价 ,ELISA、Western bloting检测重组抗原的免疫活性。结果　得到了重组表达的蛋白抗原 ,表达产物能与兔抗恶性疟原虫血清发生反应 ,并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答 ,免疫琼脂扩散法抗体滴度为 1∶16。结论　LDHp在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性。     

约氏疟原虫裂殖子表面蛋白1 DNA疫苗免疫小鼠对子孢子攻击感染产生的保护性反应

裂殖子表面蛋白1(MSP-1)已成为红细胞期疟原虫疫苗研究的热点。作者报道了用约氏疟原虫MSP-1(PyMSP-1)编码的DNA疫苗免疫小鼠,可获得抗子孢子攻击感染的免疫反应,效果与同类编码抗原加佐剂相似,免疫后的小鼠显示高水平的保护性抗体。 PyMSP-1的构建:VR1012载体插入一个新的多接头以连接小基因组件和人体组织纤溶酶原激活物(tPA)的特异信号序列;另一载体VR 1012 tPA p2 p30,含破伤风毒素p2和p30辅助性T细胞表位,从约氏疟原虫     

含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅲ.免疫鼠肌组织表达产物免疫酶法定位及血清IgG抗体测定

目的用所构建的弓形虫pcDNA3-ROP1真核表达重组质粒,经肌肉注射免疫小鼠,观察它在肌组织中的表达及不同免疫途径所诱导的体液免疫应答.方法碱裂解法大量制备pcDNA3-ROP1质粒,免疫BALB/c小鼠,每只鼠注射100ug, 两周后同量加强免疫一次,以pcDNA3空质粒及生理盐水组为对照.于免疫后第50天用间接免疫酶法检测注射局部肌组织重组蛋白的表达;ELISA法测定IgG抗体滴度.结果免疫鼠肌组织石蜡切片呈特异性阳性反应;血清IgG抗体90天后测定为阳性;皮下及肌肉不同免疫途径血清均显示阳性结果,无显著性差异.结论 pcDNA3-ROP1质粒DNA免疫小鼠后,肌组织内有重组蛋白表达,并能诱导机体产生IgG抗体.