黄芩素对IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应的影响

[目的]探讨黄芩素对白介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞炎症反应的影响.[方法]将软骨细胞分为正常组(加入不含任何刺激物的培养基),IL-1β组(10 ng/mL的IL-1β),黄芩素低、中、高剂量组(12.5,25,50 μmol/L 黄芩素+10 ng/mL的IL-1β).MTT法检测细胞活力,硝酸还原酶法测一氧化氮(NO)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-γ(IFN-γ)及IL-6含量,western blot检测核因子-κB (NF-κB p65)及p38 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平.[结果]低、中、高剂量组黄芩素能显著提高软骨细胞活力(P<0.05).与正常组比较,IL-1β组中细胞活力降低(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量提高(P<0.01),p-NF-κB p65及p-p38 MAPK表达量上调(P<0.01);与IL-1β组比较,黄芩素低、中、高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65/NF-κB p65及p-p38 MAPK/p38 MAPK值下调(P<0.01);与低剂量组比较,中、高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65/NF-κB p65及p-p38 MAPK/p38 MAPK值下调(P<0.01);与中剂量组比较,高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65及p-p38 MAPK表达量下调(P<0.01).[结论]黄芩素能通过阻断NF-κB及p38 MAPK信号通路进而抑制IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应,为临床OA的治疗提供理论依据.     

比较不同剂量地塞米松对小鼠脓毒症致急性肾损伤的保护作用

目的 比较不同剂量地塞米松(DEX)对脓毒症导致的急性肾损伤(AKI)的影响.方法 健康雄性昆明小鼠130只,按随机数字表法均分为假手术组、脓毒症模型组和DEX生理剂量组(0.12 mg/kg)、应激剂量组(1.2 mg/kg)、大剂量组(12 mg/kg).采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症模型,分别在术后24 h、48 h观察肾组织病理学变化,免疫组化法检测肾组织糖皮质激素受体-α(GR-α)蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测肾组织GR-α、核转录因子-κB(NF-κB)的mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量.结果 与假手术组比较,脓毒症模型组小鼠肾小管病理损害严重;肾组织GR-α蛋白和mRNA表达明显降低,NF-κB mRNA表达及血浆TNF-α、IL-1β水平均明显升高.与脓毒症模型组比较,各剂量DEX组肾小管病理损害不同程度减轻;肾组织GR-α蛋白和mRNA表达均明显升高,NF-κB mRNA表达和血浆TNF-α、IL-1β水平均明显降低,其中以DEX生理剂量组作用尤佳[AKI评分(分)24 h:1.480±0.334比3.040±0.517,48 h:1.840±0.167比3.400±0.400;GR-α蛋白(A值)24 h:0.102±0.009比0.088±0.005,48 h:0.103±0.008比0.085±0.006;GR-o mRNA 24 h:0.0400(0.0300,0.0400)比0.0100 (0.0093,0.0100),48 h:0.0350 (0.0300,0.0475)比0.0100 (0.0010,0.0138); NF-κBmRNA 24 h:0.009±0.001比0.012±0.000,48 h:0.011±0.000比0.013±0.001;TNF-α (ng/L)24 h:105.84±3.84比135.52±4.49,48 h:111.35±3.67比141.22±4.46;IL-1β(ng/L)24 h:45.71±2.93比64.12±3.62,48 h:57.04±3.04比74.87±3.67; P＜0.05或P＜0.01].结论 生理剂量DEX可以通过上调肾组织中GR-α表达,减轻脓毒症引起的肾组织损伤,其作用明显优于大剂量DEX.     

烫伤脓毒症大鼠肾脏核转录因子-κB活化与肾损伤关系的研究

目的研究烫伤脓毒症大鼠肾脏核转录因子-κB (NF-κB)活化与肾损伤的关系.方法采用30%总体表面积Ⅲ度烫伤加内毒素攻击制备烫伤脓毒症大鼠模型.54只Wistar大鼠随机分为正常对照组、烫伤脓毒症1、2、6、12和24 h组,烫伤脓毒症1、2和6 h+NF-κB抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC)组.采用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测肾组织NF-κB活性;采用酶联免疫吸附法检测血浆及肾组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的变化;采用自动生化分析仪检测血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)含量.结果肾组织NF-κB活性于烫伤脓毒症后1 h明显增强并达到高峰(P<0.01),PDTC可显著降低烫伤脓毒症后1 h NF-κB的活性.烫伤脓毒症后1 h和2 h血浆及肾组织中TNF-α水平均明显增高(P均<0.01),PDTC可显著降低伤后血浆TNF-α水平(P均<0.01),对肾组织中TNF-α水平影响不明显.烫伤脓毒症后BUN及SCr含量均明显增高(P均<0.01),PDTC对BUN和SCr含量均无显著影响.结论 NF-κB抑制剂可降低烫伤脓毒症大鼠肾组织NFκB活性,但对肾脏功能无明显保护作用.     

胰岛素对烧伤血清致心肌细胞凋亡的保护作用

目的 探讨胰岛素对烧伤血清致心肌细胞凋亡的保护作用及机制.方法 通过烧伤血清作用的心肌细胞模型,用胰岛素及其信号通路抑制剂SB203580、LY294002进行干预.蛋白质免疫印迹法检测心肌细胞内活化型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)、Bax和磷酸化核转录因子-κB抑制因子α(p-IκBα)的表达;定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达;Hoechst 33258核染色法检测心肌细胞凋亡.同时通过阻断实验,初步研究胰岛素保护心肌细胞作用的信号通路.结果 胰岛素能够明显降低烧伤血清作用的心肌细胞cleaved-caspase-3(2.22±0.30比4.84±0.74,P＜0.01)、Bax(1.33±0.35比3.74±0.65,P＜0.01)和p-IκBα( 1.43±0.62比3.62±0.74,P＜0.01)的表达;显著抑制TNF-α表达(0.72±0.27比2.02±0.63,P＜0.01);降低心肌细胞的凋亡率[(9.4±3.4)％比(19.1±5.6)％,P＜0.01].阻断实验结果显示,胰岛素活化磷酯酰肌醇-3-激酶/蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K/Akt)通路的抑制剂LY294002能够抵消胰岛素的保护作用;而p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)通路活化抑制剂SB203580则能够抑制烧伤血清引起的心肌细胞损害,与胰岛素作用相当.结论 在烧伤血清作用的心肌细胞模型,胰岛素可能通过对PI3K/Akt和p38MAPK通路的调控发挥其对心肌细胞的抗炎、抗凋亡作用.     

NF-κB decoy对人脐静脉内皮细胞组织因子表达及凝血因子Ⅶ激活抑制作用研究

目的用decoy策略调控核因子κB( NF-κB)调节组织因子(TF)表达及相应的因子Ⅶ(FⅦ)活化,探讨冠心病新的防治方法.方法用流式细胞术检测NF-κB decoy对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的转染效率 ,用凝胶迁移率改变竞争实验证实NF-κB decoy的作用机制,用RT-PCR检测组织因子(TF)mRNA,流式细胞术检测HUVEC表面TF抗原,重组组织因子一期凝血法检测与HUVEC共孵育的血浆中活化因子Ⅶ(FⅦa)活性.结果 decoy能成功地转染入HUVEC内,能与TF启动子的κB位点顺式作用元件竞争性结合转录因子NF-κB,明显抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)刺激的HUVEC TF mRNA TF抗原表达及相应的FⅦa活性.结论 NF-κB decoy能通过抑制TF表达而抑制FⅦ的激活,为冠心病的防治提供新的思路.     

变应性鼻炎患者中MAPK和NF-κB信号通路的表达变化

目的探讨变应性鼻炎(AR)患者中促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)和核转录因子(NF-κB)信号通路的表达及变化。方法采用酶联免疫吸附试验检测AR患者(试验组)和健康体检者(对照组)血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-Iβ、IL-4、p38MAPK和NF-κB的表达。结果与对照组相比,试验组中TNF-α、IL-Iβ、IL-4、p38MAPK和NF-κB的表达明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 AR患者血清中TNF-α、IL-Iβ、IL-4、p38MAPK和NF-κB呈过度表达状态;检测患者血清中的相关细胞因子,NF-κB有利于了解患者过敏状态并协助AR的诊断。     

IRAK4基因对高糖诱导的心肌细胞炎症因子分泌及凋亡的影响

目的探讨沉默白细胞介素1受体相关激酶4(IRAK4)基因对高糖诱导的心肌细胞炎症因子分泌及凋亡的影响。方法分别将siRNA阴性对照和siRNA IRAK4转染H9C2心肌细胞,并进行高糖干预。实验分为正常对照组(采用含5. 5 mmol/L D-葡糖糖的正常培养基培养细胞)、高糖对照组(正常培养基培养24 h后更换为含33 mmol/L D-葡糖糖的高糖培养基培养72 h)、高糖+siRNA-NC组(转染siRNA阴性对照24 h后更换为高糖培养基)、高糖+siRNA-IRAK4组(转染siRNA IRAK4 24 h后更换为高糖培养基)。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定细胞中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中IRAK4蛋白、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、核转录因子κB(NF-κB)蛋白水平。结果与正常对照组相比,高糖条件显著上调心肌细胞中IRAK4蛋白(P 0. 05),抑制细胞的活力、促进其凋亡(P 0. 05),提高炎症因子IL-6、TNF-α水平(P 0. 05),上调p-p38MAPK、NF-κB蛋白水平(P 0. 05);沉默高糖诱导的心肌细胞中IRAK4的表达量显著提高心肌细胞活力(P 0. 05)、降低其凋亡率(P 0. 05),抑制炎症因子IL-6、TNF-α水平(P 0. 05),下调p-p38MAPK、NF-κB蛋白水平(P 0. 05)。结论沉默IRAK4显著抑制高糖诱导的心肌细胞的凋亡,提高细胞的活力,可能通过调节p38MAPK、NF-κB活性及其下游炎症介质的表达调控。     

对白细胞介素-1β激活核转录因子-κB介导A549细胞分泌细胞间黏附分子-1作用的研究

目的 研究白细胞介素-1β(IL-1β)对A549细胞表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的诱导作用及相关细胞内信号通路的激活和转导机制.方法 以1 μg/L终浓度的IL-1β刺激经SC-514[核转录因子-κB(NF-κB)的IKK-2复合物抑制物]预处理的A549细胞,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测IL-1β刺激5、10、30、60 min时细胞内磷酸化NF-κB抑制蛋白(pIκBα)和IκBα蛋白表达水平;激光扫描共焦显微镜(LSCM)显像检测NF-κB p65的核转移过程;按试剂盒说明测定NF-κB DNA结合活性;p65抗体染色质免疫沉淀结合聚合酶链反应(ChIP-PCR)技术检测乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子的结合;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测4 h后的ICAM-1 mRNA表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测24 h后细胞表面的ICAM-1蛋白表达.结果 IL-1β刺激后细胞内pIκBα蛋白表达水平明显升高,IκBα蛋白表达水平明显下降;LSCM检测显示激活的p65蛋白从胞质向胞核转移,p65与DNA结合活性明显升高(P<0.01).ChIP-PCR扩增发现,IL-1β促使乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子区域的DNA片断结合.IL-1β刺激4 h后ICAM-1 mRNA表达明显升高,刺激24 h后A549细胞表面ICAM-1蛋白表达亦明显升高(P均<0.01).SC-514阻断了pIκBα蛋白的升高和IκBα蛋白的下降;减少了p65蛋白的核转移和DNA结合活性;降低了ICAM-1的mRNA及蛋白表达水平(P均<0.01).结论 IL-1β通过激活NF-κB 介导了A549细胞表达ICAM-1.     

Ang 1-7对雨蛙素刺激的胰腺腺泡AR42J细胞p38 MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的探讨血管紧张素1-7(Ang 1-7)干预雨蛙素(caerulein,CAE)刺激的胰腺腺泡细胞AR42J后,p38MAPK/NF-κB信号蛋白的表达变化。方法将AR42J细胞随机分为3组:对照组、雨蛙素组(10 nmol/L,CAE组)、Ang1-7组(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L Ang 1-7+10 nmol/L雨蛙素)。对照组为正常生长的AR42J细胞,CAE组用10 nmol/L的雨蛙素刺激AR42J于2 h、6 h、12 h、24 h及48 h收集细胞,Ang 1-7组为不同浓度Ang 1-7作用30 min后再用雨蛙素刺激24 h收集细胞,Western blot技术检测各组细胞中ACE2、Mas受体、p38 MAPK、p-p38 MAPK及NF-κB的蛋白表达。结果 AR42J细胞中可见ACE2-Ang 1-7-Mas受体轴表达;与对照组相比,CAE组ACE2和Mas受体的表达呈先增多后减少的趋势,均于24 h达高峰(P0.05);p38 MAPK、p-p38 MAPK及NF-κB的表达亦是24 h达峰值(P0.05);Ang 1-7(10-7mol/L、10-6mol/L及10-5mol/L)上调Mas受体的表达,下调p38 MAPK、p-p38MAPK、NF-κB蛋白的表达,Ang 1-7的浓度为10-5mol/L时,后三者的表达水平与CAE组比较,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论雨蛙素刺激的AR42J细胞中,Ang 1-7可通过Mas受体抑制p38MAPK/NF-κB信号通路的活性。     

天然辅助细胞通过p38信号通路分泌IL-13

目的 RSV感染后,天然辅助细胞(Natural helper cells,NHC)通过IL-33/ST2途径产生IL-13,对于IL-33激活的下游信号通路尚不明确。IL-33通过其受体ST2激活NF-κB和MAPK信号通路,进而诱导极化的Th2细胞分泌Th2型细胞因子。本研究旨在通过一系列体内外实验探究NF-κB和MAPK信号通路在天然辅助细胞IL-13分泌机制中的作用。方法在IL-33刺激前用特异性NF-κB和p38抑制剂对NHC进行预处理,实时RT-PCR和流式细胞仪技术分别检测mRNA水平及NF-κB和MAPK磷酸化情况。结果 NHC中p38mRNA和磷酸化水平都显著升高;并且,p38特异性抑制剂显著降低NHC中IL-13分泌量。另一方面,NF-kB mRNA及磷酸化水平升高,但NF-κB的特异性抑制剂并没有显著抑制NHC分泌IL-13。结论 RSV诱导的NHC中IL-13的产生依赖于p38信号通路。     

p38丝裂素活化蛋白激酶磷酸化对多器官功能障碍综合征肿瘤坏死因子-α基因表达调控的影响

目的 探讨猪多器官功能障碍综合征(MODS)中p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达调控的影响.方法 将30头家猪随机均分为MODS组和对照组,采用失血性休克与内毒素血症的"二次打击法"建立猪MODS模型.采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测外周血单核细胞p38MAPK的磷酸化水平,用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定TNF-α mRNA表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆TNF-α浓度.结果 MODS时外周血单核细胞p38MAPK磷酸化明显增强,使TNF-α mRNA表达明显增强、血浆TNF-α浓度显著升高,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 在MODS发病机制中,外周血单核细胞p38MAPK磷酸化使TNF-α基因的转录活性明显增强,从而使血浆TNF-α升高,这是MODS时TNF-α生成增加的机制.     

p38丝裂原活化蛋白激酶对大鼠肾脏分泌单核细胞趋化因子-1的影响

目的 动态观察单核细胞趋化因子-1(MCP-1)在单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾小管的表达,探讨它与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核转录因子-кB(NF-кB)及肾损害之间的关系. 方法 雌性SD大鼠共36只,体质量150～170 g.随机分为2组:假手术组作为对照组;手术组根据梗阻时间分3组,每组6只.皮下注射水合氯醛(4 mg/kg)麻醉,开腹后结扎右侧输尿管,缝合腹腔,即制备UUO模型.假手术组开腹后不结扎输尿管,缝合腹腔.采用免疫组织化学检测NF-кB、MCP-1,Western印迹分析法检测p38MAPK的磷酸化水平和lVICP-1蛋白水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MCP-1 mRNA的表达.光镜检查肾组织的形态改变.生化方法测定血尿素氮、血肌酐. 结果 与对照组比,随着梗阻时间的延长,MCP-1蛋白表达明显上调,[对照组:0.401±0.039,UUO组8h:0.894±0.137;24 h:1.416±0.135;72 h:1.894±0.143,与对照组相比,P<0.05],MCP-1 mRNA表达明显上调,[对照组:50.08±3.210,UUO组8 h:108.25±4.325;24 h:179.34±3.237;72 h:230.12±3.026,与对照组相比,P<0.05],同时NF-кB、p38MAPK蛋白活性增高,[p38MAPK蛋白对照组:110.65±9.734,UUO组8 h:200.15±8.326;24 h:272.74±7.244;72 h:549.11±9.544,与对照组相比,P<0.05],肾小管MCP-1的表达与p38MAPK、NF-кB呈显著正相关(r=0.74、r=0.81,P<0.01). 结论 UUO大鼠.肾小管MCP-1表达增加参与了UUO大鼠.肾小管间质损害的发病机制;p38MAPK可能介导了NF-кB的表达,进而调节MCP-1的表达增多.     

去甲斑蝥素通过NF-κB/IκBα途径增强阿霉素的抗骨髓瘤效应

目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)联合阿霉素(ADR)对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 以U266细胞为研究对象,采用NCTD(10 μmol/L)和ADR(0.25 μmol/L)单独或联合处理细胞,MTT法观察细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测核因子-κB P65( NF-κB P65)、磷酸化NF-κB P65( p-NF-κB P65)、NF-κB抑制因子IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、survivin、Bcl-2和Bax蛋白水平,免疫组化法测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平.结果 ①NCTD能增强ADR的细胞毒和诱导凋亡作用,二者具有协同作用;②与ADR单药组比较,联合用药组胞核NF-κB P65和胞质p-IκBα的表达量分别由2.08±0.29和0.39±0.07降至0.48±0.08和0.02±0.01,胞质NF-κB P65和IκBα表达无变化;③联合用药组与ADR单药比较,survivin和Bcl-2的表达水平分别由0.31±0.05和0.23±0.05降至0.03±0.02和0.05±0.02,而Bax的表达由0.46±0.06升至0.62±0.08;④ADR组和联合用药组VEGF的阳性率分别为(44.6±4.4)％和(27.0±2.1)％,NCTD增强ADR对VEGF表达的抑制作用.结论 NCTD通过抑制NF-κB/IκBα途径,调节下游信号分子survivin、Bcl-2、Bax和VEGF的表达,增强ADR的抗骨髓瘤效应.     

重组腺病毒介导反义p38α基因抑制烧伤复合缺氧条件下乳鼠心肌细胞凋亡的研究

目的 探讨烧伤血清复合缺氧条件下乳鼠心肌细胞p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)活化与细胞凋亡之间的关系.方法 采用原代培养的乳鼠心肌细胞,按照处理因素不同分为3组:正常对照组细胞自然生长;烧伤缺氧组细胞给予烧伤血清+缺氧刺激(含10%的40%总体表面积Ⅲ度烫伤大鼠伤后6 h血清的DMEM/F12培养液+1%O2、5%CO2和94%N2);反义阻断组在细胞转染反义p38α重组腺病毒(AD-ASp38α)后给予烧伤血清+缺氧刺激.细胞培养6 h后,采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测p38磷酸化水平;采用DNA片断和流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况.结果 与正常对照组比较,烧伤缺氧组p38磷酸化水平(灰度值)明显提高(8.68±0.14比3.21±0.05,P＜0.01),细胞凋亡率明显增高[(50.367±0.451)%比(2.063±0.111)%,P＜0.01];心肌细胞转染AD-ASp38α后,p38磷酸化水平(灰度值)明显下降(5.46±0.16比8.68±0.14,P＜0.01),细胞凋亡率明显降低[(13.200±0.121)%比(50.367±0.451)%,P＜0.01].结论 烧伤血清复合缺氧条件下通过促使p38MAPK活化导致心肌细胞凋亡增多;阻断p38MAPK信号转导通路可减轻严重烧伤早期心肌细胞的损伤.     

氟伐他汀对人THP-1细胞TLR4及下游信号转导通路的影响

目的探讨氟伐他汀对脂多糖(LPS)刺激的人急性单核细胞白血病细胞系(THP-1)Toll样受体4(TLR4)及下游信号转导通路的干预作用。方法采用不同剂量的氟伐他汀、LPS处理THP-1细胞,MTT法检测细胞增殖情况,实时荧光定量RTPCR(qRT-qPCR)检测细胞中TLR4和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达,western blot检测TLR4及下游磷酸化胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化核因子κB(NF-κB p65)蛋白的表达水平。ELISA法测定细胞培养上清中TNF-α蛋白的含量。结果氟伐他汀(10 mg/L)降低LPS刺激的THP-1细胞TLR4(蛋白质和mRNA)的表达(t分别为7.55、7.80,P均0.05),1、5、10mg/L氟伐他汀能显著抑制LPS刺激的下游分子ERK的磷酸化(q分别为11.78、18.15、18.88,P0.05);亦能抑制LPS刺激的NF-κB p65的磷酸化(q分别为5.13、6.87、11.68,P0.05)。同时,氟伐他汀(10 mg/L)能显著干预LPS刺激的细胞TNF-α(蛋白质和mRNA)的表达(q分别为4.23、3.01,P0.05)。结论氟伐他汀可通过干预LPS刺激的TLR4表达及下游分子ERK、NF-κB p65的磷酸化,抑制THP-1细胞TNF-α的表达,可能为氟伐他汀的抗炎机制之一。     

成年房间隔缺损患者核因子κB活化与细胞因子分泌的相关性研究

目的 探讨成年房间隔缺损(atrial sepml defect,ASD)患者外周血单个核细胞(PBMCs)核因子κB (NF-kB)表达与肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)分泌的相关性.方法 30例ASD患者和30例健康对照组PBMCs NF-κB的表达由免疫组化染色检测,血清细胞因子的含量由酶联免疫吸附试验(ELISA)测定.对两组的指标进行t检验及相关分析.结果 ASD患者PBMCs NF-κB胞核染色阳性率和血清TNF-α、IL-6含量显著高于健康对照组,分别为(43.67±19.16)%vs(22.97±12.77)%,(0.79±0.11)μg/L vs(0.23±o.09)μg/L,(0.46±0.07)μg/L vs(0.03±0.02)/.μg/L,均P<0.01,且NF-kB胞桉染色阳性率和血清TNF-α、IL-6含量呈显著正相关(rs=0.783,0.589,均P<0.01).结论 成年ASD患者NF-κB表达增高,细胞因子TNF-α及IL-6分泌增多.在成年ASD,炎症基因转录激活,可能通过NF-κB表达的上调致使炎性细胞因子(TNF-α、IL-6)的增加.     

动态通气参数对急性呼吸窘迫综合征犬肺损伤的作用机制

目的 探讨机械通气动态通气参数对ARDS犬肺内肺炎症介质的影响及其作用途径.方法 取36条健康杂种犬,采用气管内盐酸吸入法建立ARDS模型,随机(随机数字法)分为对照组,ARDS模型组及实验犬组,实验犬组随机分成A,B,c,D四组,每组6条.A组:小潮气量(6 mL/kg),低吸气流速[6mL/kg·s)],高通气频率(30次/min);B组:大潮气量(20mL/kg),高吸气流速[20mL/(kg·s)],高通气频率(30次/min);C组:大潮气量(20 mL/kg),高吸气流速[17 mL/(kg·s)],低通气频率(15次/min);D组:大潮气量(20 mL/kg),低吸气流速[10 mL/(kg·s)],低通气频率(15次/min).机械通气4 h后处死动物,留取肺组织标本行免疫组化、Western blotting检测TNF-α,IL-8,p38 MAPK蛋白的变化,RT-PCR测定TNF-α,IL-8 mRNA的表达,流式细胞仪检测NF-κB活性.结果 B组IL-8蛋白表达明显较A,D组高,c组IL-8蛋白表达较B组有下降趋势,但B,C组之间差异无统计学意义;B组TNF-α的灰度比值明显较其他组高(P<0.01),但与C组比较差异无统计学意义(P>0.05);B组p38 MAPK表达明显较A,D组高(P<0.01);A,D组之间的p38 NAPK表达差异无统计学意义(P>0.05).B组NF-κB p65(33.56±2.85)%表达较A(10.35±0.6)%,D(7.11±0.47)%两组差异有统计学意义,B组与C组(30.87±1.16)%之间差异无统计学意义.结论 在相同的大潮气量基础上,高吸气流速和高通气频率可以激活肺组织p38 MAPK及NF-κB通道,炎症介质的释放增加,导致呼吸机相关性肺损伤,小潮气量机械通气可减轻炎症反应.     

促性腺素释放素激动剂通过ERK MAPK途径调节In-R1-G9细胞胰高血糖素的分泌

目的研究促性腺素释放素激动剂(GnRHa)醋酸阿拉瑞林对In-R1-G9细胞分泌胰高血糖素的影响是否与促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路有关。方法无血清培养细胞24 h后,选用100 nmol/L GnRHa处理培养的In-R1-G9细胞0、5、10、20、30、60、90 min,用western blotting检测磷酸化胞外信号调节激酶(P-ERK)、总ERK(T-ERK)、磷酸化p38(P-p38)、β-ac-tin的表达。用ERK选择性抑制剂PD98059(50μmol/L)刺激细胞,用放射免疫法测定胰高血糖素的分泌水平。结果Gn-RHa刺激In-R1-G9细胞20 min后,p-ERK水平开始升高(P<0.05),在30 min时达到峰值,比对照组升高了169%(P<0.01),90 min恢复至正常水平;但P-p38与对照组比无显著性差异;PD98059组与本底对照(DMSO组)比较、GnRHa+PD98059组与GnRHa组比较均有统计学意义(P<0.05;P<0.01)。结论GnRHa可能通过ERK MAPK途径调控In-R1-G9细胞胰高血糖素的分泌,而不是通过p38 MAPK途径。     

甘草酸二铵对急性肺损伤大鼠肺组织糖皮质激素受体及核因子κB表达的影响

目的 观察甘草酸二铵(GL)对急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织核因子κB(NF-κB)、糖皮质激素受体(GR)表达的调控作用及对血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)表达的影响.方法 将24只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为生理盐水对照组、ALI模型组和GL干预组,每组8只.ALI模型组、GL干预组分别给予内毒素(LPS)5 mg/kg尾静脉注射;IPS注射前1 h,GL干预组给予GL 20 mg/kg静脉注射.观察4 h后各组大鼠肺组织病理,测定肺湿干比(W/D)、PaO_2,并采用逆转录-PCR反应检测肺组织NF-κB mRNA,GR mRNA的表达,western blot法测定肺组织Nf-κB及GR蛋白的表达,ELISA法测定血清TNF-α,IL-10质量浓度.采用SPSS 13.0软件进行统计学分析,各组间均数比较采用单因素方差分析,均数两两比较采用q检验.结果 (1)ALI模型组TNF-α为(153.68±20.42)ng/L,明显高于生理盐水组(43.96±7.57)ng/L(P<0.01)和GL干预组(87.23±7.52)ng/L(P<0.01).ALI模型组IL-10为(42.48±6.81)ug/L,明显高于生理盐水组(24.72±8.03)ng/L(P<0.01),但低于GL干预组水平(58.33±9.62)ug/L(P<0.05).(2)ALI模型组NF-κBmRNA和蛋白的表达水平[分别为(3.414±0.521),(254.7±16.4)]明显高于生理盐水组[分别为(0.432±0.085),(45.6±7.3)](P<0.01),而GRmRNA和蛋白的表达[分别为(0.152±0.025),(11.5±2.3)]则明显低于生理盐水组[分别为(0.434±0.013),(54.6±6.5)](P<0.01);GL干预组NF-κB mRNA和蛋白的表达水平[分别为(1.894±0.272),(133.5±11.7)]明显低于ALI模型组(P<0.01),GR mRNA和蛋白的表达[分别为(0.308±0.033),(28.2±5.6)]则明显高于ALI模型组(P<0.05,P<0.01).(3)ALI模型组肺组织出现充血、水肿、中性粒细胞浸润,GL干预组肺部炎症较ALI模型组减轻.结论 甘草酸二铵可能通过下调NF-κB的表达,同时提高GR的表达,进而调节炎症因子TNF-α及抗炎介质IL-10的表达,从而起到减轻ALI的作用.