血管紧张素Ⅱ对培养人脐静脉内皮细胞PAI-1 tPA蛋白表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)、组织型纤溶酶原激活剂(tPA)蛋白的释放及活性的影响。方法将不同浓度的AngⅡ(1×10-9~1×10-6mmol/L)与HUVECs共同孵育24h,以及将1×10-6mol/LAngⅡ与HUVECs作用不同时间(0、4、8、12、24h)后,用细胞酶联免疫法和发色底物法分别检测细胞培养液中PAI-1、tPA的含量及活性。结果1×10-6mol/LAngⅡ作用HUVECs24h后,可使细胞分泌的PAI-1含量与对照组相比明显增高[(280±16)ng/mlvs(83±11)ng/ml,P<0.01],PAI-1活性明显增高[(10.35±1.47)U/mlvs(5.65±0.44)U/ml,P<0.01],AngⅡ虽也可刺激tPA含量增加[(102±4)ng/mlvs(70±6)ng/ml,P<0.01],但PAI-1的增量是tPA增量的6~7倍[Δ(197±21)ng/mlvsΔ(31±6)ng/ml,P<0.01],AngⅡ对tPA活性无影响[(0.97±0.05)U/mlvs(0.95±0.08)U/ml,P>0.05];1×10-9~1×10-6mol/L不同浓度的AngⅡ分别作用HUVECs24h,PAI-1含量增加、活性增加与AngⅡ呈浓度依赖性相关;1×10-6mol/LAngⅡ与HUVECs分别作用4~24h,PAI-1含量及活性增加与AngⅡ作用于HUVECs的时间呈正相关。结论AngⅡ可促使HUVECs分泌PAI-1,并使其活性增加,AngⅡ虽亦可刺激tPA分泌,但作用弱于PAI-1,且对其活性无明显影响。     

蝎毒素Ⅳ对血管内皮细胞介导纤溶作用的影响

目的：研究蝎毒素Ⅳ纤溶作用的内皮细胞介导机制。方法：培养的人脐静脉血管内皮细胞分别与剂量为0，1，2，4，8mg／L的蝎毒素Ⅳ孵育后，测定蝎毒素Ⅳ对内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、组织型纤溶酶原激活荆抑制物(PAI-1)的影响。结果：蝎毒素Ⅳ在低剂量能降低t-PA和PAI-1活性，但t-PA／PAI-1比值较对照组相比明显升高。结论：蝎毒素Ⅳ能够通过影响内皮细胞功能，发挥纤溶作用，提示其为纤溶促进剂。     

蝎毒素IV对血管内皮细胞介导纤溶作用的影响

目的　研究蝎毒素IV纤溶作用的内皮细胞介导机制。方法　培养的人脐静脉血管内皮细胞分别与剂量为 0 ,1,2 ,4 ,8mg/L的蝎毒素IV孵育后 ,测定蝎毒素IV对内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)、组织型纤溶酶原激活剂抑制物(PAI 1)的影响。结果　蝎毒素IV在低剂量能降低t PA和PAI 1活性 ,但t PA/PAI 1比值较对照组相比明显升高。结论　蝎毒素IV能够通过影响内皮细胞功能 ,发挥纤溶作用 ,提示其为纤溶促进剂。     

蝎毒素IV对血管内皮细胞介导纤溶作用的影响

目的　研究蝎毒素IV纤溶作用的内皮细胞介导机制。方法　培养的人脐静脉血管内皮细胞分别与剂量为0 ,1,2 ,4 ,8mg/L的蝎毒素IV孵育后,测定蝎毒素IV对内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、组织型纤溶酶原激活剂抑制物(PAI 1)的影响。结果　蝎毒素IV在低剂量能降低t-PA和PAI-1活性,但t-PA/PAI-1比值较对照组相比明显升高。结论　蝎毒素IV能够通过影响内皮细胞功能,发挥纤溶作用,提示其为纤溶促进剂。     

宫腔粘连子宫内膜中tPA PAI-1变化的研究

目的 探讨组织型纤溶酶原激活剂(tPA)和纤溶酶原激活剂抑制因子-1(PAI-1)在宫腔粘连(IUA)发生发展中所起的作用.方法 前瞻性研究IUA患者35例(观察组)(其中轻-中度粘连22例、重度粘连13例),非IUA患者30例(对照组),采用免疫组化和图像分析技术,观察各组子宫内膜组织中tPA、PAI-1的表达情况.结果 观察组子宫内膜中tPA的表达低于对照组(P＜0.05),重度粘连组又低于轻-中度粘连组(P＜0.05),PAI-1的表达高于对照组(P＜0.05),轻-中度粘连组与重度粘连组间的表达无显著性差异(P＞0.05).结论 IUA患者子宫内膜中tPA的降低和PAI-1的升高表明纤溶系统失衡,可能和IUA的发生发展有关.     

组织型纤溶酶原激活物重组腺病毒载体的构建及其转染ECV304细胞后对血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的 评估外源性组织型纤溶酶原激活物(t-PA)对ECV304细胞中血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响.方法 应用细菌内同源重组技术快速构建Adt-PA腺病毒重组质粒,转染不同病毒滴度Adt-PA至ECV304细胞,转染比率(MOI)分别为1∶10、1∶50、1∶100,选取合适MOI值;病毒转染后检测ECV304细胞内t-PA蛋白的表达.然后将培养的ECV304细胞分为二组,在培养液中加入Adt-PA混合培养24 h和48 h分别作为实验组1和实验组2,加入空病毒Ad混合培养48 h作为对照组,比较各组细胞中VEGF mRNA的转录和蛋白表达水平.结果 成功构建了重组腺病毒Adt-PA.当MOI为1∶50时,细胞转染效率为(69.6±21.2)%,且对ECV304细胞增殖具有一定的促进作用;Adt-PA转染ECV304细胞后在72 h内随着时间的延长其蛋白表达量逐渐升高(P<0.01);细胞内VEGFmRNA的转录水平和蛋白表达量在实验组1和2中较对照组均有明显升高(P<0.01).结论 构建的t-PA腺病毒表达载体可有效感染ECV304细胞并可显著增加其VEGF的表达水平.     

高压培养对血管内皮细胞t-PA和PAI-1的影响及辛伐他汀干预的效果

目的:本实验拟观察高静水压培养对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)t-PA和PAI-1的影响以及辛伐他汀的干预效果,并探讨其可能的作用机制。方法:选用第4~6代HUVECs,接种于24孔培养板中。依培养压力分为3组:大气压组(0mm-Hg)、中压组(90mmHg)、高压组(180mmHg)。在同一压力组,根据不同药物干预又分为两个亚组。即对照组和辛伐他汀组。每组6份标本。采用ELISA法测定上清液t-PA和PAI-1的抗原浓度,并用细胞内总蛋白进行标化。同时测定细胞内Ca2 浓度。结果:与大气压组相比,中压和高压组t-PA浓度均显著降低,PAI-1浓度显著增高,t-PA/PAI-1比值显著降低,[Ca2 ]i也显著增高。辛伐他汀显著升高3个压力组的t-PA浓度,显著降低3个压力组的PAI-1浓度,3个压力组的t-PA/PAI-1比值显著升高。在常压组,辛伐他汀对[Ca2 ]i无影响。在中压和高压组,辛伐他汀干预后,[Ca2 ]i显著地降低。结论:高静水压可损害内皮细胞的纤溶功能,而辛伐他汀的干预可改善VEC的纤溶功能。     

肺血栓栓塞后组织型纤溶酶原激活物及其抑制物-1在肺动脉中的表达

目的通过研究兔实验性肺血栓栓塞（PTE）后组织型纤溶酶原激活物（t—PA）及其抑制物1（PAI-1）在肺动脉中表达的动态变化,了解急性肺栓塞后机体纤溶能力的变化。方法将48只日本健康大耳白兔,随机分为栓塞组和对照组。栓塞组利用自体血栓经股静脉输入建立PTE模型,对照组输入生理盐水。用免疫组织化学及Western blot方法检测对照组及栓塞后即刻、4、8、24h栓塞部位肺动脉组织中t—PA及PAI-1蛋白表达水平。结果tPA在栓塞后即刻和4h未见明显表达,8h和24h表达明显增强;半定量蛋白结果显示t—PA在栓塞后4h表达开始增高。8h进一步增强,24h达高峰。与各对照组比较,有显著性差异（P〈0．05）。PAI-1在栓塞后即刻及24h均见明显表达,而在栓塞后4h和8h表达明显减少;半定量蛋白结果显示PAI-1在栓塞后4h开始降低,8h降至低峰,与各对照组比较,有显著性差异（P（0．05）。PAI-1在栓塞后24h表达有所恢复。结论兔急性肺栓塞后．t-PA表达水平随时间而逐渐增高,PAI-1表达呈现-过性降低。表明了在肺动脉栓塞早期,机体的纤溶功能明显增强,这与肺血管的tPA和PAI-1表达平衡变化有关。     

卡托普利对大鼠t—PA和PAI—I活性的作用

目的：评价卡托普利对大鼠血浆t-PA和PAI－1活性水平的影响。方法：给大鼠应用三种剂量的卡托普利，观察其对大鼠血浆t-PA和PAI－1活性水平的作用。结果：卡托普利治疗后使大鼠血浆t-PA活性升高，PAI－1活性及PAI－1／t-PA活性比值显著降低，这种作用呈某种程度的剂量依赖性。结论：卡托普利能增强大鼠纤溶系统的活性。这种作用呈某种程度的剂量依赖性。     

蕲蛇酶对血管内皮细胞纤维蛋白溶解功能的影响

目的　研究蕲蛇酶对体外培养人脐静脉内皮细胞纤溶活性的影响 ,探讨其抗栓作用机制。方法　采用人脐带来源的脐静脉内皮细胞进行原代及传代培养 ,以光镜、电镜、第Ⅷ因子相关抗原免疫组化等方法鉴定内皮细胞 ,采用发色底物法 (S2 2 51 )测定内皮细胞培养液中组织型纤溶酶原激活剂(t PA)及组织型纤溶酶原激活剂抑制物 (PAI)的活性 ,ELISA法测定培养液中纤维蛋白降解产物的含量。结果　所培养的细胞具有特征性Weibel palade小体 ,第Ⅷ因子特异性抗原阳性。蕲蛇酶使细胞培养液中t PA活性升高 ,t PA/PAI比值升高 ,纤维蛋白降解产物明显增加。结论　蕲蛇酶具有促进血管内皮细胞释放t PA ,提高其纤溶活性的作用。     

TPA基因体外转染对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨组织型纤溶酶原激活因子(tPA)基因体外转染对鼠血管平滑肌细胞(VSMC)黏附、增殖和迁移的影响,为tPA基因在预防移植血管再狭窄中的应用奠定理论基础。方法通过阳离子质体介导,将tPA基因转染体外培养鼠血管平滑肌细胞,RT-PCR、Western-Blot及ELSIA检测转基因平滑肌细胞基因表达,底物发色法检测转基因VSMC纤溶活性变化,MTT、细胞黏附、细胞迁移实验等方法,检测体外转染tPA基因对血管平滑肌细胞黏附、增殖和迁移的影响。结果RT-PCR和Western-Blot检测到转基因血管平滑肌细胞tPA基因转录及蛋白表达,转基因组、载体组和空白对照组tPA含量分别为(518.38±125.32)ng/106cells/24h、(12.53±4.27)ng/106cells/24h和(13.21±5.02)ng/106cells/24h,转基因组明显高于各对照组;转基因组tPA活性为(26.6±7.02)IU/106cells/24h,而载体组和空白对照组没有检测出tPA活性。转基因平滑肌细胞和对照组相比,其细胞的增殖、黏附和迁移能力没有明显变化。结论转tPA基因血管平滑肌细胞纤溶活性增高,但对血管平滑肌细胞的黏附、增殖和迁移能力没有影响。     

组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)及其突变体的表达研究进展

对组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)及其突变体在大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞、丝状真菌、昆虫细胞和转基因动物乳腺等表达系统中进行表达的研究工作情况进行了综述，并对各个表达系统的优缺点进行了比较。     

内皮素及其受体拮抗剂对纤溶系统的影响

目的 探讨内皮素1(ET-1)及其受体拮抗剂(PD142893)对纤溶系统的影响。方法培养肺静脉内皮细胞株(ECV304),分为ET-1刺激组,培养基中加ET-1至终浓度为5、10、20、50、100nmol/L;PD142893干预组,培养基中加ET-1(100nmol/L)后加入PD142893,终浓度为10、100、200、400mol/L,24小时后测定上清中的组织纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的含量。结果 空白对照组PAI-1含量为78.169±1.211ng/ml,ET-1(5、10、20、50、100nmol/L)刺激组分别为66.525±1.746、68.075±1.889、66.911±0.933、67.825±3.564、67.851±2.437ng/ml,刺激组与对照组之间存在显著差异,P<0.05;而两组t-PA含量无明显差异,P>0.05。无PD142893干预的ET-1(100nmol/L)组PAI-1含量为67.951±2.437ng/ml;ET-1(100nmol/L)+PD142893(10、100、200、400nmol/L)干预组PAI-1含量分别为91.112±8.811、99.311±14.079、113.467±7.679、114.933±9.623ng/ml,两者之间存在明显差异,P<0.05;而两组间t-PA含量无明显差异,P>0.05。结论 ET-1对肺静脉内皮细胞分泌的PAI-1有显著的抑制作用,而对t-PA无显著影响;用PD142893干预后,PAI-1显著升高,t-PA的含量无明显的改变。     

卒中单元联合重组组织型纤溶酶原激活剂静脉溶栓治疗脑梗死效果观察

目的探讨卒中单元联合重组组织型纤溶酶原激活剂（rt—PA）静脉溶栓治疗急性脑梗死的效果。方法2012年1—10月采用卒中单元联合rt—PA静脉溶栓治疗发病4．5h内急性脑梗死15例,观察治疗后神经功能缺损量表（NIHSS）评分改善情况、临床疗效和不良反应发生情况。结果治疗后各时点NIHSS评分较治疗前均降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;治疗21d总有效率为86．67％,治疗期间未见明显不良反应。结论急性脑梗死发病4．5h内给予卒中单元联合rt—PA静脉溶栓治疗疗效显著,且安全可行。     

腺病毒介导的TSP1f基因转移对脐静脉内皮细胞株ECV304增殖的影响

目的探讨腺病毒介导的凝血酶敏感蛋白1（TSP1）抗血管新生衍生物（TSP1f）基因转移对人脐静脉内皮细胞株ECV304增殖的影响。方法应用RTPCR方法从正常人外周血单个核细胞扩增TSP1f cDNA序列构建TSP1f重组腺病毒（ADV-TSP1f）;Western blot方法检测ADV-TSP1f介导TSP1f在K562细胞中的表达;台盼蓝拒染检测经ADV-TSP1f感染的K562细胞条件培养基对ECV304细胞增殖的抑制作用。结果K562细胞经ADV-TSP1f感染可高效表达／分泌TSP1f多肽;经ADV-TSP1f感染的K562细胞条件培养基可显著抑制ECV304细胞增殖,以ADV-LacZ及PBS作对照,抑制率分别为51．6％和53．8％。结论ADV-TSP1f可显著抑制人脐静脉内皮细胞株ECV304增殖,可望成为有效的恶性肿瘤血管新生抑制剂。     

过敏性紫癜肾儿童血尿纤溶酶原激活物及其抑制物的变化及干预治疗

目的　探讨过敏性紫癜肾患儿外周血和尿液中组织型纤溶酶原激活物 (tPA)及 1型纤溶酶原激活物抑制物 (PAI 1)的活性和尿纤溶酶原激活物总活性 (PAs)的变化特点及予血管紧张素转化酶抑制剂 (ACEI)、低分子肝素治疗的影响。方法　 2 3例紫癜肾儿童为研究对象 ,11名正常对照。分别于ACEI和低分子肝素治疗前、治疗后 1周、治疗后 2周取血、尿标本 ,用纤维平板法测定尿PAs活性 ,用酶联免疫吸附测定 (ELISA)法测定血tPA和PAI 1活性 ,以 x±s报道数据。 结果　紫癜肾患儿于治疗前血tPA水平和尿PAs总活性均明显低于正常对照组 ,而PAI 1水平则显著高于对照组 ,ACEI和肝素联合治疗后 ,随着治疗的持续可明显改善凝血纤溶系统平衡紊乱的趋势 (P <0 0 1)。结论　紫癜肾儿童血、尿凝血纤溶系统平衡紊乱 ,表现为凝血亢进和纤溶障碍 ,干预性治疗具有一定疗效     

环孢素对足细胞尿激酶型纤溶酶原激活剂受体表达的影响

目的观察环孢素对脂多糖诱导的足细胞尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(uPAR)表达的影响。方法建立体内脂多糖诱导小鼠蛋白尿模型和体外脂多糖足细胞损伤模型,2种模型均分为正常对照组、脂多糖组和脂多糖+环孢素组。通过测量尿蛋白-尿肌酐比值观察各组小鼠尿蛋白的变化情况,通过免疫荧光激光共聚焦、RT-PCR及流式细胞术观察各组小鼠肾组织及足细胞uPAR基因和蛋白水平。结果脂多糖组小鼠尿蛋白-尿肌酐比值高于正常对照组(P<0.01),脂多糖+环孢素组低于脂多糖组(P<0.05)。脂多糖+环孢素组小鼠肾组织中uPAR的表达弱于脂多糖组。足细胞脂多糖组uPAR蛋白荧光信号明显强于正常对照组,给予环孢素后荧光信号减弱。足细胞脂多糖+环孢素组uPAR蛋白表达率和Plaur mRNA为(20.10±10.70)%和0.872±0.167,均低于脂多糖组[(65.17±13.04)%和1.341±0.287,P<0.05],与正常对照组无显著差异[(18.06±7.78)%和1.025±0.167,P>0.05]。结论环孢素可能通过抑制足细胞uPAR的表达,从而稳定和保护足细胞起到降蛋白尿作用。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂及其受体在胰腺癌中表达的意义

目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinaseplasminogenactivator,uPA)、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(urokinaseplasminogenactivatorreceptor,uPAR)在胰腺癌中表达的意义。方法用反转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)和免疫组织化学方法分别检测uPA、uPAR在85例胰腺癌和10例胰腺炎组织中mRNA和蛋白抗原的表达。HPIAS图像分析各组标本相对密度,t检验各组相对密度差异,字2检验uPA、uPAR与胰腺癌肿瘤临床病理之间的相关性。结果uPA、uPARmRNA和蛋白抗原在胰腺炎组织中低表达,胰腺癌组织中uPA、uPARmRNA和蛋白抗原的高表达,胰腺癌中伴有转移者uPA、uPAR的mRNA和蛋白抗原的表达明显高于无转移者。uPA、uPAR的表达与胰腺癌的转移程度高度相关。结论uPA、uPAR是反映胰腺肿瘤进展和生物学特性的指标,是临床上判断预后的良好指标之一