羽扇豆醇对肝细胞肝癌的抑制作用研究

目的体外探讨羽扇豆醇对肝癌细胞系SMMC7721的抑制作用。方法利用MTT法检测羽扇豆醇对SMMC7721的毒性作用;流式细胞术检测羽扇豆醇作用SMMC7721细胞后对细胞周期及凋亡的影响。结果羽扇豆醇抑制SMMC7721的增殖,其能显著阻滞细胞在S期的聚集,促进细胞的凋亡。结论羽扇豆醇能抑制肝细胞肝癌(HCC)细胞的增殖,其作用机制可能与对诱导肝癌细胞凋亡和对细胞的S期阻滞相关。     

维A酸注射液对人肝癌细胞SMMC-7721及其裸小鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究维A酸注射液对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用及其对裸鼠移植瘤生长的影响。方法:采用细胞计数试剂盒检测不同浓度维A酸注射液对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,计算半数抑菌浓度(IC50)。建立裸鼠SMMC-7721移植瘤模型,分为阴性对照组(n=12)、阳性对照(顺铂1mg.kg-1)组和维A酸低、中、高剂量(7.5、15、30mg.kg-1)组,后4组各6只。腹腔给予相应药物,每周连续给药5d后停药2d,共给药4周,每周检测各组裸小鼠体重、肿瘤体积(TV)、相对肿瘤体积(RTV)、相对肿瘤增殖率(T/C),及末次给药2d后移植瘤组织中凋亡细胞阳性率和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达。结果:维A酸注射液对SMMC-7721细胞的IC50为(15.14±0.46)μg.mL-1。小鼠给药19d(治疗疗效最佳时间)时,与阴性对照组比较,其余各组TV、RTV均明显下降(P<0.05或P<0.01),体重无明显变化,T/C均小于60%;末次给药2d后,与阴性对照组比较,维A酸3个剂量组凋亡细胞阳性率和Caspase-3表达明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:维A酸注射液能抑制SMMC-7721细胞的增殖及其裸小鼠移植瘤的生长,其机制可能与促进细胞凋亡和Caspase-3表达有关。     

复尔康注射液对人肝癌细胞株及裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究复尔康注射液对人肝癌细胞株增殖及裸鼠移植瘤生长的影响。方法:采用CCK8试剂盒检测复尔康注射液对人肝癌细胞株SMMC-7721和BeL-7402增殖的抑制作用;建立SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤模型,通过比较肿瘤体积(tumor volume,TV)、相对肿瘤体积(relative tumor volume,RTV)和相对肿瘤增殖率(T/C)考察复尔康注射液对肿瘤生长的影响。结果:复尔康注射液对SMMC-7721和BeL-7402的IC50分别为(61.51±1.58),(68.39±7.16)mg·L-1;不同剂量复尔康注射液能够不同程度地抑制裸鼠移植瘤的生长,与阴性对照组比较,P<0.05。低、中、高剂量复尔康注射液组(0.065,0.130,0.260 g·kg-1)T/C分别为57.75%,39.9%和44.08%。结论:复尔康注射液体外能抑制人肝癌细胞株的增殖,体内能明显抑制SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤的生长。     

牡荆素对人肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用及其机制的影响

目的: 研究牡荆素(vitexin)对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用, 并初步探讨其作用机制。方法: 体外培养人肝癌细胞SMMC-7721, 分别采用MTT法和Hoechst33258核染色法检测牡荆素对人肝癌细胞SMMC-7721活力的影响以及观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位(ΔΨm) 变化;蛋白免疫印迹法检测p53、Bcl-2、Bax等相关凋亡蛋白水平的表达情况。结果: 牡荆素培养人肝癌细胞SMMC-7721 48, 72, 96 h后能明显抑制细胞增殖, 呈时间-剂量依赖性(P<0.05), 其IC₅₀分别是150.37, 116.24, 90.19 μmol·L^-1。牡荆素作用于人肝癌细胞SMMC-7721 72 h后, 以浓度依赖性方式增加细胞凋亡率、降低线粒体膜电位(ΔΨm) 以及上调p53、Bax、Caspase-3等相关促凋亡蛋白的表达, 下调Bcl-2抗凋亡蛋白的表达。结论: 牡荆素能抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖诱导凋亡, 呈时间-剂量依赖性, 其作用机制可能通过依赖P53途径下调Bcl-2, 上调Casepase-3、Bax、P53、PARP等基因表达, 进而诱导凋亡有关。     

广西眼镜蛇毒蛋白Natrin在体外诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡作用的研究

目的观察广西眼镜蛇毒蛋白Natrin在体外对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用及凋亡诱导作用。方法以不同浓度的Natrin作用于SMMC-7721细胞24 h后,用MTT法检测细胞的生长抑制率;AO/EB双染色法、透射电子显微镜法观察细胞凋亡、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期。结果 Natrin对人肝癌SMMC-7721细胞有体外抑制作用,随着药物浓度的增大抑制率也随之增大,24 h半数抑制浓度IC50为138.69 mg·L-1;给药后,荧光显微镜下与透射电子显微镜下细胞呈现典型的凋亡形态改变;流式细胞仪检测到随着药物浓度的增大凋亡百分数也随之增大;Natrin能诱导SMMC-7721细胞发生S期和G2/M期阻滞。结论Natrin在体外能抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡。     

新型金属铜络合物对SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

目的研究新型金属铜络合物(N-Cu)在体外对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法将不同浓度的N-Cu(0.3～24μmol.L-1)作用于体外培养的SMMC-7721细胞,应用MTT法检测细胞生长抑制率,FCM法检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR和Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达的变化。结果 N-Cu可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,呈明显的量效与时效关系。随着药物浓度的增加,G0/G1期的细胞比率上升,G2/M和S期细胞比率下降,并促进凋亡率增加。N-Cu可上调细胞中Bax、Caspase-3基因及蛋白的表达,抑制Bcl-2基因及蛋白的表达,且均呈剂量依赖性。结论一定浓度的N-Cu可抑制SMMC-7721细胞的增殖并诱导其凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。上调Bax、Caspase-3基因及蛋白的表达,降低Bcl-2/Bax比值,可能是其诱导细胞凋亡的重要机制。     

秦皮乙素的制备及对人肝癌细胞SMMC-7721体外增殖的影响

目的 制备秦皮乙素并探讨其对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响。方法 采用聚酰胺柱层析法分离纯化秦皮乙素,采用薄层色谱法进行定性鉴别,高效液相色谱法进行纯度检测。采用MTT比色法观察秦皮乙素对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响。采用流式细胞仪分析秦皮乙素对SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响。结果 高效液相色谱法检测秦皮乙素的纯度为95%。MTT结果显示,IC50为2.24 mmol·L-1,并呈现时间-剂量依赖关系。流式细胞仪(FCM)检测表明, G2/M期细胞的比例减少,S期细胞的比例增加,与对照组相比差异显著(P<0.05)。结论 秦皮乙素可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖,阻滞于S期,诱导肝癌细胞凋亡。     

京大戟中二萜类化合物pekinenal对肝癌细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的研究京大戟中二萜类化合物pekinenal对肝癌SMMC-7721细胞增殖、周期和凋亡的影响,并初步探讨其治疗肝癌可能的影响机制。方法采用MTT法分析不同浓度的pekinenal对体外培养SMMC-7721细胞增殖的影响;采用原位末端标记法(TUNEL)、Annexin V/PI双染法和电镜观察对细胞凋亡的作用;应用流式细胞术分析对细胞周期的影响。结果 MTT结果显示,pekinenal可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,呈浓度依赖性。Annexin V/PI双染法结果显示,随着pekinenal浓度的增加,肝癌SMMC-7721细胞的凋亡率明显增加,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。TUNEL法检测结果表明,不同浓度的pekinenal作用于SMMC-7721细胞后均可诱导肝癌细胞凋亡,凋亡指数(AI)随着药物浓度的升高明显增加(P<0.01)。给药后电镜观察,与对照组比较,发现肝细胞线粒体肿胀、内质网扩张,胞质包涵体形成,部分细胞核呈现凋亡表现,并且随着药物浓度增加,凋亡现象越明显。流式细胞术分析显示,不同浓度的pekinenal均可使细胞被阻滞于S期。结论 pekinenal对人肝癌细胞增殖有明显地抑制作用,并存在着明显的浓度依赖关系;pekinenal可能是通过抑制癌细胞DNA的合成,将人肝癌细胞周期阻滞在S期,抑制其增殖,通过诱导人肝癌细胞发生凋亡等,发挥其抗肝癌作用。     

氧氟沙星-绕丹宁衍生物诱导人肝癌细胞凋亡作用

目的研究氧氟沙星-绕丹宁衍生物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用。方法用不同浓度的6-(3-苄基-4-氧代-2-硫代-噻唑烷-5-叉甲基)-9-氟-3-甲基-10-(4-甲基哌嗪-1-基)-2,3-二氢-7-氧代-7-氢-吡啶并[1,2,3-de][1,4]苯并噁嗪(R3)与人肝癌SMMC-7721细胞、食管鳞癌EC-9706细胞、结肠癌CaCO-2细胞和L-02肝转化细胞体外培养。MTT法检测R3对各种细胞的增殖抑制作用;DAPI荧光染色法和TUNEL法检测细胞凋亡变化;PI染色流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot法测定p53和caspase-3蛋白表达量的变化。结果 R3在2~20μmol·L~(-1)的浓度范围内能明显抑制SMMC-7721细胞、EC-9706细胞和CaCO-2细胞的增殖,作用于细胞24 h的IC_(50)值分别为3.893、4.181和3.408μmol·L~(-1);R3作用于L-02细胞24 h的IC_(50)值为33.959μmol·L~(-1);氧氟沙星盐酸盐作用于SMMC-7721细胞24 h的IC_(50)值为240.137μmol·L~(-1);舒尼替尼作用于SMMC-7721细胞24 h的IC_(50)值为8.075μmol·L~(-1);R3处理SMMC-7721细胞后,细胞周期被阻滞在G1-S期检测点,且细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。R3明显增加SMMC-7721细胞p53和caspase-3蛋白表达量,其中caspase-3活性裂解片段增加明显。结论氧氟沙星-绕丹宁衍生物对肿瘤细胞具有较好的选择性抑制作用,能够明显诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡。     

siRNA-DAD1联合人参皂苷Rh 2对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨基因沉默DAD1 联合人参皂苷Rh2 对肝癌细胞增殖和凋亡的作用机制。方法　化学合成siRNADAD1,然后转染肝癌SMMC-7721 细胞,分别采用Q-PCR 和Western blot 检测DAD1 的mRNA 及蛋白表达水平变化,CCK-8 法检测肝癌SMMC-7721 细胞增殖能力的改变,DNA Ladder 法和流式细胞术检测肝癌SMMC-7721 细胞凋亡的变化。结果　siRNA-DAD1 可下调肝癌SMMC-7721 细胞中DAD1 的mRNA 及蛋白表达水平;siRNA-DAD1 与人参皂苷Rh2 均具有抑制SMMC-7721 细胞增殖的能力,并促使其发生凋亡,二者联合作用效果更好（P<0.05）。结论　siRNADAD1可下调肝癌SMMC-7721 细胞中DAD1 的mRNA 和蛋白表达水平,与人参皂苷Rh2 协同抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖并促进其凋亡。     

Cytotoxic effects and pro-apoptotic mechanism of TBIDOM, a novel dehydroabietylamine derivative, on human hepatocellular carcinoma SMMC-7721 cells

We have investigated the antiproliferative effects of TBIDOM (N-(4-(2,2,2-trifluoroethyl) benzylidene) (7-isopropyl-1,4a-dimethyl-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahydrophenanthren-1-yl) meth-anamine) and have explored its possible mechanisms on human hepatocellular carcinoma SMMC-7721 cells. The proliferative status of cells treated with TBIDOM was measured by the colorimetric MTT assay. Cellular apoptosis was analysed using Hoechst 33342 staining and flow cytometry. Reduction of mitochondrial membrane potential (Delta psi(m)) was also detected by flow cytometry. Western blotting assay was used to evaluate the release of cytochrome c and expression of p53, Bcl-2 and Bax proteins. It was shown that TBIDOM displayed a significant inhibitory effect on growth of SMMC-7721 cells in a dose- and time-dependent manner. Hoechst 33342 staining and flow cytometry analysis showed an increase of apoptosis rate and decrease of mitochondrial membrane potential after SMMC-7721 cells were exposed to TBIDOM for 24 h. Pretreatment of SMMC-7721 cells with TBIDOM significantly induced a decrease of Bcl-2 protein expression and an increase of caspase-3 activity and Bax protein expression. The results indicated that TBIDOM could effectively inhibit proliferation by induction of apoptosis and could be a promising candidate in the development of a novel class of antitumour agent.     

丹参多酚酸盐体外抗肿瘤作用研究

目的:研究丹参多酚酸盐体外抗肿瘤的作用,探讨其可能机制。方法:采用MTT比色法测定注射用丹参多酚酸盐体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞、人肺腺癌细胞株SPC-A-1细胞、B淋巴瘤细胞株Raji细胞和急性粒细胞白血病细胞株HL-60细胞4种肿瘤细胞株增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期的改变及细胞凋亡情况;采用吉姆萨染色及吖啶橙荧光染色观察细胞形态变化。结果:注射用丹参多酚酸盐对SMMC-7721、SPC-A-1、Raji、HL-60细胞增殖均有显著的抑制作用,且呈时间和剂量依赖关系;可诱导SMMC-7721细胞阻滞于S期继而发生细胞凋亡;可观察到细胞逐渐凋亡形态。结论:注射用丹参多酚酸盐有较强的体外抗肿瘤作用,可能是通过作用于细胞周期、诱导肿瘤细胞凋亡来发挥的。     

Mucin-4在百里醌抑制肝癌生长中的作用

目的 探讨百里醌对体内外肝癌生长的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 不同浓度百里醌作用人肝癌细胞株SMMC-7721后,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测其对细胞生长的抑制作用;Hoechst染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;RT-PCR检测Mucin-4 mRNA在SMMC-7721细胞中的表达;Western blot-ting检测肝癌细胞中Mucin-4蛋白表达;建立裸鼠肝癌皮下移植模型,完全随机法分为对照组和低（10 μmol/L）、中（20 μmol/L）、高剂量（40 μmol/L）百里醌组,观察不同剂量百里醌对裸鼠肝癌皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Mucin-4的阳性表达.结果 不同浓度（10、20、40 μmol/L）百里醌作用人肝癌SMMC-7721 24 h后,细胞存活率分别为（80.14±9.84）％、（71.68±6.51）％和（64.58±5.24）％;百里醌作用后,SMMC-7721细胞出现典型凋亡形态学改变;百里醌干预后SMMC-7721细胞中Mucin-4蛋白和mRNA的表达均明显下调,呈浓度依赖性;实验结束后,对照组和低、中、高剂量百里醌组肿瘤体积分别为（1056.3±236.3）、（672.3±178.8）、（529.4±165.7）、（473.1±141.5） mm2,各百里醌组肿瘤体积明显低于对照组（P＜0.05）,低、中、高剂量百里醌组抑瘤率分别为36.5％ 、49.9％和30.3％;百里醌可明显降低肿瘤组织中Mucin-4的阳性表达.结论 百里醌可显著抑制体内外肝癌生长,该作用可能通过抑制Mucin-4的表达而实现.     

美洲大蠊多肽提取物对SMMC-7721细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的：研究美洲大蠊多肽提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其分子机制。方法：采用不同质量浓度的美洲大蠊多肽提取物作用于SMMC-7721,以Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测细胞抑制率;Hoechst33342/PI与Annexin V-FITC/PI双染法相结合检测SMMC-7721细胞的凋亡;蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：不同质量浓度的美洲大蠊多肽提取物可抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导其凋亡,呈一定的量效关系;Western Blot法显示Bax表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,Bcl-2/Bax比值降低。结论：美洲大蠊多肽提取物可明显诱导SMMC-7721细胞凋亡,抑制其增殖,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,降低Bcl-2/Bax比值有关。     

大黄素诱导癌细胞凋亡和抑制视黄醇X受体的转录激活功能

大黄素(emodin)对多种肿瘤细胞有较强的抑制增殖和诱导凋亡的作用，但其作用机制尚不清楚。本研究通过配体-受体竞争结合实验以及报告基因检测了大黄素对维甲酸X受体(retinoid X receptor alpha，RXRα)的结合和转录活性的调控，并研究了大黄素对肺癌细胞H460和肝癌细胞SMMC-7721生长和凋亡的作用。结果发现，大黄素对两种癌细胞有很强的抑制增殖作用，加入RXRα的天然配体9-顺式视黄酸(9-cis-retinoid acid，9-cis-RA)共同处理可显著缓解这种抑制作用。大黄素能浓度依赖地引起两种癌细胞系的凋亡，使细胞核出现碎裂和染色质浓染。报告基因实验发现大黄素对RXRα同源和异源二聚体的转录激活有显著抑制作用。体外的配体竞争结合实验发现，大黄素不直接结合RXRα的配体结合区。蛋白质免疫印迹实验发现，大黄素不影响RXRα的蛋白表达。结果提示，大黄素具有诱导肺癌细胞H460和肝癌细胞SMMC-7721凋亡和抑制细胞生长的作用，大黄素抑制9-cis-RA对RXR转录激活作用以及9-cis-RA具有一定程度拮抗大黄素对肺癌细胞H460和肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制作用，提示大黄素的抗癌作用可能与细胞内RXR的功能有关，并以RXR转录非依赖性的方式起作用。配体竞争结合实验结果提示大黄素可能间接作用于RXR。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的体内体外抗人肝细胞癌的作用

目的：研究Bcl-2蛋白的过表达对Trail诱导肝癌细胞凋亡的影响,以及Trail蛋白体内和体外对人肝癌细胞的杀伤作用。方法：克隆Trail基因并在大肠杆菌中表达Trail重组蛋白。检测Trail重组蛋白在体内和体外对肿瘤的杀伤作用。用台盼蓝拒染法检测细胞的凋亡率。将真核细胞表达质粒pcDNA3-Bcl-2转染到人肝癌细胞BEL－7404细胞中,并通过G418 400mg/L筛选得到Bcl-2蛋白稳定表达的细胞株。结果：重组蛋白Trail能够有效地杀死人肝癌细胞（包括BEL－7404,SMMC－7721,和BEL－7402等细胞）。在体外,过量表达的Bcl-2蛋白能抑制Trail重组蛋白对人肝癌细胞BEL－7404的杀伤作用。重组蛋白Trail能够有效地抑制人肝癌细胞BEL－7404在裸鼠中形成实体瘤。结论：在体内和体外,Trail重组蛋白能够杀死肝癌细胞,Bcl-2蛋白过表达可以抑制Trail重组蛋白对肝癌细胞BEL－7404的杀伤作用。Trail蛋白是一种潜在的肝癌治疗剂。     

Redifferentiation of human hepatoma cell induced by 6-(p-chlorophenyl)-3-[1-(p-chlorophenyl)-5-methyl-1 H-1,2,3-triazol-4-yl]-s-triazolo[3,4-b]-1,3,4-thiadiazole (TDZ)

6-(p-Chlorophenyl)-3-[1-(p-chlorophenyl)-5-methyl-1 H-1,2,3-triazol-4-yl]-s-triazolo[3,4-b]-1,3,4-thiadiazole (TDZ) is a derivative of various substituted s-triazolo[3,4-b]-1,3,4-thiadiazoles, which are associated with diverse pharmacological activities. However, the antitumor activity of TDZ is not well understood. To evaluate its role on tumor cell lines, we have examined the effect of TDZ on two tumor lines: human hepatoma cell (SMMC-7721) in vitro and Sarcoma180 tumor (S180) in vivo. The cytotoxicity of TDZ on human hepatoma cells was assessed using the MTT assay. The inhibition on tumor growth was evaluated by means of trypan blue exclusion test in vitro, and using a Sarcoma180 tumor (S180) animal model in vivo. A scanning electronic microscope was used to discover the morphological changes on cell surface, cell electrophoresis was employed to determine the changes of cell surface negative charges, and alpha-fetoprotein was applied as a biomarker of hepatoma. The effect of TDZ on DNA synthesis was determined by a [3H]-thymidine incorporation assay, and cell cycle distribution by flow cytometry. The IC50 value of TDZ on SMMC-7721 cells was 52.9 microg/ml (48 h). However, TDZ could inhibit the growth of SMMC-7721 cells at concentrations far lower than the IC50 value. Treated with the same low concentrations of TDZ, microvilli on the surface of SMMC-7721 cells decreased obviously, electrophoresis rate of cells reduced from 2.14 microm ms(-1) x V(-1) x cm(-1) of control to 1.54 and 1.56 microm x s(-1) x V-1 x cm(-1), the content of AFP dropped from 205.14 +/- 6.41 ng x mg(-1) Pr to 115.68 +/- 3.47 and 78.57 +/- 2.35 ng mg(-1) Pr, and the DNA replication was inhibited by 26.8% and 45.2%. These results indicated that TDZ may inhibit proliferation of cancer cells by reversing SMMC-7721 cells malignant phenotypic characteristics and inducing redifferentiation. Flow cytometry showed that TDZ-treated cells resulted in a higher proportion of cells in S phase compared with untreated cells, and only when the concentration reached 64 microg/ml, the apoptosis could happen at the rate of 4.2%. Detection of the inhibition of Sarcoma 180 tumor growth in vivo showed that TDZ reduced the tumor weight and 69.08% of the growth was inhibited. TDZ could inhibit the proliferation of tumors in vitro and in vivo; the possible antitumor mechanism might be inducing redifferentiation at a lower dosage on vitro.