卵巢癌中上皮特异性抗原抗体修复方法的选择

目的探讨免疫组织化学(IHC)检测中上皮特异性抗原(Ber-EP4)在不同修复条件下蛋白表达情况,寻求本实验室检测Ber-EP4的最佳抗原修复方法。方法应用全自动免疫组织化学仪及不同的修复方法对20例卵巢癌患者进行Ber-EP4蛋白表达的检测,并比较4种抗原修复方法的差异。结果 Ber-EP4蛋白表达与不同的抗原修复方法密切相关,通过胃蛋白酶消化修复方法,组织染色充分,定位清晰,背景干净。结论 IHC是多步骤,多条件的复杂过程,建议实验室针对每种抗体选择最佳修复方法,以确保结果准确性和可靠性。     

原发性乳房外Paget病中HER-2的表达

目的：观察原发性乳房外Paget病中HER-2/neu基因扩增及HER-2蛋白的表达,探讨其在乳房外Paget病中的意义。方法：收集2007年1月-2011年9月原发性乳房外Paget病手术切除标本20份,应用显色原位杂交和免疫组织化学的方法,分别检测患者皮损组织石蜡包埋标本中HER-2/neu基因扩增和HER-2蛋白表达情况。结果：所有20例患者分为3组：免疫组织化学检测HER-2蛋白高表达组、低表达组和阴性表达组分别为8例、6例和6例,HER-2蛋白阳性表达率为70.0％。显色原位杂交检测高扩增组、低扩增组和无扩增组分别为7例、2例和11例,HER-2基因的扩增率为45.0％。采用Spearman秩相关进行分析,两种检测方法的结果具有正相关性（P＜0.05）。结论：在原发性乳房外Paget病中存在HER-2/neu基因扩增和HER-2蛋白的表达,两者之间存在正相关性。干扰HER-2蛋白的表达可能为临床治疗原发性乳房外Paget病提供一种新的策略。     

抗原修复液pH值和抗体浓度对免疫组织化学技术检测PD-L2染色结果的影响

目的:探讨不同浓度抗体和不同pH值的抗原修复液对免疫组织化学反应结果的影响,以提高免疫组织化学染色阳性率.方法:采用3种不同抗体浓度作预处理后,分别在pH值6.0和pH值9.0条件下,进行免疫组织化学SP法检测PD-L2分子在食管磷状细胞癌组织中的免疫组织化学染色效果.结果:PD-L2抗体稀释浓度1∶400的免疫组化染色效果优于抗体浓度1∶800;pH值9.0的抗原修复液处理后的免疫组化染色效果优于pH值6.0的抗原修复.结论:PD-L2抗体稀释浓度1∶400,pH值9.0抗原修复液处理后的免疫组化染色效果最佳,既可提高免疫组织化学反应阳性表达率,又能提高制片质量,是理想的检测PD-L2分子免疫组织化学反应的优化方案.     

微波及电炉加热抗原修复方法对皮肤桥粒结构蛋白的免疫组化染色的影响

目的　研究皮肤桥粒结构蛋白抗原修复技术的两种方法对皮肤桥粒结构蛋白免疫组化染色的影响。方法　分别用微波炉、电炉加热法进行抗原修复 ,比较 4种不同皮肤病组织的免疫组织化学染色在不同抗原修复技术条件下的应用效果。结果　抗体由不处理的阴性 (- )提高到阳性 ( ) ,2种方法结果相同的有 3种 ,微波炉法较电炉加热法提高了一个 ( )的有1种。结论　微波炉法能增强抗原的修复 ,有利于抗原复性 ,极大地改善免疫组化染色效果 ,且明显优于电炉加热法 ,微波炉抗原修复法简便易行 ,对提高皮肤组织抗原检出率效果好     

荧光原位杂交与免疫组化法检测乳腺癌HER-2表达的临床意义

[目的]探讨乳腺癌中荧光原位杂交(FISH)检测HER-2基因的扩增和免疫组织化学(IHC)检测HER-2蛋白表达在临床诊断及分子靶向治疗中的应用.[方法]采用FISH与IHC检测50例乳腺癌组织中HER-2基因的扩增与HER-2蛋白表达.[结果]50例浸润性乳腺癌中,FISH检测HER-2基因扩增阳性15例(30％),IHC检测HER-2蛋白表达(-～+)40例,HER-2蛋白表达(++)的2例,HER-2蛋白表达(+++)的8例.[结论] FISH检测HER-2基因的扩增与IHC检测HER-2蛋白表达(++-+++)有较高的一致性.对于IHC检测HER-2(-++)表达时,必须进一步FISH检测.     

乳腺癌手术标本BRCA-1蛋白表达与HER-2基因扩增的临床意义

目的:研究乳腺癌患者乳腺癌手术标本中乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA-1)蛋白表达、原癌基因HER-2的基因扩增与蛋白表达及其与临床病理特征之间的关系.方法:采用免疫组织化学和显色原位杂交的方法,检测乳腺癌手术切除肿瘤组织中的HER-2和BRCA-1蛋白表达以及HER-2基因扩增情况,对这两个基因的表达与临床相关病理特征之间的关系进行分析.结果:BRCA-1和HER-2蛋白表达在不同组织类型中差异无统计学意义,但在不同肿瘤大小、不同组织分级和有无淋巴结转移中差异有显著性(P<0.05).BRCA-1蛋白表达与HER-2基因扩增率呈负相关.结论:BRCA-1和HER-2蛋白表达对乳腺癌的发生发展具有一定作用,检测BRCA-1和HER-2蛋白表达在乳腺癌的早期诊断、判断生物学行为、预测预后中有重要意义.另外BRCA-1与HER-2可能存在相关性,须进一步研究.     

加热抗原修复对乳腺癌组织中内源性抗生物素蛋白结合物的影响及其对策

目的:探讨加热抗原修复对甲醛固定石蜡包埋乳腺癌组织中内源性抗生物素蛋白结合物(EABA)的影响,以及消除EABA对免疫组织化学染色干扰的对策。方法:采用微波加热抗原修复法,免疫组织化学SP染色法,蛋清液封闭法,抗生物素蛋白-生物素封闭法及Envision二步法对10例甲醛固定石蜡包埋乳腺癌标本内的EABA进行检测。结果:1经甲醛固定石蜡包埋的乳腺癌组织中的EABA被封闭;2加热抗原修复可造成EABA暴露,且EABA仅存在于细胞质中;3蛋清液封闭法及抗生物素蛋白-生物素封闭法可封闭暴露的EABA。采用非生物素检测系统也可消除EABA对正常免疫组化染色的干扰。结论:微波加热抗原修复可使甲醛固定石蜡包埋乳腺癌组织中的EABA重新暴露。因而对生物素-抗生物素蛋白-辣根过氧化物酶检测系统的免疫组织化学染色造成干扰;暴露的EABA可通过蛋清液封闭法、抗生物素蛋白—生物素封闭法封闭,或采用非生物素检测系统,达到避免EABA对正常免疫组化染色干扰的目的。     

乳腺癌HER-2基因显色原位杂交与免疫组织化学检测对比研究

目的：对乳腺癌HER-2/neu/c-erbB-2（HER-2）显色原位杂交（chromogenicin situhybridization,CISH）检测和免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）表达两者之间进行对比研究。方法：选择乳腺癌的组织蜡块44例,经HER-2 IHC蛋白表达;阴性9例,（＋）9例,（艹）13例,（）13例。从中选取经HER-2 IHC表达阳性的乳腺癌22例[包括HER-2 IHC表达（＋）9例和HER-2 IHC表达（）13例]作回顾性CISH基因检测。结果：HER-2 IHC表达（＋）9例一组,经CISH基因检测9例均无基因扩增;HER-2 IHC表达（）13例一组,CISH无基因扩增2例（15.38%）,基因检测不理想1例（7.76%）,基因扩增10例,两种检测方法符合率76.92%,两者有高度一致性（P=0.001）。HER-2 IHC表达（）和CISH基因检测扩增与乳腺癌类型间有一定相关性（P〈0.05）。结论：CISH基因检测与IHC表达（）组,两者具有很高的一致性。IHC可作为乳腺癌HER-2筛选的首选方法,对于HER-2 IHC表达（ 卅）病例,经CISH基因检测,两者符合率高,CISH基因检测较IHC更准确,证实HER-2／neu扩增的患者可从采用抗HER-2单克隆抗体治疗中获益。     

免疫组织化学方法在眼眶肿瘤病理诊断中的应用及其前景

免疫组织化学方法是将一些可视性物质 ,如荧光素染料、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶等与组织和细胞中的特异性抗原相结合 ,利用抗原与抗体的特异性反应来检测组织中的未知抗原或者抗体 ,借以判断检测组织的来源和分化程度 ,协助病理诊断和鉴别诊断[1-4 ] 。免疫组织化学技术一般分为两大类 :一为直接免疫组织化学方法 ,即用标记有可视性物质的特异性抗体证实抗原的存在。二为间接免疫组织化学方法 ,即用标记可视性物质的第二抗体来检测初级抗体 -抗原反应复合物的存在[2 ] 。传统使用的荧光素染料标记特异性抗体的方法 ,称为免疫荧光技术。此…     

石蜡切片免疫荧光法在肾病穿刺组织中的应用

目的：探讨石蜡切片免疫荧光法检测肾病穿刺组织中免疫球蛋白等指标的最佳实验条件。方法：收集北京大学基础医学院病理学系的肾病穿刺组织标本45例,包括IgA肾病20例、膜性肾病15例、膜型乙肝病毒相关性肾炎10例,将组织标本用10%（体积分数）中性甲醛溶液固定、石蜡包埋、组织切片,在不同的抗原修复条件和抗体结合时间下,分别标记IgG、IgA、HBsAg、HBcAg,观察染色结果,并与其新鲜组织的免疫荧光染色结果相比较,评判石蜡切片免疫荧光法的应用价值。结果：热诱导抗原修复法修复后一步法和二步法染色均为阴性;蛋白水解酶消化法中胰蛋白酶优于胃蛋白酶,并以胰蛋白酶消化30 min、IgG和IgA 37 ℃温箱孵育90 min、HBsAg和HBcAg二抗37 ℃温箱孵育150 min染色结果最佳,与新鲜组织标本染色强度接近或略弱一些,阳性表达的方式也与后者相同,符合率100%。结论：经胰蛋白酶消化的石蜡切片免疫荧光法能够较好地应用于肾病穿刺组织诊断。     

不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用

目的:选择最适宜的抗原修复法.方法:在免疫组织化学染色中,选用鼠抗人5种单克隆抗体,用不同的抗原修复法,对不同染毒剂量、正常对照暴露大脑皮质及海马,石蜡组织切片,依阳性颗粒表达的情况,确定适宜的抗原修复.结果:抗原修复的方法直接影响到组织中抗原的暴露,高压加热法能把被掩盖或交联变性的抗原暴露或修复,使免疫组化的结果更准确可靠,特别是核阳性组织,适用于高压加热法;电炉煮沸法,阳性结果不佳;酶消化抗原修复法,与高压锅加热抗原修复法的阳性结果无区别.结论:核阳性表达的抗体应选用高压锅抗原修复法,推测核阳性表达的抗体也适用于酶消化抗原修复法.     

肺癌组织p53、HER—2蛋白的表达及意义

目的探讨p53、HER-2蛋白在肺癌的表达及意义。方法应用免疫组织化学S-P法检测肺癌组织中p53、HER-2蛋白表达。结果p53、HER-2蛋白在51例肺癌组织中的阳性表达率分别为58.82%,56.86%。其中p53蛋白在鳞癌、腺鳞癌和腺癌的表达无显著性差异(P＞0.05),但有淋巴结转移者(77.27%)显著高于无淋巴结转移者(44.82%,P＜0.05);HER-2蛋白阳性表达在腺癌、腺鳞癌均为75.00%,显著高于鳞癌(34.78%,P＜0.05),与淋巴结转移也显著相关(P＜0.05)。结论p53、HER-2蛋白阳性的肺癌患者更易发生淋巴结转移,HER-2蛋白表达与病理类型相关。     

高压锅和微波抗原修复法的对比分析

免疫组织化学技术是用已知抗体或抗原检测组织细胞中的未知抗原或抗体的技术 ,具有操作简单、敏感性和特异性强等优点 ,已广泛用于病理诊断。但在甲醛固定、石蜡包埋后的组织有部分抗原决定簇与核酸或其他蛋白发生交联 ,形成网络 ,固定液中的醛基在使蛋白质变性的同时 ,自身也会交联形成网络结构 ,使组织抗原决定簇封闭。导致表达不佳或假阴性。因此 ,充分的抗原修复是关系免疫组化结果的重要因素 ,抗原修复技术对免疫组织化学方法的敏感性起着决定性的作用 [1 ] 。微波炉和高压锅加热是目前常采用的抗原修复方法 [2 ] ,本文比较了这两种方…     

HER-2／neu在乳房外paget＇s病中的表达

目的探讨HER-2／neu在乳房外湿疹样癌中的表达及意义。方法应用免疫组织化学SP法检测20例乳房外湿疹样癌、20例正常包皮组织中HER-2／neu蛋白的表达情况。结果EMPD中HER-2／neu阳性表达率为40％，正常皮肤组织未表达，两者阳性表达率有显著性差异（P〈0．01）。结论HER-2／neu在EMPD的形成中起重要作用，与EMPD转移及复发的关系需扩大样本进一步地研究。     

HER-2蛋白疫苗的制备及在小鼠中诱导的抗体应答

目的：制备HER-2抗原疫苗．方法：采用RT—PCR方法从HER-2＋SKBR3细胞株中获得HER-2基因胞外段编码区cDNA,构建pQE-30-HER-2原核表达载体,在大肠杆菌中表达HER-2胞外区蛋白．Ni—NTA柱亲和层析纯化后,梯度尿素复性,Western Blot鉴定．用获得的蛋白免疫小鼠,检测重组蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答．结果：构建的pQE-30-HER-2质粒经酶切和DNA测序分析,结果表明该基因的序列与设计的序列完全相同．构建的质粒转化DI-IS（x后经IPTG诱导表达,SDS—PAGE分析,该重组蛋白以包涵体形式表达,且与mAbHerceptin有较好的结合活性．包涵体用Ni—NTA柱亲和层析纯化后,梯度尿素复性,最大限度的获得了可溶性的HER-2胞外区蛋白．用重组蛋白免疫小鼠,得到了较高的抗体滴度．结论：成功制备了HER-2蛋白疫苗并诱导出较高抗体滴度,为下一步工作打下基础．     

抗激活素受体相互作用蛋白1抗体的制备及应用

目的：制备抗激活素受体相互作用蛋白 1(ARIP1)抗体并探讨其应用。方法： 在大肠杆菌BL21中表达GST-ARIP1融合蛋白,以该蛋白作为抗原免疫新西兰家兔,制备抗ARIP1的多克隆抗体。应用该抗体进行免疫组织化学染色,分析ARIP1在小鼠脑组织的分布。结果：制备的兔抗ARIP1多克隆抗体可以特异识别ARIP1,而与ARIP2无交叉反应。初步应用制备的抗体进行免疫组织化学染色,ARIP1在小鼠大脑组织主要表达在下丘脑及海马。结论：成功地制备了抗ARIP1多克隆抗体,该抗体可用于ARIP1成熟蛋白表达的免疫组织化学染色分析。     

抗原修复对乳腺癌组织中雌激素受体与孕激素受体和C-erbB-2蛋白表达的影响

目的:探讨使乳腺癌组织雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和C-erbB-2蛋白在免疫组化中获得最佳效果的抗原修复条件。方法:对100例乳腺浸润性导管癌石蜡标本分别采用高压抗原修复和微波抗原修复法在不同的修复液、不同的时间检测ER、PR和C-erbB-2蛋白的表达,比较和观察它们各自的最优修复条件。结果:高压修复时,ER和PR最适的条件是采用pH值8.0的EDTA修复液煮沸喷气后持续5min,其染色的背景清晰,无非特异性着色。微波修复ER和PR最适的条件是采用pH值8.0的EDTA修复液15min,其染色的背景不清,有非特异性着色。而在高压和微波修复时C-erbB-2蛋白阳性表达率和表达强度的时间最适的条件是分别采用pH值6.0的枸橼酸盐修复液(CA)5min和10min。结论:高压抗原修复法在乳腺癌组织ER、PR和C-erbB-2蛋白阳性表达率、表达强度、背景和非特异性着色等方面均优于微波修复。高压抗原修复法是一种理想有效的抗原修复法,值得推广应用。     

胃癌中 HER-2蛋白的表达及其临床意义

目的：探讨胃癌中 HER-2基因的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学 SP 法检测75例胃癌组织中 HER-2蛋白的表达情况,分析其与胃癌临床各病理因素的关系,生存期分析采用 Life-tables 法。结果（1）胃癌中 HER-2的阳性率为14．67％,过表达率为9．33％。（2）胃癌 HER-2在不同 Lauren 分型、临床分期中的表达差异有统计学意义（P ＜0．05）;在不同民族、年龄、性别、肿瘤的大小、组织学分级、肿瘤部位和淋巴结转移的表达差异无统计学意义（P ＞0．05）。（3）获得随访的55例胃癌患者中,HER-2阳性患者与 HER-2阴性患者生存时间差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论胃癌 HER-2的表达与 Lauren 分型、临床分期关系密切,但可能不影响患者的预后。     

乳腺癌组织微阵列HER-2/neu,ER,PR相关性的研究

目的构建乳腺癌组织微阵列,研究HER-2/neu,雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progestogen receptor,PR)在原发性乳腺癌中的表达及其相关性.方法应用组织微阵列仪制作乳腺癌组织微阵列(tissue mieroarray).用免疫组织化学方法检测HER-2/neu,ER,PR在180例乳腺癌中的表达.结果180例乳腺癌肿瘤组织中HER-2/neu,ER,PR阳性率分别为37.8,38.3和47.2,HER-2/neu表达与激素受体(hormone receptor,HR)呈负相关,而与ER,PR无明显相关性.在激素受体和HER-2/neu均阳性的患者中,HER-2/neu与HR蛋白表达水平也呈负相关.结论乳腺癌细胞HER-2/neu表达及表达水平与HR表达及表达水平负相关.同时检测HER-2/neu,ER,PR对乳腺癌的辅助治疗具有重要意义及实用价值.     

不同分子分型乳腺癌组织中趋化因子 CXCL12 及其受体 CXCR4 和 CXCR7 的表达及临床意义

目的：探讨趋化因子CXCL12及其受体CXCR4和CXCR7在不同分子分型乳腺癌组织中的表达及临床意 义。方法：应用实时定量PCR检查80例不同分子分型乳腺癌组织中的趋化因子CXCL12 mRNA及其受体CXCR4和 CXCR7 mRNA的表达,采用免疫组织化学技术检测160例不同分子分型乳腺癌细胞组织中趋化因子CXCL12蛋白及其 受体CXCR4和CXCR7蛋白的表达,并分析它们在不同分子分型乳腺癌中的表达差异。结果：CXCL12 mRNA及其受 体CXCR4和CXCR7 mRNA在Luminal A和Luminal B型中表达无差异,在HER-2过表达型和三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)两个类型之间的表达也无差异,但三者在HER-2过表达型和TNBC中的表达明显高于Luminal A和 Luminal B型(均P<0.05);CXCL12蛋白、CXCR4蛋白和CXCR7蛋白在HER-2过表达型和TNBC中的阳性表达率均明显高 于Luminal A和Luminal B型(均P<0.05),但在Luminal A和Luminal B之间及HER-2过表达型和TNBC之间的表达无差异。 结 论：趋化因子CXCL12及其受体CXCR4和CXCR7在HER-2过表达型乳腺癌和TNBC组织中高表达,可能与该类型乳腺 癌预后较差有关,抑制其表达可为该类乳腺癌的治疗提供重要途径。