肺腺癌患者miR-126-5p的差异性表达及其作用机制预测

目的探讨肺腺癌患者miR-126-5p的表达差异性及其在患者临床预后中的价值,基于生物信息学方法,分析其作用机制。 方法检索STARBASE数据库,分析肺腺癌组织和正常肺组织中miR-126-5p表达水平差异。使用Kaplan-Meier Plotter在线网站 分析肺腺癌患者生存预后,绘制癌组织miR-126-5p不同表达水平患者的生存曲线。利用STARBASE数据库预测miR-126-5p 作用的靶基因,在线网站分析靶基因的表达水平及对预后的影响。使用qPCR法检测30例健康对照组及30例肺腺癌患者外周 血清mir-126-5p表达水平。结果STARBASE数据库检索结果提示正常肺组织中miR-126-5p高表达,肺腺癌组织中miR-126-5p 低表达,Kaplan-Meier Plotter在线大数据分析提示肺腺癌组织中miR-126-5p高表达的患者生存预后优于低表达者（HR=0.68, P=0.015）。miR-126-5p预测结合靶基因BRCC3 mRNA 3’UTR区,二者表达量呈负相关（r=-0.197,P<0.05）;与正常组织相比, BRCC3 在肺腺癌患者中呈现高表达,与患者不良预后相关（HR=1.39,P<0.05）。对照组血清中miR-126-5p 高于肺腺癌患者 （1.23±0.21 vs 0.63±0.12,P<0.05）。结论肺腺癌组织中miR-126-5p 表达水平低于正常肺组织,肺腺癌患者外周血清中miR- 126-5p表达水平低于正常人,miR-126-5p高表达患者预后较好,低表达患者预后较差。通过生物信息学预测,miR-126-5p可能 通过调控BRCC3发挥抑癌作用。     

miR-138-5p靶向调控程序性死亡配体-1对肺腺癌细胞的增殖、迁移和上皮间质转化的影响

目的：探讨微小RNA-138-5p(miR-138-5p)靶向调控程序性死亡配体-1(PD-L1)对肺腺癌细胞（H1299）增殖、迁移及上皮间质转化（EMT）的影响。方法：选择2019年3月至2021年5月在本院手术治疗的肺腺癌患者42例,术中取肺腺癌组织与癌旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测肺腺癌组织、癌旁组织与肺腺癌细胞H1299、HCC827、A549、H1975及支气管上皮细胞BEAS-2B中miR-138-5p表达水平;将H1299细胞分为Control组、miR-138-5p过表达（miR-138-5p mimics）组及阴性对照（miR-NC）组、抑制PD-L1表达（si-PD-L1）组及阴性对照（si-NC）组、miR-138-5p mimics+空载质粒（pcDNA）组和miR-138-5p mimics+PD-L1过表达（PD-L1）组。双荧光素酶报告基因检测miR-138-5p与PD-L1的靶向关系,CCK-8法与细胞划痕实验检测H1299细胞增殖与迁移,Western blotting法检测H1299细胞PD-L1、增殖细胞核抗原（PCNA）、基...     

miR-125a靶向转录无调性碱性螺旋环螺旋转录因子8对肺腺癌恶性进展的影响

目的 探讨miR-125a通过靶向转录无调性碱性螺旋环螺旋转录因子8(ATOH8)对肺腺癌恶性进展的影响。方法 通过在线数据库UALCAN分析ATOH8在肺腺癌中的表达水平及其与患者生存率的相关性,以及miR-125a在肺腺癌中的表达水平及其与肺癌进展的关系;提取肺腺癌及癌旁正常组织总RNA,实时PCR分析ATOH8表达水平差异;将ATOH8过表达载体转染至肺腺癌细胞中,CCK-8法检测过表达ATOH8对肺腺癌细胞存活能力的影响;预测与ATOH8的3’非翻译区（UTR）结合的微RNA(miRNA),将miR-125a模拟物和抑制物转染至肺腺癌细胞中,实时PCR和Western blotting检测ATOH8的表达水平变化。结果 数据库及实时PCR验证结果显示,ATOH8在肺腺癌组织中显著下调（P <0.01）;过表达ATOH8能够显著降低肺腺癌细胞存活能力（P <0.05）;高表达ATOH8组患者5年生存率显著升高（P <0.05）; miR-125a能够与ATOH8的3’UTR结合,显著抑制其表达（P <0.05）。miR-125a在有吸烟史、中晚期和淋巴转移...     

MiR-144-3p在肺腺癌中的机制研究

目的 miR-144-3p在肺腺癌中的作用机制,为肺腺癌的靶向治疗提供新思路.方法 通过qRT-PCR和Western blot检测miR-144-3p和CDH2在肺腺癌细胞中的表达.通过荧光素酶测定miR-144-3p对CDH2的靶向结合关系;采用MTT法检测其生长及增殖能力;通过Transwell实验测定细胞侵袭能...     

miR-21-3p靶向STAT3促进银屑病角质形成细胞增值的研究

目的 探讨miR-21-3p及其靶蛋白信号转导子和转录激活子3蛋白（STAT3）在寻常型银屑病发生过程中角质形成细胞的作用意义。方法 对皮肤组织中STAT3蛋白表达情况的检测选择免疫组织化学法,对健康人群皮肤组织及银屑病患者皮损组织miR-21-3p表达量的检测选择实时荧光定量PCR法,靶基因STAT3和miR-21-3p关系的检测选择双荧光素酶报告基因。化学合成miR-21-3p模拟物、抑制剂,瞬时转染HaCaT细胞,对不同分组细胞进行CCK8、流式细胞凋亡实验,探究分析miR-21-3p调控细胞表型主要作用。对于转染细胞中STAT3蛋白表达情况,选择Western Blot检测。结果 寻常型银屑病患者皮肤组织中miR-21-3p呈高表达（P＜0.05）。STAT3免疫组化阳性表达定位于细胞浆,在银屑病组患者皮损组织阳性表达率为82.22%（37/45）高于正常皮肤组织（P＜0.01）。双荧光素酶报告基因显示miR-21-3p与STAT3存在结合,呈靶向关系。miR-21-3p mimics促进HaCaT细胞增殖活性,抑制细胞凋亡;miR-21-3p inhibitor抑制HaCaT细胞的增殖能力,促使细胞趋向凋亡。miR-21-3p转染HaCaT过表达可对STAT3蛋白表达量产生促进,相反则降低（F=48.632, P＜0.01）。结论 miR-21-3p呈现正调控关系,能够靶向调控STAT3;两者共同作用参与并加重银屑病的病程,并抑制患者细胞凋亡,调节角质形成细胞增值活性     

lncRNA MNX1-AS1通过调控miR-218-5p影响非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡及迁移

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MNX1-AS1通过调控miR-218-5p的表达对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法qRT-PCR检测MNX1-AS1和miR-218-5p在肺癌细胞系及肺正常上皮细胞系中的表达;采用双荧光素酶报告基因实验和RNA pull down实验验证MNX1-AS1和miR-218-5p之间的靶向关系;干扰A549细胞中MNX1-AS1和miR-218-5p的表达后,MTT、流式细胞术和Transwell实验检测MNX1-AS1靶向miR-218-5p对癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果与肺正常上皮细胞系相比,肺癌细胞系中MNX1-AS1表达升高,miR-218-5p表达降低(P＜0.05);荧光素酶报告基因实验显示,MNX1-AS1可与miR-218-5p结合导致荧光素酶活性显著降低(P＜0.05);RNA pull down实验证实miR-218-5p能特异性结合MNX1-AS1(P＜0.05);抑制A549细胞中MNX1-AS1的表达后,miR-218-5p水平上调,细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低,凋亡率显著升高;与MNX1-AS1抑制剂组相比,共抑制MNX1-AS1和miR-218-5p的细胞增殖、迁移、侵袭能力升高,凋亡率下降(P＜0.05)。结论MNX1-AS1可以通过靶向下调miR-218-5p的表达影响非小细胞癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭。     

UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究

目的探讨尿路上皮癌胚抗原1（UCA1）/miR-122-5p/pcDNA-胞质多聚腺苷酸元件结合蛋白1（CPEB1）轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究。方法通过实时荧光反转录定量PCR（RT-qPCR）检测UCA1相关miRNA分子,并通过细胞转染获得miR-122-5p和CPEB1相关细胞株。通过双荧光素酶报告实验分别验证UCA1与miR-122-5p、CPEB1与miR-122-5p的结合。药物敏感性实验获得顺铂药物半抑制浓度（IC50）;通过肿瘤基因组图谱（TCGA）数据库分析CPEB1在肺腺癌中的表达情况以及与免疫细胞功能的关系。结果miR-122-5p在肺腺癌细胞中的表达水平明显升高,并通过双荧光素酶报告实验以验证UCA1与miR-122-5p结合,构建miR-122-5p抑制物和模拟物转染肺腺癌细胞株,发现miR-122-5p抑制后,顺铂IC50浓度下降,而miR-122-5p过表达后,顺铂IC50浓度升高。CPEB1在肺腺癌细胞中的表达水平明显降低,双荧光素酶报告实验证实CPEB1是与miR-122-5p结合,CPEB1过表达后,顺铂IC50浓度减低;对TCGA数据库分析显示肺腺癌组织CPEB1mRNA明显低于癌旁组织,ROC曲线分析显示CPEB1表达水平能较好地用于诊断肺腺癌（AUC=0.849）,进一步分析显示CPEB1表达水平与肺腺癌患者的细胞功能如T细胞、B细胞、CD8+T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞、肥大细胞存在密切关联。结论UCA1与miR-122-5p存在结合位点,后者可影响肺腺癌的顺铂耐药,并与靶基因CPEB1结合;肺腺癌中CPEB1呈低表达,降低肺腺癌顺铂药物的敏感性。UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴有望为干预肺腺癌顺铂耐药的靶点。     

miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响

  目的  探讨miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响。  方法  将宫颈癌HeLa细胞分为对照组、mimic-NC组、miR-503-5p mimic组、E2F3组、mimic+E2F3组,并通过Lipofectamine 2000将质粒分别或者联合转染进入各组HeLa细胞,运用基因预测软件预测靶基因,荧光素实验验证靶向关系,RT-PCR检测miR-503-5p和E2F3的表达,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测Ki67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、E-cadherin和N-cadherin的表达,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移。将裸鼠分为对照组和miR-503-5p mimic组,在裸鼠右后肢腹侧皮下分别注射0.2 mL转染mimic-NC或miR-503-5p mimic的宫颈癌HeLa细胞悬液,第30天颈椎脱位法处死裸鼠,测量肿瘤质量,并用免疫组化方法检测肿瘤组织中Ki67和Vimentin表达情况。  结果  宫颈癌HeLa细胞中miR-503-5p的表达量明显下调,miR-503-5p与E2F3在3′UTR区存在结合位点, miR-503-5p直接靶向作用于E2F3,过表达miR-503-5p抑制E2F3表达; miR-503-5p过表达降低细胞生长速度、Ki67和PCNA表达量,减少侵袭细胞数目,增宽划痕、降低愈合率,上调E-cadherin表达、下调N-cadherin表达（P<0.01）;miR-503-5p过表达减小移植瘤体积、减轻移植瘤重量,减少Ki67和Vimentin的阳性所占比率（P<0.01）。  结论  miR-503-5p通过靶向调控E2F3抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化。     

miR-552-3p通过抑制DACH1促进肝细胞性肝癌细胞增殖、迁移、侵袭功能

目的：探讨miR-552-3p在肝细胞性肝癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）中的表达及其促进细胞增殖和迁移、侵袭功能的机制。方法：qRT-PCR检测HCC细胞系及人正常肝细胞系中miR-552-3p的表达情况;下载TCGA数据库的HCC样本的微阵列数据分析miR-552-3p在HCC癌组织及癌旁组织中是否存在表达差异;miR-552-3p mimics以及miR-552-3p inhibitor转染HCC细胞,荧光素酶报告基因验证miR-552-3p与DACH1是否存在靶向关系,CCK8及Transwell实验检测miR-552-3p及其与DACH1相互作用对于HCC细胞增殖、迁徙、侵袭功能的影响。结果：TCGA数据库中HCC样本的分析结果表明miR-552-3p在HCC中高表达,同时qRT-PCR显示miR-552-3p在HCC细胞系中的表达水平显著高于人肝细胞系L02;miR-552-3p的高表达促进HCC细胞的增殖、迁移、侵袭功能而抑制miR-552-3p的结果则相反;荧光素酶报告实验验证了miR-552-3p靶向作用于DACH1的3’-UTR,上调miR-552-3p的表达抑制DACH1而下调miR-552-3p则DACH1表达增加;DACH1的过表达可抑制HCC细胞相关功能,但同时过表达miR-552-3p后DACH1对于HCC细胞相关功能的抑制即可解除;miR-552-3p正向调控Wnt/β-catenin 信号通路的激活。结论：miR-552-3p靶向作用于DACH1促进HCC细胞增殖、迁移、侵袭功能,并参与调控Wnt/β-catenin 信号。可能作为HCC的诊疗策略提供潜在靶点。     

miR-28-5p靶向Nrf2调控LPS诱导的急性肺损伤机制研究

目的 探究miR-28-5p在LPS诱导的急性肺损伤（acute lung injury,ALI）进程中的功能和分子机制。方法 利用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠急性肺损伤3h,6h,12h,取肺组织进行荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,RT-PCR）检测miR-28-5p表达;同时体外利用LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7发生炎症反应,RT-PCR检测细胞中miR-28-5p表达;巨噬细胞中过表达miR-28-5p mimic后利用LPS刺激,RT-PCR检测巨噬细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）表达情况;RT-PCR和蛋白免疫印迹（western blotting,WB）检测抗氧化关键分子核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶（HO-1）、醌氧化还原酶（NQO1）表达水平;Targetscan 7.0预测miR-28-5p靶向基因,突变结合位点后,并通过荧光素酶报告基因系统检测miR-28-5p对靶基因的转录调控作用。结果 LPS诱导小鼠ALI 3h,6h,12h,肺组织中miR-28-5p的表达水平明显升高（***P＜0.001）;LPS刺激巨噬细胞炎症反应时,细胞内miR-28-5p的表达水平也明显升高（***P＜0.001）;巨噬细胞中过表达miR-28-5p mimic后,炎症因子TNF-α（###P＜ 0.001）和IL-1β（&&&P＜0.001）表达水平明显升高;同时抗氧化关键分子Nrf2（###P＜ 0.001）及其下游HO-1（&&&P＜0.001）、NQO1（$$P＜0.01）表达的明显降低;Targetscan 7.0预测发现miR-28-5p靶向Nrf2基因3'' UTR序列,荧光素酶报告基因实验进一步明确miR-28-5p通过靶向 基因3'' UTR序列调控其转录。结论 miR-28-5p在LPS诱导的ALI中表达上调,并进一步加剧ALI病理进程,其作用机制可能是通过靶向巨噬细胞Nrf2,从而减弱胞内抗氧化能力,促进炎症因子分泌和巨噬细胞的活化。     

miR-93-5p对非小细胞肺癌A549细胞增殖和迁移的影响

目的研究miR-93-5p对非小细胞肺癌A549细胞增殖和迁移的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养非小细胞肺癌细胞和正常肺细胞,检测细胞中miR-93-5p、P53表达水平,将A549细胞分为miR-93-5p低表达(miR-93-5p inhibitor)组、阴性对照(NC)组和空白对照(CK)组,转染48 h后,CKK-8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移能力,生物信息学预测P53是miR-93-5p的直接靶标,进一步采用双荧光素酶实验进行验证,蛋白免疫印迹(Western Blot)检测miR-93-5p低表达对P53蛋白表达及STAT3信号通路相关蛋白表达的影响。结果与正常肺细胞比较,H1299、HCC827、A549肺癌细胞中miR-93-5p表达水平升高,差异有统计学意义(P0.05),P53表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05);转染miR-93-5p inhibitor后,A549细胞中miR-93-5p、p-STAT3、JAK、STAT3表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05),P53相对表达量增加,差异有统计学意义(P0.05);与CK组、NC组相比,A549细胞的增殖、迁移能力均下降,差异有统计学意义(P0.05);TargetScan数据库预测显示P53是miR-93-5p的直接靶标,双荧光素酶报告基因试验证实二者存在靶向关系。Western Blot结果显示:过表达P53后,与CK组、NC组相比,A549细胞中P53蛋白相对表达量增加,差异有统计学意义(P0.05),p-STAT3、JAK、STAT3蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 MiR-93-5p可通过靶向P53调控STAT3信号通路的激活,进而调控肺癌A549细胞的增殖与迁移。     

MicroRNA-34a通过靶基因c-Met抑制施万细胞增殖

目的:探讨坐骨神经横断后,microRNA-34a(miR-34a)对c-Met(肝细胞生长因子受体)的调控作用及对施万细胞增殖的影响。方法:采用Real-time PCR检测miR-34a和c-Met在坐骨神经横断后近侧端的表达变化;Edu染色法检测miR-34a对原代培养的施万细胞增殖能力的影响;双荧光素酶报告基因系统检测miR-34a对c-Met 3’UTR的直接靶向作用。结果:miR-34a与c-Met在坐骨神经横断后近侧端的表达呈负相关,能够抑制原代培养的施万细胞的增殖,并可直接作用于c-Met基因的3’UTR。结论:miR-34a可以直接靶向c-Met的3’UTR,从而通过下调靶基因c-Met的表达抑制施万细胞的增殖。     

MicroRNA-150-5p对肝细胞癌细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的  研究microRNA-150-5p（miR-150-5p）在人正常肝细胞和肝细胞癌细胞中的表达，及其对肝细胞癌细胞增殖、凋亡和周期的影响及潜在机制。方法  通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各处理组细胞中的miR-150-5p的表达水平；MTT法检测miR-150-5p对肝细胞癌细胞增殖的影响；流式细胞术检测miR-150-5p对肝细胞癌细胞凋亡和周期的影响；荧光素酶报告基因实验检测锌指蛋白609是否为miR-150-5p的直接靶基因。结果  miR-150-5p在肝细胞癌细胞系中的表达较人正常肝细胞细胞系降低，miR-150-5p可抑制肝细胞癌细胞的增殖，促进肝细胞癌细胞的凋亡，并阻滞细胞周期于G1期。miR-150-5p在肝细胞癌中发挥肿瘤抑制分子作用的潜在机制为直接靶向抑制ZNF609的表达。结论  miR-150-5p在肝细胞癌细胞中表达降低，并可通过调控ZNF609的表达而调控肝细胞癌细胞增殖、凋亡和周期。

     

miR-124-3p通过负调控Caveolin-1表达N2a/APPswe细胞凋亡率及细胞内钙离子浓度

目的：探讨在阿尔茨海默病（Alzheimer’s diseases,AD）细胞模型中miR-124-3p通过调控Caveolin-1的表达对细胞凋亡率及钙离子浓度的影响。方法：体外培养野生型N2a（N2a/WT）和N2a/APPswe细胞,real-time PCR及Western blot分别检测miR-124-3p与β-淀粉样蛋白前体蛋白（β-amyloid precursor protein,APP）mRNA及蛋白的表达。双荧光素酶报告实验分析miR-124-3p与Caveolin-1之间靶向调控关系。N2a/APPswe细胞瞬时转染miR-124-3p模拟物（mimics）,real-time PCR、Western blot分别检测Caveolin-1 mRNA和蛋白的表达。N2a/APPswe细胞分别瞬时转染miR-124-3p模拟物（mimics）、pcDNA-Caveolin-1、Caveolin-1-siRNA,流式细胞仪分析细胞凋亡水平,测定细胞内游离钙离子浓度。结果：与WT组相比,APPswe组APP mRNA和蛋白水平表达都明显升高（分别为P=0.000,P=0.000）,miR-124-3p表达明显降低（P=0.000）。双荧光素酶报告实验表明,和与突变型载体（pGL3-Caveolin-1 3’UTR MUT）共转染组相比,与野生型载体（pGL3-Caveolin-1 3’UTR WT）共转染组的相对荧光素酶活性和明显减弱（P=0.004）;转染miR-124-3p mimics后,与空载体组比较,miR-124-3p mimcs转染组的Caveolin-1 mRNA和蛋白的表达明显下调（分别为P=0.000,P=0.000）;分别转染miR-124-3p mimics、Caveolin-1-siRNA后,与空载体组比较,细胞凋亡率降低（分别为P=0.000,P=0.000）,游离钙离子浓度降低（分别为P=0.000,P=0.000）;转染pcDNA-Caveolin-1后,得到与上述相反的结果（分别为P=0.000,P=0.000）。结论：miR-124-3p可以通过靶向下调Caveolin-1的表达,抑制AD细胞凋亡,降低细胞中游离钙离子浓度,从而发挥神经保护作用,为AD的防治提供新的思路和靶点。     

不同双荧光素酶方法对检测胃癌相关miRNAs靶向基因TIAM1的影响

目的:探讨不同双荧光素酶实验方法对检测胃癌相关miRNAs靶向基因TIAM1的影响。方法:从胃癌细胞系BGC823基因组中提取T-细胞淋巴瘤侵袭转移诱导基因(TIAM1)的3’非编码区(3’-UTR)片段全长,将TIAM1-3’UTR构建在2种不同的荧光素酶基因质粒上,选择8个miRNAs进行双荧光素酶实验研究。结果:miR-10b的抑制物使2种质粒的相对荧光素酶活性均升高;miR-651和miR-653的抑制物使2种质粒的相对荧光素酶活性变化完全相反;miR-10b-5p的抑制物和类似物(mimic)分别使psi-TIAM1-3’UTR的相对荧光素酶活性增高和减弱;而miR-372-3p、miR-373-3p和miR-653-5p的抑制物和类似物处理组荧光素酶活性均升高,miR-335-3p的抑制物和类似物处理组荧光素酶活性均减低。结论:进行双荧光素酶实验时psi-TIAM1-3’UTR这类2种基因位于同一质粒且不以Renilla作为内参的质粒较为合适,并发现miR-10b-5p能够直接靶向作用于TIAM1-3’UTR。     

miR-144负性调节大鼠巨噬细胞TOLL样受体2的表达

目的明确TOLL样受体2（TLR2）与microRNA144（miR-144）作用之间的关系。方法利用不同浓度的miR-144的模拟物
（mimics）和抑制剂（inhibitor）瞬时转染大鼠巨噬细胞系NR8383细胞,RT-qPCR检测miR-144和TLR2及其下游分子TNF-α的
表达。利用大鼠肝脏cDNA为模板,PCR获取目的片段（即含miR-144 野生及突变结合位点的TLR2 mRNA的3’UTR区）;用
SacⅠ、XbaⅠ双酶切pmirGLO报告基因载体和含miR-144野生及突变结合位点的TLR2 mRNA的3’UTR区,构建携带上述片段的双
荧光素酶报告基因,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒,即pmir-TLR2-3’UTR及pmir-mutant-TLR2-3’UTR;并
用miR-144 的mimics 与双荧光素酶报告基因共转染明确miR-144 与TLR2 mRNA的3’UTR 区的靶向关系。结果瞬时转染
100 nmol/L miR-144 mimics后,NR8383细胞中miR-144表达显著升高,而TLR2及其下游分子TNF-α表达显著下降;而100 nmol/L
miR-144 inhibitor作用则相反。PCR和双酶切DNA测序结果证实pmir-TLR2-3’UTR及pmir-mutant-TLR2-3’UTR重组载体构
建成功;用100 nmol/L miR-144 mimics与空载体及上述两个构建体分别共转染HEK 293T细胞后,pmir-TLR2-3’UTR转染组相
对荧光素酶活性显著降低。结论miR-144通过靶向结合TLR2 mRNA的3’UTR区负性调节TLR2及其下游促炎因子的表达。
     

miR-152和miR-448靶向于Rictor并抑制结直肠癌细胞增殖

目的筛选靶向于Rictor mRNA表达的miRNAs并研究其在结直肠癌中的调控作用。方法采用软件预测筛选可能靶向 于Rictor mRNA表达的miRNAs,用所预测的miRNAs转染KM12SM细胞株,利用qRT-qPCR和Western blotting进一步确定对 Rictor表达具显著调控作用的miRNAs。在此基础上,利用双荧光素酶报告系统进一步确定可结合到Rictor mRNA的3’UTR区 对其转录后进行调节的miRNAs。利用细胞存活检测和克隆形成实验进一步确证所筛选miRNAs对细胞存活和克隆形成的影 响。结果miR-152 和miR-448 对Rictor 表达均具显著抑制作用（P<0.01,P<0.05）,且miR-152 和miR-448 可结合到Rictor mRNA的3’UTR区,显著抑制荧光素酶活性（P<0.01,P<0.05）,对其进行转录后进行调节,miR-152和miR-448过表达均可显著 抑制结直肠癌细胞株KM12SM的生长和增殖。结论miR-152和miR-448可能通过靶向于Rictor mRNA进而抑制其蛋白表达, 最终负调控结直肠癌的生长和克隆形成。     

miR-590-5 p靶向调控STAT3基因对骨肉瘤143 B细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-590-5p和信号转导与转录激活因子3(STAT3)基因在骨肉瘤143B细胞中的表达,探讨miR-590-5p对STAT3基因的靶向作用及其对143B细胞迁移和侵袭的影响.方法:运用生物信息学方法对miR-590-5p和STAT3基因的靶向配对关系进行预测,采用荧光素酶报告系统鉴定;脂质体2000转染miR-590-5p模拟物以及干扰STAT3的siRNA后,real-time PCR检测miR-590-5p和STAT3 mRNA在癌细胞中的表达,Western blotting检测STAT3蛋白在癌细胞中的表达,细胞划痕实验检测癌细胞的迁移情况以及Transwell小室检测癌细胞体外的侵袭性.结果:生物信息学软件TargetScan和miRanda显示miR-590-5p和STAT3基因二者靶向配对良好,荧光素酶报告系统鉴定发现miR-590-5p能够抑制STAT3 mRNA表达.Real-time PCR和Western blotting检测结果均表明过表达miR-590-5p能够降低STAT3 mRNA和蛋白的表达.细胞划痕实验和Transwell实验发现过表达miR-590-5p能够分别抑制143B细胞的迁移和侵袭.结论:miR-590-5p通过负性靶向调控骨肉瘤143B细胞中STAT3基因的表达,进而抑制癌细胞的迁移和侵袭.     

微小RNA-128-3p靶向调控高尔基体膜蛋白1对肺腺癌细胞增殖的作用

目的:观察微小RNA-128-3p(miR-128-3p)和高尔基体膜蛋白1(GOLM1)在肺腺癌细胞系中的表达特征，探讨miR-128-3p是否通过介导GOLM1调控肺腺癌细胞的增殖。方法:选择人肺癌细胞系SK-LU-1和A549、人永生化肺上皮细胞系16HBE,对SK-LU-1和A549分别建立miR-128-3p inhibitor组、siRNA-GOLM1组，并分别设立空白对照组，应用Western blot法检测GOLM1和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达，应用实时荧光定量PCR法检测miR-128-3p的表达，应用CCK-8检测细胞增殖活性，挽救实验观察小干扰RNA-GOLM1逆转miR-128-3p inhibitor对PCNA表达的影响。结果:肺腺癌细胞系SK-LU-1和A549中miR-128-3p的表达量均明显低于16HBE,GOLM1和PCNA的表达量均明显高于16HBE(均P<0.05)。肺腺癌细胞系SK-LU-1和A549中，miR-128-3p inhibitior组中GOLM1的表达均明显高于空白对照组(均P<0.05),siRNA-GOLM1...     

微小RNA-506-3p调控UHRF1抑制大肠癌细胞转移的机制

目的 探讨微小RNA-506-3p(miR-506-3p)通过调控含PHD及指环结构域的类泛素蛋白1（UHRF1）的表达,进而影响大肠癌细胞转移能力的机制。方法 利用生物信息学的方法预测并筛选UHRF1上游可能发挥调控作用的miRNA-506-3p;在大肠癌细胞及组织中分别检测miR-506-3p及UHRF1的表达水平并分析其相关性;运用荧光素酶报告基因技术检测miR-506-3p与UHRF1 3′非翻译区（3′UTR）特异性结合的情况;荧光定量PCR（qRT-PCR）及Western blot检测大肠癌细胞转染miR-506-3p类似物（mimics）后对UHRF1表达水平的影响;构建UHRF1过表达的大肠癌稳转细胞株,分别转染miR-506-3p mimics及其对照序列（mimics control）后,利用Transwell实验检测处理前后大肠癌细胞转移能力的变化。结果 相对于正常大肠上皮细胞及癌旁组织而言,miR-506-3p在大肠癌细胞及组织中的表达均下调（均P<0.05）,且与UHRF1的表达水平呈负相关（r=-0.456,P=0.044）;miR-506-3p通过其“种子序列”与UHRF1 3′UTR特异性结合（P<0.01）,并减少了UHRF1的mRNA及蛋白表达（均P<0.01）;转染miR-506-3p mimics抑制了大肠癌LoVo细胞的转移能力（P<0.01）,而在此基础上增加UHRF1的表达则逆转了miR-506-3p的抑制作用（P<0.01）。结论 miR-506-3p通过调控UHRF1抑制了大肠癌细胞的转移能力,在大肠癌中发挥抑癌基因的作用。