不同冷冻载体对小鼠MⅡ期卵母细胞玻璃化冻、融技术影响

目的比较不同冷冻方法对小鼠成熟卵母细胞的冻存率和冻后发育潜能的影响,试图建立玻璃化冷冻技术平台,为人类卵母细胞玻璃化冷冻提供理论与技术参考。方法以昆明品系小鼠为实验材料、以玻璃化冷冻技术为基本方法冻存小鼠成熟卵母细胞。实验分为新鲜周期对照组和玻璃化冷冻组,玻璃化冷冻组又再分为开放式拉长麦管(OPS)组、自制麦管组和冷冻叶片(cryoleaf)组,比较其存活率、受精率、卵裂率和囊胚形成率。结果新鲜周期对照组和玻璃化冷冻组之间受精率差异无显著性,卵裂率差异亦无显著性(P>0.05),但是囊胚形成率之间差异有显著性(P<0.05);OPS组与自制麦管组之间存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率之间差异均无显著性(P>0.05);OPS组与cryoleaf组比较存活率之间差异有显著性(P<0.05),受精率、卵裂率、囊胚形成率之间差异均无显著性(P>0.05);自制麦管组与cryoleaf组之间存活率之间差异有显著性(P<0.05),而受精率、卵裂率、囊胚形成率之间差异无显著性(P>0.05)。结论OPS法和cryoleaf法均可以用于冷冻昆明小鼠卵母细胞,但cryoleaf法更安全可靠。     

Effect of three different loadings on vitrification of oocyte

目的 以小鼠成熟卵母细胞(MⅡ期)为试验对象,应用3种不同载体对其行玻璃化冷冻,旨在分析载体对冷冻效果的影响.方法 采用玻璃化冷冻技术冻存昆明种小鼠成熟卵母细胞,设新鲜对照组和玻璃化冷冻组,玻璃化冷冻组又分为开放式脉管(OPS)组、自制麦管组和Cryoleaf组.比较冻融后鼠卵的存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果 新鲜对照组和玻璃化冷冻组的受精率、卵裂率差异无统计学意义,但囊胚形成率差异有统计学意义(P<0.05);OPS组与自制麦管组的鼠卵存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义;OPS组与Cryoleaf组比较,存活率差异有统计学意义(P<0.05),受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义;自制麦管组与Cryoleaf组比较,存活率差异有统计学意义(P<0.05),而受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义.结论 载体的不同会对卵母细胞玻璃化冷冻效果形成一定程度的影响.     

3种不同载体对卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响

目的以小鼠成熟卵母细胞(MⅡ期)为试验对象,应用3种不同载体对其行玻璃化冷冻,旨在分析载体对冷冻效果的影响。方法采用玻璃化冷冻技术冻存昆明种小鼠成熟卵母细胞,设新鲜对照组和玻璃化冷冻组,玻璃化冷冻组又分为开放式脉管(OPS)组、自制麦管组和Cryoleaf组。比较冻融后鼠卵的存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果新鲜对照组和玻璃化冷冻组的受精率、卵裂率差异无统计学意义,但囊胚形成率差异有统计学意义(P<0.05);OPS组与自制麦管组的鼠卵存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义;OPS组与Cryoleaf组比较,存活率差异有统计学意义(P<0.05),受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义;自制麦管组与Cryoleaf组比较,存活率差异有统计学意义(P<0.05),而受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义。结论载体的不同会对卵母细胞玻璃化冷冻效果形成一定程度的影响。     

不同冷冻载体对小鼠成熟卵母细胞玻璃化冷冻的影响

目的:探讨玻璃化冷冻小鼠成熟减数第二次分裂中期(MⅡ期)卵母细胞的最佳冷冻载体及冷冻方法。方法:用乙二醇和蔗糖为玻璃化冷冻保护剂,将小鼠成熟MⅡ期卵母细胞分为冻融、暴露和对照组。冻融组分别采用普通麦管、封闭式拉细麦管(CPS)和开放式拉细麦管(OPS)作载体,采用玻璃化快速冷冻和快速复温的方法冻存小鼠成熟卵母细胞;暴露组卵母细胞仅暴露在冷冻和复苏液中,不进行冷冻;对照组卵母细胞不接触冷冻和复苏液。观察各组处理后卵子回收、受精、卵裂等情况。结果:冻融组普通麦管、CPS和OPS处理的卵母细胞回收率分别为92.0%、92.3%和72.3%,OPS处理卵母细胞的回收率显著低于普通麦管和CPS处理的卵母细胞(P<0.001);普通麦管、CPS和OPS处理的卵母细胞复苏存活率分别为43.5%、72.2%和76.5%,CPS和OPS处理卵母细胞的复苏存活率显著高于普通麦管组处理的卵母细胞(P<0.001)。冻融、暴露和对照组的卵裂率分别为38.6%、69.2%和73.5%,冻融组显著低于暴露和对照组(P<0.001)。结论:CPS法在玻璃化冷冻保存成熟的卵母细胞方面有价值。     

一种安全有效的卵母细胞封闭式玻璃化冷冻载体

目的 探讨封闭式玻璃化冷冻载体冻存小鼠卵母细胞的可行性.方法 以小鼠MII期卵母细胞为模型,以开放式玻璃微细管法(GMP)为对照组,比较两种玻璃化冷冻载体对小鼠卵母细胞冷冻后的存活率、受精率、卵裂率及囊胚率的影响.结果卵母细胞经冻融后,封闭式冷冻载体组和GMP组的存活率、受精率、卵裂率和囊胚率均没有明显差异(92.80%vs 93.11%,49.80%vs 51.67%,36.73%vs 35.83%,12.65%vs 14.17%%;P>0.05).结论 封闭式冷冻载体能安全、有效的冷冻保存小鼠卵母细胞.     

人类卵子改良程序化冷冻和玻璃化冷冻的比较研究

【】目的：研究两种冷冻方法对人类卵子冻融结果的影响。方法：分为程序化冷冻卵子与玻璃化冷冻卵子两组,对于卵子冻融后的复苏率、受精率以及优质胚胎率等指标进行比较。结果：程序化冷冻组卵子的复苏率(71.05%,108/152)显著低于(P<0.05)玻璃化冷冻组(81.75%,103/126),但优质胚胎率(41.07%,23/56)显著高于(P<0.05)玻璃化冷冻组(30.23%,13/53),而受精率、卵裂率及囊胚形成率无统计学差异。结论：玻璃化冷冻卵子可以获得较高的复苏率,但使用改良程序化冷冻试剂盒冻融卵子,可能较玻璃化冷冻获得更好发育潜能。     

左卡尼汀对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞体外受精结局的影响

目的：研究左卡尼汀对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的影响。方法：将卵母细胞分为新鲜组（存活卵数243个）,玻璃化冷冻组（解冻卵数282个）,左卡尼汀高、中、低剂量（2．0、1．0、0．5 g／L）组（解冻卵数分别为285、280和279个）。观察各组卵母细胞中GSH含量、ROS水平以及卵母细胞存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率。结果：5组卵母细胞GSH含量、ROS 水平及卵母细胞存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均有统计学意义（ F ＝881．290、182．760及χ2＝113．361、21．560、16．660、9．667,P均＜0．05）。与新鲜卵母细胞比较,玻璃化冷冻卵母细胞中GSH含量降低,ROS水平升高,卵母细胞存活率、受精率、卵裂率均降低（ P＜0．05）。左卡尼汀呈剂量依赖性地增加玻璃化冷冻卵母细胞中GSH含量,降低ROS水平（P＜0．05）;高剂量左卡尼汀可明显改善玻璃化冷冻卵母细胞的存活率（ P＜0．05）。结论：左卡尼汀可通过抗氧化作用改善玻璃化冷冻卵母细胞的结局。     

两种玻璃化装载工具对人卵母细胞冻融效果的比较

目的 比较自制的Cryotop装载管与商用的Cryotop装载管对人卵母细胞玻璃化冻融效果.方法 冷冻时采用自制的Cryotop装载者为A组,采用商用的Cryotop装载者为B组.比较采用两种装载工具冻融体外受精胚胎移植(IVF-ET)中48 h后受精失败MⅡ(metaphase Ⅱ )卵子(A1、B1组)、获卵日MⅡ卵母细胞(A2 、B2组)及单精子显微注射(ICSI)患者的GV(germinal vesicle)卵子(A3、B3组).结果 冻融受精失败MⅡ卵母细胞部分: A1、B1组的回收率和存活率分别为93.9%、96.8%、82.9%和86.2%,相互比较差异无统计学意义(P>0.05);新鲜MⅡ卵母细胞部分: A2组的回收率、存活率、受精率、卵裂率和优胚率分别为100%、100%、80%、100%和25%; B2组的回收率、存活率、受精率、卵裂率和优胚率分别为100%、100%、60%、100%和33.3%;A2、B2组比较差异无统计学意义;GV期卵子, A3与B3组的回收率、存活率、GVBD率和MⅡ率分别为:100%与90%,81.3%与77.8%,92.3%与85.7%,83.3%与66.7%,与对照组比较差异均无统计学意义.结论 自制Cryotop装载管具有价格低廉的优点且并没有降低冻融效果,可以作为临床运用,特别是科研使用的一种玻璃化冷冻的装载工具.     

人成熟卵母细胞冻融的研究

目的 探讨冷冻保护剂中不同蔗糖浓度对人成熟卵母细胞冻融的影响.方法 根据冷冻液中蔗糖浓度的不同,将收集到的人成熟卵母细胞分为0.1 mol/L组、0.2 mol/L组、0.3 mol/L组,分别采用程序化慢冻-快融法,比较三组人成熟卵母细胞复苏后的存活情况及其行单精子卵泡浆内注射(ICSI)后受精率、卵裂率和优质胚胎形成率.结果 0.1 mol/L组、0.2 mol/L组、0.3 mol/L组解冻后的存活率分别为23.1%,40.8%,59.4%,三组比较差异有统计学意义(P＜0.05);而受精率、卵裂率、优质胚胎形成率三组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 提高蔗糖浓度能明显提高人成熟卵母细胞解冻的存活率.     

3种玻璃化冷冻小鼠生发泡期卵母细胞效果比较

目的:比较3种玻璃化冷冻对小鼠生发泡期卵母细胞的存活及胚胎发育潜能的影响.方法:将小鼠生发泡期卵丘复合物(n=175、177、190)和裸卵(n=150、149、150)分别随机分为3组:采用一步乙二醇法、乙二醇加二甲基亚砜法、三步乙二醇法进行冷冻保存.解冻存活体外培养成熟后行卵胞浆内单精子显微注射受精,进一步评价胚胎发育潜能.结果:冻融小鼠生发泡期卵丘复合物,三步乙二醇法与一步乙二醇法的存活率、成熟率、受精率均高于乙二醇加二甲基亚砜组(P均<0.05);三步乙二醇法的优质胚胎和囊胚率均高于一步乙二醇法和乙二醇加二甲基亚砜法(P均<0.05).冻融小鼠生发泡期裸卵,三步乙二醇法的存活率及三步乙二醇法、一步乙二醇法的受精率及卵裂率均高于乙二醇加二甲基亚砜法(P均<0.05).三步乙二醇法中,卵丘复合物组的存活率、成熟率、受精率、卵裂率及优质胚胎率均高于裸卵组(P均<0.05).结论:3种玻璃化冷冻中,三步乙二醇法可以获得高质量的冻融小鼠生发泡期卵母细胞,是一种理想的冷冻方法;带完整卵丘颗粒细胞的生发泡期卵母细胞的冻融效果更佳.     

Influence of two embryo freezing methods on cumulative pregnancy rate

目的 比较玻璃化法和程序法对人第3天卵裂期胚胎冻融移植周期累积妊娠率的影响.方法 选取程序化冻融周期92例、玻璃化法冻融周期179例,比较分析这两种冻融方法在存活率、累积临床妊娠率等方面的效果.结果 玻璃化法在胚胎复苏存活率(94.3％ vs 53.9％,P＜0.01)、复苏完整胚胎形态(89.4％ vs 36.3％,P＜0.01)、累积临床妊娠率(28.2％ vs 43％,0.01＜P ＜0.05)等方面均明显优于程序化法,但在在胚胎植入率(13.7％ vs 13.5％)、流产率(18.2％ vs 22.4％)等方面差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 与程序化法比较,玻璃化法可以提高累积妊娠率,是一种高效胚胎冻融方法.     

玻璃化冷冻与慢速程序冷冻法保存人MⅠ期卵母细胞的效果比较

目的:探讨玻璃化冷冻与慢速程序冷冻法对人未成熟卵母细胞的存活及胚胎发育潜能的影响。方法:体外受精-胚胎移植中获得的251个MⅠ期卵母细胞随机分3组,第1组94个先玻璃化冷冻保存,第2组63个先慢速程序冷冻保存,两组冻融后的未成熟卵母细胞再进行IVM,用ICSI技术对成熟卵母细胞完成授精,并进行体外胚胎培养。第3组94个MⅠ期卵母细胞先进行IVM,再进行玻璃化冷冻保存,与第1组先玻璃化冷冻保存再IVM的顺序不同,冻融后同样用ICSI技术对获得的成熟卵母细胞完成授精,并进行体外胚胎培养。结果:玻璃化冻融组复苏存活率、体外成熟率、受精率、及卵裂率均高于慢速程序冻融组(P均<0.05);先玻璃化冷冻再IVM与先IVM再玻璃化冷冻的复苏存活率、体外成熟率、可用卵比率、受精率及卵裂率无统计学意义(P均>0.05)。结论:玻璃化冻融人未成熟卵母细胞能获得更好的冷冻保存效果;玻璃化冷冻与IVM的顺序不影响未成熟卵母细胞的利用。     

程序化与玻璃化冷冻保存人D2和D3胚胎的临床结局比较

目的比较程序化和玻璃化冷冻保存人D2和D3胚胎的临床结局,分析探讨不同冷冻方法对人D2和D3胚胎冷冻的影响。方法回顾性分析了本中心170个D2和D3胚胎复苏周期,比较程序化和玻璃化冷冻复苏后的存活率、卵裂球存活指数、完胚率、≥1完胚移植率、种植率、临床妊娠率、流产率等指标。结果程序化解冻移植周期47个,存活率73.60%,卵裂球存活指数65.88%,完胚率31.46%,≥1完胚移植率80.85%,胚胎种植率14.17%,临床妊娠率36.17%,流产率11.76%。玻璃化解冻移植周期120个,存活率92.96%,卵裂球存活指数86.49%,完胚率68.04%,≥1完胚移植率90.83%,胚胎种植率18.84%,临床妊娠率35.83%,流产率9.30%。玻璃化冷冻比程序冷冻能显著提高胚胎存活率、卵裂球存活指数和完胚率(P<0.05),但在≥1完胚移植率、临床妊娠率、胚胎种植率和流产率上无显著性差异。无论采用哪种冷冻方法,D2和D3胚胎在所有统计指标上差异均没有显著意义。结论玻璃化冷冻是一种有效的冷冻方法,其复苏存活率、卵裂球存活指数和完胚率均明显高于程序化冷冻,可作为传统程序化冷冻的替代方法。D3胚胎冷冻没有比D2胚胎更有优势,对于工作量较大的IVF实验室可选择D2胚胎冷冻移植。     

冷冻载体对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻效果影响的研究

目的探讨不同冷冻载体对小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻回收率、复苏率和解冻后胚胎发育潜能的影响。方法以小鼠卵母细胞为实验材料,以玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵母细胞,分别以冷冻叶片（A）组、冷冻小钩（B）组、电镜铜环（C）组、自制冷冻叶片（D）组为冷冻载体冷冻小鼠卵母细胞,通过对解冻后卵子回收率、复苏率、卵子受精率及早期胚胎发育率等分析判断冻存效果。结果回收率D组明显低于其他3组,差异有统计学意义（P〈0.01）;D组与其他3组卵母细胞冷冻保存后卵子复苏率、胚胎受精率、继续发育潜能的比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 4种玻璃化冷冻载体都是小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体,自制叶片组的卵子回收率明显低于其他3组,需更进一步熟练叶片制作的技术和实验人员操作技能。     

不同成熟时期山羊卵母细胞冷冻保存研究

目的比较山羊卵母细胞在不同成熟时期解冻后体外成熟、体外受精及胚胎发育能力。方法收集山羊生殖泡（GV）期未成熟卵和成熟卵,分5组行开放式拉细麦管（OPS）法玻璃化冷冻,Ⅰ组：直接冷冻GV期卵;Ⅱ组：GV期卵在体外培养（IVC）8h后冷冻;Ⅲ组：GV期卵在IVC16h后冷冻;Ⅳ组：GV期卵体外培养成熟（IVM）后冷冻;Ⅴ组：直接冷冻体内成熟卵。解冻后比较各组卵受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率。结果Ⅰ组（GV期卵）冷冻解冻后存活率达56.8%,显著高于Ⅱ组（33.3%）、Ⅲ组（31.6%）、Ⅳ组（28.9%）及Ⅴ组（30.4%）,差异有高度统计学意义（均P〈0.01）。各组体外受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论采用OPS法玻璃化冷冻山羊GV期卵较冷冻其他成熟时期卵效果好。     

鼠成熟卵母细胞冷冻与复苏的实验研究

目的 探讨不同的植冰温度和冷冻保护剂中蔗糖浓度对小鼠MⅡ期卵子冷冻复苏后形态结构及发育潜能的影响.方法 共收集小鼠MⅡ期卵子372个,随机分为A、B、C三组冷冻.A组冷冻保护液含0.1 mol/L蔗糖,在-6℃植冰;B组冷冻保护液中蔗糖浓度同A组,在-7℃植冰;C组冷冻保护剂中蔗糖浓度为0.2 mol/L,在-7℃植冰.分别对冷冻复苏后的卵子进行质量评估、受精及胚胎培养,观察并比较其受精及卵裂情况.结果 MⅡ期卵子复苏后存活率以及优质卵率A组较B组好,但差异无统计学意义(P>0.05);A组卵子冻融后的受精卵卵裂率(82.35%)高于B组(38.46%),其差异有统计学意义(P<0.05);而受精率和优质胚胎率虽然A组高于B组,但无统计学差异(P>0.05).C组的卵子冻融后存活率(82.61%)、优质卵率(78.26%)、受精卵卵裂率(76.92%)均分别高于B组(68.24%,52.94%,38.46%),其差异有统计学意义(P<0.05);受精率和优质胚胎率C组与B组相比较无统计学差异(P>0.05). 结论 植冰温度升高不影响MⅡ期卵子的冻融效果,而且可能有助于保护卵子的发育潜能;在冷冻保护液中,0.2mol/L蔗糖浓度比0.1mol/L更适合于MⅡ期卵子的冷冻.     

玻璃化冷冻法对冻融胚胎移植周期结局的影响

目的:探讨玻璃化冷冻法对冻融胚胎移植周期结局的影响.方法:对324个玻璃化冷冻人卵裂期胚胎复苏周期和146个程序化慢速冷冻胚胎复苏周期进行分析,比较2组冷冻胚胎复苏后的存活率、完整率、种植率、临床妊娠率、孕周、新生儿身高及体质量等指标.结果:玻璃化冷冻组的胚胎完整率、临床妊娠率均高于程序化慢速冷冻组(83.24％ vs...     

叶酸在玻璃化冷冻中对小鼠卵母细胞的影响

目的探讨叶酸对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻的影响。方法将卵母细胞随机分为新鲜组、玻璃化冷冻组、叶酸低、中、高剂量(50、100和200mg/L)组。比较各组卵母细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量、活性氧(ROS)水平以及卵母细胞存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率。结果低、中、高剂量的叶酸均可增加卵母细胞内GSH含量(F=23.814,P<0.01),降低卵母细胞内ROS水平(F=11.209,P<0.01),提高卵母细胞存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率(χ2=124.815、21.117、15.172和9.834,P<0.05)。结论叶酸对玻璃化冷冻卵母细胞具有保护作用,可能与其抗氧化作用相关。     

OPS法及自制冷冻叶法玻璃化冷冻小鼠MⅡ期卵母细胞的研究

目的:以小鼠为研究模型,建立优化的玻璃化冷冻卵母细胞方法以及研究超排卵对卵母细胞质量的影响,为人类卵母细胞玻璃化冷冻技术的改善提供基础研究依据.方法: 建立小鼠超排卵周期模型,比较ops(open pulled straw,开放式拉细麦管)和(自制)冷冻叶两种玻璃化冷冻方法冷冻小鼠MⅡ期卵母细胞的复苏率及体外受精率.结果:超排卵周期组中(自制)冷冻叶法玻璃化冷冻卵母细胞复苏率为66.5%,高于OPS法的冷冻复苏率(45.2%),2者比较差异有统计学意义(P<0.05).(自制)冷冻叶法玻璃化冷冻卵母细胞冷冻后体外受精率为47.4%,高于OPS法的冷冻后体外受精率(32.9%),2者比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:(自制)冷冻叶玻璃化法冷冻是小鼠MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻的较优方法.     

颗粒细胞在玻璃化冷冻中对卵母细胞的影响

目的 采用开放式拉细麦管(open pulled straws，OPS)法玻璃化冷冻技术，探讨卵丘颗粒细胞对未成熟卵母细胞冻融后存活率及其发育能力的影响。方法 小鼠生殖泡期卵丘-卵母细胞复合物(COC)或完全去颗粒细胞后的裸卵(DO)用OPS法玻璃化冻存，复苏后行体外成熟培养(IVM)；COC直接行IVM作为对照组。结果 COC及裸卵冻融后存活率(分别为69．49％、77．90％)、成熟率(分别为56．10％、56．74％)无显著性差异，但成熟率均显著低于对照组(82．28％)。结论 在未成熟卵的玻璃化冷冻中颗粒细胞对卵母细胞冻存无保护作用。