体外培养甲状腺细胞IGF－1 mRNA在大鼠增龄的表达

【目的】探讨体外培养F344大鼠甲状腺细胞胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因表达不同鼠龄改变规律，以及观察IGF-1在衰老中的意义。【方法】选择大鼠10周、45周、65周、100周、150周5个鼠龄组的甲状腺，用原代培养法的改良方法进行培养。45周、100周、150周的大鼠甲状腺细胞培养至14d抽提细胞内总的RNA。应用RT-PCR方法检测甲状腺细胞IGF-1 mRNA表达情况，并进行各鼠龄组比较。【结果】各鼠龄组体外培养至14d的甲状腺细胞所抽提细胞内总的RNA量随着鼠龄增加而降低，各组比较差异有统计学意义；各鼠龄组甲状腺细胞均检测到IGF-1的mRNA表达。IGF-1 mRNA的表达量于10周的大鼠组较低，45周的大鼠组最高，之后随着鼠龄增加而逐步降低，其表达量与鼠龄明显相关。【结论】体外培养大鼠甲状腺细胞的总RNA量随着鼠龄增加而降低，各鼠龄组甲状腺细胞均表达IGF-1 mRNA。其表达量随鼠龄增加而改变。     

电针对糖尿病大鼠坐骨神经NGF mRNA和IGF-1 mRNA表达的影响

目的观察电针对糖尿病大鼠坐骨神经组织中神经生长因子(NGF)mRNA和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)mRNA表达的影响,初步探讨电针治疗糖尿病周围神经病变的机制。方法SD大鼠115只,随机分成空白组35只、造模组80只。后者经腹腔注射链脲佐菌素(STZ)造模,成模动物共73只。随机抽取70只,分成模型组与电针组各35只,电针组每天电针45min。所有动物分批于试验开始后第1、2、4、6及10周后处死,取坐骨神经,抽提总RNA。采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测坐骨神经组织中NGF、IGF-1的水平。结果模型组NGFmRNA及IGF-1mRNA的表达水平比空白组显著降低(P0.05)。电针组NGFmRNA及IGF-1mRNA的表达随电针的干预时间而逐渐升高;第4周NGFmRNA明显高于空白组和模型组,差异有统计学意义(P0.05),至第10周时仍维持较高水平,明显高于空白组和模型组,差异有统计学意义(P0.05);在第2周时电针组IGF-1mRNA的表达开始显著上升,第4周达到高峰,明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05),至第10周时仍维持较高水平,明显高于空白组和模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论NGFmRNA和IGF-1mRNA在糖尿病大鼠坐骨神经中表达降低,电针刺激促使大鼠坐骨神经的NGFmRNA和IGF-1mRNA的表达增加可能是电针治疗糖尿病神经病变的机制之一。     

消渴灵浓缩液对糖尿病大鼠坐骨神经IGF-1 mRNA表达的影响

目的：探讨消渴灵浓缩液对糖尿病大鼠坐骨神经IGF-1 mRNA表达的影响。方法：将30只链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型随机分为模型组、西药对照组、中药治疗组,每组10只。另选10只鼠龄、体重相匹配的大鼠作为正常组。采用相对定量逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测病程8周后各组大鼠坐骨神经IGF-1 mRNA表达的水平。结果：中药组、西药组、正常大鼠组坐骨神经IGF-1 mRNA相对表达量均增加,差异无统计学意义（P=0.213,P=0.822,P=0.304）;模型组坐骨神经IGF-1 mRNA相对表达量下降,与中药组、西药组、正常大鼠组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。IGF-1 mRNA表达水平与血糖呈负相关（P<0.05）。结论：糖尿病大鼠坐骨神经组织IGF-1 mRNA的表达下降,消渴灵浓缩液可上调糖尿病大鼠坐骨神经IGF-1 mRNA的表达水平,可能是消渴灵浓缩液防治糖尿病周围神经病变的作用机制之一。     

体外培养人成骨细胞BGP、IGF-1基因表达的增龄改变

目的　探讨体外培养不同年龄组人成骨细胞BGP、IGF 1基因表达的增龄改变规律。方法　选择≤ 5岁、3 0～ 4 0岁、5 0～ 60岁、≥ 70岁 4个年龄组的松质骨 ,用 1∶1DMEM HamF 12培养液进行培养。不同年龄组两代人成骨细胞培养至 14d抽提细胞内总RNA ,应用RT PCR方法半定量检测BGP、IGF 1基因表达情况 ,并进行各年龄组比较。结果　各年龄组体外培养至 14d的两代人成骨细胞所抽提的细胞内总RNA量随增龄而降低 (男r=- 0 .783 ,女r=- 0 .873 ,均P <0 .0 0 1) ;各年龄组成骨细胞均检测到BGP与IGF 1的mRNA表达。BGP与IGF 1mRNA表达量于幼年组较低 ,3 0～ 4 0岁最高 ,之后随年龄增长逐渐降低 ,其表达量和年龄明显相关 (BGP男r2 =0 .3 2 8,女r2 =0 .3 0 1;IGF 1男r2 =0 .3 0 3 ,女r2 =0 .3 3 8,均P <0 .0 5 ) ,性别之间未见明显差异。结论　体外培养人成骨细胞的总RNA量随增龄而降低 ,不同年龄组人成骨细胞均表达BGP、IGF 1mRNA ,其表达量随增龄而改变     

麦冬多糖对脂肪细胞胰岛素敏感性的作用机制

【目的】研究麦冬多糖对3T3-L1细胞诱导分化的脂肪细胞胰岛素敏感性作用机制的研究。【方法】将实验分为5组：模型对照组、阳性对照罗格列酮组、麦冬多糖低、中、高剂量组。体外诱导分化3T3-L1细胞为脂肪细胞,ELISA法检测各实验组3T3-L1脂肪细胞上清液中肿瘤坏死因子-α的表达量;RT-PCR法检测各实验组3T3-L1脂肪细胞瘦素、脂联素、抵抗素mRNA的表达水平。【结果】与模型对照组相比：其他实验组肿瘤坏死因子-α表达量降低,且3T3-L1脂肪细胞肿瘤坏死因子-α表达量随着麦冬多糖剂量的增加而降低;瘦素、脂联素mRNA表达升高,且3T3-L1脂肪细胞瘦素、脂联素mRNA表达随着麦冬多糖剂量的增加而增高;抵抗素mRNA的表达量随着麦冬多糖剂量的增加而降低。【结论】麦冬多糖降糖作用的部分机制可能与促进脂肪细胞高表达瘦素、脂联素而抑制TNF-α、抵抗素的表达而增加胰岛素的敏感性有关。     

NHE-1反义RNA对大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨NHE-1反义RNA对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)凋亡的影响.方法构建NHE-1反义RNA逆转录病毒载体,转染体外培养的大鼠PASMC,应用半定量RT-PCR法(sqRT-PCR)测定细胞内NHE-1 mRNA的表达、BCECF法测定pHi、流式细胞仪测细胞周期、电镜及原位细胞凋亡检测(TUNEL法)观察细胞凋亡情况.结果转染NHE-1反义RNA逆转录病毒载体的细胞,NHE-1 mRNA表达量及pHi较空载体转染细胞及未转染细胞显著降低,细胞凋亡率显著增加,电镜示细胞凋亡,凋亡小体形成.结论抑制NHE-1可通过引起细胞内酸化,诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡.     

miR-210inhibitor对大鼠背脊髓神经元细胞氧化应激的保护作用

【目的】观察mi R-210 inhibitor对大鼠背脊髓神经元细胞氧化应激的保护作用。【方法】体外培养大鼠背脊髓神经元细胞,随机分成正常组,H2O2组,H2O2联合mi RNA Negative control组以及H2O2联合mi R-210 inhibitor组。采用MTT法检测细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧,Elisa检测NOX2。【结果】q PCR结果显示,100μmol/L H2O2处理可导致大鼠背脊髓神经元细胞内mi R-210表达量上升7.34倍;转染mi R-210 inhibitor可明显抑制mi R-210的表达量;MTT结果显示,抑制mi R-210的表达可明显降低H2O2对大鼠背脊髓神经元细胞存活率的抑制作用;流式细胞仪检测发现抑制mi R-210的表达可以明显阻止H2O2对大鼠背脊髓神经元细胞凋亡的诱导,显著降低凋亡率;进一步研究发现,转染mi R-210 inhibitor可显著性降低H2O2诱导的细胞内NOX2和ROS的表达。【结论】H2O2刺激鼠脊髓神经元细胞导致细胞内mi R-210表达的上调;降低mi R-210的表达能够降低细胞内NOX2和ROS的表达,抑制NOX2/ROS通路从而减缓H2O2对大鼠背脊髓神经元细胞造成的损伤,推测mi R-210可以作为脊髓损伤治疗的靶点。     

IGF-1及其受体在老年大鼠甲状腺细胞表达的研究

胰岛素生长因子-1(IGF-1)广泛地存在于体内各组织器官,DHEA调节IGF-1分泌起到了重要的作用[1].本实验利用体外培养老年大鼠甲状腺细胞观察DHEA刺激IGF-1 mRNA转录量及提高IGF-1的浓度、IGF-1的IR(受体),报告如下.     

邻苯二甲酸二乙基己酯体外对大鼠卵巢颗粒细胞Bax和Bcl-2基因表达的影响

【目的】通过对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯（di-2-ethylhexylphthalate,DEHP）染毒,探讨DEHP体外对大鼠卵巢颗粒细胞Bax和Bcl-2基因表达及细胞凋亡的影响。【方法】体外分离和原代培养未成熟大鼠卵巢颗粒细胞,用不同浓度的DEHP（10、50、nnmol／L）染毒24h。荧光定量PCR法检测Bax和Bcl-2基因mRNA表达水平,Weas[ernblot检测Bax和Bcl-2蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。【结果】与对照组比较,大鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2基因mRNA和蛋白表达下降（P〈0．05）,Bax基因mRNA和蛋F1表达增加（P〈0．05）,同时细胞凋亡率增加（P〈0．05）,呈浓度依赖关系。【结论】DEHP可通过下调Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达而诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,进而影响卵巢功能。     

冷暴露大鼠下丘脑、垂体、脾淋巴细胞内神经白细胞素mRNA的变化

神经白细胞素(NLK)是既作用于神经系统又作用于免疫系统的蛋白质(Mr 56 000),其表达调控于mRNA水平.150只SD纯系雄性大鼠分为对照组和冷暴露1,2,3,4周组.RNA打点杂交结果表明,大鼠冷暴露期间神经内分泌系统(垂体、下丘脑)和免疫系统(脾淋巴细胞)中 NLK mRNA的变化均一致,即RNA杂交点灰度比值:1周时增加到原值的1.63-11.31倍,2周时降低到原值的0.63倍,3周时再次增加到原值的1.92-21.09倍.这是对寒冷环境的一种普遍性反应.体外培养的淋巴细胞内合成蛋白质与上清中分泌蛋白质经SDS-PAGE放射自显影图谱分析表明淋巴细胞内NLK与其mRNA含量变化不呈平行关系,与对照组相比,冷暴露1周组NLK电泳条带极浅,而冷暴露2,3,4周组NLK放射自显影电泳条带明显增浓.这很可能是冷适应动物Ig合成增加的一个主要原因.     

IGF-1 mRNA expression of adult rat thyroid cell cultured in vitro

Withageincreasing ,fibrosis,cellinfiltration ,folliclevariation ,nodformation ,thyroidweightloss ,lessthyroidhormoneoccursinthyroid .Inrecentyears ,thereweremanyresearchesfortherelationshipbetweenthyroidfunctionandagingaswellasthethy roidfunctioninpostponingaging[1] ,butthestudyofmolecularlevelonthechangeofthyroidcellandageingisless .IGF 1distributesinallorgansandtissues .IGF 1ofthyroidcellplaysanimportantroleinthyroidfunctionregulation[2 ] .Ourexperimentinvestigatesthelawofage relatedchange…     

糖基化终产物诱导肾系膜细胞CTGF mRNA表达的规律

目的:探讨糖基化终末产物(AGEs)对大鼠肾系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达的影响。 方法：在体外培养的大鼠肾系膜细胞培养基中,分别加入不同浓度的糖化牛血清白蛋白（AGE-BSA）及牛血清白蛋白（BSA）,RT-PCR法检测细胞转化生长因子β₁ (TGF-β₁)和结缔组织生长因子(CTGF) mRNA表达。 结果：与加入BSA组比较,AGE-BSA组TGF-β₁和CTGF mRNA表达明显增强（P<0.01）,TGF-β₁ mRNA表达增强发生时间早于CTGF。 结论：AGEs能明显诱导肾系膜细胞CTGF mRNA表达上调,并且具有时间和剂量依赖性。     

二氢杨梅素可逆转SKBR3细胞对赫赛汀的耐药：基于上调miR-98-5p抑制IGF1R/HER2二聚体形成

目的 探索二氢杨梅素对SKBR3细胞miR-98-5p表达影响及在赫赛汀耐药发生中的机制。方法 通过TargetScan在线数据库对IGF2和miR-98在乳腺癌中的表达及相互作用进行生信分析。细胞实验培养SKBR3细胞并构建耐曲妥珠单抗的SKBR3-R细胞和裸鼠异种移植瘤模型,免疫印迹法和免疫组化法检测细胞和组织内关键信号蛋白表达及其磷酸化水平。shRNA慢病毒载体构建转染细胞系,RT-qPCR检测细胞内RNA表达水平,MTS法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭。荧光素酶实验验证RNA间的相互作用,免疫共沉淀法分析IGF-1R/HER2异源二聚体含量。结果 在SKBR3-R细胞中IGF2、pIGF1R、p-Akt、p-S6K水平高于SKBR3细胞,而PTEN蛋白表达正好相反（P<0.05）;SKBR3-R细胞中IGF1R/HER2异源二聚体含量升高（P<0.01）;转染miR-98-5p的SKBR3-R细胞内IGF2 mRNA表达水平变化无统计学意义（P>0.05）,但IGF2表达水平降低,细胞侵袭能力降低（P<0.05）;经二氢杨梅素饲养后耐药裸鼠肿瘤组织中miR-98-5p表达上调,IGF2表达下降,对赫赛汀敏感性升高（P<0.05）。 结论 二氢杨梅素通过诱导SKBR3-R细胞内miR-98-5p表达,使其结合IGF2 mRNA 降低IGF2水平,进一步抑制IGF-1R/HER2异源二聚体形成,从而逆转细胞对赫赛汀耐药。     

Smad3介导补肾中药对增龄成骨细胞VDR mRNA表达的影响

目的：探讨smad3是否介导了补肾中药对增龄成骨细胞VDR mRNA表达的影响,从而阐明补肾中药具有促进骨形成的机制。方法：分离6月龄和16月龄SD大鼠成骨细胞,采用组织块翻转方法培养,通过倒置显微镜观察细胞形态,并以矿化结节染色对成骨细胞加以鉴定。将SD大鼠随机分为正常组、生理盐水组、单味补阳组（固本壮骨粉）、复方补阳组（金匮肾气丸）、复方平补组（补肾益精方）、复方补阴组（知柏地黄丸）和西药对照组（阿法骨化醇片）,制备药物血清;当成骨细胞汇合达60％,换无血清培养液培养细胞24h后,加入含药血清（浓度为10％）再继续培养3d。采用RT-PCR方法检测含药血清干预后成骨细胞smad3和VDR mRNA的表达。结果：在增龄成骨细胞smad3 mRNA表达是下降的,这与增龄所致VDR mRNA表达下降相一致;单味补阳组、复方补阳组和西药对照组上调smad3 mRNA的趋势与它们上调VDR mRNA的趋势相一致。结论：补阳中药可能通过启动Smad3 mRNA表达而上调VDR mRNA表达,从而促进骨形成。     

甲状腺激素与胰岛素样生长因子—1在衰老中的研究

目的：观察增龄对血清甲状腺激素（ＴＨ）及胰岛素样生长－１（ＩＧＦ－１）的影响及用小剂量ＴＨ治疗健康老人，观察其血清ＴＨ及ＩＧＦ－１水平的变化。方法：把不同年龄的成年人分为青壮年组、老年前组及老年组，分别检测其ＴＨ、ＩＧＦ－１、肝功能及心电图。并对老年组用小剂量ＴＨ治疗。每天服甲状腺片１０ｍｇ，连服６个月，分别于第３和第６个月后再复查以上检测指标，同时观察有关衰老症状的变化及药物的毒副作用。结果：老     

IGF1和IGF1R在甲状腺乳头状癌组织中的表达

目的：探索胰岛素样生长因子 1(IGF1)及其受体(IGF1R)在甲状腺乳头状癌发生、发展中的作用,寻找新的甲状腺乳头状癌诊断标志物,并为甲状腺乳头状癌的病因研究寻找新的理论依据。方法:以15例正常人甲状腺组织标本作对照,对62例经手术切除并由病理证实的甲状腺乳头状癌患者的癌、癌旁及正常区组织标本进行研究,应用RT PCR方法,检测IGF1/IGF1R在甲状腺癌组织与正常人甲状腺组织中的表达。结果:甲状腺乳头状癌组IGF1/IGF1RmRNA的表达量明显高于正常对照组(P＜0.01)。甲状腺乳头状癌患者的癌、癌旁及正常区组织中IGF1/IGF1RmRNA的表达量按正常、癌旁、癌组织顺序逐渐增高(P＜0.01)。结论:IGF1/IGF1R的高表达促进了甲状腺上皮细胞的异常增殖,提示IGF1/IGF1R可作为甲状腺乳头状癌诊断的标志物。     

Effects of Shenggu Injection (生骨注射液) on mRNA Expression of Vascular Endothelia Growth Factor in Rat Osteoblasts in vitro

Vascular endothelia growth factor(VEGF),one of the most effective growth factor of angio-genesis,is known to have a significant action inpromoting the development of new blood vessels.A great number of research work showed thatVEGF plays an i mportant role in fracture heal-ing(1).In previous studies,much has been repor-ted about ectogenic VEGF in promoting fracturehealing.Yet experi ment in promoting endogeneticVEGF has been seldom reported.Following thedevelopment of molecular biology,…     

地黄多糖诱导大鼠BMSCs向神经样细胞分化中对Notch信号通路的影响

目的 探讨地黄多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经样细胞过程中对Notch信号通路的影响。方法 以大鼠BMSCs为研究对象,取P3～P5代细胞随机分为正常对照组(CON组)与地黄多糖诱导组(RGP组),诱导后连续培养7d。以免疫细胞化学法和Western blotting检测诱导后0、1、3、7d各时点Notch1、Jagged1蛋白和Notch1胞内段NICD蛋白的表达,Real-time PCR检测Notch信号通路相关分子mRNA。结果 免疫荧光法检测显示,RGP组与CON组比较各时点Notch1蛋白表达阳性率差异有统计学意义(P＜0.01),且随时间变化Notch1蛋白表达阳性率逐渐降低;Jagged1蛋白阳性细胞率从诱导结束0d到诱导后1d具有明显的上升趋势,1d到7d显著下降,各时点比较差异有统计学意义(P＜0.05), CON组与RGP组各时点比较差异具有统计学意义(P＜0.05);Western blotting检测结果与免疫荧光检测结果相似。Real-time PCR检测显示,RGP组Notch1 mRNA随时间变化表达下降,Presenilin1表达先降低后略有回升,Hes1表达下降,Mash1表达升高,Jagged1表达先升高后降低,各时点与CON组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。结论 地黄多糖在诱导BMSCs向神经样细胞分化过程中抑制Notch1蛋白的表达,并影响Notch信号通路相关基因的表达。     

胰岛素样生长因子在人胎盘绒毛滋养层细胞的基因表达

目的探讨胰岛素样生长因子系统（IGFs）在体外培养的胎盘绒毛滋养层细胞中的基因表达及其作用。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测58例体外培养的胎盘绒毛滋养层细胞中IGF—ⅠmRNA、IGF—ⅡmRNA、IGF—IRmRNA、IGF-ⅡRmRNA、IGFBP-1mRNA、IGFBP-2mRNA、IGFBP-3mRNA、IGFBP-4mRNA、IGFBP-5mRNA、IGFBP-6mRNA等10种胰岛素样生长因子的基因表达。结果58例体外培养的胎盘绒毛滋养层细胞均有IGF—ⅠmRNA、IGF—ⅡmRNA的基因表达；56例存在IGF—ⅠRmRNA、IGF—ⅡmRNA、IGFBP-3mRNA的基因表达；2例同时检测出上述10种基因。结论IGFs可能在早期细胞滋养层的侵入、增殖分化、胎盘形成和胚胎生长发育过程中以自分泌或旁分泌方式发挥重要的调节作用。