人c—fos原癌基因cDNA克隆及核酸序列分析

本研究应用逆转录ＰＣＲ方法从Ｊｕｒｋａｔ传代细胞株获得－３８０ｂｐ的人ｃ－ｆｏｓ原癌基因ｃＤＮＡ片段，并将其克隆到具有双向转录启动子的栽体质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）中。核酸序列分析表明，所克隆的ｃＤＮＡ片段包括人ｃ－ｆｏｓ基因外显子２的大部分，外显子３的全部及外显子４的一部分。该重组质粒可分别用于制备ｃ－ｆｏｓ ｃＤＮＡ探针和ＲＮＡ探针，为ｃ－ｆｏｓ基因结构，表达调控等方面的研究奠定了工作基础。     

人穿孔素cDNA的克隆与序列分析

引言穿孔素（ｐｅｒｆｏｒｉｎ）又称成孔蛋白（ｐｏｒｅｆｏｒｍｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＰＦＰ）,是一种主要由激活的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）和自然杀伤（ＮＫ）细胞所产生的溶细胞蛋白,贮存于细胞的杀伤颗粒中,在细胞介导的杀伤过程中起非常关键的作用［１］。...     

人Hrs cDNA的克隆与序列分析

以小鼠ＨｒｓｃＤＮＡ为探针从人胎盘ｃＤＮＡ文库中克隆出人ＨｒｓｃＤＮＡ，其全长为２９１０ｂｐ，所编码的蛋白质含７７７个氨基酸。人ＨｒｓｃＤＮＡ与小鼠ＨｒｓｃＤＮＡ间高度保守。推定的氨基酸序列含有锌指样结构域、脯氨酸丰富区及脯氨酸、谷氨酰胺丰富区。     

大鼠全长OBRb cDNA克隆及真核表达重组体的构建

目的克隆SD大鼠全长长胞内段瘦素受体基因cDNA(OBRb cDNA)及构建其真核表达重组体,为进一步研究该基因打下基础.方法应用RT-PCR方法分段扩增全长OBRb cDNA,再将它们连接起来,并获得载有全长OBRb cDNA的阳性克隆质粒.将上述质粒中全长OBRb cDNA定向插入真核表达质粒pcDNA3中,筛选出阳性克隆.通过限制性内切酶酶切和核苷酸序列测定进行鉴定.结果重组的克隆质粒和真核表达质粒经限制性内切酶酶切后获得的片段大小均与理论值一致.结论成功地克隆了SD大鼠全长OBRb cDNA,并构建了真核表达重组体.     

从Hep-2细胞克隆hFGF-2 cDNA及序列分析

目的 从Hep-2细胞(人喉鳞癌细胞)克隆人的FGF-2cDNA,用于下一步构建携带hFGF-2cDNA的非复制型腺病毒载体。方法 设计和合成引物,提取Hep-2细胞的总mRNA,通过RT-PCR扩增出目的cDNA,然后将其重组到pGEM-T Easy载体中送测序分析。结果 经基因测序分析表明,从Hep-2细胞克隆的hFGF-2基因序列与已报告的序列,除在ATG后的第24位碱基发生无意突变外(由G-A),其他序列则完全一致。结论 从Hep-2细胞的总mRNA中成功克隆出hFGF-2的基因片段。     

人血管形成素cDNA克隆和序列分析

０　引言　人肿瘤的发生、转移和血管形成密不可分．近年来,已发现多种具有血管形成活性的因子,如纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）,转化生长因子（ＴＧＦ）,血管形成素（ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ）等．其中血管形成素是第一个肿瘤来源的具有血管形成活性蛋白,在体外可以诱导鸡胚绒毛尿囊膜及兔角膜血管形成［１］,因此可能在肿瘤发生中有重要作用．文献［２,３］报道,从人肝ｃＤＮＡ文库中获得人血管形成素的基因全长,并推导出氨基酸．我们利用ＲＴＰＣＲ从人肺癌细胞株Ａ５４９中提取总ＲＮＡ,成功克隆了人血管形成素ｃＤＮＡ,其序列…     

人bit1 cDNA基因的克隆、测序及表达

目的: 克隆并在大肠杆菌中表达人bit1 cDNA基因. 方法: 从新鲜的胎盘组织中提取总RNA,经反转录成单链cDNA, 以此为模板扩增出人bit1 cDNA基因,将该基因克隆入载体pUC19中,测序正确后亚克隆入表达载体pGEX-4T3中进行表达. 结果: 利用所设计的引物扩增出完整的人bit1 cDNA基因.以大肠杆菌为宿主在IPTG的诱导下获得表达,激光薄层扫描显示表达蛋白占总蛋白的40.6%. 结论: 获得了人bit1 cDNA基因及其原核表达产物,对研究人Bit1蛋白的功能具有重要的意义.     

FMS样酪氨激酶3受体配基基因的克隆和序列分析

目的 获得人FLcDNA膜外序列,以构建表达人FMS样酪氨激酶3受体配基（FL）蛋白的重组本,更深入地探讨FL的生物学功能。方法 通过设计和合成引物,提取胎肝细胞总RNA进行逆转录反应,经PCR扩增目的cDNA片段,并将其重组至PUC－18T载体中,测定其DNA序列。结果 从胎肝细胞总RNA中扩增得到546bp片段,序列测定证实该片段为包括25个氨基酸残基组成的信号肽的胞外序列。结论 FL胞外区cDNA已被成功地克隆。     

从Hep-2细胞克隆hVEGF165/VEGF121基因及序列分析

目的 从Hep-2(喉鳞癌细胞)克隆hVEGF165、hVEGF121cDNA并重组到克隆载体中，用于下一步构建表达VEGF165、VEGF121的腺病毒载体。方法 设计和合成引物，提取Hep-2细胞的总mRNA，进行逆转录～聚合酶链反应(RT-PCR)，扩增出两个目的cDNA，并将其重组到pGEM-T Easy载体中送测序。结果 从Hep-2细胞的总mRNA中反转录扩增得到588bp和456bp的片段，经重组送测序证实两基因分别与GenBank中的［GI：19909064]及[GI：6631028]提供序列完全一致。结论 从Hep-2细胞我们成功获得VEGF165、VEGF121的cDNA并构建其克隆载体可供进一步研究。     

高亲和力IgE受体α链cDNA的克隆及序列测定

目的：为获得编码高亲和力ＩｇＥ受体（ＦｃεＲ１）α链的ｃＤＮＡ序列。方法：从正常人外周血中富集嗜碱性粒细胞,提总ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ,分子克隆,用自动测序及放射自显影测序。结果：分离并鉴定了该ｃＤＮＡ重组子,在１５９密码子及１８５密码子分别发现了ＣＡＣ→ＣＧＣ与ＴＡＴ→ＣＡＴ置换。结论：建立了一个编码ＦｃεＲ１膜外区α链的ｃＤＮＡ重组子克隆,它不含引导肽序列,可能是一个来自中国人的该基因的变异体     

人脂联素基因全长cDNA克隆

目的克隆人脂联素(ADPN)基因cDNA,为进一步研究ADPN的功能提供实验基础.方法应用RT-PCR方法从中国人大网膜脂肪垫总RNA中扩增出ADPN cDNA全长基因,克隆入载体pMD18-T中,形成重组载体pMD18-T/人 ADPN.筛选出阳性克隆,通过限制性内切酶酶切鉴定后对其进行测序.结果从脂肪组织总RNA中扩增得到745bp片段ADPN基因,其cDNA序列与GenBank人ADPN基因序列相同.结论成功地克隆ADPN基因全长cDNA.     

人血管生成素cDNA克隆及其在组织细胞中表达分布研究

血管生成素是一种具有明显促血管新生的蛋白因子,属于有特殊生物学功能的RNA酶家族.我们从人外周血白细胞中克隆了血管生成素cDNA,进行了DNA序列对比分析.同时对其在不同组织和细胞系中的表达情况进行了检测,并首次利用RT-PCR法在KG-1、Jurkat、HepG2、Tf-1、HL60、HEL和神经胶质细胞中检出血管生成素mRNA,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.     

人肌肉组织中GLUT4 cDNA的克隆及测序

目的：通过RT-PCR，以特异引物，从人新鲜手术肌肉组织获得人葡萄糖转运子4(GLUT4)cDNA基因，并体外克隆入测序载体，获得具有正确序列的目的基因．方法：经GeneBank在线检索，确定人GLUT4 cDNA基因特异引物，采用反转录聚合酶链方法从1例人手术新鲜腹部肌肉组织RNA模板中，获得人GLUT4表达片段cDNA的基因，经克隆入测序载体pGEM-3zf(-)，自动测序，验证cDNA大小及序列．结果：以我们设计的特异引物，从人肌肉组织模板中能得到预期大小的人GLUT4 cDNA基因RT-PCR产物，并能插入预定的克隆载体中测序，所得基因的序列符合目的基因的序列．结论：从人肌肉组织中能获得具有正确序列、含完整起始及终止密码的人GLUT4 cDNA基因。     

人存活素基因编码区的克隆和序列分析

目的：克隆人存活素(survivin)基因编码区cDNA并进行序列分析。方法：以人骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板，采用RT-PCR方法得到人存活素的编码区cDNA，克隆至载体pUC19中，酶切鉴定后进行序列分析。结果：获得人存活素编码区基因和重组质粒pUC19-SURVIVIN，DNA序列分析证实所获得的存活素基因编码区cDNA序列和文献报道一致。结论：采用基因克隆的方法获得人存活素基因，为进一步研究其结构和功能奠定了基础。