曲古抑菌素A对鼻咽癌CNE3细胞增殖抑制作用

目的 探讨曲古抑菌素A(TSA)对鼻咽癌CNE3细胞周期阻滞与凋亡影响及作用机制。方法 以不同浓度TSA作用鼻咽癌CNE3细胞株,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞生长抑制率;流式细胞术测定TSA作用前后鼻咽癌细胞调亡情况及细胞周期变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析鼻咽癌细胞中细胞周期素依赖性蛋白激酶相互作用蛋白1(p21)mRNA表达的变化。结果 100～500 nmol/L TSA对CNE3细胞生长有明显抑制作用,呈剂量依赖性,抑制率为17.74%～44.33%;400,500 nmol/L TSA可在DNA合成期(S)、DNA合成后期/有丝分裂期(G₂/M)诱导CNE3细胞周期阻滞,并诱导细胞凋亡,24 h凋亡率为(14.67±0.21)%,(18.73±1.80)%,48 h凋亡率分别为(16.3±0.96)%,(39.17±1.27)%,与对照组(9.16±1.05)%比较差异均有统计学意义(P<0.05);TSA可诱导CNE3细胞内p21基因表达。结论 TSA可明显抑制CNE3细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制与p21基因异常表达有关。     

曲古抑菌素A对肺癌细胞株H322抑制效应及机制的研究

目的 评价曲古抑菌素A(TSA)对肺癌细胞株H322的生长抑制效应及机制.方法 以四氮甲基唑蓝、流式细胞术观察TSA作用后,肺癌细胞株H322的生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等变化,Western blot分析细胞周期相关蛋白p21、抗凋亡蛋白survivin及细胞外信号调节激酶(ERK)的表达.结果 TSA对H322具有时间依赖性和浓度依赖性的生长抑制作用;TSA作用48h及96h后,H322细胞凋亡及G2/M期细胞明显增加(P＜0.05).p21蛋白表达水平显著提高,survivin蛋白及磷酸化ERK蛋白表达显著下降.结论 TSA对肺癌细胞株H322生长具有抑制作用,其机制可能是上调p21蛋白的表达,引起细胞周期的阻滞;同时抑制survivin的表达,阻断ERK信号通路,导致细胞凋亡.     

对曲古抑菌素A敏感的人肺腺癌细胞株的初步筛选

目的初步筛选不同p53表达型肺癌细胞株对曲古抑菌素A（TSA）敏感性不同的影响因素。方法分别以体外药物敏感试验（MTT法）、流式细胞术观察TSA处理3种肺癌细胞株（H1299为p53缺失型,H322为p53变异型,A549为p53野生型）后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化;用Western blot法检测3种细胞的人类表皮生长因子受体2（HER2）表达水平。结果TSA对3种细胞均有抑制作用,在96h时对A549的IC50抑制作用明显低于对H1299和H322的IC50（P〈0.05）,A549细胞凋亡也明显多于H1299和H322的细胞凋亡（P〈0.05）。3种细胞株HER2蛋白表达水平由高到低依次为H322、A549和H1299,与TSA的IC50值之间无相关性。结论TSA对p53不同表达型人肺腺癌细胞株均有生长抑制作用,肺腺癌细胞株p53的不同表达型可能对TSA的敏感性产生影响,而HER2的表达强度不影响TSA的敏感性。     

对曲古抑菌素A敏感的人肺腺癌细胞株的初步筛选

目的初步筛选不同p53表达型肺癌细胞株对曲古抑菌素A（TSA）敏感性不同的影响因素。方法分别以体外药物敏感试验（MTT法）、流式细胞术观察TSA处理3种肺癌细胞株（H1299为p53缺失型,H322为p53变异型,A549为p53野生型）后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化;用Western blot法检测3种细胞的人类表皮生长因子受体2（HER2）表达水平。结果TSA对3种细胞均有抑制作用,在96h时对A549的IC50抑制作用明显低于对H1299和H322的IC50（P〈0.05）,A549细胞凋亡也明显多于H1299和H322的细胞凋亡（P〈0.05）。3种细胞株HER2蛋白表达水平由高到低依次为H322、A549和H1299,与TSA的IC50值之间无相关性。结论TSA对p53不同表达型人肺腺癌细胞株均有生长抑制作用,肺腺癌细胞株p53的不同表达型可能对TSA的敏感性产生影响,而HER2的表达强度不影响TSA的敏感性。     

曲古抑菌素A阻断Stat3信号通路诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的本实验研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对前列腺癌细胞DU145的抑制作用及其对信号传导与转录激活因子3(Stat3)信号通路的影响。方法采用不同浓度的TSA处理DU145不同时间后,四氮甲基唑蓝比色法测定TSA对细胞活力的抑制效应;流式细胞仪分析细胞周期的改变;蛋白印迹实验检测细胞凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase)家族的Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3、二磷酸腺苷核糖多聚酶(PARP)及Stat3信号蛋白活性(phospho-Stat3)的变化。结果 TSA时间和剂量依赖性地抑制DU145细胞的增殖,TSA处理细胞24 h和48 h后,细胞生存率分别是85.7%和68.7%;细胞经TSA处理后,细胞形态和细胞周期均发生明显的变化,细胞周期被阻断在G0/G1期,其细胞百分比从55.6%增加到68.5%;Western blot检测结果显示,TSA作用DU145细胞后,Stat3信号蛋白的磷酸化水平下降,同时IL-6对Stat3的刺激诱导作用也被TSA所阻断;Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3、PARP等凋亡蛋白被TSA诱导活化,并发生显著剪切。结论 TSA能够通过抑制Stat3信号通路的活性来诱导DU145细胞凋亡。     

曲古菌素A对胃癌细胞SGC-7901增殖抑制的研究

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)对胃癌细胞SGC-7901增殖活性的抑制作用。方法:采用不同浓度的TSA处理胃癌细胞SGC-7901,MTT法检测药物作用前后的细胞增殖情况。流式细胞仪检测TSA处理前后细胞周期的变化。结果:75 ng/ml TSA在48 h时就出现明显抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖。抑制由12 h至72 h显著增加,细胞周期检测发现75 ng/ml TSA即可导致细胞G2期阻滞,抑制细胞增殖。结论:TSA可抑制体外胃癌细胞SGC-7901的生长,诱导SGC-7901细胞出现G2期阻滞。     

二十二碳六烯酸联合5-氟尿嘧啶对人肝癌细胞HepG2耐药相关蛋白表达的影响

目的研究二十二碳六烯酸(DHA)联合5氟尿嘧啶(5-FU)对人肝癌细胞HepG2耐药相关蛋白ERK、JNK及p38的表达。方法 Western blot检测5-FU5μg/mL,或5-FU5μg/mL联合DHA30μg/mL作用HepG2细胞48h后ERK、JNK及p38蛋白表达。结果与单用5-FU组比较,5-FU联合DHA组对耐药相关蛋白的影响,p-ERK明显受到抑制,而p-JNK表达显著增加,p-p38表达无差别。结论 DHA对肝癌细胞耐药相关蛋白的调控可能通过抑制ERK、激活JNK信号通路来增强5-FU的细胞毒活动,发挥增敏化疗药物的作用。     

外阴尖锐湿疣细胞受5-氟尿嘧啶影响的结构变化观察

目的:观察5-氟尿嘧啶对外阴尖锐湿疣(CA)细胞超微结构影响。方法:40例CA病人,用5-氟尿嘧啶进行治疗,采用电子显微镜超薄切片法观察治疗前后CA细胞的超微结构有无改变。结果:通过对比发现,用5-氟尿嘧啶治疗后CA细胞的超微结构发生改变,出现细胞凋亡。结论:5-氟尿嘧啶对外阴CA细胞超微结构有影响。     

5-氟尿嘧啶对人类绒癌JAR细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对人类绒毛膜癌JAR细胞增殖及凋亡的影响。方法:MTT法检测5-FU对JAR细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测5-FU对JAR细胞DNA含量的改变;倒置显微镜及荧光显微镜下观察JAR细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变。结果:MTT抑制实验得出5-FU对JAR细胞的增殖具有一定程度的抑制作用,且抑制作用呈时间、剂量依赖性;5-FU0μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml处理JAR细胞24h,通过倒置光学显微镜可观察到JAR细胞的形态变化,可见随着5-FU浓度的增加,JAR细胞逐渐缩小、变圆、分散,细胞核减少;用流式细胞仪检测5-FU对JAR细胞DNA含量的改变发现:12h均未诱导出凋亡,直到24h5-FU处理组才诱导出凋亡,48h由于JAR细胞耐酸性低,出现自溶现象,干扰实验结果,因此只选择24h为实验时间点。0μg/ml(对照组)、20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml5-FU处理JAR细胞24h后,流式细胞术检测发现5-FU处理组可诱导绒癌细胞凋亡。5-FU在0μg/ml~40μg/ml范围内可以呈剂量依赖性促进JAR细胞凋亡,在40μg/ml~80μg/ml范围内,凋亡反而降低。40μg/ml、60μg/ml5-FU处理组凋亡率与对照组相比差异有统计学意义。在0μg/ml~80μg/ml范围内5-FU处理组细胞坏死增加,呈剂量依赖性。坏死率高于不加5-FU的对照组,差异具有统计学意义;Ho-echst33342/PI荧光染色结果显示,典型的细胞凋亡形态学改变,可见典型的凋亡小体,表现为核染色质聚集、核固缩、核碎裂。20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml各处理组的凋亡率均显著高于对照组(P<0.01),80μg/ml处理组的坏死率也显著高于对照组。结论:5-FU对JAR细胞的增殖具有一定程度的抑制作用,5-FU对绒毛膜癌JAR细胞有凋亡诱导作用。     

5-氟尿嘧啶联合异维A酸治疗女性外阴尖锐湿疣

文章采用单用5-氟尿嘧啶、单用异维甲酸及两药联用治疗妇科尖锐湿疣患者,观察比较三者临床效果。三种方法治疗尖锐湿疣效果均较理想,采用5-氟尿嘧啶联合异维甲酸治疗可更有效控制患者病情复发。     

姜黄素与氟尿嘧啶抗人结肠癌细胞株HT-29增殖的协调作用研究

目的:检测姜黄素能否增强氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)抗结肠癌细胞的增殖作用,并探讨其与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白表达的关系。方法:应用中位效应原理和联合作用指数法来定量姜黄素与FU的联合作用。应用Westernblot分析联合应用两种药物之后对于COX-2蛋白表达的影响。结果:姜黄素和FU的半数生长抑制率(IC50)分别为15.9±1.96和17.3±1.85μmol/L。当姜黄素与FU联合应用时,在较高的作用水平可以定量地观察到对HT-29细胞的协同抑制作用。并且这种协同作用随COX-2蛋白表达水平下调。结论:姜黄素可以增强FU的化学治疗效果,在结肠癌的临床治疗方面联合应用这两种药物可能具有实际意义。     

TSA诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及对FHIT表达的影响

[目的]研究去乙酰化转移酶抑制剂TSA对人肝癌HepG2细胞的作用及其FHIT表达的影响。[方法]培养的人肝癌HepG2细胞随机分为两组:对照组给予等量DMSO,实验组给予终浓度分别为125、250、500、1 000、2 000nmol/L的TSA,培养24 h后收集细胞,MTT比色法检测细胞活性,TUNEL法检测细胞凋亡率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学检测FHIT的mRNA和蛋白表达水平。[结果]与对照组相比,经TSA处理的细胞增殖速度明显减慢,TUNEL阳性细胞百分率随TSA浓度的升高呈剂量依赖性增高(P﹤0.01),细胞FHIT mRNA表达增强(P﹤0.01),FHIT蛋白表达差异具有统计学意义(P﹤0.01)。[结论]TSA可能通过抑制HDACs的活性,上调FHIT表达,诱导细胞凋亡而抑制肝癌细胞生长。     

二氧化硒诱导的正常肝细胞株及肝癌细胞株的凋亡

目的 :　研究中毒剂量二氧化硒 ( Se O2 )对正常肝细胞 HL- 770 2及肝癌细胞 SMMC-772 1的影响。方法 :　用流式细胞术观察不同浓度硒对两种细胞的损伤作用及对两种细胞 Bcl- 2 ,P5 3蛋白表达的影响。结果 :　 30 μmol/L的硒作用 48h可以明显抑制正常肝细胞株 HL- 770 2及肝癌细胞株 SMMC- 772 1的增生与活力 ,诱导两种细胞的凋亡 ,且两种细胞伴随着不同程度的 Bcl-2蛋白的下调及 P5 3蛋白的上调。结论 :　中毒剂量的 Se O2 诱导正常肝细胞 HL- 770 2和肝癌细胞 SMMC- 772 1的凋亡 ,且这种诱导凋亡作用是无选择性的 ,但两种细胞调亡的机制有一定区别。     

植酸对人肝癌细胞株HepG_2细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的研究肌醇六磷酸(IP6)对人肝癌细胞株HepG2细胞周期的影响并探讨其作用机制。方法以体外培养人肝癌细胞株HepG2为研究对象,应用流式细胞仪检测不同浓度IP6作用24h后对HepG2周期的影响;以免疫细胞化学法检测IP6对细胞周期相关蛋白cyclinD1、Rb、P27表达的影响;RT-PCR法检测IP6对HepG2细胞cyclinD1、CDK4 mRNA表达的影响。结果经IP6作用处理的HepG2细胞的细胞周期发生G1期阻滞。免疫细胞化学结果显示:与对照组比,各IP6浓度组均能抑制cyclinD1蛋白的表达(F=225.02,q=15.20-25.35,P<0.05),上调Rb(F=63.31,q=2.77-13.06,P<0.05)、P27蛋白的表达(F=254.75,q=4.71-25.71,P<0.05);RT-PCR结果显示,与对照组相比,各IP6浓度组均能抑制cyclinD1(F=672.34,q=16.41-41.99,P<0.05)和CDK4 mRNA(F=108.35,q=5.32-16.27,P<0.05)的表达。结论 IP6对HepG2细胞生长具有明显的抑制作用。其机制可能是IP6降低cyclinD1、CDK4水平,上调Rb、P27蛋白的水平而作用于G1-S限制点,使HepG2细胞周期发生G1期阻滞,从而起到抑制细胞增殖的作用。     

叶黄素对人肝癌细胞HepG2的抑制作用及其机制研究

目的研究叶黄素对人肝癌细胞的抑制作用并探讨其可能机制。方法以HepG2人肝癌细胞株和L02正常人肝细胞株为研究对象,设叶黄素低、中、高剂量组(20、40、80 mol/L)和溶剂对照组。常规细胞培养后进行细胞计数、MTT法测定细胞存活率、DCFH-DA法测定ROS活性、HPLC法测定ATP含量、RT-PCR测定Bax mRNA及p53mRNA表达水平。结果 HepG2细胞经叶黄素干预处理后,低、中、高剂量组的细胞存活率显著降低(P<0.05),并且随干预时间的增加而持续降低,ROS水平和ATP含量显著降低(P<0.05);高剂量组的Bax mRNA表达和中、高剂量组的p53 mRNA表达显著增加(P<0.05)。而L02细胞经叶黄素干预处理后,细胞存活率和ATP含量均无显著性变化。结论叶黄素能抑制人肝癌细胞的生长,其机制可能与叶黄素清除细胞内ROS、抑制肝癌细胞ATP生成及上调凋亡基因Bax和p53 mRNA的表达有关。[营养学报,2012,34(4):332-335]     

胆碱与叶酸组合对人成淋巴细胞株DNA损伤效应

目的探讨叶酸充足时胆碱缺乏对人成淋巴细胞株的遗传损伤效应。方法在甲硫氨酸(Met)浓度为50μmol/L条件下,设置0～21.5μmol/L的胆碱与30、60、120、240nmol/L的叶酸(folic acid,FA)组成不同浓度组合,培养人成淋巴细胞株9d后,利用胞质阻断微核细胞组分析(CBMNCyt),评价上述组分缺乏诱发的微核化双核细胞(MNedBNC)、核质桥(NPB)及核芽(NBUD)千分率。结果各叶酸浓度下,低浓度胆碱组(0、3、6μmol/L)与高浓度胆碱组(12、18、21.5μmol/L)之间的MNedBNC及NBUD千分率差异有统计学意义(P0.001);低叶酸情况下(30、60nmol/L),12μmol/L胆碱以上的NPB千分率显著降低(P0.001),而高叶酸情况下(120、240nmol/L)各胆碱浓度之间的NPB率无显著差异。胆碱和叶酸对MNedBNC、NPB及NBUD变异的贡献率均达到了极显著(P0.001)。结论胆碱不足对人成淋巴细胞株造成遗传损伤,该细胞株基因组的稳定需要叶酸和胆碱浓度分别维持在120nmol/L和12μmol/L以上。     

嗜中性活性肽-2(73)在人肝癌细胞株表达验证及分析

[目的]研究NAP-2(73)蛋白在人肝癌细胞株SMCC-7721和人肝正常细胞株HL-7702的表达差异,并初步探讨NAP-2(73)对肝癌作用的相关机制.[方法]运用蛋白免疫印迹(WB)对NAP-2(73)在人肝癌细胞株SMCC一7721和人肝正常细胞株HL-7702中的表达情况进行再验证,RT-PCR法检测NAP-2(73)mRNA水平的表达.[结果]验证结果证实,在肝癌细胞株中NAP-2(73)呈阳性表达,而在正常肝细胞株中无表达.Real-time PER结果显示肝癌细胞株中NAP-2(73)mRNA表达比正常肝细胞株增加了7倍.[结论]实验结果验证了初筛结果的可信性和生物信息学的分析和推测,提示NAP-2(73)可能是肝癌相关标志物.     

新疆天然植物黑加仑对食管癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察新疆天然植物黑加仑水提物对食管癌细胞的影响及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度(10-1、10-2、10-3g/ml)黑加仑水提物作用不同时间(12、24、36h)对人食管癌细胞株Eca109的细胞存活量的影响,以大鼠正常肝细胞(BRL)为正常对照细胞株;用Bradford法测定肿瘤细胞蛋白质合成的变化;采用流式细胞技术(FCM)观察黑加仑作用后肿瘤细胞周期变化及凋亡情况;通过倒置显微镜观察细胞的形态变化。结果:黑加仑水提物10-1g/ml组对人食管癌细胞株Eca109作用24h后,癌细胞的生长和蛋白合成均有明显抑制作用(P<0.05),对正常肝细胞的存活量及蛋白合成均无影响;流式细胞仪检测二倍体峰前出现凋亡峰,细胞凋亡率为49.6%;并且癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态。结论:黑加仑水提物可通过诱导细胞凋亡而抑制人食管癌细胞株Eca109细胞的生长。     

原儿茶酸对小鼠乳腺癌细胞增殖和转移能力的影响

目的研究原儿茶酸(protocatechuic acid,PCA)对小鼠乳腺癌细胞(4T1)增殖和转移的影响。方法体外培养4T1细胞。实验分组:溶剂对照组(DMSO)和PCA组(浓度为1、10、100、250、500、1000 nmol/L)。MTT法检测PCA对细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell小室法观察PCA对细胞迁移和侵袭能力的影响;蛋白印迹法和荧光定量PCR法分析PCA对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白和mRNA表达的影响。结果 1¹000 nmol/L PCA对4T1细胞增殖无影响;500、1000 nmol/L PCA能够抑制4T1细胞的迁移和侵袭,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05);PCA对4T1细胞MMP-2蛋白和mRNA表达均无影响。结论 PCA能够抑制小鼠乳腺癌细胞的迁移和侵袭,其作用机制可能与MMP-2无关。[营养学报,2014,36(1):53-57]     

海兔素对人乳腺癌细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响

目的观察海兔素(aplysin)对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达的抑制作用,以及对二甲基苯蒽(DMBA)诱导乳腺癌大鼠肿瘤组织中VEGF表达的抑制作用。方法用MTT法和ELISA法分别检测海兔素对MCF-7细胞增殖及VEGF表达的影响。用免疫组织化学法检测海兔素对DMBA诱导的大鼠乳腺癌组织中VEGF的影响。结果海兔素体外对MCF-7细胞有明显的增殖抑制作用,并伴随VEGF表达水平下降。体内可有效抑制大鼠乳腺癌组织中VEGF的表达,且与海兔素浓度有关。结论海兔素体外对MCF-7细胞具有明显的细胞毒作用并能抑制其VEGF的表达,体内可有效抑制乳腺癌组织中VEGF的表达。