我国首次分离到基因Ⅰ型乙型脑炎病毒

目的　对新分离乙型脑炎病毒鉴定 ,了解病毒E基因区段的氨基酸序列特征及基因分型。方法　 2 0 0 1年在上海市采集蚊虫标本 ,用组织培养的方法分离到 7株病毒。进行病毒一般生物学鉴定 ,对病毒PrM和E基因区段约 2 0 0 0nt进行了扩增、克隆、测序。应用ClustalX软件做碱基配对和比较分析 ,种系发生采用PHYLIP软件包分析。结果　 7株病毒可以引起BHK 2 1细胞规律病变 ,病变时间为 6 0h。乳鼠脑内接种病毒后 72h死亡。所有新分离病毒与标准乙型脑炎病毒抗体阳性反应。用病毒PrM区段 (4 5 6～ 6 95位核苷酸 )进行的基因分型分析 ,新分离的 7株病毒属于基因Ⅰ型乙型脑炎病毒。以减毒活疫苗株SA14 14 2为标准 ,对 7株病毒的E基因区段进行分析 ,7株病毒之间核苷酸同源性在 97.7%以上 ,氨基酸同源性在 99.2 %以上 ;7株病毒与疫苗株SA14 14 2核苷酸差异在 12 .2 %左右 ,氨基酸差异在 2 .8%～ 3.2 %之间 ,共有 14个共同的氨基酸位点差异。结论　 2 0 0 1年在上海采集的蚊虫中新分离的 7株病毒属于基因Ⅰ型乙型脑炎病毒 ,为我国的首次报道     

河南省唐河县分离到基因1型乙型脑炎病毒

目的 从河南省唐河县采集的蚊虫标本中分离乙型脑炎病毒(JEV)并确定其基因分型及E基因区段氨基酸序列特征.方法对2004年采集蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的乙脑病毒进行生物学、血清学及分子生物学鉴定.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增新分离JEV的PrM、E区段核苷酸序列,测序后应用Clustal X软件做碱基配对分析,MEGA3.1完成病毒进化分析,GENEDOS(3.2)软件完成氨基酸位点分析.结果共采集3722只蚊虫标本,包括:库蚊、骚扰阿蚊、伊蚊及按蚊.从库蚊标本中分离到3株属于基因1型的乙脑病毒,E区段核苷酸和氨基酸与减毒活疫苗株SA14-14-2株的同源性分别为86.9%～87.7%,氨基酸同源性为95.2%～97.0%,存在12处共同的氨基酸位点差异.结论从河南省唐河县首次分离到基因1型的乙脑病毒.E基因与疫苗株相比有部分氨基酸差异,但现行疫苗株理论上可以保护新分离乙脑病毒.     

中国基因3型乙型脑炎病毒E基因分子特征

目的 以减毒活疫苗(SA14-14-2株)为对照,分析我国分离的基因3型乙脑病毒E基因区段核苷酸及氨基酸序列分子特征.方法 从GenBank中获取相应乙脑病毒株E基因区段核苷酸序列,通过Clustal X(1.81)、DNAStar、GENEDOC(3.2)等生物学软件进行核苷酸和氨基酸位点差异分析.以蜱传脑炎病毒可溶性蛋白晶体结构为模板进行乙脑病毒E蛋白氨基酸位点分析.结果 我国不同地域、不同宿主分离的基因3型乙脑病毒与SA14-14-2株核苷酸同源性分别在96%和95%以上,氨基酸同源性在95%和94%以上.在同一地域、同一宿主类型分离的毒株之间核苷酸和氨基酸同源性非常高.在E基因区段存在10处共同的氨基酸位点差异,在结构域Ⅰ(E160)、结构域Ⅱ(E123和E227)和两个未在结构域中的氨基酸位点(E441和E487)等5个位点在部分基因3型乙脑病毒中存在差异.结论 我国分离的基因3型乙脑病毒与减毒活疫苗株(SA14-14-2株)E基因区段同源性高,存在5处基因3型乙脑病毒特异的氨基酸位点差异,但现行减毒活疫苗株理论上可以保护我国分离的基因3型乙脑病毒野毒株.     

从辽宁省再次分离到基因1型乙型脑炎病毒

目的 了解2007年在辽宁省分离的乙型脑炎病毒基因型别及其病毒E基因分子特征.方法2006年8月在辽宁省东港市采集蚊虫标本,利用组织培养细胞进行病毒分离,对病毒分离物进行血清学和分子生物学鉴定.结果从采集的30批,共1500只三带喙库蚊标本中分离到2株病毒,命名为LNDG07-02、LNDG07-16,经鉴定均为基因1型乙脑病毒.病毒E基因区段核苷酸和氨基酸序列与乙脑减毒活疫苗株(SA14-14-2株)的同源性分别为87.8%～88.0%和97.2%,新分离病毒E基因区段与疫苗株存在11处氨基酸位点差异,与2002年在辽宁省分离的乙脑病毒相比,未发现氨基酸位点变异.结论自2002年以来在东港市再次分离到基因1型乙脑病毒,与2002年在辽宁分离的基因1型乙脑病毒相比E基因区段氨基酸未发生变异.基因1型乙脑病毒在辽宁省东港市持续存在.     

四川省分离的基因1型乙型脑炎病毒分子特征分析

目的 从四川省巴中市采集的蚊虫标本中分离乙型脑炎(简称乙脑)病毒(JEV),确定其基因型别,并分析相关的基因1型乙脑病毒PrM和E基因区段氨基酸序列特征.方法 对2004年采集蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的乙脑病毒进行生物学、血清学及分子生物学鉴定.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增新分离JEV的PrM、E区段核苷酸序列,测序后应用Clustal X软件做碱基配对分析,MEGA4软件完成病毒进化分析,GENEDOC(3.2)软件完成氨基酸位点分析,根据蜱传脑炎病毒可溶性蛋白晶体结构为模板进行乙脑病毒E蛋白三维结构模拟预测分析.结果 共采集4668只蚊虫标本,主要是骚扰阿蚊和库蚊,分离到6株病毒,经鉴定均属于基因1型的乙脑病毒.将四川省分离的6个毒株结合我国新分离的基因1型乙脑病毒与减毒活疫苗株SA14-14-2株的PrM区段和E区段氨基酸比较,发现PrM区段在PrM2、64和65位存在基因1型乙脑病毒独有的氨基酸位点差异,E区段存在14处共同的氨基酸位点差异,其中在E129、222、327和366位点为中国目前分离到的基因1型乙脑病毒所特有的位点特征.结论 从四川省巴中市首次分离到基因1型的乙脑病毒,并发现基因1型乙脑病毒与减毒活疫苗株之间PrM、E基因区段存在氨基酸差异,但现行疫苗株理论上可以保护新分离的基因1型乙脑病毒.     

四川省分离的基因1型乙型脑炎病毒分子特征分析

目的 从四川省巴中市采集的蚊虫标本中分离乙型脑炎(简称乙脑)病毒(JEV),确定其基因型别,并分析相关的基因1型乙脑病毒PrM和E基因区段氨基酸序列特征.方法 对2004年采集蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的乙脑病毒进行生物学、血清学及分子生物学鉴定.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增新分离JEV的PrM、E区段核苷酸序列,测序后应用Clustal X软件做碱基配对分析,MEGA4软件完成病毒进化分析,GENEDOC(3.2)软件完成氨基酸位点分析,根据蜱传脑炎病毒可溶性蛋白晶体结构为模板进行乙脑病毒E蛋白三维结构模拟预测分析.结果 共采集4668只蚊虫标本,主要是骚扰阿蚊和库蚊,分离到6株病毒,经鉴定均属于基因1型的乙脑病毒.将四川省分离的6个毒株结合我国新分离的基因1型乙脑病毒与减毒活疫苗株SA14-14-2株的PrM区段和E区段氨基酸比较,发现PrM区段在PrM2、64和65位存在基因1型乙脑病毒独有的氨基酸位点差异,E区段存在14处共同的氨基酸位点差异,其中在E129、222、327和366位点为中国目前分离到的基因1型乙脑病毒所特有的位点特征.结论 从四川省巴中市首次分离到基因1型的乙脑病毒,并发现基因1型乙脑病毒与减毒活疫苗株之间PrM、E基因区段存在氨基酸差异,但现行疫苗株理论上可以保护新分离的基因1型乙脑病毒.     

从病毒性脑炎患者标本分离的基因I型乙脑病毒全基因组序列特征研究

目的通过现代分子生物学理论与技术测定和分析了从脑炎患者脑脊液标本分离的基因I型乙脑病毒（GZ56株）全基因组序列特征,以了解其致病性的分子基础。方法采用RT．PCR法和核酸序列测定法获得病毒基因组全序列,并利用DNASTAR、ClustalX version2．0．9及MEGAversion4．1等生物学软件分析该乙型脑炎病毒核苷酸序列、氨基酸序列及系统进化等。结果研究结果表明从病毒性脑炎患者脑脊液标本分离的基因I型乙脑病毒（GZ56株）基因组全长为10965nt,编码3432个氨基酸。病毒全基因组分子进化分析显示GZ56株全基因组与国际上第一株从蚊虫分离的基因I型乙脑病毒（M-28株）处于同一进化分支。GZ56株与其他基因I型乙脑病毒核昔酸和氨基酸序列同源性分别为96．2％～98．6％和98．2％～99．7％。病毒E基因与乙脑病毒灭活疫苗株P3相比存在11个氨基酸差异位点,而与乙脑病毒减毒活疫苗株SA14-14-2相比,在E蛋白上存在14个氨基酸差异位点。结论本研究提示,从病毒性脑炎患者标本分离的基因I型乙脑病毒全基因组未见明显变化,从基因组水平可以推测该病毒可以被现行的乙脑疫苗所保护。     

2008年甘肃省新分离乙脑病毒的分子生物学特征

目的 对2008年甘肃省新分离乙脑病毒的PrM和E基因区段进行序列测定和分析,明确新分离病毒的基因型别并对E基因序列的分子特征进行分析.方法 对新分离乙脑病毒的PrM和E基因区段进行PCR扩增并测定序列.使用ClustalX2.09、MegAlign和Mega4软件对核苷酸和氨基酸序列进行分析并绘制系统发生树.结果 系统进化分析结果显示6株病毒均为基因Ⅰ型乙脑病毒,并且与2001和2002年越南分离株、2004年日本分离株及2004年我国四川省分离株进化关系较近.新分离株与减毒活疫苗株SA14-14-2相比,E基因核苷酸同源性为87.5%～87.9%,氨基酸同源性为96.8%～97.2%.新分离株与疫苗株在E基因区段存在11处共同位点的氨基酸差异.结论 2008年甘肃省分离的乙脑病毒均为基因Ⅰ型乙脑病毒,新分离株E基因氨基酸序列与疫苗株相比有部分差异,但均不属于决定抗原性的关键位点.     

中国分离乙脑病毒与灭活疫苗株(P3株)E基因差异分析

目的 分析我国近年来从蚊虫及患者标本中分离的乙脑病毒与灭活疫苗株（P3株）之间在E基因区段核苷酸及氨基酸差异。方法 从GenBank中获取相应乙脑病毒株E基因区段核苷酸序列，通过Clustal X（1．8）、DNASTAR、GENEDOC（3．2）等生物学软件进行分析。结果 P3株与福建分离株之间核苷酸同源性在98．3％-98．5％之间、氨基酸同源性在98．2％-98．6％之间；P3株与上海分离株之间核苷酸同源性在88．0％-88．5％之间、氨基酸同源性在98．0％-98．4％之间。E基因区段500个氨基酸中P3株与所有新分离乙脑病毒株之间共存在19个位点的差异，其中在E-76、E-306、E-408处所有新分离毒株与P3株存在共同的差异；在E-160、E-487处福建分离株与P3株存在共同差异；上海分离株与P3株在E-129、E-222、E-227、E-366存在共同差异。结论 上海蚊虫中分离的Ⅰ型乙脑病毒和福建省脑炎患者中分离的Ⅲ型乙脑病毒与P3株在E基因的部分氨基酸位点存在差异，但均不处在影响病毒生物学特性的关键位点。     

武汉市新分离2株乙型脑炎病毒E基因分型及序列分析

目的 对2009年武汉市新分离的2株乙型脑炎（简称乙脑）病毒进行基因分型和序列分析,了解本地乙脑病毒株的分子生物学特性。方法 将2009年从三带喙库蚊中分离的两株乙型脑炎病毒用RT-PCR法扩增E基因,将其进行测序,并用DNAstar and MegAlign软件与其他基因型代表株进行比对。结果 16组样品检出两株阳性（WHJX9-09、WHJX10-09）,这两株阳性均属于GI型。两株新分离JEV之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.9％和100％。同目前在武汉市使用的疫苗株SA-14-14-2相比,核苷酸同源性分别为87.4％、87.9％,氨基酸同源性为96.9％。共有15个氨基酸发生变异分布在3个不同结构域,中和位点没有变异但是神经毒力位点仍然存在。结论 武汉市本地新分离乙脑病毒基因型为GI型,不同于1988年在武汉检出的GⅢ型的基因型,和疫苗株SA-14-14-2相比,其神经毒力并没有减弱,但疫苗产生的抗体对新出现的GI型乙脑病毒仍有中和作用。因此提高乙脑疫苗的接种率并配合防蚊灭蚊措施对控制乙脑疫情依然至关重要。同时有必要对本市蚊虫及乙脑患者进行长期的病原学监测工作,为乙脑预测预警体系的建立提供科学依据。     

Development in in vitro toxicology

There are three principal pressures driving the development of in vitro toxicology: (1) the need for more efficient testing systems to cope with the large number of xenobiotics currently being developed; (2) public pressure to reduce animal experimentation; and (3) a need for a better understanding of the mechanisms of toxicity. Within this, in vitro toxicology is focused on local, systemic, and target-organ toxicity. It is becoming increasingly apparent that a step or decision-tree approach using input of a variety of experimental data (physicochemical properties, biokinetics, cytotoxicity) provides the most efficient system for predicting toxicity. Examples of the use of in vitro toxicity systems for prediction of systemic toxicity and target-organ (liver) toxicity are presented.Originally presented at ECCP 93.     

Seasonal variations in acute toxoplasmosis in pregnant women in Slovenia

Between December 1999 and December 2004, 40 081 pregnant women were examined for toxoplasmosis with Toxo-IgG, Toxo-IgM enzyme immunoassay. Women with positive results were then retested with the Toxo-IgG avidity assay for recent toxoplasmosis. Recent acute toxoplasmosis in pregnant women was found to be significantly more frequent (p < 0.01) during winter than summer. The incidence of acute toxoplasmosis during winter-spring was also significantly more frequent (p < 0.025) than summer-autumn. This phenomenon should be taken into account when formulating preventive measures for toxoplasmosis, especially for pregnant women.     

Age-related changes in polyamines in memory-associated brain structures in rats

Polyamines putrescine, spermidine and spermine are positively charged aliphatic amines and have important roles in maintaining normal cellular function, regulating neurotransmitter receptors and modulating learning and memory. Recent evidence suggests a role of putrescine in hippocampal neurogenesis, that is significantly impaired during aging. The present study measured the polyamine levels in memory-related brain structures in 24- (aged), 12- (middle-aged) and 4- (young) month-old rats using liquid chromatography/mass spectrometry and high performance liquid chromatography. In the hippocampus, the putrescine levels were significantly decreased in the CA1 and dentate gyrus, and increased in the CA2/3 with age. Significant age-related increases in the spermidine levels were found in the CA1 and CA2/3. There was no difference between groups in spermine in any sub-regions examined. In the parahippocampal region, increased putrescine level with age was observed in the entorhinal cortex, and age did not alter the spermidine levels. The spermine level was significantly decreased in the perirhinal cortex and increased in the postrhinal cortex with age. In the prefrontal cortex, there was age-related decrease in putrescine, and the spermidine and spermine levels were significantly increased with age. This study, for the first time, demonstrates age-related region-specific changes in polyamines in memory-associated structures, suggesting that polyamine system dysfunction may potentially contribute to aged-related impairments in hippocampal neurogenesis and learning and memory.     

休克过程中肾上腺髓质素变化的研究进展

Adrenomedullin (AM) is a new peptidergic regulator of vascular function. AM serves as a hormone, which has many biological properties, plays an important role in the many pathophysiological processes, especially shock. This review will highlight the structure, biological properties of AM and the relationship between AM and shock.     

Secular change in menarche in women in Madrid

The age at menarche was estimated by recollection in 1617 women between the ages of 18 and 60 in Madrid and a nearby suburb, Pinto. The population of Pinto is working-class and the Madrid group, taken from residential neighbourhoods , belongs to the upper middle class. In both groups we found a diminution in average age at menarche, from 14.04 to 13.02 years in Madrid and from 14.55 to 13.16 years from about 1935 to about 1965 in Pinto. These changes have been more intense in the group which is less well-off economically, where living conditions have varied much more drastically.     

Uteroglobin in the developing rabbit conceptus in vivo and in vitro

Summary Uteroglobin (UGL) was measured in day- 4 to day-10 rabbit conceptuses by a competitive ELISA. Levels in blastocyst fluid, tissues, coverings and in the early fetus were determined separately. The total amount of UGL increased from 18.4 ng to 6.8 g per conceptus. The UGL content of individual day-6 blastocysts was studied in vitro. Culturing was carried out up to 60 h in Ham's F10 medium with polyvinylpyrrolidone as macromolecular component, with and without progesterone, and with progesterone plus estradiol. UGL was determined in the blastocyst fluids, tissues with coverings and in the culture media. After labelling with [³⁵S]-methionine, protein patterns of total blastocysts and of culture media were analysed by two-dimensional gel electrophoresis and fluorography. The morphology of cultured blastocysts was examined by electron microscopy. During 60 h of culture, the blastocysts expanded in diameter by 84%, and released 19% of their initial UGL content into the medium, independent of the hormonal substitution. Neither de novo synthesis, nor degradation of UGL was found: the protein remained unlabelled in fluorography, and its total quantity was not significantly different from that of non-cultured controls. Trophoblast, endoderm and embryoblast cells showed well preserved cell organelles and intercellular junctions, while the morphological differentiation of the germ layer was inhibited.