应用两种方法进行无损伤性产前诊断研究

目的 用两种不同的方法进行胎儿性别鉴定，分析二者有无明显差异。方法 从孕妇外周血分离血浆和胎儿有核红细胞(Nucleated red blood cells，NRBCs)，应用套式PCR特异性扩增DYS1片段，琼脂糖凝胶电泳检测结果。结果 30例受检者中，共有男婴18例，血浆组检出率为88．9％(16／18)；有核红细胞组检出率为66．7％(12／18)。     

胎儿有核红细胞在无创性产前诊断中的应用

产前诊断是对胚胎或胎儿在出生前是否患有某些遗传病或先天畸型作出准确的诊断.目前常用的产前诊断的方式有:绒毛活检、羊膜腔穿刺、脐带血穿刺、胎儿镜等,这些技术都属于侵入性技术,有一定的并发症和胎儿丢失率,从而限制了它们的应用,利用母体外周血中胎儿有核红细胞(FNRBC)进行产前诊断是近年研究较活跃,颇具潜力的无创性诊断方法之一,本文就这方面进展进行综述.     

无损伤性兔全肺灌洗实验研究

尘肺是我国发病率较高的职业病 ,其发病机制至今尚未完全阐明 ,给尘肺患者的治疗带来困难。全肺灌洗治疗尘肺 ,目前取得一定效果 ,但对其确切及远期疗效存在争议。我们用动物实验探讨尘肺灌洗的治疗机制 ,以制备尘肺模型成功的实验兔模拟临床尘肺患者全肺灌洗 ,进行无损伤性家兔全肺灌洗实验研究 ,现报告如下。1　材料与方法1.1　材料1.1.1. 　动物　健康雄性大耳白兔 30只 ,体重 2 .0～ 3.0kg(河南医科大学实验动物中心提供 ) ,按实验要求分三组 :煤尘组、矽尘组与对照组。1.1.2　器材　新生儿喉镜 (YILAN6 6 ) ,片长 9cm ,小儿用简易呼…     

母体血浆中胎儿DNA分析在性连锁遗传病产前诊断中的应用

目的 建立一种准确、快速、简便的无创性胎儿性别鉴定技术.方法 应用实时定量PCR技术(Taqman探针法)检测35例孕妇血浆中胎儿DNA的Y染色体特异序列SRY基因,每例血浆样本DNA均用3个PCR管同时进行检测.结果 利用母体血浆中SRY基因定量PCR分析的灵敏度为94.7%,特异性为100%.结论 母亲血浆DNA中SRY基因定量检测是一种高度敏感性和比较可靠的胎儿性别鉴定技术,为性连锁遗传病提供一种无创性产前诊断方法.     

应用聚合酶链式反应-酶切法进行脊髓性肌萎缩的基因诊断及产前诊断

目的：建立一种高效,快速的脊髓性肌萎缩（SMA）的基因诊断与产前诊断的方法。方法：基于运动神经元生存基因（SMN）基因的两个同源拷贝碱基上的差异,采用聚合酶链反应（PCR）－酶切的方法,选择特异的酶切位点对11例SMA患儿进行SMN基因检测。同时采用SMN基因内部及旁侧的C161,C171,C212,C272等4对（CA)n对4个家系进行连锁分析。结果：11例SMA患儿中10例患儿缺失SMNt7,8号外显子,1例患儿仅缺失7号外显子。4个SMA家系中有3个胎儿未发现与先证者完全相同的SMN基因片段,1个胎儿检测到与先证者完全相同的SMN基因片段。结论：该方法快速,简便,适合临床推广。     

母体血浆中游离胎儿DNA在无创性产前诊断中的应用研究

目的：建立一种从孕妇血浆中检测胎儿DNA的无创性产前诊断新方法。方法：对30例孕7－41周妇女血浆游离DNA进行聚合酶链反应，特异性扩增的胎儿基因为Y染色体上的DYZ1位点，扩增片段的大小为149bp.30例孕妇血浆均经过酚氯仿法提取DNA作为模板，进行聚合酶链反应。结果：20例妊娠男性胎儿孕妇中有17例出现DYZ1基因扩增条带，检出率为85．0％，10例妊娠女性胎儿孕妇中未出现阳性扩增条带，无假阳性结果，本研究中早，中，晚孕期性别符合率分别为80％，80％，90％，总符合率为85．0％，结论：用酚氯仿法提取血浆中的DNA，可以提高模板的浓度和纯度，可改善PCR条件，提高结果的准确性。     

应用荧光原位杂交技术进行产前诊断的研究

目的:应用荧光原位杂交技术(FISH)对产前诊断中的不同标本进行检测,探讨其用于产前诊断遗传性疾病的价值,从而为临床诊断提供实验依据.方法:选用13、18、21、X、Y五色探针对20例不同取材标本进行FISH检测.结果:在检测的20例标本中,有1例为胎死宫内褐色羊水、8例绒毛、1例死胎皮肤、1例外周血、4例常规产前诊断羊水、5例羊水培养失败后的羊水,FISH检测均获得成功.结论:应用FISH技术对绒毛、羊水间期细胞、脐血细胞以及无法进行培养的胎儿组织、羊水培养失败后的羊水物质均可进行检测,且检测结果可靠.     

孕妇外周血中胎儿有核红细胞在杜氏进行性肌营养不良胎儿产前诊断中的应用

目的探讨应用孕妇外周血中胎儿有核红细胞，对性连锁遗传病进行非创伤性产前诊断方法的可行性。方法取已生育过杜氏进行性肌营养不良病（DMD）患儿的孕妇外周血，经密度梯度离心法分离有核细胞层，挑取有核红细胞，并提取DNA，提取孕妇、其丈夫及杜氏进行性肌营养不良患儿的外周血的基因组DNA。将有核红细胞DNA先进行随机引物预扩增，利用dystrophin基因中4个短串联重复序列多态位点（STR-44，STR-45，STR-49和5＇-ysⅡ）进行PCR扩增，进行家系连锁分析。结果准确检测2例，1例为杜氏进行性肌营养不良患儿，1例为正常女孩。结论利用孕妇外周血中胎儿有核红细胞，可进行胎儿杜氏进行性肌营养不良病的非创伤性产前诊断。     

两种侵入性产前诊断技术的评估及染色体核型分析

目的: 系统评估现有的侵入性产前诊断技术的安全性、有效性及其手术并发症的发生率,并对产前诊断指征及各种异常核型的临床意义进行探讨。方法: 回顾性总结分析2005年3月至2012年5月中南大学湘雅二医院产前诊断中心所进行的羊膜腔穿刺、脐静脉穿刺的病例并分析其手术指征、成功率、安全性和并发症等情况;对25例异常染色体核型进行分析。结果: 2005年3月至2012年5月共对669例孕妇进行了侵入性产前诊断,其中羊膜腔穿刺组598例,脐静脉穿刺组71例,与脐静脉穿刺组比较,羊膜腔穿刺组有更高的穿刺成功率(91.54% vs 100%, P<0.05),更低的流产率(1.41% vs 0.33%,P<0.05)、异常染色体发现率(11.27% vs 2.84%,P<0.05)及医疗费用(880元vs 800元,P<0.05)。羊膜腔穿刺术及脐静脉穿刺的产前诊断指征前3位均为唐筛高风险、高龄孕妇、超声检查异常。侵入性产前诊断共发现异常染色体25例,其中21-三体6例,性染色体数目异常4例,常染色体平衡易位7例,标记染色体1例,嵌合体7例。结论: 羊膜腔穿刺作为成熟的产前诊断取材技术其临床应用是安全有效的;脐静脉穿刺的手术并发症发生率远高于羊膜腔穿刺不应作为染色体异常产前诊断的常规手段。染色体核型分析不仅能及时发现胎儿染色体异常,而且能为孕妇是否继续妊娠提供科学依据,有利于降低出生缺陷的发生率。     

以孕妇外周血中单个胎儿有核红细胞进行苯丙酮尿症的非损伤性产前基因诊断

中华医学基金会基金;国家杰出青年科学基金从孕妇外周血中分离胎儿细胞进行非损伤性产前基因诊断，对胎儿和孕妇均无损伤，易于被接受与推广，是遗传病产前诊断的发展方向。但是这一领域的研究一直因材料与技术的限制而发展较缓慢。本组采用从孕妇外周血中分离的单个胎儿有核红细胞，对两例苯丙酮尿症（ＰＫＵ）风险胎儿进行产前基因诊断。方法　两例ＰＫＵ携带者孕妇外周血各１０ｍｌ，用三密度梯度离心方法分离获得的有核红细胞，经磁性激活的细胞分离（ＭＡＣＳ）法富集ＣＤ７１＋细胞。后者经免疫组化染色，鉴别出胎儿血红蛋白阳性（Ｈ…     

Application of Fetal DNA in Maternal Plasma in Noninvasive Prenatal Diagnosis

To explore the application of fetal DNA in maternal plasma for noninvasive prenatal diagnosis, the DNA template was extracted by hydroxybenzene-chloroform from 44 maternal (7-41 weeks) plasma. The Fetus-derived Y sequence DYZ-1 gene (149bp) was chosen to be amplified by PCR. The fragment was identified in all the plasma of male bearing pregnant women with the diagnostic accordance rate being 100.00 %. Two of the 22 female bearing pregnant women had false positive results. Among the 44 pregnant women, the diagnostic accordance rate was 88. 89 % at early pregnant stage, 100.00% at medium pregnant stage, and 96.55 % at late stage respectively.The final accuracy of 95.45% was obtained in all cases. It was concluded that by means of hydroxybenzene-chloroform extraction the authors of this article promoted the concentration and purity of the DNA template, and diagnosed more accurately. The results showed that free fetal DNA in the maternal plasma could be regarded as the gene resource for noninvasive prenatal diagnosis.     

APACHEⅡ评分与NRBC含量对NRBC阳性ICU患者生存时间的预测价值

目的探讨APACHEⅡ评分与有核红细胞（NRBC）含量对NRBC阳性ICU住院患者生存时间预测价值。方法收集血常规检查中NRBC阳性的ICU住院患者67例。记录患者入住ICU24h内的血小板分布宽度（PDW）、平均血小板体积(MPV)、血小板淋巴细胞比值（PLR）、NRBC、C反应蛋白（CRP）及前白蛋白/纤维蛋白原比值（PA/Fig）检测结果,同时跟踪并记录其诊疗过程及预后情况。根据随访结果将患者分为死亡组和生存组,其中死亡组17例,生存组50例,通过两组的临床资料与实验室结果比较,并进一步采用logistic回归分析筛选入选者死亡的危险因素,再采用Kaplan-meier法进行生存时间预测指标的探讨。结果死亡组与生存组的Charlson合并症指数、APACHEⅡ评分、菌血症、脓毒血症、感染性休克、多重感染及机械通气等比较均有统计学差异（均P＜0.05）。死亡组与生存组PDW、MPV、PLR、NRBC、CRP及PA/Fig的差异均有统计学意义（均P＜0.05）。logistic回归分析结果显示APACHEⅡ评分及NRBC含量是NRBC阳性的ICU住院患者死亡的危险因素。Kaplan-meier法生存分析结果：将入选者按照APACHEⅡ评分及NRBC含量的中位数分为两组,APACHEⅡ评分≥29分与APACHEⅡ评分＜29分的生存时间有统计学差异（P=0.001）;NRBC含量≥0.145×109/L及NRBC含量＜0.145×109/L的生存时间有统计学差异（P=0.018）。结论APACHEⅡ评分及NRBC含量是NRBC阳性的ICU住院患者死亡的危险因素,有助于预测生存时间。     

应用Multiple-SNaPshot技术无创性产前检测唐氏综合征

目的:探讨1种相对便捷?准确?经济的适用于杂合型SNP位点的无创性产前检测胎儿唐氏综合征的方法?方法:选择50例孕整倍体胎儿(孕15~21周)?13例孕21三体胎儿(孕19~26周)的母血浆样本,应用Multiple-SNaPshot法检测胎盘源性PLAC4基因上5个SNP等位基因的基因比率及其杂合性,从而对杂合型SNP位点的胎儿无创性产前检测唐氏综合征;同时对我国苏南地区200例人群的5个SNP位点进行基因型别研究?结果:从63例单胎孕妇外周血中成功提取到PLAC4 mRNA,检测出17例PLAC4上为杂合型SNP的样本,通过分析SNP等位基因比率检测出14例正常整倍体胎儿及3例21三体胎儿?苏南地区人群PLAC4上Rs8130833和Rs4818219位点的杂合度分别为0.278和0.343?结论:对PLAC4基因上为杂合型SNP位点的胎儿,用Multiple-SNaPshot法检测其等位基因比率可用于无创性产前筛查唐氏综合征?苏南地区人群PLAC4基因上SNP杂合度较高的位点有Rs8130833和Rs4818219?     

流式技术检测外周血白血病细胞在AML复发监测中的应用

目的：探讨多参数流式技术(FCM)检测外周血白血病细胞在急性髓细胞白血病(AML)复发监测中的临床应用价值。方法选择2012年1月至2014年6月我院血液科收治的56例AML患者,于首次诱导化疗结束、巩固化疗6个月、巩固化疗12个月应用FCM定期检测患者外周血标本,同时检测骨髓细胞形态学的变化。MRD≥0.01%为MRD阳性,否则为MRD阴性。AML患者首次诱导化疗结束后外周血MRD水平分为高(MRD≥10-2)、中(10-20.05)。结论 FCM检测外周血白血病细胞对诊断AML复发及指导个体化治疗有重要意义。     

雅培CELL-DYNRuby全自动血细胞分析仪检测有核红细胞的准确性评价

目的探讨雅培CELL-DYN Ruby全自动血细胞分析仪检测有核红细胞（NRBC）的准确性。方法 2012年3月—2014年2月取镜检确认的外周血涂片有NRBC的标本102例,分别用显微镜镜检计数法和细胞计数仪法两种方法计数,得到两组数据进行比较分析。结果当标本中NRBC百分比〈5%时,两种检测方法比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,说明雅培CELL-DYN Ruby全自动血细胞分析仪检测有核红细胞准确。当标本中NRBC百分比≥5%时,差异有统计学意义,两种检测方法有明显差异,说明在此种情况下检测有一定偏差。结论雅培CELL-DYN Ruby全自动血细胞分析仪检测有核红细胞时准确性较差,如在检测时有NRBC的提示时,一定要推血涂片镜检计数,并用公式计算出白细胞总数。     

无害性急性胰腺炎评分联合血清炎性及免疫指标对轻症急性胰腺炎诊断和预后的评估价值

目的 探讨无害性急性胰腺炎评分(HAPS)、C-反应蛋白(CRP)、有核红细胞(NRBC)、辅助性T细胞17(Th17)对轻症急性胰腺炎诊断和预后的评估价值。方法 选取2016年8月至2020年7月急性胰腺炎患者153例为研究对象,根据严重程度分为轻症组(MAP组)和非轻症组(non-MAP组),对比两组CRP、NRBC、Th17及HAPS水平的差异,通过ROC曲线和多因素Logistic回归评估各指标对MAP预后的预测能力。结果 non-MAP组患者CRP、NRBC、Th17和HAPS水平显著高于MAP组,差异具有统计学意义(P＜0.05);多因素Logistic回归分析显示,CRP、NRBC、Th17和HAPS是MAP的独立危险因素(P＜0.05);ROC曲线显示,CRP、NRBC、Th17和HAPS对MAP的诊断均具有预测能力,曲线下面积(AUC)分别为0.699、0.757、0.754、0.714,4者联合的AUC为0.872,敏感性为91.3%,特异度为84.8%,95%置信区间为0.748~0.996;高水平的CRP、NRBC、Th17和HAPS局部并发症发病率、全身并发症发病率和死亡率均显著高于低水平患者,差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论 CRP、NRBC、Th17和HAPS可作为MAP临床诊断和预后的评估指标,4者联合评估效能更好。     

孕妇外周血无创基因检测在产前诊断中的应用

目的 通过评估孕妇外周血无创基因检测(noninvasive prenatal testing,NIPT)的检测结果阳性预测值,评价NIPT在产前诊断应用中的利弊.方法 选自2016年1月-2019年12月在济宁医学院附属济宁市第一人民医院行NIPT孕妇资料进行回顾性分析,对NIPT高风险结果经羊水穿刺进一步验证,并对所有行NIPT孕妇进行随访.结果 孕妇外周血NIPT结果提示21三体阳性预测值为73.7％(28/38),18三体阳性预测值为58.3％(7/12),13三体阳性预测值为20.0％(1/5),性染色体阳性预测值为30.4％(17/56).结论 NIPT对21三体阳性预测值最高,其次18三体,13三体最低.对于NIPT筛查高风险孕妇和高龄孕妇仍建议侵入性产前诊断进一步确诊.     

妊娠期被动吸烟量对新生儿脐血有核红细胞数量的影响

目的检测妊娠期孕妇被动吸烟的适于胎龄儿脐血有核红细胞(NRBC)数量,并探讨柯替宁水平与NRBC数量关系。方法通过问卷方式,随机选择孕妇94例,分为被动吸烟组(53例)和对照组(41例),观察记录2组新生儿发育情况并采集新生儿脐静脉血进行血细胞参数、NRBC数量和柯替宁水平检测。结果被动吸烟组新生儿体重低于对照组(P<0.05),脐血NRBC数量较对照组多(P<0.05)。脐血柯替宁与被动吸烟量呈正相关(r=0.04,P<0.01);脐血NRBC数量与被动吸烟程度无相关性(P>0.05)。结论孕妇妊娠期被动吸烟可引起新生儿脐血NRBC数量增加,增加程度与被动吸烟量无关。     

胎儿有核红细胞在DMD产前基因诊断中的应用

目的探讨胎儿有核红细胞（FNRBCs）在DMD产前基因诊断中的可行性。方法对6例进行性肌营养不良症携带者孕妇（孕12～18周）抽取外周血进行密度梯度离心，富集胎儿细胞，在显微操作下吸取胎儿有核红细胞。对所富集细胞经提取DNA进行人Y染色体特异DNA扩增，判定胎儿性别。将其应用于DMD产前诊断中，并与用羊水进行产前诊断比较。结果SRY片段经PCR后，3例男性胎儿可见特异性条带，3例女性胎儿未见此电泳条带。母体外周血FNRBCs的DNA产前诊断中，2例为女性正常胎儿，1例为女性携带者，2例为正常男性胎儿，1例为DMD患儿，结果与用羊水进行产前诊断和产后个体性别证实一致。结论密度梯度离心结合显微操作方法分离FNRBCs能用于性别鉴定和遗传病的产前诊断。