重复序列DNA探针分析我国3株恶性疟原虫

分析鉴定疟原虫虫株,在种下分类理论研究及疟疾防治应用上均具有重要意义。基因分析技术精确、可靠,能揭示虫体内在的本质差别。本实验试用重复DNA序列PFrep20作探针,以分子杂交方法分析我国恶性疟原虫(P.f)、安徽Fcc/AH株、云     

用生物素标记两种重组DNA探针检测红内期恶性疟原虫

DNA重组技术已广泛用于疟疾的研究,用含有疟原虫DNA重复序列的重组质粒作探针检测疟原虫,具有较好的敏感性和特异性,在疟疾的流行病学调查和疟原虫虫株分类等方面有重要意义。目前,DNA探针的标记物大多采用放射性同位素,对人体有辐射危害,难以在疟疾流行区现场推广应用。作者试用生物素标记两种非洲地理株恶性疟原虫     

用~(32)P标记的重组DNA探针检测红内期间日疟原虫

目前有关间日疟原虫基因诊断的报道极少,作者首次用中国地理株来源的间日疟原虫DNA重组质粒为探针,检测红内期间日疟原虫,同时与镜检方法进行了比较.1 材料和方法 含间日疟原虫DNA插入片段的重组质粒为作者克隆,用[α-~(32)P]dCTP[北京     

光生物素DNA探针的制备及其检测恶性疟原虫DNA的研究

本研究使用光生物素(PHOTOPROBE~(TM) Biotin)标记恶性疟原虫(P.f.)全基因组DNA,含P.f.cDNA片段的重组质粒DNA(C7)及克隆的P.f.cDNA片段(P9-25)等作为探针,并以斑点杂交试验检测靶DNA。实验结果显示,光生物素标记法简单、快速和安全;标记的探针活性较高,于-20℃贮存10个月无明显降低。用生物素化的P.f.全基因组DNA及C7探针分别可检出低至125pg和250pg的纯化的P.f.DNA。     

用生物素标记DNA探针检测红内期间日疟原虫

在疟疾基因诊断的研究中,目前所用的DNA探针大多是用放射性同位素~(32)P标记的,~(32)P有辐射能量强和检测敏感度高的优点,但是半衰期短,价格昂贵,有辐射危害和易污染环境等不足之处,难以用于疟疾流行病学现场.用非同位素取代放射性同位素标记探针是疟原虫核酸探针研究中的大趋势,作者首次报道用生物素标记DNA探针检测红内期间日疟原虫.1 材料和方法 含间日疟原虫DNA插入片段的重     

人恶性疟原虫DNA探针的研究和现场应用概况

一、前言人类疟疾的诊断,50年代以前一般应用病人血涂片染色镜检法。60～70年代开始血清学方法的研究。1975年Grunster and Hogness首次建立Colong hybridization方法之后,DNA探针杂交法开始广泛应用于分子生物学、遗传学、医学方面的研究以及遗传病的传染病诊断和流行病学调查等。其原理是:利用已知标记的单链(变性)DNA为探针与被检样品中互     

恶性疟原虫基因组的研究进展

本综述了疟疾的现状、恶性疟原虫基因组的特点及其研究意义。     

恶性疟原虫海南株丝氨酸重复抗原部分基因序列分析

该文采用ＰＣＲ方法特异性扩增恶性原虫海南株（ＦＣＣ－１／ＨＮ）ＳＥＲＡ基因片段,并将该基因片克隆于Ｍ１３噬菌体,用双脱氧链末端终止法进行测序,ＰＣＧＥＮＥ软件对该基因序列进行了分析,结果显示该基因片段长度为４５３ｂｐ,Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ为２．６：１,符合恶性瓶原虫结构基因的特点。同源性分析显示在不同虫株间高度保守,我国ＦＣＣ－１／ＨＮ虫株ＳＥＲＡ与Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３（巴西）株及Ｓ１６（塞内加尔）株仅一个     

套式PCR用于海南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1和2的分型研究

目的了解海南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1(pfMSP1)和表面蛋白2(pfMSP2)等位基因型的分型特征。方法采用套式PCR法分别扩增pfMSP1基因第2区与第3区部分片段和pfMSP2基因的中间可变区(第3区)，对海南省恶性疟原虫分离株进行基因分型。结果 55份血样中有52份恶性疟疾患扩增pfMSP1基因片段，以MAD20型为主导型(84.6％)，K1型为次要型，未检出RO33型，两种不同等位基因混合感染率为15．4％。同时，55份血样中有53份恶性疟疾患扩增出pfMSP2基因片段，以3D7型为主导型(83％)，FC27型为次要型，混合感染率为17％。结论 海南省恶性疟原虫的MSPl存在MAD20型和K1型两种等位基因型，以MAD20型为优势虫株；其MSP2存在3D7型和FC27型两种等位基因型，以3D7等位基因家族为主。     

恶性疟原虫红内期SSUrRNA编码基因的克隆与序列分析

目的 克隆恶性疟原虫海南株红内期小亚单位核糖体核糖核酸SSUrRNA编码基因(SSUrDNA)片段，并进行序列分析。方法根据献报道恶性疟原虫基因序列设计1对特异性引物，采用聚合酶链反应(PCR)方法从海南恶性疟患血样核酸提取物中扩增出恶性疟原虫SSUrDNA目的基因片段，纯化后与PUC19m-T质粒载体连接构建重组子，并导入大肠杆茵JM109；阳性克隆经双酶切鉴定后，双脱氧末端终止法测定序列，并采用ExPASy Proteomicstools软件分析。结果 恶性疟原虫SSUrDNA扩增片段大小约为431bp；阳性克隆重组质粒作双酶切及PCR扩增均得到预期大小的基因片段；测定的SSUrDNA插入片段核酸序列与巴西恶性疟原虫IMTM／7G8相同基因序列对比。未发现碱基的插入或缺失去，同源性为99．3％；第353位碱基由C取代了G，第371位碱基由T取代了C，其余序列相同。结论 成功克隆了恶性疟原虫海南株红内期SSUrDNA基因片段，该序列在不同恶性疟原虫虫株间相对保守。     

HRP标记DNA探针的制备及杂交条件探讨

目的：用辣根过氧化物酶(HRP)直接标记DNA探针,并对其斑点杂交条件进行探讨。方法：以对苯醌(PBQ)氧化HRP使其产生活化位点,并与聚乙烯亚胺PEI缩合形成HRP-PBQ-PEI复合物,再以戊二醛连接DNA,共价结合构建直接酶标探针进行斑点杂交,利用HRP可与底物发生颜色反应的特点观察结果,并对不同杂交条件进行研究。结果：成功构建了HRP标记的DNA探针,并进行了斑点杂交反应,归纳出较好的杂交条件。结论：直接酶标DNA探针有较高的特异性及敏感性,操作简便快速,经济可行。     

5种提取恶性疟原虫DNA方法用于PCR的结果评价

目的 比较5种DNA模板制备方法的优缺点。方法 采用5种方法所制备的DNA进行PCR扩增，经统计学处理比较制备的成功率，与6对不同引物PCR反应的敏感性，方便性，快速和费用等因素进行综合。结果 用于PCR，方法1－3的成功率显高于法4和5（P＜0．001）；法3制备的DNA敏感性最高，适用性最强。结论 5种方法各有其优缺点，应根据实验目的的选用。     

孕妇外周血血浆胎儿DNA的检测

目的：建立可靠有效的检测孕妇血浆胎儿DNA的方法,探讨其在非创伤性产前诊断中的价值。方法：采用引物引伸预扩增（PEP）法及巢式PCR技术对65例孕妇外周血血浆DNA进行正常男性SRY基因检测。结果：单用巢式PCR技术和联合应用PEP,PCR技术对怀男胎的孕妇血中SRY基因检出率分别为65．2％（30／46）和89．1％（41／46）,两组差异有极显著性,对怀女胎孕妇血中SRY基因的未检出率为78．9％（15／19）和94．7％（18／19）,两组差异无显著性。结论：应用PEP法可对胎儿DNA进行全基因组扩增使DNA模板量增加,并使继后的PCR技术检测SRY基因的敏感性明显提高,PEP法是解决母血中胎儿细胞数量太少的途径之一,孕妇血浆中胎儿DNA可成为非创伤性产前诊断的胎儿物质来源。     

金黄色葡萄球菌nuc基因特异性核酸探针的制备及应用

目的　建立核酸探针检测实验动物金黄色葡萄球菌的方法。方法　将重组质粒pGEM NUC中金黄色葡萄球菌nuc基因特异性片段酶切回收 ,经生物素标记后作为核酸斑点杂交试验探针 ,对细菌菌株及临床样品进行了检测。结果　核酸探针与金黄色葡萄球菌DNA呈杂交阳性 ,而与表皮葡萄球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌等其他细菌DNA呈杂交阴性 ,斑点杂交检测的灵敏度为 1pg基因组DNA。用斑点杂交试验和PCR对 32 2份SPF小鼠的临床样品进行了检测 ,检出率为 3 1% (10 /32 2 ) ,符合率为 10 0 % ,与细菌学检查的结果相一致。结论　建立的DNA探针检测金黄色葡萄球菌方法具有高度的特异性和敏感性 ,且较快速 ,可用于实验动物金黄色葡萄球菌的监测。     

地高辛标记的DNA探针检测核酸疫苗中宿主菌基因组DNA的含量

将合成的引物与宿主菌的染色体模板DNA进行PCR扩增的核糖体DNA片段,以地高辛进行标记,与待测DNA样品进行点杂交,确定制备的乙肝DNA疫苗中其宿主菌基因组含量<15 ng/μg质粒DNA.这提示地高辛标记的探针用于检测基因组DNA的方法灵敏、可靠.     

地高辛配基标记DNA打点杂交和原位杂交检测钩端螺旋体

应用一种新的非放射标记物地高辛配基(DIG)制备黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体DNA(017DNA)探针,与~(32)P和光敏生物素标记017DNA探针对照打点杂交检测钩端螺旋体DNA。结果,上述三种探针均能检测到不同群型的问号状钩体,DIG探针的敏感性为0.1pg,~(32)P和光敏生物素探针的敏感性分别为1 pg和10pg。以上探针均不能检测双曲钩体patoc型Patocl株、细螺旋体illini型3065株,与其它致病菌及人白细胞DNA也无明显杂交信号。DIG标记017DNA探针原位杂交检测感染017株钩体的豚鼠系列组织切片和血浆涂片,以对比度极大的着色反应,清晰地显示各组织和血浆中的钩体形态。细螺旋体illini型3055探针和HBV-DNA探针不能检测到上述标本中的钩体.