非剥脱性激光嫩肤作用机制的实验研究

目的 探讨激光非剥脱性嫩肤的作用机制。方法 昆明小鼠分A、B、C三组，分别以1320nm激光照射小鼠背部左侧皮肤1、2和3次，背部右侧作自身对照，共4个疗程。免疫组化法检测碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和转化生长因子β1（TGF—β1）在受照射小鼠皮肤中的表达。体外培养人成纤维细胞，随机分对照组及低、中、高三个照射能量组。用1320nm激光以15J/cm^2、20J/cm^2和24J／cm^2能量照射，于0、24、48和72h ELISA法检测上清液bFGF和TGF—β1的分泌水平。结果 照射后bFGF和TGF-β1在组织中的表达增加，激光照射3次组与各组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；成纤维细胞计数增加（P〈0．05）；bFGF分泌的量，20J／cm^2、24J／cm^2能量组增加，24h达高峰，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。TGF—β1分泌的量在照射的各能量组均下降，24h达峰底（P〈0．01）。结论 ①激光对成纤维细胞的直接作用是促进bFGF分泌，抑制TGF—β1分泌；而对组织的综合作用是两者分泌均增加；②非剥脱性激光通过光或热的作用直接刺激成纤维细胞分裂增殖；使成纤维细胞自分泌bFGF增加并通过血管因素的作用使bFGF及TGFβ1增加，促进成纤维细胞分裂增殖并使胶原合成增多。     

雌激素受体、血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子在小儿血管瘤中的表达及意义

目的探讨雌激素在小儿血管瘤增殖退化过程中的作用。方法用免疫组织化学法检测42例血管瘤和17例血管畸形标本雌激素受体（estrogen receptor，ER）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth fictor，bF—GF）的表达，分析其相关性。结果血管瘤组的ER、VEGF、bFGF平均标记指数均显著高于血管畸形组及正常皮肤组（P《0．01），血管瘤组中增生期亚组三指标标记指数均显著高于退化期亚组（P〈0．01）。血管瘤中ER与VEGF、bFGF具强正相关性，其相关系数分别为0．91、0．83，而血管畸形组中该相关性较弱，相关系数分别为0．20、0．58（P〈0．05）。结论雌激素及其受体与小儿血管瘤血管生成密切相关。     

17β-雌二醇对骨外膜来源成骨样细胞增殖及基因表达的影响

目的探讨17β-雌二醇（17β-E2）对骨外膜来源成骨样细胞增殖及基因表达的影响。方法6周龄雌性Wistar大鼠颅骨骨外膜来源的成骨样细胞分别在含有0．01、0．05、0．1、0．25、0．5、0．75、1、5、10nmol／L9种浓度17β-E2的成骨诱导培养液中培养，用MTF法测定3、6、9、12d时细胞的增殖情况。用RT—PCR法测定7d时细胞Ⅰ型胶原蛋白仅。链（COLLI）、骨桥接素（OPN）、骨保护素（OPG）及RANKL基因的表达。结果17β-E2作用6、9d时，雌激素组的增殖水平显著高于对照组（P〈0．05）；12d时，0．05nmol／L及以上组的增殖水平显著高于对照组（P〈0．05），各雌激素组的增殖水平的差异无统计学意义（P〉0．05）。（1）COLLI：对照组的表达水平显著高于雌激素组（氏0．05）；在雌激素组中0．5nmo／／L组的表达水平最高，0．75nmol／L组次之，二者皆显著高于其他各组（P〈0．05）。（2）OPN：0．1nmol／L及以上组的表达水平显著高于对照组（P〈0．05）。（3）OPG和RANKL：OPG表达阴性，RANKL在对照组及雌激素组中均有较高水平的表达。结论雌激素对骨外膜成骨样细胞的调节可能以促进增殖，抑制分化为主。骨外膜来源成骨样细胞对破骨细胞的调节可能以促进其祖细胞分化为主。     

碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对骨骼肌源性干细胞的促增殖效应

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）和表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）单独及联合应用对骨骼肌源性干细胞（muscle derived stem cells，MDSCs）生长的影响。方法取出生24h内的昆明小鼠15只，采用连续预贴壁法从小鼠后肢肌分离培养MDSCs，用含2％胎牛血清的DMEM培养基促进其向骨骼肌细胞分化。取原代MDSCs及MDSCs分化细胞，采用免疫细胞化学染色检测干细胞标志Sca-1和骨骼肌细胞标志α-Sarcomeric肌动蛋白的表达。HE染色观察细胞肌管形成。MTT比色法检测不同浓度（6．25、12．50、25．00、50．00、100．00ng／ml）的bFGF和EGF单独应用96h对MDSCs增殖的影响以及二者（100．00ng／ml）联合作用24、48、72和96h对MDSCs增殖的影响。结果从新生小鼠后肢肌成功分离培养MDSCs，免疫细胞化学染色90％以上的MDSCs呈Sca-1阳性，分化形成的肌管呈α—Sarcomeric肌动蛋白阳性。HE染色可见肌管形成。bFGF、EGF对MDSCs的促增殖效应随浓度的增加而增加。与阴性对照组比较，bFGF于12．50ng／ml出现促增殖效应（P〈0．05）；25．00ng／ml组与12．50ng／ml组比较，作用提高（P〈0．01）；50．00、100．00ng／ml组较25．00ng／ml组无明显提升（P〉0．05）；EGF的作用与bFGF类似，但于50．00ng／ml时趋于饱和。与阴性对照组比较，EGF于72h、bFGF于96h表现促增殖效应（P〈0．01），而二者联合应用于24h即表现促增殖效应（P〈0．01），并于48、72和96h增殖效应均较单独应用显著提高（P〈0．05）。结论bFGF和EGF都能促进MDSCs的增殖，联合作用更快、更强。     

去势对骨折早期愈合过程的影响

目的 通过对去势大鼠股骨骨折模型愈合早期骨痂的组织学、骨密度以及转化生长因子β1(Transforming growth factor beta 1.TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF）、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic proteins-2，BMP-2)合成变化的观察．探讨骨质疏松骨折早期愈合过程的变化。方法 将60只雌性SD大鼠分为去势组和对照组，3个月后制成股骨干骨折模型．伤后不同阶段处死．分别进行组织学、骨密度以及TGF-β1,bFGF,BMP-2免疫组化染色方法观察。结果 大鼠去势后3个月全身骨密度检查证实去势组骨质疏松形成。骨折后第3d两组均开始形成原始骨痂；第4～6周，去势组骨痂比对照组少，且软骨痂比例较高．骨密度较低，免疫组化染色显示，在两组间bFGF、BMP-2的表达与分布、高峰出现与持续时间差异无显著性．去势组骨小梁附近表达TGF-β1的成骨细胞数目减少，结论 骨质疏松使大鼠骨折早期骨痂的数量与质量降低，自软骨性骨痂至骨性骨痂演变过程减缓．对骨折愈合过程的影响与BMP-2、bFGF的表达无明显关联。TGF-β1在成骨细胞中的表达减少可能是引起骨质疏松骨折愈合质量下降的因素之一．     

低强度脉冲超声通过PIEZO1/PI3K/AKT/mTOR信号通路促进成骨细胞增殖的研究

目的 探索低强度脉冲超声（low-intensity pulsed ultrasound，LIPUS）的促成骨机制，为治疗骨质疏松寻找潜在有价值的分子靶点。方法 将成骨细胞分为LIPUS组和对照组，分别给予LIPUS 1、6、12、18、24、36 h照射后，使用CCK-8检测两组细胞的增殖活力，并使用Western blot检测两组PIEZO1蛋白的表达水平。将成骨细胞分为对照组、LIPUS组、LIPUS+GsMTx4组和GsMTx4组，给予干预措施后，使用Western blot检测各组p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR和Cyclin D1的表达水平。结果 CCK-8结果提示，LIPUS可显著促进MC3T3-E1成骨细胞的增殖活力；LIPUS组的PIEZO1和Cyclin D1的表达水平显著高于对照组（P＜0.001），表明LIPUS可能是通过上调PIEZO1的表达进而促进MC3T3-E1成骨细胞的增殖；在机制研究中发现，LIPUS组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR和Cyclin D1的表达水平显著高于对照组（P＜0.001），GsMTx4组的显著低于对照组（P＜0.001），LIPUS+GsMTx4组的显著低于LIPUS组（P＜0.001）。结论 LIPUS可通过促进PIEZO1的表达进而活化PI3K/AKT/mTOR信号通路促进MC3T3-E1成骨细胞的增殖。     

鹿茸多肽对软骨表型化骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的 通过观察鹿茸多肽对白细胞介素1β（interleukin 1β，IL-1β）诱导软骨表型化骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells，MSCs）凋亡的影响，以优化软骨组织工程的种子细胞。方法新西兰大白兔2只，抽取其骨髓；经密度梯度离心得到单核细胞，经体外分离、培养获得兔MSCs。用转化生长因子β1（transforming growth factorp β1，TGF-β1）和碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）将其诱导分化软骨表型。将软骨表型化MSCs随机分成A组（空白对照组）：5％胎牛血清的α-MEM培养液；B组（IL-1β组）：5％胎牛血清的α-MEM培养液加入100ngIL-1β；C组（鹿茸多肽组）：5％胎牛血清的α-MEM培养液加入10μg／ml鹿茸多肽作用3d后再加入100ng IL-1β；D组（TGF-β1组）：5％胎牛血清的α-MEM培养液加入10ng／ml TGF-β1作用3d后再加入100ng IL-1β。分别于培养24、48和72h后取样，采用透射电镜观察细胞形态，Annexin V法检测细胞凋亡率，RT-PCR技术分析Caspase-3 mRNA表达水平，ELISA法检测Caspase-3蛋白酶活性。结果透射电镜观察：B组24h后细胞核内染色质开始呈块状凝集，分布于核膜下，核膜不规则；48h后细胞核内染色质凝集加剧；72h后部分细胞内的核碎片凝集成凋亡小体。各时间点C、D组细胞结构改变相对滞后，且数量较少；A组细胞结构几乎无明显改变。各时间点B组MSCs凋亡率、Caspase-3 mRNA表达及蛋白酶活性逐渐增高，与A组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；C、D组与B组比较则逐渐下降，且差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 Caspase-3参与MSCs凋亡，鹿茸多肽通过减少Caspase-3 mRNA表达，并抑制其蛋白酶活性，阻止或逆转软骨表型化MSCs凋亡。     

MMP-2、TIMP-2、VEGF和bFGF在血管瘤增生及消退过程中的变化

目的 探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及其抑制剂（TIMP-2）、血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在血管瘤增生、消退过程中的变化。方法 采用免疫组织化学链霉亲和素-过氧化酶（SP）法，检测增生期血管瘤32例、消退期血管瘤10例、血管畸形17例及小儿正常皮肤10例标本中MMP-2、TIMP-2、VEGF及bFGF的表达。结果 MMP-2、VEGF及bFGF在增生期血管瘤中的表达明显高于消退期血管瘤、血管畸形和正常皮肤，其差异有统计学意义；TIMP-2在消退期血管瘤中的表达明显高于增生期血管瘤、血管畸形和正常皮肤，其差异有统计学意义。结论 MMP-2、VEGF及bFGF可能促进血管瘤血管生成，从而促进血管瘤增生，而TIMP-2可能促进血管瘤消退。     

三种生长因子对人胚半月板细胞增殖及细胞表型的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）、转化生长因子β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1）、胰岛素样生长因子1（insulin-like growth factor1,IGF-1）单独或联合作用于人胚半月板细胞,探讨半月板组织工程种子细胞大量扩增最佳作用组合及浓度。方法无菌条件下取健康妇女意外流产并自愿捐献的4个月人胚半月板,体外分离、培养半月板纤维软骨细胞,用Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和Aggrecan免疫荧光染色检测其性状。取第3代细胞贴壁后使用血清饥饿法同步化细胞,加入IGF-1（1、10、50、100μg/L）、TGF-β1（0.1、1.0、5.0、10.0、50.0μg/L）、bFGF（5、10、50、100、200μg/L）作用于半月板细胞,每样本设8个复孔和阴性对照组,分别于作用后48h和72h采用MTT法检测软骨细胞增殖情况,以确定各生长因子最佳效应浓度。同法设7个组,每组8个复孔,分别为：阴性对照组、bFGF最佳效应浓度组（50μg/L）、TGF-β1最佳效应浓度组（5μg/L）、IGF-1最佳效应浓度组（50μg/L）、bFGF和TGF-β1最佳效应浓度联用组、bFGF和IGF-1最佳效应浓度联用组、TGF-β1和IGF-1最佳效应浓度联用组,48h和72h用MTT比色法得出吸光度（A）值并分析软骨细胞的增殖效应。结果第3代半月板细胞扩增前后细胞均表达Ⅱ型胶原和Aggrecan蛋白。48h和72h50μg/L IGF-1,5μg/L TGF-β1及50μg/L bFGF浓度组与对照组相比均具有促细胞增殖作用,且差异有统计学意义（P〈0.05）;此即为各生长因子最佳效应浓度。生长因子联用：bFGF50μg/L与IGF-150μg/L联用、IGF-150μg/L与TGF-β15μg/L联用具有协同效应,差异有统计学意义（P〈0.05）;bFGF50μg/L与TGF-β15μg/L联用无协同效应,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论bFGF、TGF-β1、IGF-1单独使用均可体外扩增人胚半月板细胞,最佳效应浓度联用时bFGF/IGF-1、IGF-1/TGF-β1的扩增效果优于各自单独使用,可用于体外大量扩增种子细胞。     

水蛭素对皮肤增生性瘢痕成纤维细胞bFGF及TGFβ_1表达的影响

目的：检测水蛭素对人皮肤瘢痕成纤维细胞碱性成纤维细胞因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）、转化生长因子β1（transforming growth factor beta 1,TGFβ1）表达的影响,探讨水蛭素抑制瘢痕形成的作用及机制。方法：体外培养并鉴定人皮肤瘢痕成纤维细胞,实时荧光定量RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测不同浓度水蛭素作用人成纤维细胞24h后,bFGF、TGFβ1的mRNA和bFGF、TGFβ1蛋白表达水平。结果：浓度为0.156～2.5 U/L的水蛭素可下调瘢痕成纤维细胞TGFβ1mRNA、蛋白的表达,同时上调bFGF的mRNA、蛋白的表达,不同浓度组间比较,差异有统计学意义。水蛭素可抑制增生性瘢痕成纤维细胞分泌TGFβ1,促进其分泌bFGF。结论：水蛭素抑制瘢痕可调节bFGF、TGFβ1分泌,由此抑制成纤维细胞的生长、增殖并进一步抑制瘢痕形成。     

尿素免疫脂质体靶向杀伤血管瘤细胞的研究

目的探讨偶联血管内皮生长因子受体(VEGFR)2单克隆抗体的尿素免疫脂质体对血管瘤血管内皮细胞(HVEC)的增殖影响,对血管瘤是否有更好的靶向治疗作用。方法通过细胞毒性实验的多种方法,观察尿素免疫脂质体作用后HVEC的形态和生长曲线变化,检测HVEC细胞存活率、细胞杀伤率及细胞群体倍增时问。结果HVEC细胞存活率与尿素免疫脂质体终质量浓度呈显著负相关。尿素免疫脂质体对HVEC的半效应量(ID50)约26 mg。2.6%尿素免疫脂质体的细胞杀伤率为99.91%。2.6%尿素免疫脂质体作用HVEC后,HVEC的细胞增殖一直处于抑制状态,细胞群体倍增时间无法算出,生长曲线一直呈下降趋势,尿素免疫脂质体对HVEC的增殖抑制作用具有明显的持续效应,尿素免疫脂质体从接种药物开始就对HVEC的增值进行了抑制。结论尿素免疫脂质体对HVEC呈时间依赖性和剂量依赖性生长抑制作用,尿素免疫脂质体具有靶向治疗血管瘤的作用。     

Synergistic effect of estrogen and VEGF on the proliferation of hemangioma vascular endothelial cells

Purpose

The aim of this study was to observe the influences of estradiol (E₂), vascular endothelial growth factor (VEGF), and 4OH-tamoxifen (TAM) on the proliferation of hemangioma vascular endothelial cells (HVECs).

Methods

Two strawberry hemangiomas with positive estrogen receptor staining from 2 infants (cases 1 & 2) were used for HVECs culture. The HVECs of passage 3 were cultured in estrogen-free improved minimum essential medium and divided into 5 groups based on different treatments: group 1, no treatment; group 2, treated with E₂; group 3, treated with VEGF; group 4, treated with both E₂ and VEGF; group 5, treated with E₂, VEGF, and TAM. Cell count (CC) and DNA proliferation index (PI) were determined on culture days 0, 3, 6, and 9.

Results

On day 9 in case 1, CC and PI were the following: in group 1, 1.15 ± 0.18 × 10⁵ mL and 19.96% ± 1.45%, respectively, presenting no statistically significant changes; in group 2, 1.38 and 1.61 times those of group 1, respectively (P < .01); in group 3, 2.10 and 1.61 times those of group 2, respectively (P < .01); in group 4, 1.62 and 1.40 times as high as with group 3, respectively (P < .01); in group 5, down to the levels of group 1. The results in case 2 were similar to those in case 1.

Conclusions

In vitro, the promoting effect of VEGF on HVECs proliferation is stronger than that of estrogen. Estrogen and VEGF enhance this proliferation in a synergistic fashion, which can be inhibited by tamoxifen.     

两种细胞因子联合应用对骨髓基质干细胞增殖和成骨活性的影响

目的 研究骨形态发生蛋白融合基因-4/7(BMP-4/7)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合应用对体外培养兔骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖和成骨活性的影响.方法 体外培养BMSCs,在第3代细胞培养液中加入不同浓度的BMP-4/7和bFGF,依据加入不同基因浓度组合的不同分为5个实验组(A组:80 ng/mL BMP-4/7,B组:80 ng/mL bFGF,C组:30 ng/mL BMP-4/7+30ng/mL bFGF,D组:50 ng/mL BMP-4/7+50 ng/mL bFGF,E组:80 ng/mL BMP-4/7+80 ng/mL bFGF)和对照组(不加任何因子),采用绘制生长曲线,甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测细胞增殖活力,碱性磷酸酶(ALP)和降钙素(OC)活性检测法比较各组间差异,观察不同浓度的BMP-4/7和bFGF联合应用对兔BMSCs增殖和成骨活性的影响. 结果 传代后第5天对照组个别单核细胞贴壁,呈长梭形;A组细胞增殖,呈旋涡状排列;B组细胞较为密集,部分融合成片;C组细胞呈集落式生长,生长旺盛;D组细胞生长密集,可见明显的钙结节;E组细胞密集,可见细胞性钙结节形成.各组OD值、ALP含量、OC含量随着作用时间的延长而增加,各组不同培养时间的OD值差异均有统计学意义(P<0.01);且C、D、E组均高于A、B组,差异均有统计学意义(P<0.05).C、D、E组内随着作用浓度的增加,细胞增殖及成骨活性增强,呈浓度依赖关系,差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 合理的联合应用BMP-4/7和bFGF可促进BMSCs细胞增殖,促进成骨活性,两者对BMSCs有明显的协同增强效应.     

血管瘤中血管内皮生长因子表达的定量研究

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)在血管瘤中的表达,并探讨VEGF在血管瘤中的表达水平与DNA倍体、细胞增殖活性及血管瘤侵袭的关系.方法应用流式细胞仪及免疫荧光技术检测几种类型的血管瘤组织中VEGF表达量荧光指数FI、DNA含量(DNA指数,DI)及细胞增殖活性(增殖指数,PI).结果在血管瘤中多数为DNA异倍体、各类血管瘤FI、DI、PI值之间差异无显著性意义(P＞0.05);包膜完整组与无包膜或包膜不完整组之间FI值差异有显著性意义(P＜0.01);异倍体与二倍体之间FI值差异有显著性意义(P＜0.01);VEGF表达阳性组与VEGF表达阴性组之间PI值差异有显著性意义(P＜0.01).结论VEGF表达水平与血管瘤的侵袭性、DNA倍体及细胞增殖活性密切相关.提示阻止VEGF表达能作为治疗血管瘤的方法.     

生长因子促成年兔关节软骨细胞增殖的研究

目的　研究促进成年兔关节软骨细胞迅速增殖的方法。方法　将体外培养 2 4～ 2 8月龄的新西兰大白兔的原代关节软骨细胞中加入不同浓度的胰岛素样生长因子 - (IGF- )、碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)及 IGF- b FGF联合应用。于 2 4、4 8及 72小时分别进行 MTT检测软骨细胞的成活数 ;检测传 3代后各组软骨细胞的总增殖倍数 ;第 14天后 ,用流式细胞仪检测各组软骨细胞的增殖倍数 ,观察 IGF- 、b FGF及 IGF- b FGF联合应用对成年兔关节软骨细胞各时间点的促增殖作用。结果　 1施加不同浓度的 IGF- 、b FGF或两者联合应用后各时间点软骨细胞活细胞数明显高于对照组 (P<0 .0 1) ;2传 3代后 ,三组总增殖倍数也都明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,且两种因子联合应用 ,增殖倍数明 显比应用单个因子时高 ,有统计学意义 (P<0 .0 1) ;3培养 14天后 ,增殖指数明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,两种因子联合应用时 ,增殖指数明显比应用单个因子时高 (P<0 .0 5 ) ;而施加两次因子时 ,增殖指数比施加一次因子时高 (P<0 .0 5 )。结论　 IGF- 、b FGF对成年兔关节软骨细胞有明显的促增殖作用 ,两者之间有协同效应。     

Promoting effect of estrogen on the proliferation of hemangioma vascular endothelial cells in vitro

PURPOSE: This study was designed to observe whether estrogen can enhance the proliferation of hemangioma vascular endothelial cells (VECs) and, if so, the possible inhibiting effect of tamoxifen against estrogen. METHODS: Two skin hemangiomas with positive estrogen receptor staining from 2 infants were used for VECs culture. Based on different culture conditions and treatment, the subcultured VECs of passage 3 derived from a hemangioma were divided into 5 groups: group 1, control without endothelial cell growth supplement (ECGS) in medium; group 2, estradiol (E2) without ECGS; group 3, control with ECGS in medium; group 4, E2 with ECGS; group 5, E2 and 4OH-tamoxifen with ECGS. Cell counts and 3H-TdR incorporations were determined on culture days 3, 6, and 9. VECs from the other hemangioma were divided into 2 groups: group 3, control with ECGS in medium; group 4, E2 with ECGS. RESULTS: At the end of the 9-day study, the cell counts (x10(4)/mL) of the 5 groups were 6.31+/-1.24, 6.52+/-1.08, 15.62+/-1.88, 36.77+/-3.96, and 6.88+/-1.20, respectively. 3H-TdR incorporations (cpm) were 511+/-127, 538+/-26, 1,350+/-67, 2,729+/-145, and 575+/-64, respectively. The results of the other hemangioma were similar to those of the first one. Our data showed that without ECGS in medium, E2 had no effect on the proliferation of VECs (group 1 v group 2, P>.05); with ECGS in medium, E2 yielded a 2-fold increase in the proliferation of VECs (group 3 v group 4, P<.01); when 4OH-tamoxifen was added, the proliferation of VECs was suppressed dramatically (group 4 vgroup 5, P<.01). CONCLUSIONS: Estrogen in vitro can promote the proliferation of hemangioma VECs. This promoting effect of estrogen may depend on certain growth factors, which can be inhibited by tamoxifen.     

bFGF对培养兔关节软骨细胞作用的实验研究

目的：在于了解硷性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对关节软骨细胞分裂增殖及其特点以及功能代谢的影响。方法：体外单层培养兔关节软骨细胞,以１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ的ｂＦＧＦ作用细胞２、４、６ｄ,测ＤＮＡ含量及基质中糖醛酸含量,阐明细胞的增殖及代谢的变化。同时,在１０ｎｇ／ｍｌｂＦＧＦ作用下,采用流式细胞技术进行细胞周期亚时相分析。结果：结果显示在１～１００ｎｇ／ｍｌ浓度范围内,ｂＦＧＦ对培养软骨细胞的增殖及代谢均有促进作用,以１０ｎｇ／ｍｌ浓度作用最佳。细胞周期较对照组明显缩短,ＤＮＡ合成前期（Ｇ１期）,ＤＮＡ合成期（Ｓ期）和分裂前期及分裂期（Ｇ２Ｍ）的时间分别为１１５、１６３、７２ｈ,对照组分别为２２３、１７９、１５８ｈ。结论：ｂＦＧＦ对培养的关节软骨细胞增殖及基质代谢有促进作用,能缩短软骨细胞ＤＮＡ合成Ｇ１期及Ｇ２Ｍ期而达到缩短细胞周期、促进细胞分裂增殖的。     

Effect of basic fibroblast growth factor and hyaluronic acid on proliferation of rabbit chondrocytes in vitro

Objective: To investigate the effect of basic fibroblast growth factor (bFGF) and hyaluronic acid (HA) on the proliferation of rabbit chondrocytes in vitro. Methods: Chondrocytes from the knee joints of New Zealand white rabbits were cultured, bFGF or HA or both were added into the culture medium respectively, and the proliferation of the ehondrocytes was measured with MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl) 2,5-diphenyl-tetra-zolium bromide. (MTT, Sigma, M2128). Results: Basic fibroblast growth factor (10ng/ml) with low concentration of fetal bovine serum in the culture medium promoted the proliferation of chondrocytes significantly, and this effect reached its maximum when concentration of bFGF reached 50ng/ml. HA itself had no effect on the proliferation of chondrocytcs. However, when bFGF was used in combination with HA, especially when the concentration of bFGF was 50-500ng/ml and that of HA was 10-50ng/ml, the effect on the proliferation of chondrocytes was much more than when bFGF or HA was used alone. Conclusions: bFGF can promote the proliferation of chondrocytes. HA, which has no effect on the proliferation of the cells, can maintain a normal growth of chondrocytcs.When bFGF is used in combination with HA, more proliferation is obtained.     

碱性成纤维细胞生长因子对胆肠吻合口愈合的影响

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子( basic fibroblast growth factor,b FGF)对胆肠吻合口愈合过程的影响,预防术后吻合口狭窄。　方法　选用健康杂种犬31只,随机分为实验组16只,对照组15只。通过制作犬胆总管十二指肠吻合模型,术后1周内吻合口局部应用b FGF(实验组)及生理盐水(对照组)。术后3d,1、3周,3、6个月( n=3)分别取材行HE及Masson染色组织学观察,吻合口瘢痕组织羟脯氨酸含量测定。　结果　实验组较对照组愈合时间明显缩短。组织学见实验组肉芽组织中成纤维细胞及毛细血管增生,上皮增生明显加快,1周时开始修复,3周时基本完成,瘢痕亦已基本定型,胶原纤维排列整齐有序,较快( 2～3周左右)进入塑形期;对照组术后3周时胶原纤维排列杂乱,呈旋涡状。电镜观察实验组肉芽组织中细胞功能旺盛,胞浆丰富,粗面内质网发达。瘢痕组织羟脯氨酸含量术后各时间点实验组均小于对照组,差异有统计学意义( P<0 .0 5 )。　结论　吻合口局部应用b FGF可预防术后胆肠吻合口狭窄     

bFGF和硫糖铝在持续恒压扩张术中局部联合应用对组织细胞增殖的影响

目的 研究bFGF和硫糖铝在扩张术中局部应用对细胞增殖的影响。方法 白色小猪9只，自身对照，分为实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组，对照组，扩张术中分别注入bFGF和硫糖铝、bFGF、硫糖铝、生理盐水。各动物于术后第1～14天取出扩张器后6周取材作免疫组织化学检查。结果 持续恒压扩张术同时加用bFGF和硫糖铝后，表皮层基底细胞增殖更早更明显，尤其以第3天最为显著，14d基底细胞增殖指数最低但也高于对照组（持续恒压扩张组）；真皮层成纤维细胞，毛细血管内皮细胞，毛囊上皮细胞，汗腺上皮细胞增殖更明显，早于对照组，7d达高峰，14d明显减少但仍高于对照组，6周基本恢复正常。实验Ⅱ、Ⅲ组与对照组差异无显著性意义。结论 bFGF和硫糖铝联合局部应用于扩张术，促细胞增殖作用强，从而在扩张早期有效地诱导皮肤细胞分裂增殖，促进皮肤软组织生物性生长。