miR-186海绵载体的构建及其在EA.hy926细胞株中的表达

目的：构建微小RNA-186（miR-186）基因的海绵载体,建立稳定敲减miR-186的EA.hy926细胞株。方法：化学合成miR-186海绵体序列,并克隆到慢病毒FV040表达载体上;采用lipofectamine 2000共转染FV040-miR-186-sponge载体和慢病毒辅助包装质粒到HEK293T细胞,包装慢病毒,测定病毒滴度;FV040-control慢病毒作为对照组,FV040-miR-186-sponge作为实验组,分别感染EA.hy926细胞,筛选稳转细胞株;采用荧光定量PCR （qPCR）法检测空白对照组、FV040-control对照组及FV040-miR-186-sponge实验组中EA.hy926细胞miR-186的相对表达水平。结果：测序结果显示克隆的目的基因序列与设计的miR-186海绵体序列完全一致。在感染的EA.hy926细胞中观察到绿色荧光蛋白（GFP）的表达。FV040-control包装的慢病毒滴度为2×10⁸ TU·mL^-1,FV040-miR-186-sponge组慢病毒滴度为6×10⁸ TU·mL^-1;成功建立了稳定表达miR-186-sponge的EA.hy926细胞株,感染效率达95%;qPCR检测,与空白对照组和FV040-control组比较,FV040-miR-186-sponge组EA.hy926细胞中miR-186相对表达水平降低（P<0.01）。结论：成功构建了miR-186基因的海绵载体,建立了稳定下调miR-186表达的EA.hy926-miR-186-sponge细胞株。     

Study on the protective effect of Tadehaginoside on the damage of endothelial cell mitochondria induced by reactive nitrogen

ABSTRACT Objective: To investigate the protective effect of Tadehaginoside on vascular endothelial cell injury induced by reactive nitrogen. Methods: MTT colorimetry was used to detect the effect of Tadehaginoside on the survival rate of EA.hy 926 endothelial cells in the concentration range of 5～160 μmol/L; 1 h after pre-administration of Tadehaginoside, 0.5 mM GSNO was given to damage endothelial cells. Detect the mitochondrial specific factors COX-1, ND-1 and inflammatory factor IL-1β of EA.hy 926 cells damaged by GSNO by Real time-PCR method gene intervention. At the same time, Western blot was used to detect the changes in Bax and Bcl-2 protein expression. The mitochondrial membrane potential kit (JC-1) was used to detect the change of Tadehaginoside on the mitochondrial membrane potential after GSNO induced EA.hy 926 cell injury. Results: The results of the MTT method showed that Tadehaginoside had no obvious cytotoxicity on EA.hy 926 cells in the range of 5～160 μmol/L, and the optimal protective concentration of the drug was 40 μmol/L. Western Blot method showed that BAX protein expression increased in a time-dependent manner after GSNO damaged EA.hy 926 cells over time, while Bcl-2 protein expression was the opposite. Real time-PCR results showed that Tadehaginoside can significantly up-regulate COX-1 gene (P < 0.05), and can significantly inhibit GSNO induced ND-1 (P < 0.05) and IL-1β gene up-regulation (P < 0.01). At the same time, the results of JC-1 showed that Tadehaginoside could significantly protect the mitochondrial membrane potential from GSNO damage. Conclusion: The GSNO damage model may induce the increase of Bax and other pro-apoptotic proteins through mitochondrial DNA damage and reduce the expression of anti-apoptotic factor Bcl-2. Tadehaginoside has a certain protective effect on endothelial cell mitochondrial damage induced by reactive nitrogen, and its mechanism is related to inhibiting the expression of ND-1 and IL-1β genes and up-regulating the expression of COX-1 genes.     

RHBDF2基因过表达慢病毒载体的构建和稳定表达RHBDF2细胞系的建立

目的：构建RHBDF2基因过表达慢病毒载体,建立稳定表达RHBDF2的EA.hy926细胞,为RHBDF2基因过表达慢病毒载体的构建和稳定表达RHBDF2细胞的建立提供依据。方法：根据NCBI提供的RHBDF2基因序列,设计并合成引物,PCR扩增RHBDF2基因后通过Gateway克隆技术将目的基因克隆至入门载体,再亚克隆至慢病毒载体pLV[Exp]-EGFP,构建重组慢病毒质粒pLV[Exp]-EGFP-RHBDF2;将慢病毒表达载体质粒pLV[Exp]-EGFP和重组慢病毒质粒pLV[Exp]-EGFP-RHBDF2分别与慢病毒辅助包装质粒共转染HEK293T细胞,包装慢病毒并测定慢病毒滴度;将感染pLV[Exp]-EGFP-control的EA.hy926细胞作为对照组,感染pLV[Exp]-EGFP-RHBDF2的EA.hy926细胞作为实验组,利用嘌呤霉素筛选出稳定表达RHBDF2的EA.hy926细胞;荧光定量PCR （qPCR）和Western blotting法检测对照组和实验组EA.hy926细胞中RHBDF2 mRNA和蛋白表达水平。结果：酶切电泳和测序检测,实验组过表达慢病毒载体的基因序列与设计合成的序列完全一致;对照组包装的慢病毒滴度为1×10⁸ TU·mL^-1,实验组慢病毒的滴度为3×10⁸ TU·mL^-1;荧光显微镜下慢病毒成功感染EA.hy926细胞,感染率达95%以上;qPCR检测,实验组EA.hy926细胞中RHBDF2 mRNA表达水平较对照组明显升高（P<0.01）;Western blotting法检测,实验组EA.hy926细胞中RHBDF2蛋白表达水平较对照组明显升高（P<0.05）。结论：成功构建RHBDF2过表达慢病毒载体,利用pLV[Exp]-EGFP-RHBDF2慢病毒建立了稳定上调RHBDF2表达的EA.hy926细胞系。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对PM2.5染毒血管内皮细胞的保护作用

目的 观察丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对PM2.5引起的血管内皮细胞EA.hy926损伤的保护作用.方法 取对数生长期EA.hy926细胞分为对照组、100 μg/mL PM2.5组及STS干预组(先给予12.5、25、50 μg/mL STS干预后再加入100 μg/mL PM2.5).24 h后CCK8法测定细胞的存活率,荧光标记法检测细胞内氧自由基生成情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测凋亡蛋白酶Caspase-9和Caspase-3的表达变化.结果 PM2.5对EA.hy926细胞有明显的毒性,可以导致细胞内氧自由基生成增多,并引起Caspase-9和Caspase-3活化造成细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义;STS可以抑制PM2.5对EA.hy926细胞的毒性,降低胞内活性氧(ROS)生成及Caspase-9和Caspase-3的活化,减少细胞凋亡数目,与PM2.5组比较差异有统计学意义.结论 丹参酮ⅡA磺酸钠可以减少PM2.5引起的血管内皮细胞凋亡,其保护作用可能与抑制氧自由基生成有关.     

ZNF580过表达对内皮细胞血管内皮生长因子的表达及增殖能力的影响

【目的】研究人锌指蛋白新基因ZNF580过表达对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达及增殖能力的变化,为探讨ZNF580基因功能提供科学依据。【方法】重组质粒pEGFP-ZNF580经LipofectamineTM2000脂质体转染法转染EA.hy926细胞,48h后荧光显微镜下观察ZNF580-EGFP在内皮细胞中的表达情况;应用半定量RT-PCR、Western blotting及ELISE法检测转染前后内皮细胞ZNF580和VEGFmRNA、蛋白表达的变化;运用MTT实验检测转染前后内皮细胞增殖能力的改变。【结果】荧光显微镜下示融合蛋白ZNF580-EGFP在EA.hy926细胞核中表达;ZNF580基因过表达后,内皮细胞VEGFmRNA及蛋白的表达均上调(P<0.05),且其增殖能力显著升高(P<0.01)。【结论】ZNF580可以调控EA.hy926细胞VEGF的表达,且ZNF580在内皮细胞增殖过程中具有重要的调节作用。     

人β2糖蛋白1的重组表达及对抗磷脂抗体综合征患者血清诱导内皮细胞产生ICAM-1的影响

目的：探讨重组人β₂糖蛋白1(hrβ₂-GP1)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导内皮细胞系产生细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响。 方法：应用pQE30表达载体表达hrβ₂-GP1,Western blotting对重组蛋白进行鉴定;应 用hrβ₂-GP1处理前后的APS患者血清分别与内皮细胞株EA.hy926共孵育,细胞ELISA和 RT-PCR方法分析处理前后EA.hy926表达ICAM-1的变化。 结果：成功构建pQE30-hβ₂-GP1,并对表达产物进行了纯化和鉴定,所获得的蛋白与预期的大小一致,并具有人β₂-GP1的抗原性;rhβ₂-GP1处理后的APS患者血清与处理前比 较,与其孵育的内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1在蛋白和mRNA水平均明显降低,这种抑制作用随着rhβ₂-GP1的浓度增加而逐渐增强。 结论：抗β₂糖蛋白1抗体(anti-β₂GP1)促进内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1, hrβ₂-GP1可中和此作用。     

平阳霉素对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926的作用及其机制

目的:观察平阳霉素(PYM)对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926的作用及可能机制。方法:采用甲基三氯硅烷(MTS)比色法检测PYM对EA.hy926细胞体外生长的作用;流式细胞术测定PYM作用细胞24h后细胞凋亡、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达、线粒体膜电位的变化;免疫印迹(Western-blot)法检测PYM对EA.hy926细胞中Caspase-8、Caspase-9蛋白表达水平的影响。结果:PYM可明显抑制EA.hy926细胞的增殖,且生长抑制率具有浓度时间依赖性;流式细胞术检测结果显示PYM各浓度作用24h后,细胞凋亡百分率随药物浓度增加而增高,活化Caspase-3表达在PYM各浓度组均增强,线粒体膜电位在各浓度组均下降;Western-blot法检测结果显示PYM作用EA.hy926细胞后,Caspase-8、Caspase-9蛋白均可出现明显的剪切带。结论:PYM能抑制EA.hy926细胞的增殖,这种抑制作用是可通过诱导细胞凋亡实现的,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9参与了PYM诱导EA.hy926细胞凋亡的过程。     

HO-1激动剂Copp对放射所致内皮细胞凋亡的抑制作用

目的探讨血红素加氧酶1(HO-1)在放射所致内皮细胞凋亡中的作用。方法预先通过HO-1激动剂Copp和(或)HO-1抑制剂Znpp分别处理人血管内皮细胞EA.hy926。然后,预处理后的部分细胞接受8 Gy的照射。分别通过Western blotting和流式细胞仪检测EA.hy926细胞HO-1蛋白、细胞色素C的表达以及EA.hy926细胞的凋亡率。结果PBS R组EA.hy926细胞经8 Gy照射后低表达HO-1蛋白;而细胞先经Copp和(或)Znpp处理后,再行8 Gy照射,其HO-1蛋白的表达则显著增高(P<0.01)。与Znpp R组相比,Copp R组的增高较为明显(P<0.01);另外,Copp R组HO-1蛋白的表达低于Copp Znpp R组(P<0.01)。进一步通过流式检测各组细胞凋亡的情况显示,与其他各组相比,Copp R组细胞的凋亡率最低(P<0.01),这与相应各组细胞细胞色素C的表达水平结果一致。结论诱导并激活HO-1能够减少放射所致的内皮细胞凋亡。     

基于斑马鱼和EA.hy926细胞模型评价活血化瘀方的促血管新生作用

目的:评价活血化瘀方(SE)的促血管新生作用,并探讨其可能的作用机制。方法:选择转基因斑马鱼幼鱼及内皮细胞系EA.hy926细胞株为模型,按空白对照组、模型组、活血化瘀方不同剂量组进行分组和给药干预。在荧光显微镜下观察正常斑马鱼胚胎培养液中空白对照组及活血化瘀方组肠下静脉血管(SIVs)的生长状况;用VEGF受体抑制剂(VRI)诱导斑马鱼血管损伤,观察各组斑马鱼节间血管(ISVs)生长情况;采用VRI抑制内皮细胞系EA.hy926增殖模型,用MTT法评价活血化瘀方各组对细胞增殖的促进作用;用Real-time PCR法,检测各组斑马鱼体内血管内皮生长因子受体(VEGFR)基因(flt1、kdr、kdrl)的表达情况。结果:在正常斑马鱼模型上,活血化瘀方可明显促进斑马鱼SIVs出芽;在VRI诱导的斑马鱼血管损伤模型上,活血化瘀方各剂量组能够明显抑制斑马鱼ISVs的损伤,其血管生长指数与模型组比较差异均有统计学意义(P0.001);在EA.hy926细胞模型上,活血化瘀方各剂量组可明显促进内皮细胞的增殖。Real-time PCR结果表明,模型组VRI显著抑制了斑马鱼体内VEGF受体基因flt1、kdr、kdrl的表达,而活血化瘀方各剂量组的表达量均明显增高,并呈现一定的剂量依赖关系。结论:活血化瘀方在内皮细胞模型、正常斑马鱼模型和VRI诱导的斑马鱼血管损伤模型上均具有促血管新生作用,其机制可能与其上调VEGF受体flt1、kdr、kdrl基因的表达有关。     

重组慢病毒载体介导HIV-1 Nef蛋白对原发性渗出性淋巴瘤细胞系和血管内皮细胞增殖作用影响的初探

目的:构建含有HIV-1负调控因子(Nef)基因的重组慢病毒表达载体,并检测Nef蛋白在人胚肾293T细胞、体腔渗出性淋巴瘤细胞BCBL-1和人血管内皮细胞EA.hy926中的表达情况及其对BCBL-1和EA.hy926细胞增殖的影响。方法:从本实验室已构建好的含Nef基因的重组真核表达质粒pCI-neo-Nef中扩增出Nef基因,插入到慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-Izs-Green中构建成pHAGE-Nef,利用脂质体将其与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞。荧光显微镜下观察293T细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达并收集培养上清,此上清经0.45μm滤器过滤后即获得慢病毒悬液。梯度稀释法测定慢病毒滴度。将重组慢病毒分别感染293T、BCBL-1和EA.hy926细胞,用Western blot检测Nef蛋白的表达。通过细胞增殖实验检测Nef蛋白对BCBL-1和EA.hy926细胞增殖的影响。结果:限制性内切酶鉴定和核酸序列测序证实成功构建了含HIV-1 Nef基因的重组慢病毒表达载体,病毒滴度为1×107 TU/ml。以重组慢病毒分别感染293T、BCBL-1和EA.h...     

奥美拉唑对人脐静脉内皮细胞全基因表达谱的影响及机制分析

目的研究奥美拉唑对体外培养人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)基因表达谱的影响,探讨奥美拉唑对内皮细胞作用的分子机制。方法 10-5mol/L奥美拉唑与人脐静脉内皮细胞株共培养48 h,运用Affymetrix U133 plus 2.0全基因组表达芯片,检测奥美拉唑对人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响,分子注释系统MAS3.0软件进行聚类分析。RT-PCR验证基因表达谱结果,Western blotting验证相关蛋白水平的变化。结果奥美拉唑作用内皮细胞48 h后,基因芯片分析筛选出差异表达大于1.5倍的基因282个,其中上调基因236个,下调基因46个,包括转录调节、炎症反应、免疫反应、细胞粘附、抗凋亡、信号转导等相关基因,RT-PCR和Western blotting结果与基因芯片结果一致。结论奥美拉唑在基因水平通过多条通路调节内皮功能。     

DEPP蛋白对血管内皮细胞的存活及基因表达的影响

目的:探讨孕酮诱导的蜕膜蛋白(decidual protein induced by progesterone,DEPP)在血管内皮细胞EA.hy926中的定位?对细胞存活及基因表达的影响?方法:构建表达人DEPP的重组腺病毒,测定病毒滴度并鉴定其表达的DEPP蛋白水平?用构建好的腺病毒感染EA.hy926内皮细胞,通过免疫荧光和Western blot确定DEPP蛋白在细胞中的定位?观察DEPP过表达对EA.hy926细胞存活的影响,用MTT法测定细胞的存活率,通过流式细胞仪检测EA.hy926细胞的坏死和凋亡情况?利用蛋白质芯片检测DEPP过表达时内皮细胞中血管发生相关基因表达水平的变化?结果:本研究成功构建了表达人DEPP蛋白的重组腺病毒?通过免疫荧光检测,发现DEPP蛋白呈全细胞分布?与过表达GFP的对照细胞相比,过表达DEPP时EA.hy926细胞明显皱缩?变圆,MTT检测显示细胞的存活率明显下降,流式细胞仪检测显示EA.hy926细胞感染腺病毒后细胞的坏死水平与对照组相比升高?蛋白质芯片检测发现,DEPP过表达导致内皮细胞中多种血管发生相关蛋白的水平发生明显改变?结论:DEPP蛋白的表达升高对血管内皮细胞有损伤作用,可能参与血管发生的调控过程?     

VEGF165-tPA双基因真核表达载体的构建和体外表达

目的构建人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和人组织型纤溶酶原激活因子(tPA)双基因的新型真核表达载体pIRES-VEGF165-tPA,并通过转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,验证载体的体外表达情况。方法将目的基因片段VEGF165和tPA插入到真核表达载体pIRES质粒中,体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,通过实时荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白水平的表达。结果成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,测序结果与预期相符;荧光计数显示体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞的转染效率约为(15.6±3.1)%;实时荧光定量RT-PCR和Western blot证实转染pIRES-VEGF165-tPA质粒组细胞在mRNA和蛋白水平的表达均高于各对照组(均P<0.01)。结论成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,并且实现其在人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞中的表达,为进一步探索其在机械瓣膜抗凝方面的作用奠定了基础。     

益气活血方对凝血酶诱导内皮细胞促血栓因子表达的影响

目的:观察益气活血方对凝血酶诱导内皮细胞表达促血栓因子纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)及组织因子(tissue factor,TF)的影响。方法:体外培养内皮细胞,在含有凝血酶(4 U·m L~(-1))的培养基中加入梯度质量浓度的益气活血方(0~5.0 g·L~(-1)),作用12 h后MTT法检测细胞活力,确定益气活血方对内皮细胞无毒性的最大浓度;之后将细胞分为4组进行实验,分别为空白对照组、凝血酶组、益气活血方低剂量组(0.25 g·L~(-1))、益气活血方高剂量组(1.25 g·L~(-1)),加入益气活血方预处理2 h后加入凝血酶刺激10 h,Western blot检测PAI-1、TF的表达量。结果:由MTT检测结果得到益气活血方对内皮细胞无毒性的最大浓度为1.25 g·L~(-1),并将此浓度作为益气活血方高剂量组。Western blot结果显示益气活血方低剂量组(0.25 g·L~(-1))、高剂量组(1.25 g·L-1)均可抑制凝血酶诱导的PAI-1、TF表达(P0.05或0.01),且呈一定的量效关系。结论:益气活血方可有效抑制凝血酶诱导内皮细胞促血栓因子PAI-1、TF的表达,对内皮细胞有潜在保护作用。     

A new norlignan from Saururus chinensis

从三白草的95%乙醇提取物中分离得到3个化合物,分别鉴定为 Sauchinolide A(1),rel-(7S,8S,7′R,8′R)-3,3′,4,4′,5,5′-hexamethoxy-7.O.7′,8.8′-lignan(2),galgravin(3)。其中化合物1为新的降六碳木脂素,命名为三白草内酯 A;化合物2和3为首次从三白草科植物中分离得到。初步评价了化合物1~3对内皮细胞 EA.hy926的缺氧/复氧损伤的保护作用,化合物2对EA.hy926细胞缺氧/复氧损伤具有中等的保护作用。     

系统性血管炎抗内皮细胞抗体的检测及其与病情活动的相关性

目的　研究抗内皮细胞抗体 (AECA)在系统性血管炎患者血清中的检出率 ,分析其与病情活动的相关性 ,比较两者差异有无显著意义 ,初探AECA的分类。方法　采用Cyto ELISA法 ,分别以EA hy92 6及HMEC 1为底物 ,检测 12 2例系统性血管炎患者血清中AECA ,与临床资料行相关性分析 ,并比较两种底物细胞所测AECA有无差异。结果　EA hy92 6为底物时系统性血管炎 ( 33 6 1% )及系统性红斑狼疮 (SLE)患者 ( 32 35 % ) ,AECA阳性率显著高于类风湿关节炎 (RA) ( 2 5 0 % )患者及正常人 ( 4 76 % ) ;HMEC 1为底物细胞时系统性血管炎患者 ( 37 70 % )显著高于RA患者 ( 7 5 % )及正常人( 9 5 2 % ) ,SLE患者的AECA阳性率 ( 6 1 75 % )显著高于其他各组。其他组间差异无显著意义。AECA与红细胞沉降率相关 ,与其他生化指标无相关性。伯明翰血管活动度评分 (BVAS)与AECAP/N成正相关。对两种底物细胞所测AECA值显著相关 ,符合率 92 6 2 %。结论　AECA在系统性血管炎有较高的检出率 ,可反映病情活动度 ;AECA在系统性血管炎可否分为针对大小血管内皮细胞两类 ,有待进一步研究     

EA.HY926人脐静脉内皮细胞株与原代细胞生物特性的比较研究

目的比较培养EA．HY926人脐静脉内皮细胞株与原代脐静脉内皮细胞（HUVECs）的优缺点及生物学特性。方法通过倒置显微镜、透射电镜形态学鉴定、Ⅷ因子相关抗原免疫组织化学检查及生长曲线测定,比较2种脐静脉内皮细胞的形态、生长喵线等差异。结果透射电镜观察到原代HUVECs中发现较多Webel—Palade小体,而EA．HY926细胞株较少见。免疫组织化学染色ImageProPlus6．0软件进行分析EA．HY926人脐静脉内皮细胞株与原代HUVECs平均光密度值分别为（2234．02±78．78）、（4138．80±594．01）。原代HUVECs的染色程度明显较EA．HY926细胞株高,差异有统计学意义（Pd0．01）。EA．HY926人脐静脉内皮细胞株生长曲线较原代HUVECs稳定。结论培养原代HUVECs耗时长,生长期较短,易出现杂细胞的污染,细胞的增殖能力有限,花费昂贵。EA．HY926细胞株虽生物特性较差,但其操作简便,具有一定程度的原代HUVECs所具有的生物特性,细胞均一以及增长旺盛,可用于较复杂、细胞创伤较大的体外内皮细胞的研究。     

高糖环境对体外培养糖尿病大鼠大血管内皮细胞产生转化生长因子—β的影响

OBJECTIVE: This study was designed to examine the secretion of TGF-beta by cultured rat thoracic aortic endothelial cells of the diabetic rats under high gluocose condition. METHODS: First we created diabetic rat models, then the thoracic aortic endothelial cells of the diabetic rats were isolated and cultured in 10% FBS-RPMI 1640 media with various high glucose concentrations (12.5 mmol/L, 25 mmol/L or 50 mmol/L D-glucose), high glucose and TNF-alpha or high glucose and insulin for 48 hours, and the supernatant obtained from the cultured aortic endothelial cells was collected. The level of TGF-beta 1 in the supernatant was measured using a standard bioassay, which utilizes the TGF-beta 1 sensitive Mv1Lu (CLL-64) Mink lung epithelial cell line, and the production of endothelin (ET) in the supernatant was also assessed by RIA (radio immol/Lunoassay). RESULTS: Both total TGF-beta 1 (406 +/- 29 vs 189 +/- 23 pg/ml, P < 0.05) and active TGF-beta 1 (161 +/- 24 vs 39.5 +/- 8 pg/ml) secreted by the cultured aortic endothelial cells under high glucose condition (25 mmol/L) were significantly increased as compared with control. TNF-alpha could enhance the effect of high glucose on the secretion of TGF-beta 1, whereas insulin could inhibit it. With various high glucose concentrations, the levels of ET were increased. Also TNF-alpha enhanced it and insulin inhibited it. CONCLUSION: TGF-beta 1 may be involved in the development of diabetic macrovascular complication.     

高糖环境对体外培养糖尿病大鼠大血管内皮细胞产生转化生长因子-β的影响

目的　探讨体外高糖环境对糖尿病大鼠大血管内皮细胞及内皮细胞株产生转化生长因子 - β( TGF- β)的影响。方法　 1制备糖尿病大鼠动物模型 ;2培养糖尿病大鼠大血管内皮细胞 ;3分别用含不同浓度葡萄糖 ( 12 .5 m mol/ L、2 5 m mol/ L、5 0 mm ol/ L D-葡萄糖 )、高糖加肿瘤坏死因子 - α( TNF- α)和高糖加胰岛素的 10 %小牛血清 RPMI16 40液培养糖尿病大鼠主动脉血管内皮细胞 48小时 ,取上述培养液分别用生物学方法测其 TGF- β1水平 ,采用放射免疫法测其内皮素 ( ET)的水平。结果　高糖环境下血管内皮细胞分泌的总 TGF- β1 ( 40 6± 2 9pg/ml)及活性 TGF- β1 ( 16 1± 2 4pg/ m l)含量与对照组 (总 TGF- β1 189± 2 3pb/ m l,活性 TGF- β1 39.5± 8pg/ m l)相比明显增加 ( P均 <0 .0 5 )。TNF- α可以加强高糖的这种刺激作用 ,而胰岛素处理可以抑制这种作用。高糖刺激后 ,培养上清中 ET含量明显增加 ( P<0 .0 5 ) ,TNF- α可以加强这种作用 ,胰岛素却能抑制这种作用。结论　 TGF- β可能参与了糖尿病大血管并发症的发生发展