鞘内预先应用L-NAME抑制福尔马林炎性痛大鼠脊髓后角c-fos表达

目的:观察鞘内预先应用非选择性一氧化氮合酶抑制剂-Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对福尔马林炎性痛大鼠脊髓后角内c-fos表达的影响。方法:选择体重220～310g、鞘内置管后无神经损伤的SD大鼠60只,在其左足底皮下注射4%福尔马林40μl建立炎性痛模型。在皮下注射福尔马林前15min,通过预先置入的导管向大鼠鞘内注射容量均为10μl的L-NAME250μg(FL组)或生理盐水(FN组)。分别在注射后1h、4h、8h、12h和24h处死动物,在每一时间点每组处死的动物数均6只。另有4只大鼠在左足底皮下注射生理盐水,4h后处死作为对照组。采用免疫组化方法观察各组大鼠同侧脊髓后角内c-fos表达的情况。结果:在皮下注射福尔马林后,大鼠脊髓后角内出现了迅疾和持久的c-fos表达增强反应,而且随着时间的推移,脊髓后角深层fos阳性(fos-like immunoreactivity,FLI)神经元数目的增加更加显著。与FN组相比,FL组大鼠脊髓后角内FLI神经元数目在浅层减少23.1%～51.8%,而在深层则减少46.3%～58.3%。结论:鞘内预先应用L-NAME可有效抑制福尔马林炎性痛诱发的脊髓后角c-fos表达增加,尤其是对脊髓后角深层c-fos表达的选择性抑制最为显著。     

鞘内注射吗啡对坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠腰段脊髓后角神经元中c-fos蛋白表达的影响

目的 坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)可以引起腰段脊髓后角中c-fos的表达.μ-阿片受体长期以来被认为与脊髓中的镇痛机制有关,而吗啡作为μ-阿片受体激动剂被应用于病理性疼痛的治疗中.本实验通过给坐骨神经CCI大鼠模型鞘内注射吗啡,观察其对脊髓后角中c-fos表达的影响.方法 23只Sprague-Dawley大鼠随机分为三组.其中B、C两组大鼠接受右侧坐骨神经外周结扎手术,而A组为假手术组.9 d后,A、C两组大鼠接受鞘内注射吗啡同时给B组大鼠鞘内注射生理盐水.注射后6 d,解剖三组大鼠并取出L3～L5节段的脊髓制成40μm的冰冻切片.标本在室温下进行荧光免疫染色后制成玻片.使用激光共焦点显微镜下观察各脊髓切片标本双侧c-fos的染色情况.结果 三组大鼠手术侧同侧的脊髓后角中c-fos阳性神经元较对侧明显增多.但是c组大鼠脊髓后角同侧的c-fos阳性神经元较B组少.结论 μ-阿片受体激动剂能明显减少CCI大鼠腰段脊髓后角中c-fos的表达.     

术前给予巴氯酚延迟坐骨神经松结扎神经病理痛的形成

目的研究术前鞘内注射GABAB受体激动剂巴氯酚(Bac)对慢性神经病理痛大鼠痛阈的影响,探讨脊髓GABA能系统在神经病理痛调节中的作用。方法建立慢性坐骨神经结扎损伤模型(CCI),SD大鼠32只随机分成4组:假手术组,大鼠左侧坐骨神经分离,但不结扎,术前鞘内注射生理盐水10μL;神经结扎组,大鼠左侧坐骨神经松结扎,术前鞘内注射生理盐水10μL;Bac 1组,大鼠左侧坐骨神经松结扎前10 min,鞘内注射Bac 0.03μg;Bac 2组,大鼠左侧坐骨神经松结扎前10min,鞘内注射Bac 0.3μg。术后第1、3、5、7、10、14天测大鼠机械刺激缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL)以及运动功能。结果术后第1~14天神经结扎组大鼠MWT和TWL较假手术组大鼠明显降低(P<0.05);术前给Bac 0.3μg的坐骨神经结扎大鼠与术前给生理盐水的坐骨神经结扎大鼠比较,术后第1~5天MWT和TWL明显升高(P<0.05)。结论坐骨神经结扎前鞘内注射Bac 0.3μg可延缓大鼠神经病理性疼痛的形成。     

氯胺酮对甲醛致痛诱导大鼠脊髓背角神经元兴奋性的抑制

背景:氯胺酮是否可通过影响脊髓水平的伤害性信息的传递而发挥抗伤害作用尚不清楚;一氧化氮在脊髓水平主要参与痛觉过敏的形成和发展,可诱导Fos表达,但其是否参与了氯胺酮对痛信号的转导或调控的机制不明。目的:观察大鼠脊髓对甲醛痛刺激的反应及氯胺酮的影响。设计:均衡随机的动物实验。单位:徐州医学院附属医院麻醉科和江苏省麻醉学重点实验室。材料:实验于2000-01/03在徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室进行。取SD大鼠30只,用均衡随机方法分为6组熏甲醛组6只,甲醛 氯胺酮组6只,氯胺酮 甲醛组6只,氯胺酮组6只,甲醛 生理盐水组3只,生理盐水组3只,各组雌雄比例相同。方法:①甲醛组:体积分数为0.05的甲醛200μL一侧前爪掌心皮下注射,刺激1h。②甲醛 氯胺酮组:甲醛痛刺激10min后腹腔注射100mg/kg氯胺酮1h。③氯胺酮 甲醛组:腹腔注射氯胺酮10min后再行甲醛痛刺激1h。④氯胺酮组:腹腔注射同等剂量氯胺酮1h。⑤甲醛 生理盐水组:甲醛痛刺激10min后腹腔注射等容(10mL/kg)的生理盐水1h。⑥生理盐水组:腹腔注射等容生理盐水1h。主要观察指标:①各组大鼠行为学表现。②取脊髓切片,用c-fos基因免疫组化法和NADPH-d组化技术染色,观察大鼠脊髓背角4层(Ⅰ～Ⅱ层,Ⅲ～Ⅳ层,Ⅴ～Ⅵ层,Ⅶ～Ⅹ层)切片Fos样免疫阳性神经元(FLI)和FLI/NOS双标记神经元的数目变化。结果:30只大鼠全部进入结果分析。①行为学变化:甲醛组及甲醛 生理盐水组大鼠注射甲醛后,出现痛反应;注射氯胺酮的大鼠,注射后数分钟内翻正反射消失,无明显的痛行为表现,而呈持续睡眠状态,至灌注时翻正反射仍未恢复。②FLI神经元表达:甲醛组及甲醛 生理盐水组大鼠注射侧脊髓背角出现大量FLI阳性神经元,主要分布在脊髓背角Ⅰ～Ⅱ层;氯胺酮 甲醛组、甲醛 氯胺酮组大鼠脊髓FLI细胞的分布与甲醛组及甲醛 生理盐水组基本相似,但FLI阳性细胞数量显著减少(P<0.01);氯胺酮组和生理盐水组大鼠脊髓未见或偶见FLI阳性细胞。③FLI/NOS双标记神经元表达:氯胺酮 甲醛组、甲醛 氯胺酮组脊髓背角Ⅰ～Ⅱ层双标记神经元数目显著少于甲醛组及甲醛 生理盐水组眼(1±1),(1±1),(7±3),(8±3)个/切片,P<0.01演,氯胺酮组和生理盐水组无表达。结论:同侧相应脊髓节段的某些神经元参与了化学性致痛信息的传导和调控,氯胺酮通过抑制这些神经元的活动而产生抗伤害作用;此作用与抑制脊髓内一氧化氮合酶阳性神经元的活性有关。     

利多卡因硬膜外阻滞对CCI模型大鼠脊髓c-fos表达的影响

目的:观察利多卡因硬膜外阻滞后神经病理性疼痛大鼠行为学和热痛阈的变化及对脊髓后角c-fos表达的影响.方法:雌性Wistar大鼠24只,随机分为三组,每组8只(n=8).(1)假手术组(S组):右侧坐骨神经只暴露5分钟,未结扎,术后第4天起硬膜外注入生理盐水0.1 ml,每日1次,连续10天;(2)对照组(C组):右侧坐骨神经结扎,术后第4天起硬膜外注入生理盐水0.1ml,每日1次,连续10天;(3)利多卡因组(L组):右侧坐骨神经结扎,术后第4天起硬膜外注入1%利多卡因0.1ml,每日1次,连续10天.分别于术后第1,4,7,10,14天观察行为学变化.于术前及术后第4,7,10,14天用JL-F数显式光热测痛仪测定双后肢热痛阈.术后第14天处死大鼠取出腰段脊髓,石蜡包埋,病理切片,免疫组化法检测c-fos免疫阳性细胞(FLI).结果:(1)C组、L组与S组比较术后下肢运动评分均有非常显著差异(P＜0.01),C组与L组之间无显著差异(P＞0.05).(2)C组、L组与S组比较各实验点热痛阈均有显著差异(P＜0.05或P＜0.01);L组与C组间各实验点相比差异无显著意义(P＞0.05).(3)C组、L组与S组相比,各层FLI细胞数差异均具有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01);L组各层FLI细胞数与C组相比无显著差异(P＞0.05).结论:应用利多卡因进行硬膜外阻滞对CCI模型大鼠脊髓c-fos的表达抑制不明显.     

血管内皮生长因子对脊髓神经组织保护作用及c-fos基因的影响

目的：探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)对脊髓损伤后脊髓神经元凋亡和c-fos基因的影响及保护机制。方法：将85只同龄Wistar大鼠，采用Auens的weight dropping(WD)法挫伤大鼠T11节段脊髓，于术后0，15min，1，2，4，8，12，24h经蛛网膜下腔导管各注入VEGF溶液15μL(含VEGF20μg)，并与生理盐水组和正常对照组作对照。采用原位末端标记法(TUNEL法)检测脊髓损伤前后发生凋亡的脊髓神经元。采用免疫组化和原位杂交方法检测脊髓损伤前后c-fos基因的变化。结果：正常组脊髓前角中未发现凋亡细胞，生理盐水组于伤后2h始出现凋亡神经元。VEGF组与生理盐水组相比较，凋亡神经元明显减少(P&;lt;0．01，t=24．25)。c-fos基因表达在正常脊髓组织中呈弱阳性，在生理盐水组中表达明显增加，VEGF组c-fos基因表达比生理盐水组明显减少(P&;lt;0．01，t=12．03)。结论：脊髓损伤后脊髓神经元凋亡增多和c-fos基因表达显著增多，VEGF能抑制脊髓损伤后脊髓神经元凋亡和c-fos基因表达，从而保护损伤的神经组织。     

鞘内应用N^ω-硝基-L-精氨酸甲酯可抑制大鼠的热伤害反应

目的:观察鞘内应用非特异性一氧化氮合酶抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对大鼠热刺激伤害性反应的影响。方法:将50只雌性大鼠随机平均分成5组,A组作为对照组,鞘内注射生理盐水;B组、C组、D组和E组作为治疗组,分别鞘内注射L-NAME2.5μg,25μg,250μg和2500μg,在注药前以及注药后的60min内以5min的间隔采用热板测定大鼠的后爪缩足潜伏期作为热痛阈,并计算疼痛指数。结果:与鞘内注射生理盐水相比,鞘内注射L-NAME呈剂量相关性抑制大鼠的热伤害性反应。结论:NO在痛觉过敏的脊髓机制中具有重要作用。     

血管内皮生长因子对脊髓神经组织保护作用及c-fos基因的影响

目的探讨血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)对脊髓损伤后脊髓神经元凋亡和c-fos基因的影响及保护机制。方法将85只同龄Wistar大鼠,采用Allens的weightdropping(WD)法挫伤大鼠T11节段脊髓,于术后0,15min,1,2,4,8,12,24h经蛛网膜下腔导管各注入VEGF溶液15μL(含VEGF20μg),并与生理盐水组和正常对照组作对照。采用原位末端标记法(TUNEL法)检测脊髓损伤前后发生凋亡的脊髓神经元。采用免疫组化和原位杂交方法检测脊髓损伤前后c-fos基因的变化。结果正常组脊髓前角中未发现凋亡细胞,生理盐水组于伤后2h始出现凋亡神经元。VEGF组与生理盐水组相比较,凋亡神经元明显减少(P<0.01,t=24.25)。c-fos基因表达在正常脊髓组织中呈弱阳性,在生理盐水组中表达明显增加,VEGF组c-fos基因表达比生理盐水组明显减少(P<0.01,t=12.03)。结论脊髓损伤后脊髓神经元凋亡增多和c-fos基因表达显著增多,VEGF能抑制脊髓损伤后脊髓神经元凋亡和c-fos基因表达,从而保护损伤的神经组织。     

鞘内注射右旋美托咪啶对正常大鼠的镇痛效果及对脊髓背角c-fos蛋白表达的影响

目的研究髓鞘内注射右旋美托咪啶(Dex)对大鼠的镇痛作用以及对于大鼠脊髓背角的c-fos蛋白表达的影响。方法选择60只SD雄性大鼠,分为五个组,每个组12只:正常对照组(不进行任何的处理)、生理盐水组(生理盐水10μl)以及髓鞘内注射给药组0.75μg/kg Dex 10μl组(Dex1组)、1.50μg/kg Dex 10μl(Dex2组)、3.00μg/kg Dex 10μl(Dex3组)。于给药前、给药后30 min观察大鼠机械缩足阈值(PWMT)的变化和给药前、给药后1 h观察大鼠甩尾潜伏期(TFL)的变化,计算最大抗伤害效应比率(%MPE)。取给药后7 h、24 h、48 h的脊髓腰膨大处,检测Fos蛋白免疫反应阳性(FLI)水平。结果 PWMT的结果:给药30 min与给药前相比,Dex1组、Dex2组和Dex3组各组的机械缩足阈值升高(P0.05);给药后,Dex1组、Dex2组和Dex3组的PWMT较正常对照组和生理盐水组明显增高(P0.05);Dex3组的PWMT比Dex1组和Dex2组高(P0.05)。TFL的结果:给药30 min与给药前相比,Dex1组、Dex2组和Dex3组的TFL呈现出明显升高的趋势(P0.05);给药后,Dex1组、Dex2组和Dex3组的TFL较正常对照组和生理盐水组的表达水平明显增高(P0.05);Dex3组的TFL比Dex1组和Dex2组的高(P0.05)。%MPE的结果:Dex1、Dex2和Dex3组的%MPE比对照组和生理盐水组的高(P0.05);Dex3组的%MPE要远远高于Dex1组和Dex2组(P0.05)。脊髓背角FLI表达水平:给药后7 h时,Dex3组的FLI表达水平比正常对照组和生理盐水组的表达强(P0.05);给药后24 h时,Dex3组的比正常对照组、生理盐水组、Dex1组和Dex2组的表达水平高(P0.05);给后48 h时,各组之间无统计学差异。结论髓鞘内注射右旋美托咪啶,能够对大鼠产生一定的镇静作用,并且对于脊髓神经不会产生损伤;髓鞘内部应该小剂量的注射右旋美托咪啶,大剂量3.00μg/kg时虽然镇痛效果较强,但存在短暂的可逆性的脊髓神经毒性。     

鞘内应用普瑞巴林对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及其电生理学机制研究

目的:研究鞘内应用普瑞巴林(pregabalin,PGB),一种新型抗癫痫药,对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及其可能的机制。方法:(1)雄性SD大鼠鞘内置管,手术成功后进行坐骨神经分支选择性损伤(spared nerve injury,SNI)手术。术后10 d用von Frey纤维丝测定机械痛敏,将筛选出造模成功的SNI神经病理性疼痛大鼠,按体重随机分为两组(n=10),通过鞘内插管分别鞘内给予(i.t.)普瑞巴林100μg/d或等体积的生理盐水(saline,NS)作阴性对照,连续3 d给药。在每次给药后24 h测定大鼠后爪的50%缩足阈值(paw withdrawal threshold,PWT)及鞘内给药前后大鼠的运动功能。(2)通过在体细胞外记录的电生理学方法,观察脊髓背表面给予普瑞巴林100μg对SNI大鼠脊髓背角广动力范围,(wide dynamic range,WDR)神经元C纤维诱发放电的影响。结果:(1)与NS组相比,鞘内应用普瑞巴林100μg/d,连用3 d,能显著增加SNI大鼠术侧后爪的50%PWT,起到显著的镇痛作用(P<0.001,n=10),给药前后大鼠的运动功能没有明显改变(P>0.05,n=10)。(2)与NS组相比,脊髓背表面给予普瑞巴林100μg可以显著抑制SNI大鼠WDR神经元的C纤维诱发放电(P<0.001,n=9)。结论:鞘内应用普瑞巴林100μg/d可以对SNI大鼠产生显著的镇痛作用而不影响其运动功能,该机制可能与通过WDR神经元的C纤维诱发放电有关。     

过氧乙酸与乙醇对体温计浸泡消毒效果的比较

使用后的体温计表面普遍污染有细菌。经0．5％过氧乙酸或75％乙醇溶液浸泡30min,杀菌率均达99％以上、用过氧乙酸浸泡的消毒效果明显优于乙醇。     

大鼠PAG内Nogo-A在痛觉调制过程中角色的探索

目的:用脑内核团微量注射和免疫组化等方法,观察大鼠中脑导水管周围灰质( periaqueductal gray,PAG)内“勿动蛋白”-A(Nogo-A)、P物质(substanceP,SP)和降钙素基因相关肽(calcitoningene-related peptide,CGRP)表达的变化,研究探讨Nogo-A在痛觉调制过程中的角色,以及它在大鼠PAG内与CGRP、SP和内源性阿片系统在痛觉调制过程中的相互作用.方法:选用雄性SD大鼠32只,随机等分为4组:空白对照组8只,分别向PAG内注射0.9％生理盐水1μl;模型对照组、吗啡组和纳洛酮组各8只,首先单侧后爪掌心皮下注射1％的福尔马林0.1 ml复制炎症痛敏大鼠模型,3d后分别向PAG内注射等量0.9％生理盐水、吗啡或纳洛酮各1 μl,60 min后取大鼠大脑PAG区脑组织,采用免疫组化法观测各组大鼠PAG内Nogo-A、SP和CGRP免疫反应阳性神经元的表达差异.结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠PAG内Nogo-A的表达量显著降低(P＜0.01),CGRP及SP显著增高(P＜0.01);与模型对照组比较,吗啡组大鼠PAG内Nogo-A的表达量显著增高(P＜0.01),CGRP及SP显著降低(P＜0.05),而纳洛酮组PAG内Nogo-A的表达量显著降低(P＜0.05),CGRP及SP显著增高(P＜0.05).结论:(1)炎症痛敏大鼠PAG内Nogo-A的表达量比正常降低,而CGRP及SP显著增高;(2)阿片肽可增加PAG内Nogo-A的表达,并降低CGRP及SP的表达.     

电镜技术在测定消毒剂对乙型肝炎病毒灭活效果中的应用

在电镜下观察了消毒剂作用后乙型肝炎病毒颗粒破坏情况，并与用ＳＰＲＩＡ法检测ＨＢｓＡｇ抗原性破坏结果作比较。结果，含二氯异氰尿酸钠、碘伏与戊二醛的３种消毒液，破坏ＨＢＶ颗粒结构的最低有效浓度均高于破坏ＨＢｓＡｇ抗原性者。     

紫外线对微生物检验室空气消毒效果的检测

为了解紫外线对密闭性较好的无菌室空气的消毒效果,用平板沉降15min采样,检测空气细菌总数。结果,经卫生清扫后,室内空气细菌总数很少超过标准（>200cfu/m3再经约为常规量2倍的紫外线照射30min,22h内空气细菌总数均未超过标准。说明此类无菌室可于每天下班前进行消毒处理,第二天上班即可使用。     

含氯消毒剂持续释放对农村井水消毒效果检测

在底端封闭的聚乙烯管 (长 12 8mm ,内径 15mm ,管盖下方管壁有直径 1 5mm释氯孔 )内装2 5片漂白粉精片 (36 0mg/片 ,主要成分为次氯酸钙 ) ,悬挂于手压式抽水井井筒内。对悬挂该管 30min的36口井 ,采水样检测 ,由释氯孔释入水中的有效氯可使其全部达到消毒标准 (细菌总数 <10 0cfu/ml,大肠菌群数 <3个 /L) ;而消毒前仅 1口井水的细菌总数未超标 ,其余均超标     

25例无精子症患者常染色体异常的临床分析

据现有对Y染色体遗传序列的研究证实，Y染色体的微缺失是引起男性不育的重要原因之一，在对男性不育做染色体检查时发现，除性染色体异常引起的生殖器官异常，进而导致男性精子生成障碍而不育外，我们对一些无精子症患者进行体细胞染色体分析时，发现常染色体异常导致的不育所占比例也很大。     

不同方法对采血车厢空气消毒效果的比较

采用平板沉降法采样,检测车厢空气中细菌总数与霉菌,以比较3种方法对采血车厢空气消毒的效果。结果,戊二醛熏蒸能使车厢空气达到消毒合格标准(细菌总数≤30cfu/平板,无霉菌),开始采血后能维持2.5h空气细菌总数不超标并且无霉菌;臭氧熏蒸或氯气加臭氧熏蒸均不能将霉菌全部杀灭。因此,3种方法中仅戊二醛法可用。     

重症肝炎并发DIC早期诊断中D-二聚体乳胶试验的应用

D-二聚体乳（D—Dimer）是交联纤维蛋白经纤溶酶水解产生的一种特异降解产物。利用抗D-二聚体单克隆抗体包被乳胶颗粒进行凝集试验，是对血中D-二聚体定性检测，定性阳性反映体内纤溶活性增强，有助于重症肝炎并发DIC早期诊断。     

THE ROLE OF SERUM COMPLEMENT IN CHEMOTAXIS OF LEUKOCYTES IN VITRO

By the use of chambers containing two compartments with an interposed micropore filter, chemotaxis of polymorphonuclear leukocytes (PMN's) in vitro was studied employing various agents that fixed serum complement (C'). Antigen-antibody complexes, zymosan, and aggregated human gamma globulin, in the presence of fresh rabbit, guinea pig, or mouse serum resulted in the migration of PMN's through the micropore filter. Pepsin-degraded rabbit antibody or unaltered duck serum containing antibody did not exhibit such activity after addition of antigen. Heating of the serum before treatment or the presence of EDTA prevented the generation of the chemotactic factor. The chemotactic factor could not be generated in whole serum from rabbits genetically deficient in C'. However, the defect in this rabbit serum could be corrected by addition of rabbit or human C'6. Serum of B10·D2 mice deficient in hemolytic C' also yielded poor chemotactic activity. Interaction of the first four reacting components of guinea pig C' did not result in significant chemotactic activity unless guinea pig euglobulin with heat labile components was also present. In rabbit serum, C'5 and C'6, when "activated" by interaction with the first four reacting components, behaved like a protein-protein complex and exhibited marked chemotactic activity. By employing conditions favoring dissociation of the complex, the individual components were isolated and shown to be chemotactically inactive. Upon recombination of the two components, however, activity reappeared. Using another approach, the C'5–C'6 complex was isolated intact, and shown to be chemotactically active while other fractions not containing these components were not active. It is postulated that the C'5–C'6 complex is the active chemotactic factor generated in serum after the addition of C'-fixing agents.     

医院应用中消毒液微生物污染检测

经检测,铁道部第五工程局局内医院应用中的消毒液,细菌总数超标率为7.32%～23.88%,真菌检出率为44.78%～80.00%。其原因多为使用时间较长所致。