微创血肿抽吸术后大鼠脑出血周围组织细胞凋亡的研究

目的探讨脑出血周围组织神经细胞凋亡相关基因热休克蛋白70(HSP70)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的变化规律及微创血肿抽吸干预治疗对神经细胞凋亡的影响。方法将SD大鼠75只分为假手术组、脑出血组、血肿抽吸组,各组又分为12 h、1 d、2 d、3 d、7 d 5个时间点。假手术组注入尾状核2μL生理盐水,脑出血组注入大鼠尾状核2μLⅣ胶原酶。血肿抽吸组是在脑出血模型制作6 h后进行血肿抽吸。各组分别于各时间点处死大鼠取脑组织,采用免疫组织化学染色测定各组大鼠脑出血周围HSP70、Caspase-3蛋白的表达并进行统计学处理。结果 HSP70、Caspase-3含量脑出血组较血肿抽吸组及假手术组均明显增高(P<0.05),血肿抽吸组比假手术组明显增高(P<0.05)。HSP70表达在12 h出现,3 d达高峰,随后表达逐渐减少。Caspase-3蛋白的表达在12 h出现,在3 d时达高峰,第7天表达明显减少。结论 Caspase-3蛋白高表达说明在脑出血第3天神经细胞凋亡和损害达到高峰,随后逐渐降低,HSP70高表达对出血脑组织具有明显的保护效应,且对Caspase-3蛋白的表达具有抑制作用,而且在早期对脑出血进行微创血肿抽吸干预治疗可以减少脑出血后神经细胞的凋亡。     

大鼠脑血肿周围Caspase-3的表达与神经细胞凋亡的关系

目的研究大鼠脑血肿周围脑组织Caspase-3的表达和神经细胞凋亡及探讨二者之间的关系。方法60只Wistar大鼠随机分为假手术组（30只）和出血组（30只）。采用大鼠自体股动脉血注入尾壳核建立脑出血模型,分别于术后6、12、24、48、96h5个时间点取脑,应用免疫组化方法检测血肿周围组织Caspase-3的表达,TUNEL法检测血肿周围神经细胞凋亡。结果出血组大鼠脑血肿周围组织Caspase-3的表达及细胞凋亡明显高于假手术组（P〈0．01）,Caspase-3的表达与血肿周围神经细胞凋亡呈正相关性（r=0．956,P〈0．05）。结论Caspase-3、神经细胞凋亡参与了大鼠脑血肿周围脑组织损伤的病理过程。     

神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡的影响

目的:探讨神经生长因子(NGF)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡及FasL、Caspase-3表达的影响.方法:新生7 d龄Wistar大鼠54只随机分为3组:假手术组、生理盐水对照组(NS组)和NGF组,每组18只.NS组和NGF组动物制作新生大鼠缺氧缺血动物模型.假手术组只分离左侧颈总动脉后缝合切口,不进行动脉结扎和缺氧处理.NS组和NGF组术后分别腹腔注射生理盐水和NGF.各组分别于模型制作后1 d,3 d,6 d各处死6只动物,取脑组织切片行TUNEL染色检测神经细胞凋亡,同时行免疫组化检测FasL、Caspase-3的表达.结果:NGF组脑组织神经细胞凋亡和FasL、Caspase-3的表达明显低于NS组,但仍高于假手术组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:NGF可抑制新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞的凋亡,其机制可能与其减少FasL和Caspase-3的表达有关.     

糖皮质激素对脑出血大鼠脑水肿的TNF-α影响研究

目的：探讨糖皮质激素地塞米松对大鼠脑出血后脑水肿的影响以及对TNF-α、TRADD、Caspase3、神经细胞凋亡的影响。方法：采用胶原酶注入法制作大鼠ICH模型;将制模成功的大鼠分为ICH组和地塞米松治疗组（治疗组）,另设假手术组（对照组）,每组36只;各组大鼠分别在造模后12h、1d、3d断头取脑组织检测脑水含量以及TNF-α、TRADD、Caspase3的蛋白表达,并进行TUNEL染色。结果：ICH组在12h、1d、3d脑水含量、TNF-α、TRADD、Caspase3蛋白表达以及凋亡指数均高于对照组（P〈0.05）;治疗组在上述时间点的各项指标均低于ICH组（P〈0.05）。结论：地塞米松可降低ICH模型大鼠脑组织TNF-α、TRADD、Caspase3表达及减少神经细胞凋亡。     

胡椒碱对大鼠局灶性脑缺血的神经保护作用

目的观察胡椒碱对急性缺血性脑损伤大鼠的神经保护作用。方法随机将SD大鼠分为假手术组、生理盐水组、胡椒碱组、溶媒组,每组8只。采用颈内动脉线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞脑缺血模型,术后0.5 h灌胃给药,1次/d,连续3 d。不同时间点进行神经功能评分。72 h断头取脑,TTC染色,测量梗死体积。另择32只大鼠,分组同上,于脑缺血24 h处死,断头取脑,观察神经细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达。结果胡椒碱组大鼠神经功能评分、脑梗死体积、凋亡细胞数及Caspase-3阳性细胞数较生理盐水组、胡椒碱溶媒组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胡椒碱通过减少Caspase-3蛋白的表达抑制细胞凋亡、缩小脑梗死体积、改善神经功能。     

硫酸镁对脑损伤大鼠神经细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的 研究硫酸镁对创伤性脑损伤大鼠神经细胞凋亡及Caspase-3基因表达的影响。方法Wistar大鼠48只，随机分为6组，每组8只。采用Feeney法造成TBI模型。损伤组大鼠在致伤后5min内分别按不同剂量给予25％MgSO4腹腔注射。24h后检测细胞凋亡及Caspase-3表达情况。结果颅脑创伤后大鼠脑组织中神经细胞凋亡及Caspase-3基因表达均显著增加，使用MgSO4治疗后神经细胞凋亡显著减少，Caspase-3基因表达降低。不同剂量MgSO4组之间神经细胞凋亡与Caspase-3基因表达未见差异显著性。结论硫酸镁可显著抑制创伤性颅脑损伤大鼠神经细胞凋亡及Caspase-3基因活化，具有显著的脑保护作用。     

瑞舒伐他汀对大鼠脑出血后的C-IAP-1和Caspase-3表达变化影响的研究

目的观察大鼠实验性脑出血血肿周围脑组织中C-IAP-1和Caspase-3的表达变化及瑞舒伐他汀的干预作用,探讨瑞舒伐他汀在脑出血发生后可能出现的神经保护作用及其机制。方法将60只SD大鼠按照随机分组的方法分为假手术组(A组,20只),脑出血组(B组,20只),瑞舒伐他汀干预组(C组,20只)。每组分成6 h、24 h、72h、5 d四个时间点,每个时间点使用5只大鼠进行造模并实验。采用自体凝固动脉血注入脑组织法建立脑出血模型。通过实时荧光定量PCR技术测定大鼠脑出血术后4个时间点血肿脑组织C-IAP-1及Caspase-3表达状况。结果荧光定量PCR法显示,假手术组、脑出血组与瑞舒伐他汀组术后各个时间点相比,C-IAP-1及Caspase-3表达降低,除第6小时外,其余时间点之间脑出血组和瑞舒伐他汀干预组相比,C-IAP-1表达降低,Caspase-3表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论瑞舒伐他汀可以提高C-IAP-1的水平,抑制Caspase-3的水平,提示瑞舒伐他汀能够降低由细胞凋亡影响引起的继发性脑损伤,对神经功能起到一定的保护作用。     

脑健胶囊对MCAO大鼠脑组织Fas凋亡途径的影响

目的研究脑健胶囊对大鼠脑组织Fas凋亡途径的影响,探讨脑健胶囊抗脑缺血后神经保护的作用机制。方法将SD大鼠随机分为补阳还五汤组、脑健胶囊组、模型组和假手术组共4组,每组25只。除假手术组和模型组给予等体积无菌蒸馏水以外,其余两组在大脑中动脉线检法复制局灶性脑缺血大鼠模型(MCAO)造模后给药,将各组大鼠分别存活1、3、7、14、28 d时取脑组织及腹主动脉采血。运用免疫组化法和Elisa法检测脑组织及血清中Fas相关死亡域蛋白(FADD)、Caspase-8、Caspase-3因子表达。结果脑缺血后大鼠均有神经功能障碍,经过治疗后,脑健胶囊能显著改善其神经功能缺失症状,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论脑健胶囊通过抑制缺血后脑组织FADD、Caspase-3、Caspase-8的表达,从而起到保护缺血后脑组织作用,减轻脑组织损伤。     

脑心通对大鼠脑缺血后神经细胞凋亡的影响

目的探讨脑心通对大鼠脑缺血后神经细胞凋亡的保护作用。方法应用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型。将大鼠分为假手术组、模型组、低剂量组和高剂量组,各组分别于术前3d和术后给予不同剂量药物灌胃,术后24、48.72、96h,取脑组织进行HE染色、TIC染色、测定Caspase-3表达的动态变化。结果脑心通低、高剂量组均能减少大鼠脑梗死体积（P〈0．05）,减少Caspase-3阳性细胞表达。结论脑心通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡有保护作用。     

脑出血后氧化应激对神经细胞凋亡及c-myc蛋白表达的影响

目的 观察脑出血后氧化应激与神经细胞凋亡的相关性及对凋亡相关蛋白c-myc表达的影响。 方法 选择SD雄性大鼠84只,随机分为假手术组、模型组、MPEG-SOD组,每组28只,自体血注入法建立脑出血模型,MPEG-SOD组建模前腹腔注射MPEG-SOD;术后12 h、1 d、3 d、7 d不同时间点行神经功能缺陷评分(NDS),取脑组织测定脑组织含水量,分光光度法测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD),免疫组化法测定核因子κB(NF-κB) p65阳性细胞表达,TUNEL测定神经细胞凋亡,Western blot测定c-myc蛋白表达水平。 结果 与假手术组比较,模型组各时点NDS评分、SOD活性明显降低,脑组织含水量、MDA含量、c-myc蛋白、NF-κB p65、TUNEL阳性细胞表达明显升高(P<0.05),术后3 d达峰值,与模型组同时点比较,MPEG-SOD组NDS评分、SOD活性明显升高,脑组织含水量、MDA含量、c-myc蛋白、NF-κB p65、TUNEL阳性细胞表达明显降低(P<0.05),c-myc蛋白表达与TUNEL阳性细胞数呈正相关(模型组r=0.83,MPEG-SOD组r=0.91,P<0.05)。 结论 脑出血后氧化应激诱导神经细胞凋亡可能与启动凋亡相关基因c-myc有关。      

大鼠脑出血后神经元凋亡与caspase-3表达的关系

目的　研究大鼠实验性脑出血模型中神经细胞凋亡发生的规律以及与caspase 3表达的关系 ,观察caspase抑制剂zVADfmk对出血性脑损伤的保护作用。方法　应用立体定向技术 ,将自体不凝血注入大鼠尾状核区制备脑出血模型 ,将动物随机分为假手术组、出血组和zVADfmk干预组 ,分别在不同时间点断头取脑 ,连续切片作TUNEL染色和caspase 3免疫组化染色。 结果　脑出血后 6h血肿内部及周边组织出现TUNEL阳性细胞 ,72h达高峰 ,2周时仍有少量表达 ;caspase 3在脑出血后 6h表达明显增高 ,2 4h达到高峰 ,各组与假手术组之间差异显著 (P <0 .0 5 )。脑出血后的TUNEL阳性细胞与caspase 3的表达呈正相关 (r =0 .6 0 7,P <0 .0 5 ) ,且caspase 3的高峰时间早于凋亡的发生。经caspase 3抑制剂干预 ,血肿周围组织TUNEL阳性细胞明显减少 ,与对照组相比差异显著 (P <0 .0 5 )。结论　凋亡机制参与了脑出血后继发性损伤的过程 ,而caspase 3的激活在其中起着重要作用 ,通过阻断caspase的激活可以减少脑出血后神经细胞凋亡的发生     

黄芪对大鼠脑出血灶周围神经元Caspase-3表达的影响

目的观察与比较黄芪甲苷和黄芪注射液对大鼠脑出血灶周围神经元Caspase-3阳性细胞数和Caspase-3 mRNA表达的影响。方法将128只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、黄芪注射液组、黄芪甲苷组。用药组于造模型后0h腹腔注射用药,继之每隔24h注射一次;正常组和模型组注射相应量的生理盐水。分别在1、2、3、7d通过免疫组化和RT-PCR方法来观察Caspase-3阳性细胞数和Caspase-3 mRNA表达以及二者的相关性。结果与正常组相比,模型组、黄芪注射液组、黄芪甲苷组Caspase-3阳性细胞数和Caspase-3 mRNA表达均明显增加(P<0.05);黄芪甲苷和黄芪注射液的2、3、7d组分别与同时间点模型组比较,Caspase-3阳性细胞数和Caspase-3 mRNA表达均明显降低(P<0.05);黄芪甲苷和黄芪注射液的7d组分别与各自的3d组比较,Caspase-3阳性细胞数和Caspase-3 mRNA表达均明显降低(P<0.05);与黄芪注射液3、7d组相比,黄芪甲苷同时间点组的Caspase-3阳性细胞数和Caspase-3 mRNA表达均明显升高(P<0.05);Caspase-3 mRNA与Caspase-3阳性细胞数呈正相关(r=0.97,P<0.05)。结论黄芪甲苷和黄芪注射液可能是通过降低Caspase-3 mRNA转录,减少Caspase-3蛋白表达,抑制大鼠脑出血灶周围神经元凋亡;随着用药时间的延长,对出血灶周围神经元凋亡的抑制作用更强;黄芪甲苷对大鼠脑出血灶周围神经元凋亡的抑制作用不如黄芪注射液。     

依达拉奉对脑出血大鼠细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的研究依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响，探讨其对脑出血后脑组织损害的保护作用。方法36只SD大鼠随机分为依达拉奉组、脑出血组和假手术组，每组12只。用尾状核注射自体血法建立脑出血模型；检测丙二醛（MDA）含量，以TUNEL法及免疫组化法检测神经细胞凋亡数及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果出血组脑组织MDA含量、细胞凋亡数和Bcl-2、Bax蛋白表达水平均明显高于假手术组；与出血组相比，依达拉奉组MDA含量、细胞凋亡数与Bax蛋白表达水平均下降，而Bcl-2蛋白表达水平显著增高。结论依达拉奉可抑制出血后神经细胞凋亡，此作用可能与其减轻氧化应激、上调Bcl-2和下调Bax蛋白表达水平有关。     

立体定向血肿抽吸术对大鼠脑出血后NSE表达的影响

目的 在Ⅳ型胶原酶诱导的实验性脑出血模型的基础上,实施立体定向血肿抽吸术并研究抽吸术后血肿周围血浆神经元特异性烯醇化酶(NSE)的变化及意义。 方法 成年健康Wistar雄性大鼠135只,随机分为假手术组、脑出血组、抽吸治疗组。将Ⅳ型胶原酶注入大鼠尾状核建立大鼠脑出血模型,在形成脑出血10 h后,向血肿腔内注入含有3 000 U尿激酶的溶液5 μl来溶解血凝块,2 h后进行立体定向血肿抽吸术干预治疗。应用Bederson四级评分法评价大鼠神经功能缺损程度,免疫组化法及Western blot分别检测NSE蛋白的表达。 结果 大鼠脑出血后,各个时间点脑出血组、抽吸治疗组血肿周围脑组织NSE蛋白表达明显高于假手术组(P＜0.05);脑出血后第1天,抽吸治疗组NSE蛋白表达略高于脑出血组,但差异无统计学意义(P＞0.05);脑出血后第3天、第5天抽吸治疗组与脑出血组比较,NSE蛋白表达明显降低(P＜0.01)。 结论 Ⅳ型胶原酶诱导的大鼠脑出血模型是一种稳定、可靠的且能够实施立体定向血肿抽吸术的理想模型。大鼠脑出血后神经行为功能损伤,且血肿周围组织NSE蛋白表达明显增强。早期进行血肿抽吸术可以较好地清除脑内血肿,降低脑组织NSE蛋白的表达,减少脑出血后神经元的阳性细胞数及变性细胞数,从而保护神经组织,明显改善其神经行为功能。      

rhEPO通过调节PI3K/AKT信号通路改善大鼠脑出血后神经元损伤

目的 研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)是否可以通过调节PI3K/AKT信号通路来改善大鼠脑出血后的神经元损伤。方法SD大鼠构建脑出血(ICH)模型,并给予rhEPO药物治疗,采用TUNEL法和试剂盒检测神经细胞凋亡及凋亡蛋白Caspase 9表达;采用Real-Time PCR法和Western blot法检测PI3K、AKT的基因和蛋白磷酸化水平的表达。结果与ICH非治疗组相比,rhEPO治疗组中神经元凋亡细胞数和Caspase 9活性表达明显降低(P<0.05); rhEPO治疗组PI3K和AKT的蛋白磷酸化水平表达和mRNA表达显著升高 (P<0.05)。结论重组人促红细胞生成素rhEPO具有神经保护作用,可以通过调节PI3K/AKT信号来改善大鼠脑出血后的神经元损伤。     

rhEPO对新型BPD模型肺组织BCL-2和Caspase-9表达的影响及意义

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶 B(PI3K/AKT)通路在重组人促红细胞生成素( rhEPO)保护新型支气管肺发育不良( BPD)中的作用。方法40只定期受孕的SD大鼠,于孕第15天孕囊内注射脂多糖( LPS)或磷酸盐缓冲液( PBS ),新生大鼠分为4组：对照组、高氧组、rhEPO 组、rhEPO+LY294002组。采用Western blot法和RT-PCR法检测肺组织中BCL-2和Caspase-9蛋白及mRNA表达。结果高氧组、rhEPO+LY294002组新生大鼠肺组织BCL-2蛋白及mRNA表达减少, Caspase-9蛋白及 mRNA 表达明显增加;rhEPO组BCL-2蛋白及mRNA表达增加, Caspase-9蛋白及mRNA表达减少;于高氧暴露第1、7、14天各组间的差异均有统计学意义( P<0．05)。结论宫内炎性暴露联合生后高氧可导致肺细胞凋亡增加,rhEPO可能通过减少肺细胞凋亡,对新型 BPD 起一定的保护作用,其机制可能与 PI3K/AKT信号转导通路有关。     

金纳多联合钙离子阻滞剂对冠心病大鼠药酒中毒心肌细胞凋亡的影响

目的观察金纳多联合钙离子阻滞剂对冠心病大鼠药酒中毒心肌细胞凋亡的影响。方法将构建成功的80只冠心病大鼠药酒中毒模型分为4组,即模型组、金纳多治疗组、尼莫地平治疗组、金纳多联合尼莫地平组。根据不同组别行药物治疗,分别于治疗后不同时间点取材。采用免疫组化方法检测心肌组织中Bc1-2、Caspase-3蛋白的表达,以末端脱氧核糖核素转移酶介导的duTP缺味端标记法检测大鼠心肌凋亡细胞。结果模型组大鼠Bc1-2降低而Caspase-3表达增高,金纳多治疗组、尼莫地平治疗组大鼠Bcl-2表达增高、Caspase-3表达降低,与模型组对比差异有统计学意义(P<0.05);金纳多联合尼莫地平组Bcl-2表达明显增高、Caspase-3表达明显降低,与金纳多治疗组、尼莫地平治疗组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论金纳多联合钙离子阻滞剂可显著提高冠心病大鼠药酒中毒Bcl-2蛋白的表达、抑制Caspase-3蛋白表达、降低凋亡细胞数,从而抑制心肌细胞凋亡。提示金纳多联合钙离子阻滞剂可能通过抑制心肌细胞的凋亡而治疗冠心病大鼠药酒中毒。     

依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围组织 NF-κB p65 蛋白表达的影响

目的 探讨依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围组织NF—κB p65蛋白表达的影响。方法 108只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、脑出血组和依达拉奉治疗组,其中脑出血组和依达拉奉治疗组又分为3h、6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d8个亚组,每组6只。采用大鼠尾动脉自体不凝血50μL注入尾状核区建立脑出血模型。依达拉奉治疗组于模型制作成功后2h开始腹腔内注射3mg／kg依达拉奉。1次,d。免疫组化法检测NF—κB p65蛋白表达变化。结果 与脑出血组相比,依达拉奉治疗组于出血后6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d血肿周围组织NF—κB p65蛋白表达均减少（P〈0．05或P〈0．01）。结论 依达拉奉对脑出血后血肿周围脑组织损伤有保护作用．可能与其抑制NF—κB p65蛋白表达有关。