阿托伐他汀对慢性充血性心力衰竭患者外周血Toll样受体表达的影响

目的探讨慢性充血性心力衰竭(CCHF)患者外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)表达改变情况及阿托伐他汀对其的干预效应。方法选取80例CCHF住院患者,其中40例按照标准治疗方案进行治疗(标准治疗组);另外40例在标准治疗的基础上口服阿托伐他汀20mg/d(阿托伐他汀组)。40名健康者为对照组。在治疗前和治疗后1个月,应用流式细胞仪检测外周血单个核细胞表面TLR4的表达,采用酶联免疫吸附试验检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;并对TLR4的表达与血清TNF-α水平进行相关性分析。结果标准治疗组、阿托伐他汀组的外周血单个核细胞表面TLR4表达水平均较对照组显著升高(P值均<0.05),并且与血清TNF-α水平呈正相关(r=0.076,P<0.05)。治疗后1个月,标准治疗组和阿托伐他汀组的外周血单个核细胞表面TLR4的表达和血清TNF-α水平均较本组治疗前显著降低(P值分别<0.05、0.01),阿托伐他汀组的下降值均显著高于标准治疗组(P值均<0.05)。结论 TLR4表达可能与CCHF发生有关,阿托伐他汀可显著降低外周血单个核细胞表面TLR4的表达,提示阿托伐他汀的抗炎性免疫作用与抑制TLR4介导的炎性免疫反应有关。     

乙肝病毒携带者PBMC细胞中Toll样受体2表达水平与乙肝病毒增殖相关性研究

目的：探讨乙肝病毒（HBV）增殖与无症状乙肝病毒携带者（ASC）外周血中Toll样受体2（TLR2）表达水平的相关性。方法：分离乙肝病毒携带者和健康志愿者外周血单个核细胞,分别用免疫细胞化学染色方法检测TLR2在细胞表面的表达情况;用RT-PCR方法检测TLR2的mRNA水平;用ELISA法检测乙肝病毒携带者和健康志愿者血清中TLR2活化后产物TNF-α的表达水平。结果：HBV复制活跃组的外周血单个核细胞中TLR2在蛋白水平和mRNA水平表达明显低于HBV复制不活跃组和健康对照组;HBV复制活跃组血清中TNF-α水平显著低于HBV复制不活跃组。结论：乙肝病毒携带者外周血单个核细胞TLR2的表达及活化与乙肝病毒的增殖有相关性。     

带状疱疹患儿外周血单个核细胞Toll样受体4、9mRNA的表达及意义

目的探讨带状疱疹患儿外周血单个核细胞Toll样受体4、9mRNA的表达及意义。方法选择2010年3月～2012年1月期间,我院儿科门诊收治带状疱疹患儿19例作为研究组,另选同期在我院进行体检的健康儿童20例作为对照组。采用RT-PCR法比较分析两组外周血单个细胞中TLR4和TLR9 mRNA的阳性率及表达水平。结果健康对照组儿童PBMC中TLR4和TLR9 mRNA的表达率均为100%。而带状疱疹患儿PBMC中TLR4 mRNA的表达率为84.21%,TLR9 mRNA的表达率为89.47%。另外,与正常组健康儿童相比,研究带状疱疹患儿PBMC中TLR4和TLR9 mRNA的水平均明显升高,差异亦具有统计学意义（P〈0.05）。结论 Toll样受体有效参与了带状疱疹患儿的免疫反应,并具有重要的临床意义。Toll样受体如同天然免疫的眼睛,对于儿童带状疱疹的疾病相关分子模式发挥着监视与识别的积极作用,是自身机体抵抗疾病的第一道屏障。     

Effect of atorvastatin on toll-like receptor 4 expression in peripheral blood of patients with chronic congestive heart failure

目的 探讨慢性充血性心力衰竭(CCHF)患者外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)表达改变情况及阿托伐他汀对其的干预效应.方法 选取80例CCHF住院患者,其中40例按照标准治疗方案进行治疗(标准治疗组);另外40例在标准治疗的基础上口服阿托伐他汀20 mg/d(阿托伐他汀组).40名健康者为对照组.在治疗前和治疗后1个月,应用流式细胞仪检测外周血单个核细胞表面TLR4的表达,采用酶联免疫吸附试验检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;并对TLR4的表达与血清TNF-α水平进行相关性分析.结果 标准治疗组、阿托伐他汀组的外周血单个核细胞表面TLR4表达水平均较对照组显著升高(P值均＜0.05),并且与血清TNF-α水平呈正相关(r=0.076,P＜0.05).治疗后1个月,标准治疗组和阿托伐他汀组的外周血单个核细胞表面TLR4的表达和血清TNF-α水平均较本组治疗前显著降低(P值分别＜0.05、0.01),阿托伐他汀组的下降值均显著高于标准治疗组(P值均＜0.05).结论 TLR4表达可能与CCHF发生有关,阿托伐他汀可显著降低外周血单个核细胞表面TLR4的表达,提示阿托伐他汀的抗炎性免疫作用与抑制TLR4介导的炎性免疫反应有关.     

Toll样受体4在干燥综合征患者外周血表达的研究

目的探讨干燥综合征(SS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中Toll样受体4(TRL4)的表达及其与病情活动的关系。方法治疗组选取25例SS患者,正常对照组10例健康志愿者,用流式细胞仪检测2组外周血单个核细胞中TRL4的表达。根据血沉、C反应蛋白将SS分为病情活动组和病情稳定组,对TRL4水平和免疫球蛋白、补体等免疫指标及血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)病情活动指标进行相关性分析。结果 TRL4在SS疾病组PBMC上的表达明显高于正常对照组;TRL4在SS病情活动组与稳定组外PBMC上的表达差异无统计学意义;SS疾病组PBMC上TRL4水平与免疫球蛋白IgG、IgA、补体C3、C4免疫指标和ESR、CRP病情活动指标无相关性。结论 SS患者PBMC上TRL4的高表达提示其参与了干燥综合征的发病机制,但与SS疾病活动度无相关性。     

血必净对急性弥漫性腹膜炎患者Toll样受体及炎性介质表达的影响

目的观察血必净干预下急性弥漫性腹膜炎合并全身炎症反应综合征（SIRS）患者外周血单个核细胞（PBMC） Toll样受体TLR2mRNA和TLR4 mRNA及下游炎症介质TNF—d和IL-6的表达,探讨血必净对SIRS的疗效机制。方法将62例符合纳入标准的患者分为SIRS组（33例）与非SIRS组（29例）,另外设立健康平行对照组30例。RT—PCR法检测治疗前后PBMC中TLR2 mRNA和TLR4 mRNA表达变化,及ELISA检测治疗前及治疗的第1、3、5、7天血清炎症介质TNF．仪和IL-6的变化,经t检验比较各组问的差异性。结果33例SIRS患者经血必净干预后PBMC中TLR2mRNA（0．51±0．14）和TLR4mRNA（0．62±0．23）及血清TNF-α（36．89±12．23）、IL-6（40．27±30．31）表达均显著下降,且SIRS组降低较非SIRS组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论急性弥漫性腹膜炎SIRS组TLR2mRNA和TLR4mRNA及血清TNF-α、IL-6表达均显著下降且症状减轻,提示血必净在阻断炎症发生发展过程中可能发挥一定的作用。     

Toll样受体4、9mRNA在带状疱疹患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的研究带状疱疹患者外周血单个核细胞中Toll样受体TLR4、TLR9mRNA的表达情况,并探讨其与带状疱疹的发病关系。方法采用实时荧光定量PCR方法检测30例带状疱疹患者和20例正常人的外周血单一核细胞中Toll受体TLR4、TLR9mRNA的表达水平。结果带状疱疹患者与正常人对照,其外周血单一核细胞中TLR4、TLR9mRNA的表达水平均明显升高,具有显著的统计学差异（P〈0.05）。结论带状疱疹患者外周血单一核细胞中TLR4、TLR9mRNA的表达水平均明显升高,说明在带状疱疹患者的发病过程中,TLR样受体4、9可能参与了水痘-带状疱疹病毒的识别及抗病毒免疫。     

Toll样受体2、9mRNA在感染性早产患者外周血单个核细胞的表达及意义

目的探讨感染性早产患者外周血单个核细胞Toll样受体2、9mRNA的表达。方法收集31例早产患者部分胎盘胎膜组织行病理检查,根据病检分为早产感染组(17例)和早产非感染组(14例),门诊进行孕检的正常孕妇作为正常对照组(10例)。(1)采用酶联免疫吸附法测定血清中的IL-6水平;(2)应用实时定量PCR技术检测早产患者和正常对照组孕妇外周血单个核细胞TLR2、9的mRNA表达水平。结果（1）TLR2mRNA在早产感染组患者外周血单个核细胞的表达水平显著高于早产非感染组和正常对照组（P＜0.05）;而TLR9mRNA在早产感染组、早产非感染组和正常对照组外周血单个核细胞的表达水平无差异(P＞0.05);（2）早产感染组患者血清中IL-6水平明显高于早产非感染组和正常对照组,差异有显著性（P＜0.05）,但早产非感染组和正常对照组血清中IL-6水平比较,差异无显著性(P＞0.05);（3）感染性早产患者外周血TLR2mRNA的表达水平与血清中IL-6水平呈正相关(r=0.778, P<0.01）而TLR9mRNA的表达与IL-6不存在相关关系(r=0.0355,P=0.162)。结论感染性早产患者外周血单个核细胞表面TLR2mRNA表达增强,提示TLR2参与了感染性早产的发生发展过程,其与血清中IL-6水平成正相关,可作为早期预测早产宫内感染的指标。     

三氧化二砷对系统性红斑狼疮患者Toll样受体9及α-干扰素的影响

目的:了解三氧化二砷(AS2O3)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体9(TLR9)mRNA 及α-干扰素(IFN-α)表达的影响,为阐明AS2O3治疗SLE的作用机制提供依据.方法:SLE患者和正常人PBMCs分别与环磷酰胺(CTX)及不同浓度AS2O3进行体外培养12h和24h...     

早期显性梅毒患者外周血单个核细胞Toll样受体2mRNA表达的研究

目的研究早期显性梅毒患者外周血单个核细胞（PBMCs）Toll样受体2（TLR2）mRNA的表达情况,探讨其在梅毒发病机制中的作用。方法采用实时定量PCR方法检测30例显性梅毒患者外周血PBMCs中TLR2mRNA的表达水平,并与20例正常人作对照。结果早期显性梅毒患者外周血PBMCs中qZR2mRNA的表达水平升高,与正常对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．001）;早期显性梅毒患者外周血PBMCs中IZR2mRNA的表达水平与血清RPR滴度不存在相关关系（P〉0．05）。结论TLR2可能参与了免疫细胞对梅毒螺旋体的识别和信号转导,TLR2的表达水平升高提示梅毒患者可能存在细胞免疫功能失调和细胞免疫功能抑制。     

软脂酸增加血管内皮细胞Toll样受体4表达及活化TLR4炎症信号通路

目的研究饱和脂肪酸软脂酸对血管内皮细胞Toll样受体4（TLR4）表达及信号转导的影响。方法采用软脂酸处理猪髋
动脉内皮细胞（PIECs）,实时荧光定量PCR检测PIECs TLR4 mRNA表达,蛋白印迹法检测PIECs TLR4及IκBα蛋白表达,流式
细胞仪检测PIECs细胞表面TLR4蛋白水平,酶联免疫吸附测定法检测细胞培养液TNF-α及IL-6水平。结果与对照组比较,
软脂酸组PIECs TLR4 mRNA及蛋白表达显著升高（TLR4 mRNA：4.73±0.61 vs 1.25±0.90,P<0.05;TLR4 蛋白：5.79±0.05 vs
4.07±0.31,P<0.05）,PIECs细胞表面TLR4蛋白水平显著增加（38.070±3.907 vs 29.390±1.072,P<0.05）;软脂酸组PIECs IκBα蛋
白表达显著降低（2.04±0.22 vs 3.98±0.18,P<0.05）,细胞培养液TNF-α及IL-6水平显著升高（TNF-α：2.52±0.30 vs 1.38±0.26,P<
0.05;IL-6：3.28±0.32 vs 1.44±0.28,P<0.05）。结论软脂酸在诱导血管内皮细胞TLR4表达的同时活化TLR4炎症信号通路。
     

冬虫夏草提取液对NRK-52E缺血再灌注损伤时 凋亡及TLR-4表达的干预作用

目的：观察体外缺血再灌注损伤（IRI）时大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）凋亡情况和Toll样受体4（TLR-4）基因表达,以及冬虫夏草提取液对其干预作用。方法：将体外培养的NRK-52E分成对照组、模型组和冬虫夏草干预组,均以去除培养基后经10-10 mol/L抗霉素A刺激1 h后恢复培养基的方法,模拟IRI过程。在多个时间点,以流式细胞仪检测凋亡率, RT-PCR法检测凋亡相关基因（Bax,Bcl-2）和TLR-4基因的表达变化。结果：与对照组相比,模型组细胞凋亡率明显增高(P＜0.01),Bax mRNA表达上调(P＜0.05),Bcl-2 mRNA表达下调(P＜0.05)以及TLR-4 mRNA表达上调(P＜0.05)。冬虫夏草干预可明显影响缺血再灌注损伤时Bax,Bcl-2的表达,降低凋亡水平,并能减轻TLR-4高表达程度(均P＜0.05)。结论：NRK-52E 在IRI时有明显的细胞凋亡,以及TLR-4基因表达异常。冬虫夏草提取液可能通过抗凋亡和影响TLR-4表达减轻肾IRI。     

强直性脊柱炎患者外周血单核及T淋巴细胞CD147的表达及意义

目的 观察强直性脊柱炎(AS)患者外周血单核及T淋巴细胞中CD147的表达情况,初步探讨CD147在AS发病及疾病活动中的意义.方法 入组AS患者、类风湿关节炎(RA)患者及健康对照者(HC)各30例,以流式细胞术分析比较各组间外周血单核及T淋巴细胞CD147表达的差异,并经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测比较其外周血单个核细胞(PBMC)CD147 mRNA表达的差异;进而将AS患者单核及T淋巴细胞CD147表达水平与常用的疾病活动性指标行相关分析.结果 AS、RA及HC组外周血单核细胞CD147的平均荧光强度(MF1)分别为213.5±37.8、228.7±49.7及163.6±44.8,T淋巴细胞CD147的MFI则分别为36.8±10.1、40.2±10.5及28.3±10.6,AS组单核及T淋巴细胞CD147的表达水平均略低于RA患者,但差异均无统计学意义(均P＞0.05),而AS与RA组单核及T淋巴细胞CD147的表达水平均高于HC组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);AS与RA组PBMC中CD147 mRNA表达水平均高于HC组(P＜0.05),而AS与RA组间差异无统计学意义(P＞0.05);AS患者单核及T淋巴细胞CD147 MFI与其ESR及CRP均存在正相关(P＜0.05).结论 AS患者单核及T淋巴细胞中CD147的表达较正常升高,其水平与患者ESR及CRP存在正相关,提示CD147可能是AS患者疾病发生发展的重要影响因素.     

高糖对视网膜色素上皮细胞Toll样受体2表达的影响

目的观察高糖对体外培养的ARPE-19细胞Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)表达的影响及机制。方法各组ARPE-19(RPE细胞系)细胞分别刺激48 h,正常糖浓度组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、中度高糖组(15.5 mmol/LD-葡萄糖)、高糖组(25.5 mmol/L D-葡萄糖)、PKC-α抑制剂组(25.5 mmol/L D-葡萄糖加10 mmol/L Go6976 PKC-α抑制剂)、高渗对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖加20 mmol/L甘露醇)。Western blot检测各组ARPE-19细胞TLR2蛋白表达水平,以及PKC-α蛋白胞浆向胞膜的转位情况;Real-time PCR分析各组ARPE-19细胞TLR2的mRNA表达水平。结果与正常糖浓度组相比,高糖组和中度高糖组TLR2的mRNA和蛋白表达,以及PKC-α转位均增加(P<0.05),并且高糖组高于中度高糖组(P<0.05)。与高糖组比较,PKC-α抑制剂组的TLR2蛋白表达降低(P<0.05),PKC-α蛋白转位显著降低(P<0.01)。结论高糖可以上调ARPE-19细胞TLR2的mRNA和蛋白表达,刺激PKC-α转位;高糖可能是通过PKC-α通路上调ARPE-19细胞TLR2表达。     

外周血单个核细胞TLR4基因表达水平与AS、RA病情活动性的关系分析

目的:分析外周血单个核细胞TOLL样受体4(TLR4)基因表达与强直性脊柱炎(AS)、类风湿关节炎(RA)病情活动性的相关性.方法:选择AS、RA病人各40例,分别为AS组、RA组,另选取30名健康志愿者为对照组.以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测外周血单核细胞TLR4 mRNA表达水平,并分析其与病情活动性、实验室...     

有氧运动对高脂膳食金黄地鼠葡萄糖转运蛋白4、血糖及胰岛素的影响

目的探讨有氧运动对高脂膳食金黄地鼠葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GluT4)、血糖及胰岛素的影响。方法将健康雄性清洁级金黄地鼠20只随机分为运动组和对照组,每组10只,均给予质量分数10%高脂膳食。运动组金黄地鼠作跑台运动10周,对照组在原有条件下饲养,不作跑台运动。10周后检测金黄地鼠血糖、胰岛素及骨骼肌和脂肪组织中GluT4的基因表达。结果跑台运动10周后运动组金黄地鼠空腹血糖为(12.89±3.35)mmol.L-1,低于对照组的(19.23±2.45)mmol.L-1,差异有统计学意义(P<0.05);运动组血清胰岛素水平[(20.95±6.96)mmol.L-1]、胰岛素抵抗指数(2.47±0.35)均低于对照组[分别为(31.70±6.51)mmol.L-1、6.39±0.14],差异有统计学意义(P<0.01);运动组骨骼肌GluT4 mRNA表达(0.35±0.06)高于对照组(0.10±0.05),差异有统计学意义(P<0.01),肾周脂肪组织中GluT4 mRNA表达运动组(0.21±0.09)也高于对照组(0.09±0.03),差异有统计学意义(P<0.01)。运动组骨骼肌和脂肪组织中GluT4 mRNA的表达与血糖和胰岛素水平呈显著负相关。结论有氧运动可以降低血糖和胰岛素水平,增强GluT4 mRNA表达并向细胞膜转移,促进骨骼肌细胞及脂肪细胞对葡萄糖的摄取和利用,改善胰岛素抵抗。     

NPEPPS基因在强直性脊柱炎发病机制中的功能基因组学分析

目的：探讨NPEPPS基因的单个核苷酸多态性（SNP）位点对该基因表达及在强直性脊柱炎（AS）发病机制中的调控作用。方法：选取温州医科大学附属第一医院风湿免疫科收治的54例AS患者（AS组）与78例健康对照者（对照组）的外周血单个核细胞（PBMC）,提取DNA和RNA,分别用Illumina平台进行SNP微阵列的基因定型检测和RNA测序。用PLINK提取包含NPEPPS的染色体区域的SNPs,用IMPUTE2进行缺失基因型的补缺,用PLINK计算免疫芯片的基因型。将RNA测序获得的read定位比对到人类基因组,产生每个基因的read计数,根据参考转录组计算不同转录本的表达水平,用DESeq2进行组间比较,并与基因型进行回归分析,对该SNPs和附近1 MB范围内的基因进行eQTL分析。结果：SNP rs9901869位点不管是纯合等位基因还是杂合等位基因,AS组NPEPPS表达与对照组间差异无统计学意义（P＞0.05）;AS组与对照组中不同的转录本的表达水平各不相同,其中TCONS_00206150、TCONS_00206153和TCONS_00206137的表达水平差异有统计学意义（P＜0.05）;AS组与对照组中SNP rs9901869不同基因型所对应的NPEPSS基因及其转录本的表达水平各不相同,其中部分转录本的表达水平差异有统计学意义（P＜0.05）;AS组与对照组中NPEPPS基因及其转录本的表达水平也因SNP rs9901869附近SNP rs180677251基因型的不同而差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：NPEPPS基因位点多态性影响了NPEPPS的表达水平,可能与AS发病之间有一定的相关性。     

强直性脊柱炎患者外周血IL-33表达水平及临床意义

目的探讨白细胞介素33（interleukin33,IL-33）在强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）患者外周血中的表达水平及临床意义。方法分别采用实时定量PCR和酶联免疫吸附法检测30例强直性脊柱炎患者和30例正常对照者外周血中IL-33 mRNA的表达水平和血浆中IL-33水平。结果强直性脊柱炎患者外周血IL-33 mRNA水平与正常对照相比明显增高,差异有统计学意义（1．74±0．75 vs 1．23±0．58,P〈0．05）;强直性脊柱炎患者血浆中IL-33水平[（227±95）pg／m1]明显高于正常对照[（114±63）pg／m1],差异有统计学意义（P〈0．05）。强直性脊柱炎患者血浆中IL-33水平及外周血IL-33 mRNA的表达水平与疾病活动度指数（ASDAS）（r分别为0．461,0．438,均P〈0．05）、C反应蛋白（CRP）（r分别为0．635,0．617,均P〈0．05）呈正相关。结论强直性脊柱炎患者外周血IL-33水平增高,IL-33可能参与了强直性脊柱炎的发病。     

卡莫氟对强直性脊柱炎Th1/Th2类细胞因子表达影响的研究

目的：观察卡莫氟(1-hexylcarbamoyl-5-fluorouracil,HCFU) 和柳氮磺胺吡啶(sulfalazine,SSZ)治疗强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)后体内Th1/Th2类细胞因子的变化。方法：19例AS患者随机分为2组，分别给予HCFU(9例)和SSZ （10例），RT-PCR检测其治疗前后外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中细胞因子γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-6（IL-6）mRNA片段的表达。结果:HCFU治疗后AS患者PBMC中IFN-γ、TNF-α mRNA的表达率分别为33.33%、44.44%，与治疗前相比差异有统计学意义（P＜0.05），IL-2、IL-4及IL-6 mRNA的表达差异无统计学意义。SSZ治疗后AS患者PBMC中IFN-γ mRNA的阳性表达率为70%,半定量结果显示，治疗后PBMC中IFN-γ mRNA的表达水平明显降低（P＜0.05)。80% AS患者在治疗后PBMC中IL 4 mRNA呈阳性表达，较治疗前21.05%明显升高（P＜0.05）。IL-2、IL-6和TNF-α mRNA的表达无明显变化（P＞0.05）。结论：HCFU能使TNF-α mRNA表达降低，促进AS患者的免疫应答从Th1型向Th2型转变，小剂量即可使病情缓解。SSZ未发现对TNF-α mRNA表达有明显影响，可促使AS患者的免疫应答从Th1型向Th2型转变。     

膀胱移行上皮Toll样受体分子诱导表达的实验研究

目的 了解膀胱移行上皮在大肠杆菌和卡介苗的不同刺激下Toll样受体分子(TLRs)的表达。方法 用不同剂量(菌数／细胞数比值)的大肠杆菌和卡介苗(BCG)分别刺激培养人膀胱移行上皮癌T24细胞,1h后以RT-PCR检测其TLR-2和TLR-4的mRNA水平。结果 膀胱癌T24细胞有TLR-2和TLR-4表达;大肠杆菌各剂量组T24细胞TLR-2和TLR-4的表达水平与未刺激组相比无显著差异;BCG刺激后T24细胞中TLR-2和TLR-4的表达水平随BCG剂量的增加而逐渐升高,在菌数／细胞数比值为10时达最高,随后有所降低。结论 膀胱移行上皮在大肠杆菌和BCG等不同微生物的刺激下,其Toll样受体分子的表达存在差异。