靶向性声学造影剂与血管内皮细胞相互作用的实验研究

目的 制备携抗人VCAM-1单克隆抗体的白蛋白声学造影剂，观察其与损伤血管内皮细胞的相互作用，探讨评价血管内皮功能的新方法。 方法 采用交联法将抗人VCAM-1单克隆抗体共价偶联到自制氟碳气体为核心的白蛋白微气泡表面，制备靶向性声学微气泡；倒置显微镜下分别观察普通白蛋白微气泡、靶向性微气泡与正常内皮细胞、损伤内皮细胞的结合作用，高倍视野下计数内皮细胞及黏附的微气泡的数目，通过计算微气泡与内皮细胞的比值对两者之间的结合作用进行定量分析。 结果 无论是正常内皮细胞，或损伤内皮细胞，仅见少量的对照组微气泡的黏附作用；而镜下可见大量携VCAM-1单抗的白蛋白微气泡黏附在损伤内皮细胞表面，黏附数目显著高于黏附于正常内皮细胞表面的数目。 结论 携VCAM-1单抗的靶向性声学造影剂能够特异性结合在损伤内皮细胞表面，开拓了超声成像技术检测血管内皮损伤、评价血管内皮功能新的研究领域。     

携IL-8单抗靶向超声造影剂与血管内皮细胞相互作用的实验研究

目的 观察自制携带IL-8单抗靶向超声造影剂与损伤血管内皮细胞的相互作用,探讨IL-8在粥样斑块形成过程中的作用和评价血管内皮功能的新方法.方法 采用交联剂将抗人IL-8单克隆抗体偶联到SonoVue微泡表面,制备靶向性超声微泡;倒置显微镜下分别观察SonoVue微泡、靶向性微泡与正常内皮细胞、损伤内皮细胞的结合作用,高倍视野下计数内皮细胞及黏附的微泡数,通过计算微气泡与内皮细胞的比值对两者之间的结合作用进行定量分析.结果 仅有极少量对照组SonoVue微泡黏附于正常及损伤内皮细胞;而镜下可见携IL-8单抗的SonoVue微泡黏附于内皮细胞,黏附于损伤内皮细胞表面的微泡数显著高于正常内皮细胞.结论 携IL-8单抗的靶向性超声造影剂能够特异性结合在损伤细胞表面,拓展了超声成像技术检测血管内皮损伤、评价血管内皮功能的新领域.     

抗体偶联白蛋白超声造影剂的制备及体外靶向性研究

目的制备单克隆抗体修饰的白蛋白微气泡，并探讨其体外靶向性作用。方法采用N琥珀酰亚胺基-3-（2吡啶二硫）-丙酸酯（SPDP）交联法将鼠抗人血管细胞粘附分子（VCAM-1）单克隆抗体与白蛋白微气泡进行共价偶联，采用玻片凝集法检验抗体是否与白蛋白微气泡交联；体外培养高表达VCAM-1抗原的损伤血管内皮细胞，通过抗体修饰微气泡与该细胞的特异性结合作用检验该微气泡的靶向性作用。结果SPDP交联法制备的免疫微气泡的玻片凝集反应呈阳性；损伤内皮细胞（细胞膜表面高表达VCAM-1抗原）周围可见大量免疫微气泡聚集，而正常内皮细胞（细胞膜表面无VCAM-1抗原表达）表面未见明显免疫微气泡附着。结论应用SPDP交联法能够将抗体有效地偶联到白蛋白微气泡表面，体外实验证实了其与靶细胞的特异性结合作用。     

IL-8单克隆抗体靶向偶联SonoVue微气泡造影剂的方法学研究

目的 制备IL-8单克隆抗体与SonoVue声学微气泡偶联的声学造影剂,并探讨其偶联的方法学.方法 采用SPDP法将IL-8单克隆抗体与SonoVue声学微气泡进行共价偶联,玻片凝集法检验抗体与SonoVue微气泡造影剂是否偶联成功.结果 SPDP交联法制备的携IL-8单克隆抗体的免疫微气泡与二抗(羊抗鼠IgG血清)进行的玻片凝集反应,结果呈阳性,即偶联成功.结论 应用SPDP交联法能够有效地将IL-8单克隆抗体结合到声学微气泡造影剂表面,为进一步研究靶向性声学微气泡造影剂的制备与应用奠定了基础.     

携IL-8单抗的靶向超声造影剂对损伤心肌细胞的体外寻靶实验研究

目的 通过体外寻靶实验评价携IL-8单克隆抗体(简称单抗)靶向超声造影剂的靶向粘附效能,探讨IL-8在心肌梗死早期的作用机制。方法 采用共价偶联法制备携IL-8单抗靶向超声造影剂,利用使细胞缺氧、缺糖的方法制备损伤心肌细胞,通过靶向超声造影剂与损伤心肌细胞的体外结合实验检测其寻靶能力。结果 携IL-8单抗靶向微泡与损伤及损伤初期心肌细胞的粘附作用明显高于SonoVue微泡(P<0.05),且随着损伤程度的加重,携IL-8单抗靶向微泡与心肌细胞的黏附作用逐渐加强(P<0.05)。结论 携IL-8单抗靶向超声造影剂对损伤心肌细胞具有较强的靶向性。     

过氧化物酶增殖物激活受体α激动剂降低高糖诱导的黏附因子的表达

目的探讨过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)α激动剂对高糖条件下人血管内皮细胞细胞间黏附因子-1(ICAM-1)和血管黏附因子-1(VCAM-1)表达的影响及相关机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞和HL-60细胞,酶联免疫吸附试验(ELISA)、HL-60细胞黏附试验及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ICAM-1和VCAM-1的表达,Western blotting和共聚焦显微镜方法探讨NF-κB通路IκB、磷酸化-IκB蛋白水平及p65亚基的移位,流式细胞仪和共聚焦显微镜方法检测细胞内活性氧离子(ROS)水平,化学发光法测定烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的活性。结果 (1)高糖(33 mmol/L)干预24 h能够显著增加内皮细胞ICAM-1和VCAM-1的表达;(2)PPARα激动剂非诺贝特、NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)和NADPH氧化酶抑制剂二联苯碘(DPI)显著抑制高糖诱导的ICAM-1和VCAM-1的表达;(3)高糖能够诱导内皮细胞IκBα的降解、磷酸化-IκBα蛋白水平的增加;另外,高糖可以显著增加内皮细胞NADPH氧化酶活性和细胞内ROS水平;非诺贝特则呈浓度依赖性的逆转高糖引起的上述效应。结论 PPARα激动剂非诺贝特通过抑制NF-κB通路和NADPH氧化酶的激活降低高糖诱导的人血管内皮细胞炎症因子ICAM-1和VCAM-1的表达。     

抗VEGF抗体介导靶向超声造影剂的体外实验研究

目的以抗血管内皮因子（VEGF）抗体为配体研制能与血管内皮细胞特异性结合的靶向脂质体超声造影剂并检测其体外寻靶能力。 方法以静电吸附法将抗VEGF抗体连接到脂质体造影剂微泡的表面；体外培养ECV304人血管内皮细胞，用免疫荧光法检测靶向造影剂与其体外结合能力，以普通造影剂为对照组。 结果所制备的靶向超声造影剂与普通微泡无显著差异；免疫荧光实验结果显示靶向造影剂能在体外与血管内皮细胞特异性结合。 结论携抗VEGF抗体的脂质体靶向造影剂能通过静电吸附法成功制备，且在体外能与血管内皮细胞特异性结合。     

携ICAM-1单抗超声造影剂体外评估兔腹主动脉内皮损伤实验研究

目的探讨携ICAM-1 单抗的超声造影剂评价血管内皮损伤的可行性及其价值.方法 FITC标记自制含氟碳声振白蛋白造影剂及携ICAM-1 单抗的靶向超声造影剂.新西兰大白兔8只,高脂饮食建立内皮损伤动物模型后,取兔腹主动脉做冰冻病理切片,随机分两组,分别滴加非靶向造影剂、靶向造影剂,比较两种微泡内皮分布情况及相应荧光染色度的差异.结果靶向造影剂组内皮黏附微泡明显增多,荧光染色较强.结论携ICAM-1 单抗的造影剂微泡可靶向黏附于损伤内皮,据此可评价早期内皮损伤.     

内吗啡肽-1对正常人骨髓基质细胞造血调控的研究

本研究探讨内吗啡肽-1对正常人骨髓基质细胞表面黏附分子细胞间黏附分子（ICAM-1）和血管细胞黏附分子（VCAM-1）,以及基质细胞分泌的细胞因子IL-6、TNF-α的调控作用。应用流式细胞术检测黏附分子ICAM-1和VCAM-1的表达,用ELISA法检测细胞因子IL-6、TNF-α的浓度。结果表明：加入内吗啡肽-1培养24小时后ICAM-1和VCAM-1表达与对照组比较有显著性差异（p〈0.05）,但内吗啡肽-1浓度的改变对于二者的表达无影响;IL-6、TNF-α的浓度实验各组数据与对照组比较无显著性差异（p〉0.05）。结论：内吗啡肽-1能调控正常骨髓基质表面ICAM-1和VCAM-1的表达;对于正常骨髓基质细胞分泌的细胞因子IL-6、TNF-α无促进或抑制作用。     

携抗ICAM-1超声造影剂对兔腹主动脉损伤内膜靶向显影的实验研究

目的探讨携抗ICAM-1的超声造影剂微泡靶向显影对损伤血管内膜的诊断价值.方法使用自制含氟碳声振白蛋白造影剂,制备FITC标记的携抗ICAM-1的靶向超声造影剂.荧光素标记普通造影剂微泡以示对照.新西兰大白兔12只,随机分2组,通过高脂饮食建立腹主动脉内膜损伤模型.模型建立前后分别经兔耳缘静脉推注普通(第1组)、靶向(第2组)2种造影剂微泡,超声监测不同时期、2类微泡在内膜显影情况的差异并做比较分析.造影后取腹主动脉标本做病理对照.结果模型建立前,2组造影结果无明显差异.内膜损伤后,靶向微泡持续显影时间明显延长,有延迟排空现象,与普通微泡造影结果相差显著.光镜见第2组内皮黏附微泡明显多于第1组,内膜面有强绿色荧光带形成.结论携抗黏附分子-1造影剂微泡可靶向黏附于损伤血管内膜,超声造影可据此判定早期血管内膜损伤.