黄芪多糖对细菌脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞释放TNFα、NO及IL-1的影响

目的研究黄芪多糖(APS)对细菌脂多糖(LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-1(IL-1)及一氧化氮(NO)的影响.方法 10 mg/L LPS体外诱导大鼠腹腔巨噬细胞,小鼠成纤维细胞瘤株(L929)杀伤法检测TNFα的含量、小鼠胸腺细胞增殖法检测IL-1的活性、Griess法检测NO的水平.结果 APS能不同程度地抑制激活巨噬细胞对TNFα、NO与IL-1的分泌.结论 APS抑制巨噬细胞的分泌功能可能是其保肝作用的机制之一.     

D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠慢性肝损伤模型的建立

目的研究D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠慢性肝损伤模型建立的方法。方法 30 mg/mLD-氨基半乳糖和2μg/mL脂多糖混合溶液,腹腔注射,每2天1次,连续8周。监测小鼠饮食和体重变化;取血测定小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平;取肝组织,HE和Masson染色,观察小鼠肝组织结构、细胞形态及纤维化程度。结果模型组ALT水平升高,肝细胞变性、坏死等病变,组织纤维化明显增生。结论 D-氨基半乳糖联合脂多糖可诱导小鼠的慢性肝损伤模型。     

氧化苦参碱对小鼠急性肝损伤早期肝细胞凋亡的作用

以往研究表明[1 ] ,小鼠腹腔注射脂多糖 (L PS) +D-氨基半乳糖 (Gal N )后肝组织出现严重出血、坏死 ,氧化苦参碱 (oxy-matrine,OM) 5 0 mg/ kg腹腔注射预保护能明显减轻上述病理损害。为了探讨 OM对肝损伤早期肝细胞凋亡的影响 ,本实验从血清学、形态学和免疫组化等方面进行如下研究。1　材料和方法1.1　药品和试剂　 L PS由本校基础医学部微生物学教研室馈赠 ;Gal N购自重庆医科大学化学教研室 ;氧化苦参碱 ,为宁夏制药厂产品 ;纯化抗鼠 TNFα- Ig G EL ISA试剂盒购自深圳晶美生物公司 ;Fas及其配体 (Fas L )免疫组化试剂盒购…     

双歧杆菌脂磷壁酸对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬和NO释放的影响

目的 探讨双歧杆菌脂磷壁酸(LTA)对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬功能和NO释放的影响.方法 将无菌收集培养的小鼠腹腔巨噬细胞分为RPMI 1640完全培养液组和地塞米松处理组(终浓度为100"g/m1),分别向每组培养孔内加入不同终质量浓度的LTA,于培养4 h和24 h后,分别用中性红法和Griess Reagent试剂盒检测并分析LTA对巨噬细胞体外吞噬和NO释放的影响.结果 终浓度为5、10、20、40 ptg/ml的LTA对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬功能和NO的释放均有明显的促进作用(P<0.05),并且可以有效拮抗地塞米松的抑制效应(P<0.05).LTA的上述作用与其浓度呈一定的梯度关系.结论 LTA不但可以显著激活小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬功能和促进NO的释放,还能有效拮抗地塞米松对巨噬细胞的体外抑制作用.     

束缚应激对D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠肝损伤的保护作用

目的 探讨束缚应激对D-氨基半乳糖联合脂多糖(D–galactosamine and lipopolysaccharide combination,D+L)诱导的小鼠肝损伤的保护作用.方法 正常BALB/c小鼠随机分为正常对照组(con)、应激对照组(str)、模型组(D+L)、束缚应激组(D+L+str).con组小鼠常规饲养;str组小鼠给予定时定量的束缚应激;D+L组小鼠腹腔注射D-氨基半乳糖和脂多糖的混合溶液, 1次/2天;D+L+str 组小鼠腹腔注射等量D+L混合液后,给予与str组相同的束缚应激. 第8周,各组小鼠取血检测血清AST、ALT,肝脏固定后HE及Masson染色观察小鼠肝脏结构、细胞形态及纤维化程度. 结果 第8周D+L+str组与D+L组小鼠相比,血清ALT和AST显著降低(P<0.01),AST/ALT显著增高(P<0.01);HE及Masson染色显示,D+L组小鼠肝小叶结构紊乱,出现结节性增生及大量上皮细胞核浓缩、溶解、坏死,枯否氏细胞浸润,而D+L+str组未见明显病理变化;纤维化程度评分显示, D+L+str组与D+L组小鼠相比,病理评分与纤维显色吸光度值均显著降低(P<0.05). 结论 束缚应激对D+L诱导的小鼠肝损伤具有一定保护作用.     

四氯化碳联合D-氨基半乳糖、脂多糖诱导慢加急性肝衰竭模型的建立

目的 建立小鼠慢性、慢加急性肝衰竭模型.方法 36只BAIB/C小鼠随机分为4组.实验8周组、12周组、急性攻击组(每组8只)给予腹腔注射20%四氯化碳(CCl4)油溶液,连续注射8周、12周、12周.12周时,急性攻击组再腹腔联合注射D-氨基半乳糖(D-Gal)和脂多糖(LPS);对照组(12只)注射橄榄油12周.给...     

雷公藤内酯醇对小鼠腹腔内激活巨噬细胞杀伤活性和NO分泌影响的实验研究

目的 探讨雷公藤内酯醇(TP)对子宫内膜异位症腹腔大量激活巨噬细胞免疫抑制作用机制,以及其在不同剂量TP和不同时间段杀伤活性和NO分泌的影响。方法 体外培养由脂多糖(LPS)诱导激活的小鼠腹腔巨噬细胞,采用噻唑盐比色(MTT)间接法观察其杀伤活性的变化,并用硝酸还原酶法检测其上清NO的含量变化。结果 TP在1～10μg/ml时对巨噬细胞杀伤活性和NO的产生具有明显抑制作用(P<0.01),且无细胞毒性。TP<1 μg/ml,无统计学意义(P>0.05)。结论 TP能有效抑制小鼠腹腔液中活化巨噬细胞和NO的生成,为临床治疗子宫内膜异位症提供实验依据。     

雷公藤甲素对小鼠巨噬细胞活性和NO分泌的影响

目的探讨雷公藤甲素(TP)对子宫内膜异位症患者腹腔液中大量激活的巨噬细胞免疫抑制作用机制,以及其在不同剂量TP和不同时间段的杀伤活性和对NO分泌的影响。方法体外培养由脂多糖(LPS)诱导激活的小鼠腹腔巨噬细胞,采用噻唑盐比色(MTT)间接法观察其杀伤活性的变化,并用硝酸还原酶法检测其上清液NO的含量变化。结果1~10μg/ml TP对巨噬细胞杀伤活性和NO的产生具有明显抑制作用(P<0.01),且无细胞毒性。TP<1μg/ml无统计学意义(P>0.05)。结论TP能有效抑制小鼠腹腔液中活化巨噬细胞和NO的生成,为临床治疗子宫内膜异位症提供实验依据。     

CD40L在M2型巨噬细胞类型转换中的作用

 目的 检测不同CD40L表达水平的脾细胞对巨噬细胞表型和功能的影响，探讨通过调控CD40L的表达改变巨噬细胞的类型。方法 贴壁分离正常BALB/c小鼠的腹腔巨噬细胞。将腹腔巨噬细胞或经IL-4刺激的腹腔巨噬细胞，分别与体外培养2日后获得的CD40Llow脾细胞和Ionomycin与PMA诱导的CD40Lhigh脾细胞共孵育，24h后检测M1和M2型巨噬细胞相关基因的表达，并以硝酸还原酶法检测NO分泌水平。结果 与CD40Llow脾细胞共孵育的巨噬细胞CCL22、Fizz1和Ym1表达水平较高，但只分泌较低水平的NO，而与CD40Lhigh脾细胞共孵育的巨噬细胞表达较高水平的CCL3并分泌高水平的NO，而且CD40Lhigh脾细胞可使M2型巨噬细胞表型相关基因明显下调。结论 CD40Lhigh脾细胞使巨噬细胞倾向于M1型极化，并且能使M2型巨噬细胞向M1型转换。     

茯苓酸对LPS诱导的急性肺损伤小鼠的保护作用及机制

目的 观察茯苓酸(PA)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞活化的影响以及对LPS诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠的保护作用,并探讨其作用机制.方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7和原代肺巨噬细胞,使用40μmol/L PA孵育30 min后,以100 ng/mL的LPS刺激24 h.将36只健康C57BL/6小...     

双酚 A 对小鼠腹腔巨噬细胞极化影响的体外研究

目的：探讨体外实验条件下,双酚 A（BPA）对小鼠腹腔巨噬细胞极化的影响。方法提取 C57BL/6J 雄性小鼠腹腔巨噬细胞,用（10 ng/ ml）干扰素-γ（IFN-γ）和（500 ng/ ml）细菌脂多糖（LPS）诱导其向 M1型极化;用（10 ng/ ml）白介素-4（IL-4）诱导其向 M2型极化;同时加入0.1、1、10μmol/ L BPA 处理细胞,并设立空白对照组和溶剂对照组。流式细胞术检测 M1型和 M2型巨噬细胞比例,ELISA 法检测 M1型和M2型巨噬细胞各自分泌的诱导型一氧化氮合酶（ iNOS）和精氨酸酶（Arg-1）活性。结果不同浓度 BPA 促进 IFN-γ和LPS 诱导的小鼠腹腔巨噬细胞向 M1型极化,1、10μmol/ L BPA 组 M1型巨噬细胞比例较空白对照组分别升高11.3%和17.4%,M1型巨噬细胞分泌的 iNOS 活性分别升高1.95和2.29倍,差异均有统计学意义。不同浓度 BPA 抑制 IL-4诱导的小鼠腹腔巨噬细胞向 M2型极化,1、10μmol/ L BPA组 M2型巨噬细胞比例分别较空白对照组降低9.0%和14.3%,M2型巨噬细胞分泌的 Arg-1活性分别下降0.37和0.49倍,差异均有统计学意义。结论体外条件下,低剂量BPA 促进小鼠腹腔巨噬细胞向 M1型极化,抑制其向 M2型极化。     

阿司匹林对脂多糖、地塞米松分别诱导巨噬细胞凋亡中TNF-α表达的影响

目的本实验旨在观察阿司匹林对脂多糖和地塞米松分别诱导的小鼠腹腔巨噬细胞凋亡中TNF-α表达的影响.方法小鼠腹腔巨噬细胞培养成功后,分别以脂多糖(LPS)和地塞米松(Dex)为诱导剂进行凋亡的诱导,在出现凋亡的基础上,给予不同剂量的阿司匹林分别分5组给药,放射免疫分析法检测TNF-α表达情况.结果阿司匹林对脂多糖和地塞米松诱导的凋亡中TNF-α的表达均有抑制作用.结论阿司匹林在炎症和非炎症情况下,都可以降低TNF-α水平.     

卡介苗蛋白提取物体外对小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的影响

目的:分离活卡介苗(BCG)的有效组分,分析其对小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的影响.方法:采用酶裂解法和超声波破碎法对活BCG进行裂解,取上清夜,通过Sephadex G100凝胶层析对BCG提取物(BCGE)有效组分BCGE1、BCGE2和BCGE3进行分离及相对分子质量测定;以RPMI 1640培养液为对照,采用Gress方法检测不同质量浓度的BCG蛋白活性组分对小鼠腹腔巨噬细胞NO的诱导作用.结果:与对照组相比,BCGE2和BCGE3均具有诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的作用,且随着质量浓度的增加,诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的作用更强(F BCGE2=34.750,F BCGE3=31.730,P均＜0.001),在相同质量浓度时BCGE2的诱导作用最强(F 640mg/L=22.000,P=0.002).结论:BCGE2和BCGE3可能足BCG免疫调节作用的有效组分.     

枸杞多糖对地塞米松诱导的小鼠脾脏细胞凋亡的影响

目的 探讨枸杞多糖(LBP)对地塞米松(DEX)诱导的小鼠脾脏细胞凋亡的影响.方法 以水提取-乙醇沉淀法制备LBP,分别给予实验小鼠每天口服LBP 25、50、100 mg,10 d后体外实验取小鼠脾脏细胞与10-5、10-6、10-7 mol/L的DEX共同孵育,6 h后检测细胞凋亡率;体内实验给予小鼠腹腔注射DEX(25 mg/kg),10 h后取脾脏细胞直接检测凋亡率.结果 实验动物预先口服LPB 10 d后,可使DEX诱导的小鼠脾脏细胞凋亡率显著降低,并呈现量效关系.结论 LPB的免疫调节和促进作用与其对免疫细胞的保护、降低免疫细胞凋亡有关.     

1,3-二苯基-1,2,3,6-四氢嘧啶-4,5-二甲酸二乙酯抗炎镇痛作用的研究

目的探讨1,3-二苯基-1,2,3,6-四氢嘧啶-4,5-二甲酸二乙酯（LH-2703）体内外的抗炎镇痛活性。方法采用乙酸所致小鼠扭体反应和热板致痛模型评价镇痛作用;二甲苯致小鼠耳郭肿胀和角叉菜胶致大鼠足跖肿胀模型评价抗炎作用。细菌脂多糖（LPS）刺激小鼠腹腔巨噬细胞活化作为体外炎症模型。酶免疫分析法（EIA）检测前列腺素E2（PGE2）的含量,Griess试剂法检测氧化亚氮（NO）的含量。结果LH-2703能减少乙酸所致小鼠的扭体次数,延长热板致痛的痛阈值,抑制二甲苯诱导的小鼠耳郭肿胀和角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀。体外能抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞产生炎症因子PGE2和NO,最低有效浓度分别为20、40μmol/L（P〈0.01,P〈0.05）。结论化合物LH-2703具有抗炎镇痛作用,其作用机制可能与抑制炎症因子PGE2和NO有关。     

芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞NO生成和iNOS酶活性的影响

目的探讨芦荟多糖(AloePolysaccharides,AP)对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(nitricox-ide,NO)生成和诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)酶活性的影响。方法体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,分别用0～400mg/L浓度的AP刺激24h,采用Griess反应测定NO生成量,荧光法检测iNOS活性。结果AP在25～400mg/L浓度范围内作用于小鼠腹腔巨噬细胞24h后,NO生成量增加、iNOS活性增高,除低浓度AP组(25mg/L)外,其余各浓度组差别均具有非常显著性意义(P<0.01),并呈显著正相关(r=0.7523,P<0.01);转录抑制剂放线菌素D、蛋白质合成抑制剂放线菌酮和NOS竞争性抑制剂L-NMA,均能有效抑制AP所诱导的巨噬细胞NO生成和细胞内iNOS活性(P<0.01)。结论AP能促进细胞内iNOS基因表达,以从头合成方式促进细胞NO合成和释放,所释放的NO可能参与AP的免疫调节过程。     

短梗五加乙酸乙酯提取物对败血症并发急性肝损伤模型小鼠的保护作用

[目的]探讨短梗五加乙酸乙酯提取物对败血症并发急性肝损伤模型小鼠的保护作用.[方法]取雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组和短梗五加乙酸乙酯提取物低、高剂量组.短梗五加乙酸乙酯提取物低、高剂量组分别腹腔注射给予100,200 mg/kg短梗五加乙酸乙酯提取物,阳性对照组腹腔注射给予30 mg/kg地塞米松,正常对照组和模型对照组灌胃给予等体积生理盐水.30 min后,除正常对照组外其余各组均腹腔注射给予脂多糖(LPS,20μg/kg)和D-氨基半乳糖(D-GalN,700 mg/kg),比较各组小鼠肝组织中MDA含量和SOD活性、血清中AST,ALT活性及NO,TNF-α水平,并观察48 h内的生存率.[结果]短梗五加乙酸乙酯提取物低剂量组生存率为60%,高剂量组为80%;与模型对照组比较,短梗五加乙酸乙酯提取物低、高剂量组肝组织中MDA含量显著降低(P<0.01),SOD活性显著升高(P<0.05,P<0.01),血清中AST,ALT活性及NO,TNF-α水平均显著降低(P<0.01).[结论]短梗五加乙酸乙酯提取物对D-GalN和LPS诱导的败血症并发急性肝损伤模型小鼠具有保护作用,其机制认为可能与抑制炎症介质NO和TNF-α有关系.     

肾上腺素对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞炎症介质表达的影响

目的　研究肾上腺素对脂多糖 (LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞株RAW 2 6 4 7中肿瘤坏死因子 (TNF α)、一氧化氮 (NO)、环加氧酶 2 (COX 2 )等表达的影响。方法　以 10ng/ml的LPS刺激体外培养的RAW 2 6 4 7细胞作为炎症模型 ,加入不同浓度的肾上腺素 (1× 10 -6,5× 10 -6,1× 10 -5,5× 10 -5mol/L)孵育 2 4h后 ,收集培养上清并提取细胞总蛋白 ,酶联免疫法测定上清中TNF α浓度 ,Griess法检测上清NO含量 ,免疫印迹法检测细胞总蛋白中COX 2的表达量。结果　 10ng/ml的LPS明显诱导TNF α、NO、COX 2的产生 ,这一效应可被肾上腺素抑制 ;而单独加入肾上腺素时 ,对上述 3种炎症介质的表达无明显影响。结论　肾上腺素下调LPS诱导的巨噬细胞中炎症因子的表达 ,可能对炎症的发生发展起到一定的调节作用。     

内毒素诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的机制探讨

细胞凋亡在形态学上表现为染色质浓缩 ,生物化学上则表现为核酸酶酶切DNA。本研究试图探讨内毒素 (脂多糖 )诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的机制。结果显示 ,内毒素能诱导巨噬细胞凋亡 ,与对照组比 ,细胞吞噬机能显著下降 (P <0 .0 1) ,腹腔灌洗液中NO-2 /NO-3 浓度显著升高。NO阻断剂AG和活性氧阻断剂PDTC均能部分抑制巨噬细胞凋亡 ,细胞吞噬机能也获得部分恢复。用LPS和IFN模拟在体情况 ,也能诱导培养的巨噬细胞凋亡。与整体情况类似 ,AG和PDTC亦能部分抑制小鼠巨噬细胞凋亡。提示内毒素诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡系经NO及活性氧介导.     

四氢黄连碱体外抗炎作用及机理研究

【目的】观察四氢黄连碱(THC)的体外抗炎作用及其相关机理。【方法】将体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞分为空白对照组,模型对照组,四氢黄连碱低、中、高剂量组。以脂多糖(LPS)刺激小鼠原代腹腔巨噬细胞建立体外细胞炎症模型,作为模型对照组。四氢黄连碱低、中、高剂量组分别以不同浓度(终浓度为1、2、3μmol/L)的四氢黄连碱预培养小鼠巨噬细胞24 h后,加入LPS(终浓度为10μg/mL)。空白对照组加入相同体积的细胞培养液。继续培养12 h后,采用硝酸还原酶法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量;实时定量PCR(q PCR)法检测细胞内肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)mRNA的表达;酶联免疫吸附分析(ELISA)检测细胞上清液中TNF-α、IL-6含量;ELISA检测细胞内核因子kappa B(NF-κB)与DNA的结合活性。【结果】与空白对照组比较,模型对照组小鼠巨噬细胞上清液中NO、TNF-α、IL-6含量,巨噬细胞TNF-α、IL-6 mRNA表达及NF-κBp65与DNA的结合活性均显著升高(P 0.001);经四氢黄连碱预处理小鼠巨噬细胞24 h后,上述指标均显著降低,且呈剂量依赖性(P 0.05或P 0.01或P 0.001)。【结论】四氢黄连碱具有显著的体外抗炎作用,其机理可能与阻断细胞内NF-κB信号通路的激活,从而下调促炎因子NO、TNF-α及IL-6的表达和分泌有关。