99Tcm标记MDM2反义寡核苷酸的实验研究

目的研究^99Tc^m标记小鼠双微体扩增基因（MDM2）mRNA的反义寡核苷酸（ASON）显像诊断乳腺癌的价值。方法以联肼尼克酰胺（HYNIC）为螯合物对ASON、错义寡核苷酸（ASONM）进行^99Tc^m标记，检测标记率、放化纯及其与互补正义链（SON）的结合能力。阳离子脂质体（1ipofectamine 2000）包裹反义探针及错义探针转染人乳腺癌细胞（MCF-7），通过RT-PCR和West-em．blotting法观察乳腺癌细胞MDM2mRNA和蛋白表达。建立荷人乳腺癌MCF-7裸鼠肿瘤模型，分别进行体内分布和肿瘤显像研究。结果ASON的标记率为（57．24-2．98）％（n=5），ASONM的标记率为（56．3±3．01）％（n=5），经纯化后放化纯可达95％以上，且仍保持与互补链的结合能力。不同浓度反义探针作用于乳腺癌细胞24h后，各浓度组MDM2mRNA和蛋白的表达量差异均有统计学意义（P〈0．01），而错义探针对MDM2mRNA和蛋白的表达没有明显影响。体内分布显示，反义及错义探针主要经肝、肾排泄，注射反义探针后，肿瘤／血液和肿瘤／骨骼肌放射性比值随时间的推移而增加。注射反义探针后1h肿瘤显影，肿瘤／对侧肢体放射性比值随时间推移而增加，各时间点错义探针在肿瘤内的聚集量均明显少于反义探针，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论^99Tc^m标记的MDM2ASON可在荷人乳腺癌MCF-7裸鼠肿瘤模型的肿瘤组织中特异性聚集，为乳腺癌的特异性诊断提供了一种可能的新方法。     

^99Tc^m标记RGD环肽在荷肺腺癌裸鼠中的显像研究

目的制备^99Tc^m标记的含RGD序列的^99Tc^m-联肼尼克酰胺（HYNIC）-c（RGDfK）环肽单体,评价其在整合素表达阳性的肺腺癌严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠肿瘤模型中的生物学分布,并进行显像研究。方法（1）以HYNIC为双功能螯合剂,以三羟甲基甘氨酸（tricine）和乙二胺二乙酸为协同配体,采用二步法制备^99Tc^m标记HYNIC—c（RGDfK）,进行细胞结合实验,测定标记物生物学活性;（2）将荷A549肺腺癌模型小鼠分为7组[第7组作为竞争性抑制组,注射显像剂前0．5h先注射HYNIC-c（CRDGfk）100μg],每组5只,经尾静脉注射7．4MBq的^99Tc^m-HYNIC-c（RGDfK）,于注射后0．5,1,2,4,8,12h处死,计算荷A549肺腺癌小鼠模型各脏器％ID／g,同时采用ROI技术研究^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）在小鼠体内的生物学分布,计算不同时间点的T／NT比值（NT选取肌肉）;（3）取6只荷瘤裸鼠,其中3只为竞争性抑制组,经尾静脉注射7．4MBq的^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）,于注射后0．5,1,2,4,8,12h进行静态1显像。结果^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）的标记率〉90％,放化纯〉95％。^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）与A549肺腺癌细胞特异性结合率最高为36．14％,体内分布实验显示^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）在肾的摄取率始终高于20％ID／g,注射后0．5h肿瘤％ID／g为10．52±1．48,8h为17．26±2．81,12h为8．93±0．90,竞争性抑制组注射后0．5h为2．29±0．85。通过ROI技术测得T／NT在8h达6．87。注射后1h肿瘤可显影,4～8h显影更清晰。结论^99Tc^m标记HYNIC—c（RGDfK）易于制备,具有良好的靶向性。     

^99Tc^m标记MDM2反义寡核苷酸对人前列腺癌细胞目的基因表达的影响

目的探讨99Tcm标记的小鼠双微体扩增基因2（MDM2）mRNA的ASON和错义寡核苷酸（ASONM）对前列腺癌细胞株LNCaP目的基因表达的影响,为后续的前列腺癌基因显像奠定基础。方法人工合成一段针对MDM2mRNA的ASON和ASONM,以HYNIC为螯合剂,对ASON和ASONM进行99Tcm标记,检测标记率、放化纯、稳定性及分子杂交活性。用脂质体包裹驰TcTM-HYNIC．ASON（0、100和500nmol／L）和99Tcm-HYNIC-ASONM（500nmol／L）,于LNCaP细胞中培养24h,再行RT-PCR和Westernblot实验,观察探针对MDM2、p53mRNA和相应蛋白质表达的影响。各组间计量资料比较采用单因素方差分析和g检验。结果ASON的标记率为（65．15±2．05）％（n=5）,ASONM的标记率为（64．93±2．18）％（n=5）,两者放化纯均达90％以上。99Tcm-HYNIC-ASON稳定性好,保留了与互补链结合的能力。0、100、500nmo]／L99Tcm-HYNIC-ASON组和500nmol／LTcmHYNIC-ASONM组MDM2mRNA含量分别为0．458±0．035、0．250±0．026、0．174±0．032、0．463±0．033。除0nmol／L99Tcm．HYNIC-ASON组与500nmol／L99Tcm-HYNIC-ASONM组间外,余差异均有统计学意义（F=33．69,q=24．32-91．45,均P〈0．01）;各组MDM2蛋白的平均密度分别为90．712±3．042、71．2184-2．915、32．775±3．062、88．121±2．710,同样除0nmol／L99Tcm．HYNIC．ASON组与500nmol／L99Tcm-HYNIC-ASONM组间外,余差异均有统计学意义（F=235．93,g：6．43～19．14,均P〈0．01）。4组p53mRNA含量分别为0．185±0．046、0．203±0．040、0．213±0．027、0．163±0．049,差异无统计学意义（F=2．18,P〉0．05）;各组p53蛋白平均密度分别为33．865±2．213、70．445±2．180、99．025±3．012、38．351±3．271,除0nmol／L99Tcm-HYNIC-ASON组与500nmol／L99Tcm-HYNIC-ASONM组间外,余差异均有统计学意义（F=53．98,g=3．32-6．74,均P〈0．01）。结论MDM2反义探针能与MDM2mRNA链上的目的序列特异结合,并抑制目的基因的表达,具备活体内前列腺癌反义显像的实验条件,有望为在基因水平上诊断前列腺癌提供一种新方法。     

^99Tc^m—hTERT mRNA反义分子探针荷MCF-7乳腺癌裸鼠显像

目的制备^99Tc^m-人端粒酶催化亚单位（hTERT）mRNA反义寡核苷酸（ASON）显像分子探针并验证其在荷MCF-7乳腺癌裸鼠早期诊断中的价值。方法采用双功能螯合剂法制备^99Tc^m-hTERT mRNA无义寡核苷酸（SON）、ASON探针。建立荷MCF-7乳腺癌裸鼠模型,运用阳离子脂质体介导法进行活体显像。采用SPSS12．0软件进行单因素方差分析。结果^99Tc^m-hTERT mRNA ASON标记率达到（76±5）％,放化纯〉96％,比活度达到1850kBq／μg。室温放置和健康人血清孵育24h后的放化纯均〉93％。SON与ASON的标记率基本一致。注射后4h反义组荷瘤裸鼠右上肢接种肿瘤部位可见放射性摄取,6～8h后显影清晰;无义组始终未见肿瘤部位放射性浓聚。反义组有和无脂质体介导的肿瘤／非肿瘤组织放射性（T／NT）比值分别为8．02±0．03和7．55±0．12,差异无统计学意义（t=-1．99,P〉0．05）;无义组有和无脂质体介导的T／NT比值分别为1．23±0．06和1．33±0．15,差异无统计学意义（t=0．42,P〉0．05）。但是分别比较反义组与无义组、脂质体介导组与无介导组间差异均有统计学意义（t=26．30和28．71,P均〈0．001）。结论^99Tc^m-hTERT mRNA ASON在荷瘤裸鼠活体内可与高表达hTERT基因的人乳腺癌MCF－7肿瘤组织特异靶向结合,在肿瘤分子功能显像中具有潜在应用价值。     

99Tcm-RGD环肽二聚体的制备及其体内外评价

目的评价^99Tc^m标记的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）环肽二聚体E[c（RGDfK）]：的体内外特性及其用于整合素α，B，阳性肿瘤显像的可行性。方法以三羟甲基甘氨酸（tricine）和三苯基膦三磺酸钠（TPPTS）作为协同配体，以联肼尼克酰胺（HYNIC）作为双功能连接剂，采用无亚锡一步法制备^99Tc^m-HYNIC—E[c（RGDfK）]：，通过U87人神经胶质瘤细胞测定其半数抑制浓度（IC50），观察其体外与整合素α，B，受体的结合解离动力学、细胞内化及外化，评价其在荷人神经胶质瘤裸鼠的生物分布。结果^99Tc^m-HYNIC-E[c（RGDfK）]，的标记率〉95％，经Sep-PekC18柱纯化后其放化纯〉99％。与RGD环肽单体C（RGDyK）相比，HYNIC偶联的E[C（RGDfK）]：二聚体具有更高的整合素α，β3亲和力，IC50分别为80．0和9．07nmol／L。细胞实验显示，^99Tc^m-HYNIC—E[C（RGDfK）]：与整合素α，β，结合较快，并迅速被受体介导内化。生物分布实验显示，^99Tc^m -HYNIC—E[C（RGDfK）]：主要经肾脏排泄，在注射后0．5和4h，标记物在肿瘤的每克组织百分注射剂量率（％ID／g）分别为（2．46±0．66）和（3．10±0．35）％ID／g，标记物在肿瘤中的滞留时间足够长。1显像示注射后1h肿瘤清晰可见，注射后4h显像效果更佳。结论^99 Tc^mHYNIC-E[C（RGDfK）]：是一种有前景的用于整合素α，β3，阳性肿瘤显像的显像剂。     

建立99Tcm标记联肼尼克酰胺多肽"显像剂"纤维膜组合文库

目的证明^99 Tc^m标记联肼尼克酰胺（HYNIC）多肽“显像剂”文库是^99 Tc^m显像剂研制中的有效方法。方法八肽组合文库采用人工点阵方式合成。HYNIC多肽通过C末端以及双B丙氨酸（连接体）共价连接在纤维膜上。用阻断剂阻断非特异结合位点后，将膜文库和人重组热休克蛋白70（HSP70）温育，冲洗。用生物素-亲和素法和抗体法筛选文库。对筛选阳性多肽化合物进行再合成、^99 Tc^m标记（以三羟甲基甘氨酸为辅助配体）以及体内分析。将人肺癌细胞株A549和H460接种于雌性裸鼠胸壁皮下，用于体内研究。结果^99 Tc^m标记文库显示，“显像剂”文库的质量较好。由于天冬酰胺-亮氨酸-亮氨酸-精-氨酸-亮氨酸-苏氨酸-甘氨酸多肽（NLLRLTG）对HSP70家族蛋白具有高度特异性，因此，采用^99 Tc^m-HYNIC—NLLRLTG为对照组。经筛选获得的15种阳性多肽化合物中，有8种^99 Tc^m化合物在体内肿瘤中的分布优于对照组，其中^99 Tc^m HYNIC-谷氨酰胺-甘氨酸-缬氨酸-亮氨酸-苏氨酸．甘氨酸-苏氨酸-精氨酸多肽（QGVLTGTR）在体内肿瘤中的分布最佳。活性肽NLLRLTG替代实验和肿瘤热疗研究表明，^99 Tc^m HYNIC—QGVLTGTR具有HSP70结合肽活性。结论^99 Tc^m标记HYNIC八肽化合物“显像剂”文库的设计可能为多肽显像剂的研制提供一种模式。     

^99Tc^m-精氨酸-谷氨酸-苏氨酸在荷人肺癌H1299裸鼠体内分布和显像

目的通过研究^99Tc^m-精氨酸-谷氨酸-苏氨酸（RET）在荷人肺癌H1299裸鼠体内的分布及显像,探讨其用于肺癌显像的可行性。方法采用^99Tc^m-直接法标记RET,再行^99Tc^m-RET与NSCLC细胞H1299的结合实验。荷人肺癌H1299裸鼠尾静脉注射^99Tc^m-RET后,行不同时间（15、30min,1、2．4、8、24、48h组各4只鼠）体内分布实验,分别测定组织放射性摄取（％ID／g）;另取荷瘤鼠3只,注射4．81MBq^99Tc^m-RET后于0．5、1、2、4．5、5、6h行γ显像。结果^99Tc^m-直接标记RET的标记率为（93．15±2．02）％,与H1299细胞的最高结合率为（3．56±0．37）％。荷瘤裸鼠尾静脉注射^99Tc^m-RET后4h肿瘤放射性摄取达（4．96±1．05）％ID／g,肝脏、脾脏有较多放射性摄取[（15．89±1．84）％ID／g和（10．83±1．66）％ID／g];而心脏和血液的放射性摄取较少,相应的T／NT分别为5．70±0．21和12．40±0．11。注射^99Tc^m-RET后4．5～6．0h肿瘤显影清晰。结论^99Tc^m-RET具有亲肺癌的特性,有可能成为一种亲肺癌显像剂。     

^99Tc^m标记人表皮生长因子受体2小分子靶向结合蛋白的制备及体外结合特性

目的探讨^99Tc^m标记人表皮生长因子受体2（HER2）小分子靶向结合蛋白ZHER2：342的制备方法,分析其在体外与HER2的结合特洼。方法利用配体交换法进行ZHER2：342的^99Tc^m标记,分析不同质量的SnCl2和NaOH、不同反应时间对标记率的影响,探讨最佳的标记方法。用HPLC测定标记物的标记率与放化纯,并分析其体外稳定性。分析标记物在体外与HER2高表达的人卵巢癌SKOV-3细胞的结合率及滞留率,并与HER2低表达的人乳腺癌MDA—MB-231细胞进行对比。在体外用过量未标记的ZHER2：342对SKOV-3细胞HER2进行封闭后,与未封闭组进行对比,研究该分子探针与HER2结合的特异性。采用单因素方差分析及两样本t检验分析数据。结果^99Tc^m标记ZHER2：342的最佳条件为：反应体系中依次加人ZHER2：342 5μg（1g／L）、NaOH 5μg（1g／L）、SnCl2 8．8μg（1g／L）、^99Tc^mO4^-1 150μl（37MBq）,轻微振荡后室温静置1h.^99Tc^m-ZHER2：342标记率为（98.10±1.73）％,放化纯〉98％;体外稳定性好,与生理盐水及新鲜人血清混合24h后放化纯均〉85％。在体外与HER2高表达的SKOV-3细胞具有较高的结合率,混合后6h最高,结合率为（995±1．02）％,且各时间点细胞结合率均明显高于HER2低表达的MDA—MB-231细胞（5．68～9．88与0．56～2．11;t=-34．50—-13．14,均P〈0．01）。此外,加入过量的未标记的ZHER2：342进行受体封闭时,^99Tc^m-ZHER2：342与SKOV-3细胞的结合率从（9．95±1．02）％降到（2．11±0．27）％（t=-13．14,P〈0．01）。结论^99Tc^m标记ZHER2：342方法简单,标记率高;标记产物体外稳定性好,在体外可与HER2高表达的人卵巢癌SKOV-3细胞特异性结合,是有潜力的HER2靶向分子影像探针。     

99Tcm标重组H-Annexin Ⅴ在动物血栓显像中的研究

目的 评价人膜联蛋白V（H—Annexin V）对血栓的亲和性，对^99Tc^m直接标记H—Annexin V与通过联肼尼克酰胺（HYNIC）螫合标记AnnexinV进行比较。方法 在3种不同的反应条件下，分别用^99Tc^m of直接标记AnnexinV、H—AnnexinV及HYNIC—AnnexinV，然后测定标记率、稳定性及对兔股动脉血栓模型进行γ显像，比较损伤侧（T，血栓）及对侧（NT）的放射性比值。结果 在还原剂足量的情况下，^99Tc^mO4^-直接标记H—Annexin V方法简便，反应条件易于控制，^99Tc^m-H—Annexin V标记率达95％以上，17h后测放化纯仍〉80％，血栓显像示动脉损伤处有明显的放射性浓聚，损伤处平均放射性计数为健侧放射性计数的3．714倍。结论 ^99Tc^m-H—AnnexinV与血栓具有很好的亲和力，标记率及稳定性高，标记方法较为简单。     

^99Tc^m—survivin mRNA反义肽核酸基因显像在肿瘤与炎性反应模型中的对比研究

目的研究^99Tc^m-survivin mRNA反义肽核酸（PNA）显像在肿瘤特异性诊断中的价值。方法用^99Tc^m标记人工合成的12碱基单链survivin mRNA反义PNA。20只荷瘤（A549）裸鼠按随机数字表法分为4组,每组5只。每只裸鼠经尾静脉注入^99Tc^m-survivin mRNA反义PNA,3组进行体内分布研究,其余进行显像研究。用同样方法对20只炎性反应（金黄色葡萄球菌）小鼠进行分组、体内分布和显像研究。采用SPSS13．0软件进行统计学分析,组间计量资料比较采用t检验。结果^99Tc^m-survivin mRNA反义PNA在肝内分布最高,其次是肾,注射后4h肿瘤组靶／非靶（T／NT）比值明显高于炎性反应组,分别为3．69±1．13,2．03±0．47,差异有统计学意义（t=3．01,P=0．02）。肿瘤组在注射药物后0．5h即可见肿瘤清晰显影,至4h时显影仍较清晰,而炎性反应部位始终未见明显显影。结论^99Tc^m-survivin mRNA反义PNA基因显像可通过其在肿瘤组织中的特异性浓聚区分肿瘤与炎性反应,为肿瘤的特异性诊断提供了一种可能的新方法。     

脂质体介导^99Tc^m-EGFR mRNA反义肽核酸在荷SKOV3卵巢癌裸鼠体内的分布及显像

目的 评价脂质体介导对^99Tc^m-表皮生长因子受体（EGFR） mRNA反义PNA体外靶细胞摄取、荷瘤裸鼠体内特异显像及生物学分布的影响.方法 利用碱基互补配对原则将带有短肽螯合功能的EGFRmRNA反义PNA与部分互补寡核苷酸杂交,再以配体交换法对反义探针进行^99Tc^m标记,然后以脂质体包裹反义探针,用HPLC法鉴定标记物的标记率.分析脂质体介导及非脂质体介导^99Tc^m-EGFR mRNA反义PNA在体外人卵巢癌SKOV3细胞中的摄取率及滞留率的差别,同时分析两者在荷SKOV3卵巢癌裸鼠模型体内生物学分布及显像情况的差异.数据分析采用两样本t检验（或t＇检验）及Wilcoxon秩和检验.结果 脂质体介导及非脂质体介导^99Tc^m-EGFR mRNA反义PNA6h内标记率均在95％以上.两者在注射后1、2、4、6、12及24 h后的细胞摄取率分别为（28.90±1.12）％、（32.76±1.20）％、（38.20±3.11）％、（41.23±1.60）％、（46.63±1.55）％和（46.78±2.14）％,（3.51±0.39）％、（3.90±0.40）％、（4.69±0.18）％、（5.91±0.26）％、（5.30±0.22）％和（5.39±0.17）％,差异有统计学意义（t＇=47.11～58.67,Z=2.80,均P＜0.05）,两者滞留率差异亦有统计学意义（t＇=7.25～11.55,Z=2.80,均P＜0.05）.注射两探针后1h荷瘤裸鼠肿瘤部位均可显像,但脂质体介导使肿瘤显像更为清楚,肿瘤摄取高峰T/NT由3.95上升至5.02,并明显增加注药后各时间点T/NT（t=3.96,t＇=12.65～ 14.69,Z=2.83～5.29,均P＜0.05）.分子探针主要分布在肿瘤、肾脏及肝脏组织中.肿瘤摄取量随时间逐渐增加,1h时非介导组为（1.49±0.09） ％ID/g,介导后为（2.15±0.21） ％ID/g;6 h时分别为（3.90±0.65） ％ID/g和（5.00±0.10） ％ID/g;脂质体介导后可增加注药后各个时间点的肿瘤/肌肉（t=11.24,t＇=3.96～ 11.94,均P＜0.05）.结论 脂质体介导可以明显促进^99Tc^m-EGFR mRNA反义PNA进入细胞,并提高对EGFR高表达肿瘤的显像效?     

99Tc m标记lncRNA HOTAIR反义寡核苷酸探针的制备及其对人脑胶质瘤U87细胞活性的影响

目的:制备新型的靶向长链非编码RNA （lncRNA）同源异型盒基因转录的反义基因间RNA (HOTAIR）的反义寡核苷酸（ASON）探针 99Tc m-HYNIC-ASON (HYNIC为联肼尼克酰胺）,探讨其对人脑胶质瘤U87细胞增殖和迁移能力的影响。 方法:设计并通过化学修饰合成...     

钆双胺对^99Tc^m—MDP骨显像影响的实验研究

目的探讨MRI对比剂钆双胺注射液（欧乃影;Gd—DTPA—BMA）应用后对家兔^99Tc^m-MDP骨显像的影响。方法采用自身前后对照方法,实验组（注射欧乃影＋^99Tc^m-MDP）与自身对照组（注射生理盐水＋^99Tc^m-MDP）处理相隔7d。（1）取家兔5只,注射欧乃影或生理盐水后30min注射^99Tc^m-MDP,并于注射^99Tc^m-MDP后5、10、30、60、120、180、240和360min、24h时行骨显像,勾画ROI,计算靶／本底（T／B）值,观察家兔显像剂分布及代谢情况。（2）取家兔30只,按欧乃影或生理盐水与^99Tc^m-MDP的注射间隔（30、60、120、240和360min、24h）分为6组,每组5只。均于注射^99Tc^m-MDP后120min行骨显像,勾画ROI,计算T／B值。（3）采用TLC测定2种药物相互作用后在体内的放化纯差异。以配对t检验进行统计分析。结果注射欧乃影后30min再注射^99Tc^m-MDP,5min时肝、脾开始显影,其T／B比值120min时达最高峰（肝、脾分别为4．56±0．32和3．56±0．41）;而2组椎体24h时T／B值均达最大值（实验组为4．32±0．07,自身对照组为6．31±0．09）,但各时间点实验组均较自身对照组低。两药物注射间隔为30、60、120和240min时,可出现肝、脾异常显影,对应的实验组T／B（肝：2．47～4．22;脾：1．85～3．23）明显高于自身对照组（肝：1．52—1．58;脾：1．25～1．29）,但实验组椎体的T／B（3．08～4．28）则较自身对照组低（4．82～4．85）,以上差异均有统计学意义（t=7．750—31．916,均P〈0．05）。余时间间隔组,肝、脾未见明显摄取^99Tc^m-MDP。TLC曲线示,实验组在Rf为0—0．2处形成小峰,^99Tc^m-MDP放化纯降为（63．51±2．24）％。结论注射欧乃影后短时间内行^99Tc^m-MDP骨显像,肝、脾会出现异常摄取;间隔360min再行^99Tc^m-MDP骨显像可避免此现象发生。     

单克隆抗体4E5的131I标记及131I-4E5对B细胞淋巴瘤细胞的杀伤效应

目的 研究CD80单克隆抗体4E5的131I标记及标记产物131I-4E5对B细胞淋巴瘤细胞的杀伤作用,为B细胞淋巴瘤的放射免疫导向治疗提供实验依据.方法 采用Iodogen法对4E5进行131I标记,以三氯醋酸法测定标记率和放化纯,并对131I-4E5的免疫活性及稳定性进行分析.以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察131I-4E5和4E5对B细胞淋巴瘤Raji细胞的杀伤效应.采用SPSS13.0软件对数据进行单因素方差分析和t检验.结果 131I-4E5的标记率为(78.3±2.4)％,放化纯为(95.7±1.8)％,比活度为0.58 MBq/μg,放射性浓度为3.90×1010 Bq/L.131I-4E5加入血清中放置3d后,放化纯仍＞90％.131I-4E5与Raji细胞的最大结合率为(36.06±2.63)％;131I-4E5对Raji细胞的杀伤作用呈剂量依赖性,高剂量组的细胞杀伤效应明显强于低剂量组:放射性浓度为1.48×1010、7.40×109、3.70×109、1.85×109和9.25×108 Bq/L时,细胞抑制率分别为(52.98±5.19)％、(46.29±2.80)％、(41.05±4.83)％、(33.68±3.79)％和(17.89±2.78)％,F=33.882,P＜0.001;4E5组(质量浓度为20.0、10.0、5.0、2.5和1.25 mg/L)的细胞抑制率分别为(32.98±3.99)％、(30.88±3.98)％、(27.14±2.05)％、(20.35±4.38)％和(8.42±1.05)％,131I-4E5组显著高于4E5组(t=5.290、5.489、4.596、3.986和5.515,P均＜0.05).结论 Iodogen法131I标记4E5标记率和放化纯高,标记物稳定性好;131I-4 E5可与Raji细胞特异性结合并发挥杀伤效应,为以B细胞淋巴瘤CD80为靶点的放射免疫显像及治疗提供了可能性.     

99Tcm-替曲膦在冠心病诊断中的应用

目的 探讨99Tcm-替曲膦(TF)在CHD诊断中的应用价值.方法 回顾性分析2009年10月至2011年4月疑诊CHD并行99Tcm-TF或99Tcm-MTBI腺苷负荷-静息MPI的患者各40例,比较2种放射性药物心肌显像的心肺摄取比(H/L).行99Tcm-TF显像的患者显像前后3个月内均行CAG,以冠状动脉狭窄≥50％为标准计算99Tcm-TF显像对CHD的诊断效能.对99Tcm-TF及99Tcm-MIBI H/L间差异行配对t检验,率的比较行x2检验.结果 99Tcm-TF心肌静息及负荷显像H/L分别为6.73±1.21及6.94±1.69,99Tcm-MIBI显像的相应值分别为6.58±1.94及6.64±1.81,2种显像方法H/L间差异无统计学意义(=0.41和0.78,P均＞0.05),99Tcm-TF心肌静息及负荷显像H/L差异亦无统计学意义(t=0.69,P＞0.05). 40例患者中99Tcm-TF显像阳性24例(60.0％),对应病变血管45支,其中LAD 20支,LCX 11支,RCA 14支.CAG阳性23例(57.5％,23/40),对应病变血管42支(LAD19支,LCX 12支,RCA 11支).99Tcm-TF负荷-静息MPI的灵敏度、特异性、准确性、阳性预测值及阴性预测值分别为87.0％(20/23)、76.5％(13/17)、82.5％(33/40)、83.3％(20/24)及81.2％(13/16).以病变血管计,99Tcm-TF MPI对LAD、LCX及RCA血管病变诊断的灵敏度分别为89.5％(17/19)、83.3％(10/12)及90.9％(10/11);阳性预测值分别为85.0％(17/20)、90.9％ (10/11)及71.4％(10/14).99Tcm-TF显像对不同血管病变的灵敏度和阳性预测值差异均无统计学意义(x2=0.377和1.789,P均＞0.05).结论 从H/L可知,99Tcm-TF显像图像质量与99Tcm-MIBI显像接近;99Tcm-TF负荷-静息MPI是诊断CHD的可靠方法.     

^99Tc^m-TP5-3 microSPECT/CT探测乳腺癌化疗后细胞凋亡的实验研究

目的 合成新型凋亡显像剂^99Tc^m-半胱氨酸-膜联蛋白V（TP5-3）,研究其在小鼠体内生物分布和药代动力学特点,探讨^99Tc^m-TP5-3 microSPECT/CT检测乳腺癌单次化疗后肿瘤早期细胞凋亡的可行性.方法 以直接还原法对TP5-3进行^99Tc^m标记,HPLC检测产物的标记率;进行正常小鼠体内^99Tc^m-TP5-3的生物分布及药代动力学研究.建立荷MDA-MB-231人乳腺癌裸鼠模型,取10只分为2组,化疗组单次腹腔内注射紫杉醇（每只40 mg/kg）,对照组注射等体积生理盐水,48 h后由尾静脉注射37 MBq ^99Tc^m-TP5-3,进行microSPECT/CT图像采集,显像后立即处死、取材,比较2组肿瘤的放射性摄取（％ID/g）、T/NT（NT取肌肉）;采用流式细胞术和病理学检测肿瘤凋亡细胞.采用单因素方差分析、两样本t检验和直线相关分析数据.结果^99Tc^m-TP5-3标记率＞95％,室温放置4h放化纯仍保持在（96.0±1.5）％,稳定性好.正常小鼠注射显像剂后30 min肾脏放射性摄取最高[（8.48±1.07） ％ID/g],其他脏器分布较少;血液清除快,注射后4h血液放射性摄取[（2.07±0.35） ％ID/g]较注射后5 min[（13.74±4.21） ％ID/g]减少了85％（F=11.310,P＜0.05）;显像剂主要浓聚于肾、肝和胃,经肾脏排泄.化疗后99^Tc^m-TP5-3 microSPECT/CT显像示化疗组T/NT为4.21±0.06,对照组T/NT仅1.57±0.67（f=12.820,P＜0.05）;化疗后生物分布实验示,化疗组肿瘤放射性摄取明显高于对照组,分别为（4.82±0.54） ％ID/g和（1.44±0.38） ％ID/g（t=0.679,P＜0.05）.肿瘤放射性摄取与流式细胞仪测定的凋亡细胞百分比呈正相关（r=0.985,P＜0.05）.HE染色示化疗后肿瘤组织有大量凋亡细胞,而对照组仅有少量.结论 ^99Tc^m-TP5-3标记方法简单,生物分布理想,具备优良的药代动力学特性;^99Tc^m-TP5-3 microSPECT/CT可用于早期检测荷乳腺癌裸鼠模型化疗后的肿瘤细胞凋亡水平.     

BALB/c小鼠格雷夫斯病模型的构建

目的 通过免疫电穿孔的方法,构建稳定的BALB/c小鼠（简称小鼠）格雷夫斯病（GD）模型.方法 制备重组质粒pcDNA3.1/TSHR268.将50只小鼠按随机数字表法分为实验组（30只）、对照组（10只）和空白组（10只）.分别于实验第1、4、7、10周在实验组小鼠双后肢腓肠肌注射重组质粒,在对照组及空白组小鼠相同位置注射相同体积生理盐水;实验组及对照组小鼠每次注射后在注射区域行电穿孔加强免疫.以放射免疫法检测小鼠血清T4,ELISA法检测小鼠TRAb氨基端（TRAb N）抗体和TRAb羧基端（TRAb C）抗体.对模型小鼠进行甲状腺^99Tc^mO4^-显像及甲状腺形态学、病理学分析.多组间均数比较采用单因素方差分析及最小显著差异t检验.结果 实验组建模成功率为80％（24/30）.24只成功建模的BALB/c小鼠血清T4由第0周的（16.06±5.16） nmol/L升高至第12周的（95.04±68.92） nmol/L（F=18.906,t=-5.598,P＜0.05）,TRAb N抗体由第0周的（0.006±0.002） U/L升高至第12周的（0.251±0.110） U/L（F=47.491,t =-10.869,P＜0.05）,TRAbC抗体由第0周的（11.176±2.635） ×10^3任意单位（AU）/L升高至第12周的（46.395±22.001）×10^3 AU/L（F=14.642,t=-7.787,P＜0.05）.停止免疫后的第18周,小鼠血清T4为（36.64±23.68） nmoL/L、TRAb N抗体为（0.094±0.053） U/L、TRAb C抗体为（24.456±6.725）×10^3 AU/L,均有所下降,但仍明显高于免疫前水平（t=-4.161、-8.085和-9.008,均P＜0.05）.对照组与空白组小鼠T4、TRAb N抗体及TRAb C抗体在免疫前后均未见明显变化.经过4次免疫,实验组小鼠甲状腺对^99Tc^mO4^-的摄取能力较对照组及空白组明显增强.GD模型小鼠甲状腺较正常BALB/c小鼠体积增大,病理学检查可见甲状腺组织淋巴细胞浸润.结论 重组质粒pcDNA3.1/TSHR268＋免疫电穿孔方法可成功构建BALB/c小鼠GD模型.     

转染B7-H3基因对前列腺癌细胞摄取^18F—FDG和^18F—FLT的影响

目的研究转染B7同系物3（B7-H3）基因对前列腺癌细胞摄取^18F—FDG和^18F-FLT的影响,并探讨抗B7-H3单克隆抗体（简称单抗）对前列腺癌细胞的作用。方法用细胞计数试剂盒（CCK）-8检测鼠源性前列腺癌RM1细胞和转染B7-H3基因RM1的同种细胞（RM1-B7-H3）培养后0．5、1、2、3、4和5d的吸光度（A）值,并用流式细胞仪测定2种细胞的生长周期。在不同糖浓度（0、5．5和11．0mmol／L）、不同细胞数（每孔5×10^4～5×10^6）、不同摄取时间（20～120min）的条件下,测定2种细胞的^18F—FDG摄取率;并在细胞数为1×10^6、反应时间为100min的条件下行^18F-FLT细胞摄取实验。最后测定给予抗B7-H3单抗4H7后RM1-B7-H3细胞的^18F—FDG细胞摄取率。数据比较行单因素方差分析和两样本t检验。结果RM1-B7-H3细胞培养1、2和3d时的A值分别为1．59±0．23、2．26±0．15和2．01±0．60,较RM1细胞（1．22±0．14、1．10±0．09和1．04±0．15）高（t=3．923、19．228和4．467,均P〈0．01）;其他时间点2组间差异无统计学意义（t=-0．094、0．858、2．000,均P〉0．05）。RM1-B7-H3细胞的G1、S、G2／M期比例分别为（32．96±2．56）％、（39．11±2．57）％和（27．94±0．21）％,S期比例较RM1细胞（32．76±1．90）％高（t=3．442,P〈0．05）。2种细胞^18F—FDG摄取率均随培养基糖浓度的增加而降低,随细胞数和摄取时间的增加而升高。在1．0×10^6细胞、摄取100min时,RM1-B7-H3和RM1细胞的^18F—FDG摄取率分别为（55．07±3．99）％和（44．16±3．60）％,^18F—FLT摄取率分别为（5．25±0．81）％和（3．33±0．64）％,差异均有统计学意义（t=4．977和4．567,均P〈0．01）。给予4H7单抗后RM1-B7。H3细胞的^18F—FDG细胞摄取率为（45．36±2．92）％,较未加单抗组^18F—FDG细胞摄取率低（F=10．001,P〈0．01）。结论转染B7-H3基因能增强前列腺癌细胞的代谢和增殖活性,并提高细胞对^18F—FDG和^18F-FLT的摄取;给予抗B7-H3单抗4H7后,RM1-B7-H3细胞的^18F—FDG细胞摄取率降低。