O139群霍乱弧菌在不同水和温度下的存活时间及变异的观察

[目的]探讨O139群霍乱弧菌（VC）在不同水体，不同温度的存活时间及其变异情况。[方法]采集不同水样，选用2个O139VC菌株分别制成模拟标本，放置于不同温度定期观察。[结果]O139VC在4种不同自然水体的存活时间不长，除低温冰冻外，均少于15d，多在1周内转阴；但同样4种水体经高压灭菌后存活期活期长短不一，存活3-287d并与不同水体，置不同温度有关；此外，O139VC在模拟水中生存较长时间后，其菌落特征。菌体形态及其部分生物学特性均会发生变化，直至自发变异成L型菌而延长存活时间。[结论]O139VC在不同水体，置不同温度时的存活时间不同，且可发生各种各样变异，包括自发变异为L型菌。     

O139群霍乱弧菌L型诱导实验观察

目的：探讨O139群霍乱菌的L型变异。方法：采用抗生素,胆盐和蒸馏水实验室诱导方法进行观察,结果：发现O139群霍乱弧菌MO45菌株经上述3法诱导可发生L型变异,其菌落特征和菌体形态均与L型的描述相符,结论：实验结果证实O139群霍乱弧菌可诱导成L,其变异过程与ElTor弧菌相似,检测自然界中亦存在O139群霍乱弧菌的L型。     

O1/O139群霍乱弧菌检出率与珠江河口水体理化因素的相关性研究

目的:探讨珠江水中O1/O139群霍乱弧菌检出率与珠江水体中理化因素之间的相关性,为霍乱的防控工作提供参考。方法:2010年每月在珠江河沿岸24个采样点采集珠江河口水体,参照卫生部疾病控制司1999年版《霍乱防治手册》进行霍乱弧菌的分离培养和菌型鉴定,用7500a电感耦合等离子体质谱仪进行水样各离子浓度的检测。结果:共采集水样576份,检出51株O1/O139群霍乱弧菌,检出率为8.85%。夏天检出O1/O139群霍乱弧菌数占30%以上。Al、Mn及Ni与O1/O139群霍乱弧菌检出率之间有一定的线性关系。市内、外珠江水中Mg2+、K+、Ca2+、Mn2+、Ni2+、Se4+、Sb3+含量和PH值存在显著或极显著差异。结论:珠江河口水中检出O1/O139群霍乱弧菌与珠江河口水体理化因素Al、Mn及Ni有一定相关性。     

海宁市霍乱病原学调查检测

目的:为了查清我市水体等外环境及患者中霍乱弧菌的菌型分布特征、毒力基因、药敏等,为霍乱防控提供科学依据。方法:采用GB15984-1995附录A、C及《霍乱防治手册》第五版中有关要求进行调查检测。结果:从外环境标本和患者中共检出霍乱弧菌83株,经血清学鉴定分型,其中:O1群埃尔托霍乱弧菌(Vibriocholerae serotypeO1,b iotype E ltor,EVC)稻叶型38株,占45.78%,O1群EVC小川型16株,占19.28%,O139群霍乱弧菌29株,占34.94%。23株霍乱弧菌噬菌体生物分型以O1群EVC稻叶型1 f居多,占86.96%(20/23);14株霍乱弧菌毒力基因检测结果均为阳性(携带ctx,ace,zot 3种毒力基因);药敏试验O1群、O139群霍乱弧菌对抗菌药物均有不同程度的耐药,其中对磺胺的耐药率高达100%;对头孢噻肟、诺氟沙星、丁胺卡那霉素敏感率高达100%。结论:河水中菌型复杂,O139群、小川、稻叶三型并存,但以O139群为主,占48.94%;井水中检出4株埃尔托霍乱弧菌均为稻叶型;甲鱼塘水中O139群与O1群小川型并存;患者中以O1群EVC稻叶型为主,占88.24%(15/17)。经噬菌体生物分型,以不常见流行株为主,毒力基因检测均为产毒株。     

O139群霍乱弧菌L型变异和诱导实验的观察及致病性的探讨

[目的]探讨O139群霍乱弧菌L型变异及其与ElTor型的R型血清的关系。[方法]2002～2005年,我们采用酚肉汤传代、抗生素、胆盐和蒸馏水等实验室诱导方法进行观察。[结果]发现O139群霍乱弧菌6菌株经上述方法诱导可发生L型变异,其菌落特征和菌体形态均与L型的描述相符。[结论]实验结果证实O139群霍乱弧菌可诱导成L型,通过与O1群的R型血清凝集状况,表明其L型菌株未见到抗原的完全消失,其变异过程与ElTor弧菌相似,关系密切,推测自然界中亦存在O139群霍乱弧菌L型,且仍具有致病性。     

海宁市霍乱弧菌生物学特性、毒力基因特征分析

目的:为了解海宁市霍乱弧菌菌型分布、生物学特征、毒力基因和对抗菌药物敏感性,从而为霍乱防控提供科学有效的技术保障。方法:从2005年10月-2008年10月持续3年,采集水体、食物、水产品、熟食、厕所、腹泻病人、密切接触者粪便检测霍乱弧菌,并进行血清学分型、噬菌体生物分型,毒力基因鉴定及对抗菌药物敏感性分析;对霍乱弧菌阳性水体测定水温、pH值、耗氧量、氯化物。结果:3年中共采集各类样品2680份。检出霍乱弧菌104株,检出率4.03%。经血清学分型:O1群埃尔托霍乱弧菌稻叶型38株,占36.54%,小川型16株,占15.38%,O139群霍乱弧菌50株,占48.08%。23株霍乱弧菌噬菌体生物分型:稻叶型1f占86.96%(20/23)。14株霍乱弧菌毒力基因检测均为阳性(携带ctx,ace,zot3种毒力基因)。药敏试验:对磺胺类耐药;对头孢噻肟、诺氟沙星、丁胺卡那霉素敏感。首次发现同一水体中O139群、小川型、稻叶型共存(O139群占64.71%、小川型占22.06%、稻叶型占13.24%)。在对阳性水体检测中发现,水温6℃以下、pH值6.6左右、氯化物49.7 mg/L、耗氧量16.4 mg/L状态下仍检测到O139群和小川型霍乱弧菌。结论:海宁市霍乱弧菌菌型复杂,O139群、小川型、稻叶型共存,均为产毒株,对头孢噻肟、诺氟沙星、丁胺卡那霉素敏感。O139群、小川型霍乱弧菌能在水温低、氯化物含量低、耗氧量较高环境下存活。     

某地区O139霍乱弧菌的分离鉴定及分析

弧菌属细菌是一大群菌体短小，弯曲或弧状的革兰氏阴性菌，广泛分布于自然界，以水中最多，本菌属共有100多种，大多数菌为非病原菌，其中的O139霍乱弧菌含有O139群霍乱弧菌相同的毒素基因，亦可引起霍乱流行，已归入霍乱管理。2002年8月从一例临床腹泻病人粪便中检出一株O139霍乱弧菌，现将结果报告如下。     

锡山市首次O139霍乱暴发的调查和病原学鉴定报告

目的 调查锡山市埝桥镇丁塔村暴发一起因庆宴引起的食源性疾患的病原：观察所查出的O139霍乱弧菌在外环境中的存活时间。方法 采用流行病学调查和采集可疑样品作病原菌分离鉴定。并将检出的O139霍乱弧菌接种于不同水体，在不同温度条件下观察其存活时间。结果 在三份病人粪便标本中检出O139霍乱弧菌；分离所得的O139霍乱弧菌在河水、浅井水、自来水、纯净水中于4℃－36℃温度范围内均能存活30天以上，存活的细菌数随着时间的延长、温度的升高而减少。结论 引起本起食源性疾病暴发的病原为O139霍乱弧菌；O139霍乱弧菌于4℃－36℃条件下，在地面水、自来水、纯净水中可存活30天以上，加强食品卫生和饮用水的卫生管理工作对控制O139霍乱的传播或暴发是非常必要。     

2003～2007年厦门市海沧区外环境中霍乱弧菌监测结果分析

[目的]了解水体和水产品霍乱弧菌污染情况。[方法]2003～2007年,厦门市海沧区5～10月采集水产品和水体,检测O1群霍乱弧菌和O139群霍乱弧菌。[结果]5年合计,从922份水体中检出3株霍乱弧菌,从1040份水产品中检出6株霍乱弧菌。9株霍乱弧菌均为O1群,其中小川型4株、稻叶型5株,均为霍乱弧菌肠毒素CT阴性的无毒株。[结论]厦门市海沧区外环境中的霍乱弧菌主要是O1群非流行株。     

112株霍乱弧菌的生物学特性、毒力基因和耐药变迁的研究

目的：了解浙江温岭霍乱弧菌的生物学特性、毒力基因和耐药情况,为霍乱防治提供科学依据.方法：以霍乱弧菌主要毒力因子基因ctx为引物,对112株霍乱弧菌（O1群92株、O139群20株）进行了PCR扩增.采用WHO推荐的改良K-B纸片法,对所有菌株进行了18种抗菌药物的药敏试验.结果：除外环境检出的4株O1群霍乱弧菌菌株外,其余的霍乱菌株均扩增出与阳性对照一致的ctx毒力基因条带.药敏试验结果显示O139群霍乱弧菌的耐药性明显高于O1群霍乱弧菌,不同年份的菌株耐药的程度不一致.结论：从所有病人中分离到的菌株均为产毒株,与致病性和流行强度有关,治疗霍乱病人应结合本地区情况,根据不同菌型选择相应的抗生素药物.     

2005年-2010年武汉市霍乱弧菌监测分析

目的:对2005年-2010年霍乱弧菌监测中分离的25株疑似菌株进行系统鉴定。方法:分离培养、血清学试验、系统生化鉴定(VITEK32)、PCR检测其分型及毒素基因、药敏试验。结果:25株菌鉴定为霍乱弧菌的有21株,与霍乱弧菌发生交叉凝集4株;病例监测主要为O139霍乱弧菌、外环境监测主要为O1群霍乱弧菌;病例监测菌株携带霍乱弧菌毒素基因(ctxAB)、其他菌株均不携带霍乱弧菌毒素基因(ctxAB)。药敏实验结果对诺氟沙星和环丙沙星敏感,对其他抗生素有不同程度的耐药。结论:武汉市霍乱弧菌在病例监测中主要为O139群霍乱弧菌产毒株、外环境监测中主要为O1群霍乱弧菌非产毒株,不同型别菌株存在不同程度耐药性。     

O139群霍乱弧菌16S rRNA基因分型分析

[目的]研究北京市O139群霍乱弧菌的分子生物学特征。[方法]对北京市1998～2000年的30株O139群霍乱弧菌进行PCR霍乱肠毒素（CT）基因检测,以16SrRNA为探针对菌株DNA进行Southern杂交后对图谱进行核糖体基因（RT）分型分析。[结果]对30株霍乱弧菌RT图谱进行分析,共存在5种16SrRNA核糖体基因型,其中CT阳性的O139群霍乱弧菌为RT1型,CT阴性的O139群霍乱弧菌为RT2-RT5型。[结论]北京市不同年份的O139群霍乱弧菌CT阳性菌株核糖体基因型较为单一,CT阴性菌株基因型具有明显的多样性。提示北京市O139群霍乱弧菌CT阳性菌株和CT阴性菌株遗传发生上相距较远。     

江苏省1999—2005年霍乱弧菌的脉冲场凝胶电泳分析

目的了解江苏省1999-2005年间分离的霍乱弧菌核酸特征,及O139群与O1群霍乱弧菌在基因组水平上的关联。方法 NotⅠ酶切霍乱弧菌基因组,脉冲场凝胶电泳(PFGE)得到指纹图谱,并进行比较分析。结果 PFGE指纹图谱将全部136株霍乱弧菌分为6类,PFGE-A型由1株临床来源El Tor、120株临床来源和9株环境来源的O139组成,PFGE-B型由1株临床来源的El Tor组成,PFGE-C型由1株临床来源的El Tor和1株临床来源的O139组成,PFGE-D型由1株环境来源的El Tor组成,PFGE-E型由1株环境来源的O139组成,PFGE-F型由1株临床来源的O139组成。结论PFGE指纹图谱提示O139起源于不同克隆的El Tor霍乱弧菌,为了解O139的进化路线和流行规律提供了有效证据。作为高分辨率的基因分型工具,PFGE可用于追踪霍乱弧菌的暴发流行传染源,并在其分子流行病学研究中发挥重要作用。     

消毒剂对不同水体中E1 Tor霍乱弧菌杀灭作用的实验观察

目的 研究消毒剂不同水体中El Tor霍乱弧菌的杀灭作用,为霍乱疫源地的消毒提供指导。方法 用细菌悬液定量杀灭实验测定消洁粉 、固体碘伏、二氧化氯和戊二醛4种消毒剂分别对生活污水、医院污水、沟水、河水和海水5种不同水体中El Tor霍乱弧菌的杀灭效果。结果 对5种水体中的埃尔托生物型霍乱弧菌定量杀菌5min,其杀功菌率结达到100％,消洁粉,碘伏,ClO2及戊二醛的浓度分别为25．0－250．0mg/L,100.0-250.0mg/L,10.0-25.0mg/L及100-500mg/L。结论 不同消毒剂杀灭水体中埃尔托生物型霍乱弧菌的能力有差别。同种消毒剂对5种水体中的霍乱弧菌的杀灭作用亦有差别,污水比天然水体所需消毒剂浓度相应提高。     

温州口岸外环境水体中致病性弧菌的监测

〔目的〕了解温州口岸外环境水体中致病性弧菌的分布情况,为预测霍乱疫情以及制定防治策略和措施提供科学依据。〔方法〕收集口岸内有代表性的外环境水样(包括淡水、沿海水域、下水道排放口和集中式供水网点),进行弧菌科的分离鉴定,并对调查资料进行统计分析。〔结果〕(1)96份样品中55份检出了弧菌科,总检出率为57.3%。检出弧菌共分2属7种85株,其中弧菌属68株(80%);气单胞菌属17株(20%);优势菌为溶藻弧菌、河流弧菌和创伤弧菌。(2)4类外环境水样中弧菌检出率由高到低顺序为:淡水、海域水、下水道排放口、集中式供水网点,其中集中式供水网点无致病性弧菌检出。淡水、海域水、下水道排放口3类水的检出率和构成比之间差异无显著性(P检出率=0.37,P构成比=0.99);(3)6个月中,共检出2株非O1、非O139群霍乱弧菌。〔结论〕在温州口岸外环境水体中未检出所监测的O1群O139群霍乱弧菌,但检出了非O1/非O139群霍乱弧菌。     

Taq-Man实时荧光定量PCR同时检测O1和O139群霍乱弧菌

目的针对霍乱弧菌血清群各自编码O抗原的特异性基因建立能够快速、准确地同时检测O1和O139群霍乱弧菌的荧光PCR检测方法,并克服常用PCR检测方法中经常出现的假阳性现象。方法分别以rfbM和wbfR基因作为O1和O139群霍乱弧菌的模板设计引物和探针,通过优化反应条件建立了能够同时检测O1群和O139群霍乱弧菌的二联实时荧光定量PCR方法(FQ-PCR)。对该方法的特异性、灵敏度进行评估,并对10份模拟食品样品和133份临床样品进行了检测。结果特异性试验表明,该方法能选择性检测O1和O139群霍乱弧菌,能有效地避免O141群霍乱弧菌和拟态弧菌的假阳性,特异性为100%;灵敏度试验表明,O1群霍乱弧菌和O139群霍乱弧菌检出限分别为92cfu/ml和116cfu/ml;另外,试验建立的检测方法对模拟样品和临床样品检测结果与国标法的检测结果完全一致,符合率为100%。结论该实时荧光PCR检测方法能够同时检测O1和O139群霍乱弧菌,而且特异性好、灵敏度高,能有效克服假阳性,适用于基层疾病控制、口岸检疫单位日常疫情监测和临床诊断。     

实时荧光PCR法、胶体金法和培养法检测甲鱼中霍乱弧菌

目的优化水产品甲鱼中霍乱弧菌的检测程序,提高甲鱼中霍乱弧菌检出率。方法用实时荧光PCR、常规细菌培养、胶体金法同时对甲鱼中霍乱弧菌进行检测,并用实时荧光PCR法检测标本中霍乱弧菌ctx基因。结果共检测185份甲鱼样品,其中实时荧光PCR法检出28份霍乱弧菌核酸阳性,阳性率为15.14%;6份ctx基因核酸阳性,阳性率21.43%(6/28)。常规细菌培养法分离出2株菌株,一株为O139群霍乱弧菌,一株为小川型霍乱弧菌,用实时荧光PCR检测这两株纯培养菌株或原始标本,霍乱弧菌ctx基因均为阴性;胶体金法未检出阳性标本。结论对于水产品标本,可先用实时荧光PCR法筛检霍乱弧菌,阳性标本再进行传统细菌分离培养,以提高霍乱弧菌菌株的检出率;同时阳性标本进行霍乱弧菌ctx基因核酸检测,如也为阳性,需提高警惕,加强流行病学上的预防控制措施,及时防范霍乱疫情的发生。     

The prevalence of Vibrio spp. in drinking water and environmental samples in Vellore South India.

The prevalence of Vibrio cholerae in drinking water, lakes and sewage outfalls during July and August 1996 in Vellore, India was determined. Drinking water samples were collected on single occasions from 12 sites in different geographic areas of the town where cholera had been reported. Samples of water, plankton and sediment were collected from fixed sites at three lakes on three occasions separated by at least 3 days during the course of the study. Samples from open sewers were taken from two representative sites in four areas of the town. Bacteria isolated from samples were identified by standard biochemical tests and isolated strains of V. cholerae tested for their ability to agglutinate O1 and O139 antisera. Water samples from lakes were also tested for the presence of V. cholerae O1 and O139 by fluorescent antibody staining. Non-O1, non-O139 strains of V. cholerae were detected in 41% of drinking water samples and 100% of water, sediment and plankton samples from the test lakes. Eighty-seven per cent of open sewers sampled contained viable non-O1, non-O139 V. cholerae. Fluorescent antibody staining gave positive results for V. cholerae O1 and O139 for all water samples from the three lake sites. Strains of Aeromonas spp. were isolated from 58% of drinking water samples and from 66% of sediment, 77% of plankton and 55% of water samples from lakes. All open sewers sampled contained Aeromonas spp. PCR amplification employing specific primers demonstrated that none of the non-agglutinating V. cholerae isolates contained the ctx operon. The non-O1, non-O139 V. cholerae isolates showed different patterns of antibiotic resistance to ampicillin, ciprofloxacin, chloramphenicol, tetracycline and trimethoprim.