三氯乙烯对人原代角质形成细胞的细胞毒作用

目的研究体外培养条件下有机溶剂三氯乙烯(Trichloroethylene,TCE)对正常人表皮角质形成细胞(normal human epidermal keratinocyte,NHEK)的毒性作用。方法用0.25%的胰蛋白酶经冷温两步消化皮肤,分离得到NHEK,进行体外无血清培养;根据中性红吸附试验测定的NR50结果,确定TCE染毒剂量。测定乳酸脱氢酶(LDH)活力,反映其对细胞膜的损害,测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力,反映细胞脂质过氧化作用。结果TCE可引起NHEK细胞活力剂量依赖性降低,TCE对NHEK的NR50值为4.525 mmol/L(3.922~5.128 mmol/L);NHEK细胞用0.125,0.250,0.500,1.000,2.000 mmol/L的TCE处理1,2,3,4 h后,LDH的释放显示明显的时间-剂量-反应关系;同样剂量的TCE处理NHEK,4 h后可引起MDA含量呈浓度依赖性增加(最低浓度为0.500 mmol/L),SOD活力呈浓度依赖性抑制(最低浓度为0.250 mmol/L),与空白对照和溶剂对照组相比较,两者差异均有显著性(P<0.05)。结论在体外培养条件下,有机溶剂三氯乙烯可通过脂质过氧化和氧化应激作用对人角质形成细胞产生明显的细胞毒作用。     

细胞毒T细胞在病毒性肝炎发病机理中作用的若干研究进展

细胞毒T细胞(CTL)在抗乙型、丙型肝炎病毒感染中起着重要作用。尽管体内外实验均证实对HBV和HCV的多种抗原都存在不同程度的CTL反应,但是HBV和HCV仍能持续感染,原因尚不清楚。本文对CTL杀伤靶细胞的作用机理,CTL在HBV、HCV感染中的作用以及肝炎病毒逃避CTL的可能机理的研究进展予以综述。     

噪声对雄性大鼠NK细胞活性及血锌的影响

ＮＫ细胞是一类在肿瘤早期起作用的效应细胞 ,是机体抗肿瘤、抗病毒的第一道防线。但国内至今未见有关噪声对ＮＫ细胞活性影响的研究报道。为此 ,我们观察了噪声暴露不同时间ＮＫ细胞活性及与免疫关系密切的血锌的变化规律。一、材料与方法1 动物与分组 :选用健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 2 4只 (由中国辐射防护研究院提供 ) ,体重 (2 0 0± 10 ) ｇ。采用配伍组设计方法 ,将动物按体重随机分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ 4组 ,每组 6只。Ａ组为对照组 ,Ｂ、Ｃ、Ｄ组为实验组。2 噪声暴露 :以ＭＬ 16 6 1型白噪声信号发生器作为声源 ,经ＮＤ2 型精密声级…     

植酸对大鼠结直肠癌形成的抑制作用与NK细胞变化关系的探讨

目的:探讨植酸在预防结直肠癌中的作用。方法:将4w龄健康Wistar鼠分为对照组(基础饲料喂养,自由饮水),植酸组(基础饲料,自由饮用2 %植酸钠水溶液),每组15只。两组同时皮下注射二甲肼(1,2-dimethylhydrazine,DMH),剂量为20 mg/kg bw,注射20 w后处死。取出整段大肠观察测量肿瘤的数量、体积大小及形态,同时测量血中NK细胞的活性(LDH释放法)。结果:植酸组大鼠结直肠癌发生率、肿瘤的数量、体积均小于对照组(P<0.05),其血中NK细胞的活性高于对照组(P<0.01)。结论:在二甲肼诱发的大鼠结直肠癌中,植酸可通过提高NK细胞活性来抑制结直肠癌的发生。     

乳腺癌患者外周血T细胞亚群与NK、NKT细胞检测的临床意义

目的:检测乳腺癌患者外周血T淋巴细胞亚群及NK、NKT细胞表达率的变化,探讨乳腺癌患者免疫状况与肿瘤分期的关系以及免疫指标变化在治疗前后的临床价值。方法 :采用荧光标记法与多参数流式细胞仪检测40例正常女性和120例乳腺癌患者的总T淋巴细胞(CD3+)、T辅助/T诱导细胞(CD3+CD4+)、T抑制/细胞毒细胞(CD3+CD8+)、自然杀伤细胞(NK)、NK样T细胞(NKT)的表达率,并进行统计学分析。结果:无淋巴结转移组乳腺癌患者治疗前CD3+、CD3+CD4、CD3+CD8+、CD4+/CD8+与对照组比较无统计学意义,NK、NKT显著低于对照组(P<0.05)。淋巴结转移组乳腺癌患者CD3+、CD3+CD4、CD3+CD8+、NK、NKT表达率均明显低于对照组(P<0.05)。经过综合治疗后乳腺癌组各项免疫指标均恢复到正常值。结论:外周血T细胞亚群的检测对判断乳腺癌患者的病情、临床分期有一定意义;经过治疗后能够有效地改善乳腺癌患者的免疫状态。     

C反应蛋白检测在胸腹水性质鉴定中的作用

胸腹腔积液疾病的鉴别诊断是临床长期重视的问题 ,我们对本院 86例胸腹腔积液患者采集胸腹水 ,进行Ｃ反应蛋白ＣＲＰ检测 ,以探讨胸腹水ＣＲＰ水平与其性质的关系。对象与方法1　对象　 86例胸腹水病例均为本院 2 0 0 0～ 2 0 0 2年期间的住院患者 ,年龄 2 9～ 86岁 ,其中胸水 5 1例 ,腹水 35例。按疾病分为 :(1)恶性肿瘤组 2 4例 ,全部病例经ＣＴ和 /或Ｂ超以及脱落细胞等检查已被临床确诊 ;(2 )炎症组 4 7例 ,均经影像和实验室检查由临床确诊 ;(3)漏出液组 15例 ,其中肝硬化 10例 ,心力衰竭 2例 ,肾病低蛋白血症 1例 ,重度贫血 2例 ,均已…     

肺炎克雷伯菌中质粒介导AmpC酶的检测

目的 建立检测肠杆菌科细菌中质粒介导AmpC酶的方法并了解其酶型.方法 用K-B法检测15株对头孢西丁不敏感肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物的敏感性,采用双纸片确证法检测其中质粒介导的AmpC酶,并用三维试验与质粒介导的AmpC酶酶量直接测定法进行对比,同时检测这些菌产ESBLs的情况,用多重PCR方法检测AmpC酶型.结果 15株菌对亚胺培南的敏感率为93.3%,对其他抗菌药物的敏感率均<40.0%;双纸片确证法检测山8株质粒介导的AmpC酶,占53.3%,且不受ESBLs的干扰,与直接酶量检测法完全一致,敏感性高于三维试验;8株菌酶型测定均DHA-1型AmpC酶.结论 双纸片确证法可作为临床检测质粒介导的AmpC酶的方法,湖北地区的质粒AmpC酶以DHA-1型为主.     

大鼠实验性矽肺早期生长反应基因表达及其作用的初步探讨

目的　探讨核转录因子早期生长反应基因 (Egr 1)在矽肺发生发展中的作用。方法　建立大鼠矽肺模型 ,用免疫组化SP法结合图像分析技术观察了大鼠矽肺组织中各种细胞表达Egr 1、转化生长因子 β1(TGF β1)和纤维黏连蛋白 (FN)的动态变化及相互关系。结果　大鼠矽肺组织中肺巨噬细胞、肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞、间质细胞的Egr 1表达 (灰度值范围 118.58± 5.65～ 168.52± 5.67)比对照组 (灰度值范围 166.2 3± 5.2 3～ 188.12± 8.3 5)均明显增强 ,且主要定位于胞核 ;这 4种细胞表达TGF β1(灰度值范围 12 3 .49± 5.65～ 170 .2 4± 3 .56)比对照组 (灰度值范围 166.53± 6.2 5～ 198.56± 4.53 )也明显增强 ,且定位于胞浆。在大鼠支气管上皮细胞、肺巨噬细胞、肺泡上皮细胞中FN表达较弱 (灰度值范围150 .3 2± 6.54～ 2 0 1.54± 7.3 8) ,但间质细胞中呈高表达 (灰度值范围 12 1.43± 5.65～ 167.55± 6.3 5)。实验第 1～ 2 8天 ,TGF β1和Egr 1在大鼠支气管上皮细胞、肺巨噬细胞、肺泡上皮细胞和间质细胞表达变化基本同步 ,二者呈正相关 (r =0 .61,P <0 .0 1) ;而FN在上述细胞中表达和Egr 1未见相关性 ;FN与TGF β1在间质细胞中表达呈正相关 (r=0 .46,P <0 .0 1)。结论　SiO2 可上调肺内多种细胞E     

脂多糖介导天然免疫反应引起细胞滋养细胞凋亡

目的探讨脂多糖介导的天然免疫反应对细胞滋养细胞凋亡的调节作用及其机制。方法分离细胞滋养细胞,并给予不同浓度的脂多糖10μl,用光镜、Hoechst DNA染色和透射电镜观察细胞滋养细胞标志凋亡的形态学改变,AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞滋养细胞的凋亡指数,western blot检测半胱氨酸蛋白酶-3的表达,激光共聚焦显微镜检测细胞浆内肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)的表达,酶联免疫吸附实验检测培养基中TNF-α的表达。结果经脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)处理后,细胞滋养细胞的凋亡指数明显增加(P<0.01),并出现典型的凋亡形态学改变。western blot检测结果表明,脂多糖抑制caspase-3的表达。激光共聚焦显微镜结果表明脂多糖促进细胞滋养细胞TNF-α的表达。酶联免疫吸附实验检测表明脂多糖促进细胞滋养细胞TNF-α的表达。TNF-α的表达量与细胞滋养细胞凋亡指数正相关(r=0.769,P<0.01)。结论脂多糖能够诱导细胞滋养细胞凋亡,天然免疫反应是其重要的机制。     

树突状细胞激活效应细胞作用的初步研究

目的探讨树突状细胞（DC）对肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）和小鼠脾淋巴细胞（小鼠脾LC）的最佳激活作用比例.方法联合应用GM-CSF、IL-4和小鼠H22肝癌细胞全细胞性抗原致敏从荷瘤小鼠四肢长骨提取的DC,依据不同的激活比例用致敏DC体外激活TIL和小鼠脾LC,采用乳酸脱氢酶（LDH）4小时释放法测定、观察被不同程度激活的TIL和小鼠脾LC对小鼠H22肝癌细胞的杀伤活性.结果当E/T为1：400和1：200时,所激活的TIL或小鼠脾LC的杀伤活性较弱,线性关系不明显,P＞0.05;当E/T为1：100时,杀伤活性有较明显的提高,与前两者比较,P＜0.05;当E/T=1：50时,杀伤活性徒增,与前三者比较均有显著性差异;而当E/T=1：25,1：12.5和1：6.25时,杀伤活性与E/T=1：50时基本没变化,P＞0.05.结论当E/T=1：50时,DC能使小鼠脾LC和TIL充分激活,显著提高其对小鼠H22肝癌细胞的体外杀伤活性.     

噻唑蓝比色法检测细菌生长和存活状况的研究

建立了细菌生长和存活状况检测的噻唑蓝 (MTT)比色分析法。将S .aureus和E .coli菌以平板菌落计数法计数活菌数量 ,将一定数量细菌或经煮沸处理细菌加入微孔板 ,同时加入MTT ,于 36～ 37℃培养 ,加入DMSO溶解 ,于 51 0nm波长处测定A值 ;将一定数量活菌 ,加入不同数量MTT ,孵育不同时间 ,用不同量DMSO溶解 ,于不同波长处测定A值 ,以优化细菌MTT比色分析法条件。结果表明 :(1 )MTT能被活细菌利用 ,形成的fomazan数量与细菌浓度成线性关系 ;(2 )细菌经煮沸后MTT显色 ,A值明显降低 ,与煮沸时间成正比例 ;(3)MTT加入后在 0～ 2h内A值与作用时间成正相关 ;(4)MTT浓度增加 ,A值有一定程度增大 ;(5)以DMSO为Formazan溶解剂 ,其最大吸收波长范围为 51 0～ 530nm ;(6)以菌液体积的 2、3、4倍量加入DMSO均可较好地溶解Formazan颗粒。MTT比色分析法能反映活细菌的生长 ,存活状况 ;其较适宜的参数 :MTT终浓度0 3mg ml,作用时间 2h ,溶解剂DMSO量为菌液量 2倍 ,最大吸收波长范围为 51 0～ 530nm。     

煤尘矿物成份对细胞毒性效应的初探

作者曾在煤尘对ＡＭ毒性效应研究中发现，我国３种煤尘的细胞毒性不同，无烟煤＞贫煤＞肥煤。为探讨其原因，本文采用ＳＥＭ／ＥＤＸ和粉末Ｘ线衍射分析技术，对在原细胞实验中所使用的３种煤尘的化学元素含量及其矿物质成份进行了系统测试，探讨了煤尘矿物质成份在其毒性效应中的价值。３种煤尘游离ＳｉＯ２含量甚微，且与煤尘的细胞毒性也不全一致；煤尘主要元素含量与其铝硅酸盐、硫化物、碳酸盐和硅石等矿物质成份是吻合的；各种煤尘含有不同程度的铝硅酸盐，但各自的硫化物和碳酸盐含量不同而各具特点。无烟煤中硫化物含量最高，细胞毒性最大；贫煤中硫化物和碳酸钙含量较少，细胞毒性居中；肥煤含有大量碳酸钙和氧化钙，细胞毒性最小。     

氯化镉的体外毒性及锌的拮抗作用

目的观察镉与锌体外对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)增殖的影响,初步探讨镉毒性机制。方法采用MTT法及3H-TdR掺入法,研究不同浓度氯化镉(CdCl2)单独或与生理浓度氯化锌(ZnCl2,10 μmol/L)同时染毒对V79细胞增殖的影响,并采用等离子体光谱仪测定细胞内Cd2 、Zn2 含量。结果 CdCl2对于V79细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量依赖性.采用MTT法和3H-TdR掺入法所得CdCl2染毒24 h后50%抑制浓度(IC50)分别为13.73 μmol/L和13.60 μmol/L.随着CdCl2染毒浓度的增加,细胞内Cd2 含量也增加.而同时给予锌则对镉的增殖抑制效应在一定程度上具有明显的拮抗作用,锌可使细胞内Cd2 含量降低。结论在本实验条件下,CdCl2对V79细胞增殖具有抑制作用,锌对镉的毒性有拮抗作用。     

烹调烟雾职业暴露人群免疫功能的调查分析

目的：通过对烹调烟雾职业暴露人群外周血T、B淋巴细胞亚群分析、自然杀伤细胞（NK细胞）自然杀伤活性测定来了解烹调烟雾对机体免疫功能的影响。方法：利用直接荧光法,通过流式细胞仪分析了T细胞亚群、B淋巴细胞;采用MTT比色法检测NK细胞杀伤活性。结果：经成组t检验,暴露组CD3^ 细胞百分率、NK细胞杀伤率明显低于对照组,工龄7年以上被调查者中暴露组CD4^ CD8^-T细胞百分率、CD4^ /CD8^ 细胞比值明显低于对照组,而CD19^ 细胞百分率两组间差异无统计学意义;多因素逐步回归分析表明,暴露与否是影响CD3^ 细胞百分率、NK细胞杀伤活性的主要因素,同时CD3^ 细胞数还与工龄有关。结论：长期接触烹调烟雾对机体细胞免疫功能有一定抑制作用。     

核黄素缺乏对人成淋巴细胞株遗传稳定性及细胞毒性影响初探

微量营养素(micronutrient)是许多酶的底物或辅酶成分,当其涉及维持基因组稳定性相关的生化反应时,供给状况及代谢特点就可能影响基因组稳定性,构成肿瘤风险因素[1,2]。其缺乏或代谢异常可使基因组稳定性下降,提高肿瘤危险度[4,5]。核黄素(riboflavin,VB2)是黄素腺嘌呤二核苷酸的前体,参与机体生物氧化反应及能量代谢,VB2缺乏可引起亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)的活力降低,引起叶酸代谢异常[6]。当叶酸水平较低或MTHFR活性降低时,通过同型半胱氨酸(homocysteine,HCy)合成S-腺苷甲硫氨酸(S-aden…     

蚕丝-PLGA混合编织支架材料的细胞毒性检测

目的:对蚕丝-PLGA细丝混合编织支架体外进行细胞毒性实验,探讨蚕丝-PLGA混合编织支架材料的细胞毒性作用情况,为该材料临床应用提供理论依据。方法:制备蚕丝-PLGA细丝混合编织支架,并制备该支架材料的浸提液。通过MTT法检测25%、50%、100%浓度的蚕丝-PLGA混合编织支架材料浸提液对兔骨髓间充质干细胞(MSCs)的细胞毒性作用,以第1,3,5,7天为检测时间点,观察细胞生长状况,计算细胞相对增殖率,并对材料的细胞毒性进行分级。以正常培养基为阴性对照组,0.64%苯酚溶液为阳性对照组。结果:MSCs在不同浓度实验组及阴性对照组中生长均好,细胞呈长梭形等形态,细胞形态饱满有光泽,MTT法结果表明各时间点各浓度实验组与阴性对照组之间的A值差异不显著(P>0.05),各时间点各浓度浸提液对MSCs细胞的相对增殖率均在93%以上,毒性分级为0级或1级,无细胞毒性。结论:蚕丝-PLGA混合编织支架材料细胞相容性良好,无细胞毒性,符合材料毒性的安全标准。     

乙型肝炎疫苗细胞免疫应答检测用参考品的制备和初步应用研究

目的通过研究重组乙型肝炎表面抗原（HBsAg）免疫小鼠诱导细胞免疫应答的特点，制备一批细胞免疫应答检测用参考品，规范乙型肝炎疫苗细胞免疫实验条件和操作。方法背部皮下分别免疫小鼠（BALB／c，H-2^d）0．5、1、2、4和8鹏的HBsAg，于免后7d，检测小鼠脾单个核细胞（MNC）体外刺激诱生IFN-γ的水平。分别免疫小鼠2、4μgHBsAg，免后7d，检测MNC分泌IFN-γ水平。结果1μg组可检测小鼠IFN-μ阳转；免疫剂量与IFN-γ阳转率存在剂量效应关系（r=0．951，P=0．049），IFN-γSFC与免疫剂量也存在剂量效应关系（r=0．996，P=0．000）。2μgHBsAg组IFN-1阳转率在50％-75％之间；4μg组IFN-γ阳转率均为75％。结论制备一批乙肝疫苗细胞免疫参考品，用于规范疫苗诱导细胞免疫应答的方法检测。     

镉雌激素样作用的实验研究

目的 评价镉的雌激素样效应。方法 从体外和体内两个水平,观察不同浓度的氯化镉对MCF－7人乳腺癌细胞生长和去卵巢SD大鼠子宫的诱导增生作用。结果 10^-6mol/L的氯化镉使MCF－7细胞增殖达最大,为对照的3．92倍,并且其诱导增殖作用被纯抗雌激素ICI 182,780完全阻断。镉的相对增殖效率为雌二醇的65％,相对增殖能力为雌二醇的1／1000。每天0．1、0．5及2．5mg/kg连续3d腹腔注射氯化镉能明显促进去卵巢大鼠子宫的增生,并且具有剂量－效应关系。结论 镉能够模拟雌二醇诱导MCF－7细胞增殖及大鼠子宫增重。镉具有雌激素样效应。     

ELISA竞争法测定人尿金属硫蛋白的初步应用

探讨应用ELISA竞争法测定正常人尿金属硫蛋白含量的价值。 [方法 ]应用ELISA法测定了2 0～ 2 3岁健康在校大学生 93份 (男 49,女 44 )晨尿样品的MT。 [结果 ]本法的检测下限为 2 5ng/ml,操作内和操作间的变异系数分别为 2 2 5 %和 1 19% ,回收率为 97 6 %～ 10 0 0 % ;人尿MT含量为 (6 86± 6 0 2 )ng/ μmol肌酐。 [结论 ]本法具有较好的精密度和准确度 ;大学生尿MT含量无性别差异。     

烹调烟雾职业暴露人群外周血NK细胞自然杀伤活性检测

目的：分析烹调烟雾职业暴露人群外周血NK细胞自然杀伤活性。方法：采用MTT比色法。结果：暴露组与对照组检测结果经成组t检验,表明暴露组NK细胞杀伤率明显低于对照组。结论：长期接触烹调烟雾对机体天然免疫系统中NK细胞活性有抑制作用。