一氧化氮合酶在大鼠睾丸及附睾中的表达和定位

目的：了解一氧化氮合酶（NOS）在睾丸及附睾中的分布。方法：运用免疫组织化学ABC法观察2种NOS（nNOS,iNOS,eNOS）在性成熟大鼠睾丸、附睾中的分布。结果：①nNOS免疫反应阳性见于睾丸间质细胞、睾丸间质血管壁平滑肌细胞、附睾脂肪垫细胞;②iNOS免疫反应阳性见于睾丸间质细胞、管周类肌细胞、精原细胞、精母细胞、支持细胞、输出小管上皮细胞、附睾输出小管上皮细胞、腔内精子;③eNOS免疫反应阳性见于睾丸间质细胞、附睾脂肪垫细胞。结论：NOS广泛表达于睾丸及附睾组织细胞中,推测其参与了包括精子发生和精子成熟的生殖活动多个过程。     

一氧化氮合酶在不同年龄大鼠睾丸中的表达

目的研究一氧化氮合酶(NOS)在不同年龄大鼠睾丸中的表达情况，探讨NO在睾丸生殖功能中的作用。方法将健康雄性Wistar大鼠按月龄分为成年组和未成年组，4％多聚甲醛灌流固定，取大鼠睾丸，常规石蜡切片，免疫组化SABC法检测NOS在不同年龄大鼠睾丸中的表达。结果成年组大鼠睾丸间质细胞和间质血管中均有nNOS、iNOS和eNOS阳性物质表达，生精小管周围肌样细胞和腔面精子可见nNOS阳性物质；未成年组大鼠睾丸间质血管中偶见iNOS和eNOS阳性物质表达。结论3种NOS在睾丸中均有表达，但定位不同，且与年龄相关。     

原位杂交法检测不同发育阶段小鼠睾丸中TERT mRNA的表达

本实验应用原位杂交方法检测出生后 10d～ 90d雄性小鼠睾丸中TERTmRNA表达及定位。原位杂交方法 (Insituhybridization)结果显示 :① 10d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮中尚无TERTmRNA阳性表达 ;② 2 0d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮可见TERTmRNA阳性表达 ,阳性表达位于初级精母细胞 ;③ 30d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮也可见TERTmRNA阳性表达 ,初级精母细胞表现强阳性表达 ;④ 6 0d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮可见明显TERTmRNA阳性表达 ,阳性表达位于初级精母细胞及精子细胞 ;⑤ 90d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮有较强烈的TERTmRNA阳性表达 ,阳性表达位于初级精母细胞。此结果提示我们 :端粒酶在精子发生过程中存在动态变化 ,端粒酶的表达与精子发生存在密切关系。     

雌激素受体β亚型在大鼠睾丸发育过程中的表达和定位

目的：研究雌激素受体β亚型（ERβ）在大鼠睾丸发育过程中的作用。方法：采用免疫组织化学染色和免疫荧光组织化学染色方法，观察在出生后3，7，16及28d的大鼠睾丸和成年大鼠睾丸中ERβ的表达和分布情况。结果：在出生后3，7d的大鼠睾丸中ERβ主要分布于睾丸间质细胞，在出生后，16，28d分布于睾丸间质细胞胞质，大鼠睾丸中ERβ的表达随出生天数增加而呈逐渐上升的趋势，成年大鼠睾丸间质细胞中ERβ分布较幼年大鼠密度增加。结论：ERβ可能作为一种特异性受体在大鼠睾丸发育过程中影响睾丸间质细胞雄性激素的分泌；进而调节生精过程和精子发育成熟。     

肝硬化大鼠睾丸一氧化氮合酶免疫组化研究

探讨肝硬化睾丸功能障碍的发生机制.将清洁级雄性SD大鼠分为假手术组(SO,n=10)、肝硬化组(CIR,n=10).采用胆管结扎(BDL)复制肝硬化模型,假手术组则仅分离出胆总管而不予结扎.应用免疫组织化学法对SO组和CIR组大鼠睾丸组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达进行比较性研究.结果术后4周,组织学检查显示胆汁性肝硬化特征性表现.CIR组和SO组大鼠睾丸组织eNOS表达均在间质细胞胞浆,二者平均吸光度和面密度相比较均无显著性差异(P＞0.05).而iNOS表达则存在较大差异,SO组仅在睾丸组织间质细胞胞浆表达;CIR组不仅在间质细胞胞浆,还在支持细胞、生精细胞以及脱落的生精上皮细胞胞浆表达,二者平均吸光度及面密度相比均存在非常显著性差异(P＜0.01).表明CIR组大鼠睾丸组织iNOS活性增高,参与了支持细胞、生精过程的调节,从而进一步证明了肝硬化睾丸功能障碍的发生机制中存在NO途径.     

原位杂交法检测不同发育阶段小鼠睾丸中TERT mRNA的表达

本实验应用原位杂交方法检测出生后10 d～90 d雄性小鼠睾丸中TERT mRNA表达及定位.原位杂交方法(In situ hybridization)结果显示:①10 d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮中尚无TERT mRNA阳性表达;②20 d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮可见TERT mRNA阳性表达,阳性表达位于初级精母细胞;③30 d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮也可见TERT mRNA阳性表达,初级精母细胞表现强阳性表达;④60 d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮可见明显TERT mRNA阳性表达,阳性表达位于初级精母细胞及精子细胞;⑤90 d雄性小鼠睾丸的曲细精管上皮有较强烈的TERT mRNA阳性表达,阳性表达位于初级精母细胞.此结果提示我们:端粒酶在精子发生过程中存在动态变化,端粒酶的表达与精子发生存在密切关系.     

PDCD4在雄鼠生殖细胞中的表达研究

目的：验证程序性细胞死亡因子4 (programmed cell death 4,PDCD4)在小鼠雄性生殖细胞中的表达。方法：RT-PCR检测PDCD4在不同周龄小鼠睾丸的基因表达情况;Western blot法检测PDCD4在不同周龄小鼠睾丸中蛋白表达水平;免疫荧光法检测PDCD4在雄性生殖嵴以及在不同周龄小鼠睾丸的定位情况。结果：RT-PCR和Western blot结果均显示PDCD4在0周龄小鼠睾丸中开始有表达,并持续表达至成年;免疫荧光显示PDCD4在胚胎期雄性小鼠生殖细胞中也有表达;在出生后0周和1周龄小鼠睾丸中,PDCD4特异表达于精原细胞;在2周龄小鼠睾丸中,PDCD4分布于精原细胞和精母细胞;而在3、4和5周龄小鼠睾丸组织中,PDCD4主要分布于精原细胞、精母细胞与圆形精子细胞。结论：PDCD4分布于胚胎期和出生后各阶段生精细胞,这为进一步研究PDCD4在精子发生中的作用打下基础。     

香烟烟雾致睾丸氧化应激损伤与iNOS表达的关系

目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在香烟烟雾致睾丸生殖细胞氧化应激损伤中的关系以及抗氧化治疗的作用。方法:21只8周龄健康雄性SD大鼠制作吸烟染毒模型,随机平均分为3组:对照组(A)、吸烟组(B)、抗氧化治疗组(C)。测定睾丸组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、一氧化氮合酶(NOS)及iNOS的含量。结果:吸烟组睾丸组织匀浆SOD、CAT活性增高,GSH-Px活性降低,MDA、NO含量增高,对照组与抗氧化组两者无差别。光镜下见吸烟组睾丸生精小管上皮细胞排列紊乱,生精细胞数量减少,小管腔内精子数量罕见,对照组与抗氧化组两者区别不大。免疫组织化学方法可见吸烟组大鼠睾丸的初、次级精母细胞中iNOS蛋白强阳性表达,在对照组与抗氧化组大鼠睾丸的初、次级精母细胞中iNOS蛋白呈弱阳性表达。结论:吸烟可导致大鼠睾丸氧化应激损伤;iNOS蛋白表达增加可能在吸烟引起睾丸生精上皮细胞氧化应激损伤中发挥重要作用;抗氧化治疗可减少iNOS蛋白在睾丸生精上皮细胞的表达,可减轻吸烟引起睾丸生精上皮细胞的氧化应激损伤。     

热应激对大鼠睾丸iNOS表达的影响及其意义

目的 研究热应激对大鼠睾丸诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）表达的影响及其意义。方法42d龄SD雄性健康大鼠12只建立单侧隐睾作为热应激处理的模型,术后第7d处死大鼠留取双侧睾丸,采用RT—PCR及免疫组化SABC法分别检测生精细胞iNOSmRNA和蛋白表达的变化,TUNEL法检测生精细胞凋亡。结果热应激处理后生精上皮内可见iNOS强阳性表达,而对侧睾丸生精上皮内无iNOS表达;热应激处理后睾丸iNOSmRNA也较对侧睾丸增强,生精细胞凋亡指数明显高于对侧睾丸,差异均有显著性意义（P〈0．05）。结论热应激导致生精上皮内iNOS表达增强,生精细胞凋亡增加,iNOS参与介导生精细胞凋亡。     

ICR小鼠胚胎及生后不同阶段睾丸内生殖细胞的发育

目的 :观察ICR小鼠胚胎及出生后的睾丸内生殖细胞在不同阶段的发育情况 ,了解雄性生殖细胞分化、发育和成熟的过程。方法 :采用半薄切片甲苯胺蓝染色法 ,对雄性胚胎第 13,16 ,18d和出生后第 1,3,7,10 ,15 ,19d、4 ,6周及成年 (8周 )睾丸生殖细胞进行观察。结果 :原始生殖细胞向精原细胞的演化经历了一个分散 居中 分散靠边的过程。出生后第 7d ,支持细胞达到一个增殖高峰 ;出生后第 10d ,原始生殖细胞出现一个增殖高峰 ;出生后第 10d ,间质细胞达到一个增殖高峰 ;出生后第 15d ,出现初级精母细胞 ;出生后第 4周 ,产生精子细胞 ,同时间质细胞出现另一个增殖高峰并保持在一个高水平 ;出生后第 6周 ,开始有精子出现。结论 :当精原细胞大量增殖和生成精子细胞与精子时 ,生殖细胞可能需间质细胞提供大量激素相辅助 ;支持细胞在支持生精细胞、促进生精细胞转位及精子生成过程中起了一定作用。     

一氧化氮合酶在门脉高压大鼠肠黏膜中的表达及意义

目的 :探讨一氧化氮合酶 (nitricoxidesyethase ,NOS)在门脉高压大鼠肠黏膜中的表达及意义。方法 :将SD大鼠随机分成两组。实验组大鼠行门静脉两步结扎加左肾上腺静脉结扎 ,对照组为假手术组。门静脉完全结扎 2周后 ,应用免疫组织化学方法检测巨噬细胞型NOS(iNOS)和内皮细胞型NOS(ecNOS)在大鼠肠黏膜中的表达情况。结果 :门脉高压对大鼠肠道黏膜影响不完全一致。与对照组比较 ,实验组iNOS ,cNOS在小肠黏膜中高表达 ,iNOS在结肠黏膜中高表达 (P <0 .0 5 )。结论 :一氧化氮合酶与门脉高压大鼠肠黏膜局部病变有关。检测NOS对了解门脉高压性肠病有重要意义。     

Expression of Telomerase Gene mTR in the Testis of SD Rats and Its Significance

Summary:To study the expression of mTR gene in the testis of SD rats with varied ages and its sig-nificance,in situ hybridization(ISH)techniques were applied to detect the expression of telomerasegene mTR mRNA in the testis of SD rats.The expression of mTR was found in testes of different-age male SD rats.There was a positive correlation between the expression of mTR and the location ofgerm cells(spermatogonia,spermatocyte,spermatid).In Setoli cells,leydig cell and spermatozoa,no telomerase mTR was detectable.Type A spermatogonia expressed the highest level of telomerasemTR mRNA.It was suggested that the expression of mTR gene in the testis of SD rats is of lifetimeand coincides with the telomerase activity.     

壬基酚对断乳期子代雄性SD大鼠睾丸组织发育及凋亡的影响

目的研究壬基酚（NP）对断乳期子代雄性SD大鼠睾丸组织发育及凋亡影响的机制。方法对母鼠孕期第7d直至产后断乳期染毒NP（50、100、200mg／kg）,每个剂量组处死F1雄性子代大鼠10只,股动脉取血,测定NP浓度,取雄性子代睾丸进行组织病理学观察,并对睾丸进行Bax、Bcl-2和Caspase-3免疫组织化学分析。结果F1子代大鼠断乳期血清NP浓度在100、200mg／kgNP剂量组高于对照组（P〈0．05）,组织病理学观察可见200mg／kgNP组睾丸生精小管与对照组相比显著缩小。免疫组化结果显示,NP组睾丸生精小管Bax和Caspase-3的表达增强,Bel-2表达减弱。结论母鼠孕期和哺乳期染毒NP能够影响断乳期子代雄性SD大鼠睾丸的正常发育。     

中药何首乌饮对衰老大鼠睾丸组织NO和iNOS含量的影响

目的:观察何首乌饮对衰老雄性大鼠睾丸组织一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)含量的影响。方法:D-半乳糖连续腹腔注射的方法建立亚急性衰老大鼠模型,并用补肾中药何首乌饮进行干预,分别检测各组大鼠睾丸组织NO和iNOS的含量。结果:与正常对照组大鼠比较,模型组大鼠睾丸组织NO和iNOS含量明显升高(P<0.01);何首乌饮可抑制衰老模型大鼠睾丸组织NO和iNOS含量的升高,何首乌饮预防组和何首乌饮延缓衰老组与模型组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:何首乌饮具有一定延缓睾丸衰老的作用,机制可能与降低衰老大鼠睾丸组织NO和iNOS的含量有关。     

香烟烟雾染毒对雄性大鼠睾丸组织一氧化氮水平的影响

目的 探讨香烟烟雾染毒对大鼠睾丸组织结构及睾丸组织一氧化氮(NO)水平的影响.方法 清洁级成年雄性SD大鼠160只,分为对照组和低、中、高剂量染毒组,各组大鼠分别染毒2、4、6、8、12周,每组10只.染毒组采用呼吸道静式染毒,每天1次,每次0.5 h.观察大鼠睾丸组织结构,检测各组大鼠体质量及睾丸组织NO水平.结果 染毒4、6、8、12周时,中、高剂量染毒组大鼠体质量与对照组和低剂量组相比均明显降低(P<0.05),染毒8、12周时,高剂量染毒组大鼠体质量与中剂量组相比明显降低(P<0.05),并且随着染毒剂量的增加,降低更加明显.染毒2、4、6、8周时,高剂量组大鼠睾丸组织NO水平与对照组和低、中剂量组相比均明显升高(P<0.05);染毒8周时,中剂量组大鼠睾丸组织NO水平与对照组相比明显升高(P<0.05);染毒12周时,低、中、高剂量组大鼠睾丸组织NO水平与对照组相比均明显升高 (P<0.05) ,中、高剂量组大鼠睾丸组织NO水平与低剂量组相比明显升高 (P<0.05).结论 香烟烟雾染毒可致雄性大鼠睾丸组织NO水平升高,导致雄性大鼠睾丸组织损伤.     

大鼠肾移植急性排斥反应中诱导型一氧化氮合酶的表达及其抑制剂的作用

目的:探讨大鼠移植肾组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达及iNOS抑制药氨基胍(Aminoguanidine,AG)和免疫抑制药他克莫司(FK506)对移植术后急性排斥反应的影响。方法:实验分为同基因移植组(5只,供、受鼠均为SD大鼠)和异基因移植组,后者又分为急性排斥组、AG治疗组和他克莫司治疗组(各组大鼠均为5只,供鼠为SD大鼠,受鼠为Wistar大鼠)。术后第7 d取移植物进行病理检查,观察排斥反应发生情况,并运用RT-PCR、免疫组化法检测各组移植肾组织中iNOS的表达水平。结果:急性排斥组iNOS表达呈强阳性,与AG治疗组、他克莫司治疗组、同基因移植组比较,差异有显著性意义(P<0.01)。AG治疗组、他克莫司治疗组、同基因移植组之间比较,差异无显著性意义。结论:在大鼠原位肾移植发生急性排斥反应时,iNOS表达明显增高,增高程度与排斥反应的强度移植物损伤有明显关系。应用AG和他克莫司可抑制iNOS的表达,从而减轻移植肾组织的急性排斥反应。     

氟他胺对胚胎期SD大鼠睾丸发育整体基因表达水平的影响

目的研究抗雄激素物质氟他胺（Flu）对胚胎期SD大鼠睾丸发育整体基因表达水平的影响。方法对F0亲代母鼠在孕12～17d时每日皮下注射Flu（6．25mg／kg）,于胚胎期20d解剖孕鼠,取出实验组与对照组雄性胎鼠睾丸,提取mRNA,分别用cy5和cy3探针逆转录标记,与Rat 12KcDNA表达谱芯片杂交,荧光扫描分析;同时迅速取出雄性仔鼠右侧睾丸,做免疫组化检测;另将出生后第2d的雄性子代断颈取血清,用睾酮试剂盒测定激素水平。结果芯片结果显示实验组差异表达基因共31条,其中下调基因14条,已知功能基因9条;上调基因17条,已知功能基因7条;一共16条差异表达基因与睾丸组织功能及发育密切相关;免疫组化结果显示合成睾酮两种关键酶蛋白表达降低;且检测睾酮激素水平下降。结论所有证据表明F0亲代母鼠孕期染毒氟他胺能够影响胚胎期雄性SD大鼠的生殖发育,导致出生后雄性子代性分化和性发育异常。