脱唾液酸糖蛋白受体介导的vp3基因靶向性治疗肝癌的实验研究

目的利用肝细胞表面存在特异的脱唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR),探索ASGPR介导的vp3基因肝细胞靶向性治疗肝癌的方法。方法将携带vp3基因的质粒通过多聚左旋赖氨酸(poly-L-lysine,PLL)与该受体的天然配体脱唾液酸粘蛋白(asialoorosomucoid,Asor)结合,获得Asor-PLL-vp3复合物;通过体外转染、放射性同位素标记检测和动物实验鉴定该复合物的肝细胞靶向性。结果 成功制备了较纯的可溶性的蛋白-核酸复合物;体内外实验结果表明Asor-PLL-vp3复合物具有良好的肝细胞靶向性。结论通过制备Asor-PLL-vp3复合物,利用ASGPR介导实现了vp3的肝细胞靶向性基因转移,证实了该复合物具有体内靶向性治疗肝癌的可行性。     

二聚体化对转录的调节作用

基因转录的调控涉及蛋白质因子与特异的DNA序列的元件(elements)的相互作用。这些“元件”在基因的启动子内的排列状况确定了该基因的转录方式。近年来,对这种能与特异的DNA序列结合的蛋白质因子的发现、鉴定和克隆方面已有长足的发展。许多已鉴定的启动子元件不但能与一种特异的结合蛋白质相互作用,而且能和一整个结构相近     

迁移率改变分析

本文介绍另一种检测特异顺序的DNA结合蛋白的理想方法——迁移率改变法。该方法是在特定的缓冲液中,蛋白质与带有同位素标记的DNA探针进行结合反应,然后在低离子强度的电泳缓冲液中,电泳分离DNA与蛋白质结合的复合物与未结合的游离DNA探针,进而鉴定特异顺序的DNA结合蛋白。     

肝细胞核因子4在肝细胞分化和成熟中的作用

肝细胞核因子4在肝脏发育及肝细胞的分化、成熟过程中有着重要的调控作用,通过与肝特异基因启动子结合而影响肝特异基因的表达,促进肝细胞极化结构的形成,调节肝细胞的物质代谢和生物转化,并且能够抑制肝脏肿瘤的发生。     

骨质疏松症蛋白质相互作用网络的构建和分子复合物通路预测

背景：在蛋白质相互作用网络的基础上研究骨质疏松症,可以更深入全面了解其发生发展机制。 目的：建立基于骨质疏松症遗传相关基因的蛋白质相互作用网络,对其中所含分子复合物涉及的生物学通路进行预测。 方法：筛选在线人类孟德尔遗传数据库中的骨质疏松症遗传相关基因,应用Cytoscape软件和插件Agilent Literature Search,进行文本挖掘并建立骨质疏松症的蛋白质相互作用网络;应用插件Clusterviz,发现网络中的可能包含的分子复合物;基于DAVID,富集分子复合物的生物学通路。 结果与结论：人类孟德尔遗传数据库中骨质疏松遗传相关基因有177个。骨质疏松症的蛋白质相互作用网络包含863个节点(蛋白质)、2 925条边(相互作用关系),可能包含4个分子复合物。其中分子复合物3涉及免疫细胞表面分子及其相互黏附、细胞因子与其受体的结合、造血和止血功能等生物学通路;分子复合物4与糖尿病的发生有一定关系。     

去唾液酸糖蛋白受体与慢性肝病自身免疫

去唾液酸糖蛋白受体 (AsialoglycoproteinReceptor,ASGPR)是肝细胞的一种重要且高效的内吞受体 ,主要分布于肝小叶门静脉周围肝细胞的窦面膜上 ,又名肝凝集素 (liverlectin)。近年来研究发现该受体除了在肝脏基因定向转移、靶向药物治疗当中具有较高的应用价值之外 ,还相继在自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性肝硬化 (PBC)、病毒性肝炎等慢性肝病患者血清中检测到其相应的自身抗体 ,从这些患者外周血、肝活检组织分离到ASGPR特异性的T淋巴细胞。由于ASGPR的肝脏特异性与其在肝脏的特殊分布位置和某些慢性肝病的组织病理学特征极…     

甾体激素受体磷酸化

甾体激素受体是细胞内能与甾体激素发生紧密、特异性结合的蛋白质。当把未经甾体激素处理的细胞做成匀浆,再进行超离心分离时发现,受体主要存在于胞浆中。然而,最近得到的证据提示,在完整的细胞,未结合的甾体激素受体主要位于核中。在甾体激素与受体结合后,受体发生温度依赖性转化,形成能与核以及一些多聚阴离子紧密结合的转化形式。在核内,转化后的(或被激活的)甾体激素-受体复合物能增强或抑制特定基因的转录。最近,一些非常令人感兴趣的研究显示,甾体激素-受体复合物与靠近调节基因的特异DNA区域相结合。关于甾体激素受体研究的另一进展是提示了部     

快速构建腺病毒载体的新方法

近年来,随着腺病毒载体广泛应用于实验性基因治疗等生物学研究领域,构建重组腺病毒的方法也有了很大改进,本文主要介绍两种快速构建人腺病毒载体的新方法：1．用DNA-末端蛋白质复合物构建重组腺病毒。2在大肠杆菌细胞内而非真核细胞内完成通过同源重组产生重组腺病毒核酸的过程。     

Ashwell受体减少脓毒症时凝血紊乱的发生

Ashwell受体（无唾液酸糖蛋白受体）位于肝细胞的血管面，是肝细胞的主要凝集素。糖蛋白的末端常常由唾液酸构成，末端缺少唾液酸的糖蛋白称为无唾液酸糖蛋白（asialoglycoproteins），可被肝细胞的Ashwell受体识别清除。正是基于这一点，Ashwell受体在药物代谢中发挥着重要作用。Ashwell受体包含两种类型的跨膜糖蛋白，     

肺癌与肺良性疾病 特异血清免疫炎性蛋白质N-糖基化修饰差异

目的探索肺癌与肺良性疾病特异血清免疫炎性蛋白质N-糖基化修饰差异。方法应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE)从肺腺癌和慢性肺炎患者血清中分离得到一组疾病特异的血清免疫炎性蛋白质复合物(IIRPCs),经胶内酶解、石墨相氮化碳富集分离得到完整糖肽。应用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术,结合GPSeeker数据库检索软件进行糖肽鉴定。结果共鉴定了来自12种蛋白质的89种糖肽,其中21种仅与肺良性疾病相关,38种仅与肺癌相关。89种糖肽中包括63种糖型,其中10种为肺良性疾病特有糖型,21种为肺癌特有糖型。两种疾病的特有糖型在其结构和连接位点上均存在差异。结论发现了两种疾病血清特异免疫炎性蛋白质N-糖基化修饰的差异,为糖基化修饰在慢性疾病的诊断、预后评估和分子机制等方面的研究提供了新视角。     

晕动病易感性SNP对肾上腺素α2A受体基因表达调控的影响

目的:研究人肾上腺素α_2A受体基因-12 96位G/C多态性对DNA与蛋白质结合的影响。方法:以重组质粒为模板,扩增-12 96位为G或C的 390bp片段 (-1414--102 5)bp,分别与细胞核蛋白质结合,经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,与地高辛 (Dig)标记的同源DNA片段杂交。另将Dig-dUTP标记的同一片段与经SDS-PAGE转印至膜上的细胞核蛋白质进行DNA-蛋白质结合反应,以抗Dig抗体检测结合反应信号。结果:EMSA结果显示,-12 96位为C的片段可与细胞核蛋白质结合,X光片上显示一条特异性结合带;为G时则无;人肾上腺素α_2A受体基因 (-1414--102 5)bp 390bpDNA片段与细胞核提取物杂交结果显示,在约15kU位置可见一蛋白质条带。结论:肾上腺素α_2A受体基因-1414--102 5bp之间可能存在一转录因子结合位点,-12 96位为C时,能与一特异性核蛋白结合,此蛋白质的相对分子量约为15kU。     

人转铁蛋白的多态性

血清转铁蛋白(TF)是铁结合蛋白质中最重要的成分之一,主要在肝脏合成,其主要作用是把从肠道吸收的铁和血红蛋白分解后的铁转运到特异的需铁细胞及贮藏部位。TF为一分子量为79 570道尔顿的多肽链,由679个氨基酸残基组成。多肽链呈三维球状叶形结构,其两叶各含一个铁结合部位。TF基因可分为两个不等的部分,与已知的TF结构相符,它们是由数目相同的外显子组成。内含子在该基因的5’和3’区把大小相同的同源外显子编码顺序隔开。TF是一种含有约6%碳水化合物的糖蛋白,该碳水化合物为两条由6个甘露糖、6个半乳糖、8个乙酰糖苷和4个唾液酸残     

循环免疫复合物检测的影响因素——特异性与敏感性

如所周知,循环免疫复合物(CIC)的检测方法一般可分为抗原特异性法和抗原非特异性法两大类。前者适用于检测一种已知抗原及其相应抗体组成的CIO,如DNA-抗DNA、HBsAg-抗HBs、甲状腺球蛋白     

家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体及其基因缺陷

LDLR 是一种细胞表面糖蛋白,因介导血浆 LDL 和β-VLDL 的摄取和细胞内降解而在维持血浆脂蛋白代谢平衡中起重要作用。组成 LDLR 蛋白的5个功能区与 LDLR 基因结构之间有密切的对应关系。FH 是 LDLR 基因突变所致的遗传性疾病,已发现的突变形式有缺失,错义突变,无义突变和插入4种。这些突变导致 LDLR 的4种不同类型的功能障碍。由基因突变引起的脂代谢紊乱,是 FH 患者易发动脉粥样硬化的原因。     

HAI-1基因不同功能域的原核表达载体构建及融合蛋白表达

目的:分段克隆1型肝细胞生长因子激活剂抑制因子(HAI-1)基因的功能域并在大肠杆菌中表达,为进一步研究HAI-1的生物学功能打下基础。方法:针对HAI-1的不同功能域设计相应的5对引物,分别扩增KD1、KD1 LDLR、KD2、LDLR KD2和KD1 LDLR KD2片段。将PCR产物克隆至pGEM-TEasy载体中并经测序鉴定。将5个cDNA片段亚克隆至具有6个组氨酸标签(His-Tag)的原核表达载体pIVEX2.3-MCS中。以上述表达不同功能域的载体转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导融合蛋白的表达,表达产物以Westernblot进行鉴定,并进一步通过镍亲和层析柱纯化His-Tag标记的KD1 LDLR KD2融合蛋白。结果:成功地构建了HAI-1各功能域基因片段的原核表达载体。Westernblot分析证实,在大肠杆菌BL21(DE3)中分段表达了5种HAI-1不同功能域的His-Tag融合蛋白,并通过亲和层析法纯化到了相对分子质量为22200的KD1 LDLR KD2融合蛋白。结论:重组质粒pIVEX2.3-MCS/HAI-1能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,纯化的融合蛋白可用于研究HAI-1不同功能域的生物学作用。     

一个家族性高胆固醇血症家系的低密度脂蛋白受体基因突变检测与功能分析

目的 检测一个家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia,FH)患者低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)的基因突变,并对淋巴细胞表面LDLR功能进行检测.方法 以一家系中4例临床诊断为FH患者的基因组DNA为模板,首先检测载脂蛋白B-100(apolipoprotein B-100,ApoB100)基因R3500Q突变,以排除家族性ApoB100缺陷症(familial defective apolipoprotein B-100,FDB).然后用降落PCR方法,扩增LDLR基因的启动子和外显子片段,用单链构象多态性方法进行分析,对可疑外显子的PCR产物进行T/A克隆,测序分析.同时,用人淋巴细胞与荧光探针DiI标记的低密度脂蛋白发生结合反应,再通过流式细胞仪检测,显示具有功能性LDLR的淋巴细胞比例.结果 该家系患者LDLR基因第10外显子均出现杂合突变,第462位密码子由TGG突变为TAG,导致在462位提前出现终止密码子(W462X).具有功能性LDLR的淋巴细胞占总淋巴细胞比例患者为63.7%,健康对照者为77.3%,患者淋巴细胞LDLR活性约为健康对照者的82.4%,出现一定程度的降低.结论 提示LDLR基因W462X突变可能是导致本FH家系患者患病的一个主要原因.     

一种对低密度脂蛋白受体基因的黎巴嫩交替型快速诊断方法

低密度脂蛋白受体(LDLR)基因黎巴嫩变异是引起家族性高胆固醇血症(FH)的基因。LDLR基因损害而引起的FH是以家族性聚集,血清中低密度脂蛋白(LDL)的含量升高为特征。FH常与腱黄色瘤病同时出现。据估计黎巴嫩人的纯合子FH流行率是其他群体的10倍。在外显子14 660位有一单个碱基(胞嘧啶→腺嘌呤)的替换。此突变是LDLR基因的变异型,叫做黎巴嫩型等位基因。此突变导致终止密码提前出现,并为限制性内切酶HinfⅠ形成1个切割位点(GANTC)。     

人组织型纤溶酶原激活剂分子生物学研究的进展

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)是丝氨酸类蛋白水解酶,因它能特异地与纤维蛋白结合并受其激活,故被认为是一种高效的溶栓剂。本文结合作者的工作综述了近几年国内外在基因、蛋白质水平对t-PA进行研究的进展,深入讨论了t-PA分子结构与功能的关系,提出进行t-PA蛋白质工程以及利用抗体进行t-PA导向溶栓的可行性.     

低密度脂蛋白受体基因与家族性高胆固醇血症

低密度脂蛋白受体（LDLR）基因突变可导致家族性高胆固醇血症（familialhyper－cholesterolemia,FH）。FH是一种多基因遗传病，并且受环境因素的影响。本文重点讨论LDLR基因突变与家族性高胆固醇血症的关系。     

α-螺旋决定DNA与阻遏蛋白结合的特异性

基因表达调节的关键步骤是阻遏蛋白或活化蛋白与特异的DNA序列结合。蛋白质怎样识别这些特异的DNA序列?为了回答这个问题,近来有人测定了阻遏蛋白-DNA复合物的X-线晶体结构。这个阻遏蛋白由大肠杆菌噬菌体434(亲缘上接近λ噬菌体)编码。在此复合物中,阻遏蛋白二聚体与二重对称性的14bp操纵基因结合。每个阻遏蛋白单聚体用它一对α-螺旋与DNA接触;一个α-螺旋位于主沟,另一个跨过主沟(图1)。嵌进主沟的螺旋(识别螺旋)中的氨基酸侧链则被迫与碱基对的边缘相连,并构成序列特异性相互作用。在末端的另一α-螺旋中的氨基酸与糖-磷酸链构成无序列特异性相互作用。