123株肺炎链球菌的分离鉴定及分子分型

目的对临床诊断为大叶性肺炎、气管炎、中耳炎、胸膜炎、心内膜炎和败血症等病人进行血液等标本的采集、细菌培养和分型鉴定,为补充河北省肺炎链球菌菌型资料和疫苗的正确选择提供科学依据。方法对分离的123株肺炎链球菌进行分子鉴定和分子分型研究,普通PCR对肺炎链球菌进行种属鉴定,多重PCR方法对菌株进行菌型分析。结果经PCR检测,123株菌的cps A基因扩增均为阳性,阳性标本经多重PCR分型检测,19F和6A/6B型所占比例最大,分别为39. 02%和11. 38%,且型别类型多达20种。结论 123株肺炎链球菌19F和6A/6B型所占比例最大,且菌型丰富,为全省制定肺炎链球菌疫苗使用策略提供了科学依据。     

肺炎链球菌对青霉素耐药率的调查

目的 调查了解北京地区肺炎链球菌对青霉素及其他１２种抗生素的耐药情况,方法 对北京儿童医院及北京医科大学第一医院儿科６个月至３岁的门诊及入院首日患儿进行咽拭子标本采集,并迅速接种于平皿中过夜孵育,分离鉴定肺炎链球菌并选用苯唑西林,氯霉素,四环素,头孢曲松及红霉素纸片作药敏试验,用琼脂扩散法作最小抑菌浓度（ＭＩＣ）试验。结果 ９８９个咽拭子标本中共分离出５１株肺炎链球菌,经用 唑西林纸片初步筛选,青     

349株肺炎链球菌耐药情况分析

目的:研究本地区肺炎链球菌(SP)的耐药情况,为临床合理使用抗生素提供指导。方法:对2009年7月～2011年12月门诊和住院患者送检标本中检出的349株肺炎链球菌,使用KB法和Etest法测定肺炎链球菌对青霉素、红霉素、复发新诺明等8种常用抗生素的敏感性。结果:349株肺炎链球菌中,对青霉素敏感的有221株(63.3%),中介27株(7.8%),耐药101株(28.9%)。其中红霉素的耐药率最高为96.80%,其次是复方新诺明耐药率为87.80%。对万古霉素和左氧氟沙星的敏感率最高,分别为100%和99%。结论:本院肺炎链球菌对多种抗菌药物耐药率均较高,临床应合理选择抗生素,保证治疗的有效性,同时减少耐青霉素肺炎链球菌的产生。     

肺炎链球菌青霉素MIC与PBP变异的关系

目的探讨肺炎链球菌(Sp)青霉素抗生素最小抑菌质量浓度(MIC)与青霉素结合蛋白(PBP)1A、2B和2X变异的关系。方法用MIC法对51株Sp进行青霉素药敏试验,并提取每株Sp的DNA,分别对其PBP1A、PBP2B中编码青霉素结合区域进行PCR扩增然后测序,并用软件进行序列比对,分析PBP1A、2B保守序列的氨基酸置换。结果在所有MIC≤1 mg/L的青霉素敏感Sp(PSSP)中均未发现PBP1A突变,而在MIC>1 mg/L时多数菌株出现Thr574-(Asn)、Ser575-Thr、Gln576-Gly(、Phe)577-(Tyr)4个连续残基的置换变异和Thr371-Ser的置换。PBP2B在所有MIC≤1 mg/L的PSSP中均未发生任何突变;而当MIC分别大于1 mg/L和2 mg/L时,均出现445Thr-Ala和Glu338-Gly。结论 PBP1A、PBP2B基因突变分别可导致其表达的PBP1A、PBP2B结构异常,与青霉素(包括其他β内酰胺类抗生素)亲和力下降,继而青霉素耐药。     

呼吸道感染婴幼儿肺炎链球菌的耐药性及青霉素结合蛋白基因突变分析

目的 分析呼吸道感染婴幼儿肺炎链球菌的耐药性及青霉素结合蛋白基因(PBPs)突变情况.方法 收集呼吸道感染婴幼儿痰或咽拭子标本中分离出的24株肺炎链球菌,进行菌株鉴定和药敏试验.对筛选出的耐青霉素肺炎链球菌行耐药性分析,并提取菌株DNA后分析PBPs基因突变情况.结果 24株肺炎链球菌中,青霉素不敏感菌株有13株,占54.2％;13株青霉素不敏感菌株对对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸和头孢呋辛不敏感率较高,分别为100％、76.9％和76.9％;对头孢噻肟、头孢曲松和头孢吡肟的不敏感率较低,分别为46.2％、38.5％和30.8％;对美罗培南和万古霉素的不敏感率最低,分别为15.4％和0.13株青霉素不敏感菌株未发现pbp1a基因突变菌株,5株存在pbp2b基因突变,占38.5％.结论 青霉素不敏感肺炎链球菌存在对多种抗生素耐药情况,而pbp2b基因突变可能是导致肺炎链球菌耐药的重要原因,应加强肺炎链球菌耐药性及PBP基因突变监测.     

侵袭性肺炎链球菌148株血清型、耐药性及分子分型研究

目的 研究临床分离的侵袭性肺炎链球菌血清型分布、耐药性及分子流行病学特点,为抗生素的应用和免疫预防提供参考依据.方法 收集2005年1月至2008年8月全国15个地区148株来自血液、脑脊液等侵袭性感染部位的肺炎链球菌.采用琼脂稀释法测定青霉素等抗生素对148株肺炎链球菌的最低抑菌浓度(MIC);采用简易棋盘式肺炎链球菌分型系统和荚膜肿胀实验进行血清分型;多位点序列分型(MIST)技术对53株19群菌株进行基因分型,了解其与国际流行株的关系.结果 血清分型共检出20个血清型/群,主要集中在19A、19F、3、23F、5、6、14和9血清型/群,共计105株,占70.9%,以19A(22.3%,33/148)、19F(16.9%,25/148)最常见,其次为3群(7.4%,11/148)和23F(6.8%,10/148).7价疫苗(PCV7)在2岁以下儿童中的覆盖率为33.3%(12/36).PCV7相关血清型肺炎链球菌对阿莫西林/克拉维酸、红霉素等耐药率均明显高于非疫苗相关血清型菌株(P<0.05).53株19群肺炎链球菌MIST分析共检出9种序列型(ST),其中以ST320(28/53,52.8%)和ST271(12/53,22.6%)为主.结论 我国侵袭性肺炎链球菌血清分型以19A、19F、3和23F血清型为主.侵袭性肺炎链球菌耐药情况严重.     

苏州地区2010～2011年儿童临床分离肺炎链球菌耐药监测

目的监测苏州地区儿童肺炎链球菌的临床分布及耐药性,为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法对2010年1月～2011年6月门诊与住院患儿各临床标本分离的1 521株肺炎链球菌,采用梅里埃链球菌和肺炎球菌药敏试剂盒ATB STREP5进行MIC测定。结果 1 521株肺炎链球菌对青霉素不敏感率为43.6%,其中耐青霉素肺炎链球菌（PRSP）4.6%;低耐青霉素肺炎链球菌（PISP）39.1%。对阿莫西林、头孢噻肟、红霉素、克林霉素、四环素、复方新诺明、喹奴普丁/达福普丁,氯霉素,左旋氧氟沙星的耐药率为20.6%,21.0%,99.3%,97.6%,76.2%,92.0%,75.3%,7.0%,0.13%,未检出耐万古霉素肺炎链球菌。结论苏州地区儿童肺炎链球菌对青霉素耐药以低耐为主,青霉素仍是一个有效药物。对耐青霉素肺炎链球菌需做细菌药敏试验后再根据药敏结果合理选择用药。     

保定市致病性肺炎链球菌分子分型研究

目的了解保定市肺炎链球菌血清型分布,为肺炎疫苗的免疫预防提供依据。方法收集2013-2015年保定市3家医院临床分离的非重复性肺炎链球菌210株,采用PCR方法进行鉴定和分型,并对实验结果进行分析。结果210株肺炎链球菌主要菌型有19F、19A、6A/6B,分别达到30.0%、16.7%、11.0%;55株成人肺炎链球菌主要菌型有19F、5、19A血清型(群),分别达到18.2%、16.4%、14.5%;155株儿童肺炎链球菌主要菌型有19F、19A、6A/6B血清型(群),分别达到34.2%、17.4%、14.7%;31株侵袭性儿童肺炎链球菌主要菌型有19F、19A、6A/6B、14和1血清型(群),分别达到25.8%、16.1%、12.9%、12.9%、9.7%。结论肺炎链球菌血清型分布在地区之间、儿童与成人之间及侵袭性与非侵袭性菌株之间存在差异,应综合考虑以上因素,合理选用预防疫苗。     

苏州地区临床分离儿童肺炎链球菌耐药情况分析

 目的 检测苏州地区2006年临床分离的儿童肺炎链球菌对常用抗生素的耐药情况。方法 从新入院患儿鼻咽部采集标本,经实验室分离,并采用奥普托欣和（或）去氧胆酸钠鉴定为肺炎链球菌后,采用纸片扩散法（Kirby-Bauer法）和E-test法对分离到的89株肺炎链球菌进行抗生素的敏感性试验。结果 89株肺炎链球菌中,青霉素不敏感菌株47株,为52.8%,红霉素、四环素、克林霉素、复方新诺明和氯霉素的耐药率分别为88.8%,78.7%,86.5%,55.1%和10.1%,多重耐药率为89.9%。对万古霉素,氧氟沙星100%敏感。结论 苏州地区儿童肺炎链球菌的耐药情况严峻,本研究结果对肺炎链球菌感染的治疗和抗菌药物的选择具有参考价值。     

广州地区肺炎住院患儿感染肺炎链球菌的血清型分布及耐药性研究

目的了解广州地区肺炎住院的患儿感染肺炎链球菌的耐药性及血清型分布情况。方法用吸痰法采集患儿痰标本进行涂片，革兰氏染色镜检，合格痰标本划线接种血平板，用E-test法检测分离到的肺炎链球菌对青霉素、阿莫西林、头孢曲松、头孢呋辛、亚胺培南、氧氟沙星、万古霉素、红霉素和克林霉素9种药物的耐药性，采用K-B法检测四环素、复方新诺明的耐药性，并采用荚膜肿胀技术对分离到的79株肺炎链球菌进行血清分型。结果79株肺炎链球菌中青霉素耐药肺炎链球菌（PRSP）11．4％，青霉素中介肺炎链球菌（PISP）77．2％，青霉素敏感肺炎链球菌（PSSP）11．4％，对红霉素、克林霉素的耐药率分别为100％和93．7％，对阿莫西林、氧氟沙星、万古霉素的耐药率均为0，对头孢曲松、头孢呋辛、亚胺培南的耐药率分别为3．8％、72．2％、2．5％。79株肺炎链球菌中只有1株PSSP仅对红霉素耐药．78株肺炎链球菌对两种以上药物耐药．多重耐药率为98．7％（78／79），同时对克林霉素、红霉素、四环素、复方新诺明耐药的菌株65株，占82．3％（65／79）。79株肺炎链球菌血清型分别为19F（70．9％），23F（16．5％），6B（5．1％），4（2．5％），15B（2．5％），不能分型（2．5％），7价疫苗涵盖率为94．9％（75／79）。结论广州地区肺炎住院患儿肺炎链球菌对大环内脂类抗生素红霉素和林可酰胺类抗生素克林霉素耐药情况严重，对二代头孢菌素头孢呋辛耐药率居高，临床治疗儿童肺炎链球菌感染的肺炎应首选阿莫西林和三代头孢菌素。7价疫苗覆盖率高。预防儿童肺炎链球菌感染所致的肺炎，采用7价疫苗可以达到很好效果。     

广州地区患儿流感嗜血杆菌分离株荚膜基因分型的研究

目的用PCR方法进行流感嗜血杆菌荚膜编码基因分型,调查儿童急性呼吸道感染患儿流感嗜血杆菌的感染情况。方法以流感嗜血杆菌荚膜编码基因(bexA)和荚膜分型编码基因(Hi-a、Hi-b)作为靶基因设计引物,用PCR方法扩增标准菌株为ATCC9006、ATCC49247、EQA0609的3个编码基因并测序,在此基础上对临床分离的43株流感嗜血杆菌进行荚膜基因分型研究。结果PCR结果显示标准菌株ATCC49247未扩增出bexA编码基因,ATCC9006扩增出bexA和Hi-a编码基因,EQA0609扩增出为bexA和Hi-b编码基因,并且PCR产物序列与GenBank公布的序列一致性高。临床分离菌株Hi未扩增出bexA、Hi-a及Hi-b编码基因。结论本实验研究表明广州地区儿童急性呼吸道感染患儿所分离的流感嗜血杆菌主要是不可分型的无荚膜菌株。     

Molecular Typing of Leptospira interrogans Strains Isolated from Rattus tanezumi in Guizhou Province, Southwest of China

ObjectiveTo identify and type three leptospires isolated from Rattus tanezumi in Guizhou Province by using three molecular techniques (PFGE, MLVA, and MLST), reveal the molecular characteristic of causative agents of local leptospirosis and evaluate these three molecular methods based on their detection resolution and efficiency.MethodsThree Leptospira strains were isolated from the kidney of Rattus tanezumi and cultured with EMJH medium. PFGE, MLVA, and MLST assays were applied to type the three strains isolated from Rattus tanezumi in Guizhou Province.ResultsPFGE, MLVA, and MLST typing showed that the three leptospiral isolates matched with leptospiral serogroup Icterohaemorrhagiae serovar Lai. The findings of the genotyping methods were consistent. MLVA and MLST defined genotypes, whereas PFGE allowed the recognition of additional subgroups within the genotypes, and the findings of molecular typing were also consistent with those of traditional techniques.ConclusionThree leptospiral isolates from Guizhou Province matched with leptospiral serogroup Icterohaemorrhagiae serovar Lai, and PFGE, MLVA, and MLST, as reliable molecular techniques for identifying and typing of Leptospira interrogans, would contribute to the active surveillance, outbreak investigation and source tracking for leptospirosis in Guizhou Province.     

肺炎链球菌耐药状况分析

目的 了解肺炎链球菌对常用抗生素的耐药情况,以指导临床合理用药.方法 对2005年3月～2006年2月来院就诊的呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物、痰进行细菌培养,用K-B纸片及E-test法对分离株进行药物敏感试验.结果 分离出肺炎链球菌51株,肺炎链球菌对青霉素的耐药率为50.98%,对其他抗生素耐药率为头孢呋辛35.29%、红霉素66.67%、克林霉素64.71%、四环素78.43%,复方磺胺甲基异噁唑68.63%.而对阿莫西林/克拉维酸耐药率仅为7.84%、头孢曲松11.76%,有很好的敏感性.PNSSP株多重耐药率及对其他β-内酰胺类抗生素如头孢呋辛、红霉素、克林霉素、复方磺胺甲基异噁唑耐药率明显高于PSSP株.结论 儿童呼吸道感染的肺炎链球菌耐药形势严峻.     

广州地区医院脓肿、病灶分泌物及创面感染病原菌群分布与耐药性特点

目的了解广州地区临床脓肿、病灶分泌物及创面感染分离病原菌群分布与耐药性特点。方法耐药性监测网成员医院按《全国临床检验操作规程》要求分离临床送检的各种包括脓肿、病灶分泌物及创面的细菌培养标本,药物敏感试验采用纸片扩散法,耐药性数据分析采用WHONET4软件。结果2002-2004年间各种临床标本共分离感染病原菌20087株,其中脓肿、病灶分泌物及创面等标本分离的病原菌2659株,占13.2%。发生脓肿、分泌物及创面感染的患者主要是青壮年,门诊患者占20%。引起脓肿等感染病原菌以革兰阳性球菌为主,占50.5%。其中葡萄球菌的耐药性及耐甲氧西林（MRS）检出率低于其他标本类型分离的葡萄球菌;铜绿假单胞菌对数种抗生素的耐药率比2002全国资料低,差异有统计学意义;大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌对所监测抗生素的耐药率则与2002全国资料较为接近。结论不同的标本类型其分离株对抗生素耐药特性有所不同,广州地区引起脓肿、病灶及创面等感染的主要病原菌对抗生素的耐药性一般要比其他标本分离菌低。     

广东省肇庆市肺炎链球菌分子分型及毒力基因检测

目的 了解肺炎链球菌常见血清型及其5种毒力基因的携带情况,为新型疫苗开发研究和提高临床诊断提供基础科学依据。方法 选取2016年4月—2018年12月肇庆市第一人民医院住院及门诊患者分离200株肺炎链球菌,采用多重PCR分子分型方法进行血清型分型,再用单因子血清对6A/6B型进行细分。利用PCR方法对肺炎链球菌5种毒力基因（ply、pspA、nanA、psaA、lytA）进行检测,使用SPSS 19.0进行统计学分析。结果 200株肺炎链球菌来自男性患者144例,女性患者56例。0~2岁的患者最多（占67.5%）,其次是≥50岁患者为16.5%。标本类型以痰为主,占92.0%。多重PCR法分型率为95.0%,血清型以19F（37.5%）、6B(12.0%)、23F(10.0%)、19A(9.0%)、3(6.5%)、14(6%)、15B/15C(5.5%)为主。5种毒力基因检测阳性率分别为ply 93.5%、pspA 85.0%、nanA 88.5%、psaA 90.5%、lytA 93.0%。8株血培养、1株脑脊液培养及19A、3和35A/35C/42三种血清型的5种毒力基因阳性率均为100.0%。血清型14型和5型的 5种毒力基因阳性率都较低。结论 肇庆市200株肺炎链球菌的血清型以19F、6B、23F、19A、3、14、15B/15C为主,2岁以下的儿童和老年人感染率高。5种毒力基因保守性高,大部分菌株均存在。血清型不同,5种毒力基因的存在也略有不同,可为新型疫苗开发及疾病预防提供有利的依据。     

广州老年人恙虫病50例临床分析

目的分析广州地区老年人恙虫病临床特点,以期降低老年人恙虫病的误诊率、漏诊率及病死率。方法将1983年5月至2008年1月收治的50例广州地区老年人恙虫病从流行病学、主要临床表现、实验室及辅助检查、预后等方面进行回顾性分析研究。结果广州地区老年人恙虫病仍具有发热、焦痂溃疡、淋巴结肿大的特点,但皮疹少见,外周血白细胞数多升高,血小板降低多见,起病隐匿,临床表现趋向多样化、复杂化,多脏器损害多见,易发生误诊、漏诊,病死率达14%。结论老年人恙虫病从流行病学、临床特征、实验室检查方面趋向不典型,极易造成误诊、漏诊,且病死率高,尤其是对病程超过两周的患者,应引起临床医师的高度重视。     

肺炎链球菌HMG-CoA合成酶基因克隆和表达

目的 克隆、表达肺炎链球菌3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A synthase, HMGS).方法 采用基因工程技术克隆肺炎链球菌HMGS基因,对T226进行反突变,构建重组表达载体pET-HMGSm并表达HMGS.结果 序列分析表明该基因与文献中报道的肺炎链球菌HMGS基因(No.AF290098)相比较有98.5%的同源性,存在18个核苷酸的差异,其中有2个核苷酸的不同导致编码的氨基酸改变,分别是Asn259→Ser,Ala349→Val,该基因编码蛋白由398个氨基酸组成.结论 优化重组HMGS表达条件,在18 ℃ 0.4 mmol/L IPTG诱导表达4 h,用Ni-NTA层析柱分离纯化得到46 kDa特异性蛋白.     

Molecular epidemiology of serotype 19A Streptococcus pneumoniae isolated from children in Beijing, 1997–2006

Background  Despite the prevalence of Streptococcus pneumoniae serotype 19A, the molecular characteristics of this serotype are yet to be fully elucidated. The aim of this study was therefore to determine the homology of the serotype 19A in China.

Methods  Pulsed-field gel electrophoresis and multilocus sequence typing were done to these forty-nine serotype 19A isolates to investigate the relationship between the strains prevalent in Beijing and other regions.

Results  From 1997 to 2006, the percentage of serotype 19A isolates increased. The susceptibility rate to penicillin and amoxicillin decreased and the resistance rate to cefuroxime increased. ST320 was the most prevalent ST, followed by ST3546. There were six new STs identified in our study. The serotype 19A strains were classified into six different pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) patterns. ST320, which was associated with two different PFGE patterns (A and D), accounted for 32 isolates, and ST3546, which was associated with two PFGE patterns (B and E), accounted for eight isolates.

Conclusions  From 2003 onwards, ST320 was the most common ST and the rate of resistance to cefuroxime increased significantly. Further long-term surveys of Streptococcus pneumoniae serotype 19A are required to monitor ST prevalence and antimicrobial resistance in this important human pathogen.