压力作用时间对人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1的影响

目的:探讨压力作用不同时间对人牙周膜成纤维细胞表达TGF-β1的影响.方法:本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加1.0MPa的压力,分别持续1Omin、30min、50min、通过酶联免疫吸附实验,分别检测细胞受力后6h、12h、18h、24h时TGF-β1的含量.结果:加载1Omin组在细胞受力后的各个时段TGF-β1含量与对照组相比无显著性差异(P>0.05).加载30min组(0.51±0.06)和加载50min组(0.46±0.06)TGF-β1含量在细胞受力后的第12h同对照组(0.78±0.08)相比明显降低(P<0.05).结论:在一定加载时间内,人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1量随着压力作用时间的延长而有所降低.     

转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的观察转化生长因子．晶和碱性成纤维细胞生长因子单独或联合应用对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响。方法采用组织块培养技术进行人牙周膜成纤维细胞的体外培养，对照组采用含小牛血清的DMEM培养液，实验组分别在培养液中加入不同浓度的转化生长因子-β1或碱性成纤维细胞生长因子或两者联合加入，通过四唑盐比色法观察细胞增殖情况。结果转化生长因子-β1或碱性成纤维细胞生长因子单独作用后，人牙周膜成纤维细胞较对照组有显著的增殖，而两者联合作用后的增殖较各自单独作用时明显（P〈0．05）。结论转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子两者联合具有促进人牙周膜成纤维细胞增殖的作用。     

HGF在人牙周膜成纤维细胞中的表达

目的：观察HGF在人牙周膜成纤维细胞中的表达及探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-1β（IL-1β）与HGF之间的关系。方法：分别采用IL-1β梯度浓度、最佳干预浓度和TGF-β1梯度浓度干预第5代人牙周膜成纤维细胞,并运用酶联免疫技术检测人牙周膜成纤维细胞的上清液中HGF的表达。结果：经IL-1β单独作用,人牙周膜成纤维细胞的上清液中HGF的含量较空白对照组高,并优选出IL-1β的最佳干预浓度为10 ng/mL。当一定浓度的TGF-β1和10 ng/mL的IL-1β联合干预人牙周膜成纤维细胞,该细胞上清液中HGF的含量较单独IL-1β作用组低。结论：TGF-β1能够抑制IL-1β诱导的人牙周膜成纤维细胞分泌HGF。     

白细胞介素－1β、转化生长因子－β对人牙周膜成纤维细胞DNA合成的影响

目的：观察白细胞介素－１β（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１β，ＩＬ－１β）和转化生长因子－β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β，ＴＧＦ－β）单独作用、组合后对人牙周膜成纤维细胞（ｈｕｍａｎｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａｍｅｎｔｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＨＰＬＦ）的ＤＮＡ合成量的影响。方法：用３Ｈ胸腺嘧啶脱氧核苷细胞内掺入法。结果：ＤＮＡ合成量显著增多。浓度为０．０１ｎｇ／ｍｌ的ＴＧＦ－β与浓度为１０ｕ／ｍｌ的ＩＬ－１β组合后对ＨＰＬＦ的ＤＮＡ合成量与单纯ＩＬ－１β组间无显著差异（Ｐ＞０．０５），而０．１ｎｇ／ｍｌ、１．０ｎｇ／ｍｌ的ＴＧＦ－β与三种浓度ＩＬ－１β组合后，ＨＰＬＦ的ＤＮＡ合成量显著高于单纯的ＩＬ－１β组。结论：ＩＬ－１β、ＴＧＦ－β对ＨＰＬＦ的ＤＮＡ合成有促进作用，这两种细胞因子组合并非各个细胞因子作用的简单相加     

转化生长因子-β_1和碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的观察转化生长因子-β_1和碱性成纤维细胞生长因子单独或联合应用对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响。方法采用组织块培养技术进行人牙周膜成纤维细胞的体外培养,对照组采用含小牛血清的DMEM培养液,实验组分别在培养液中加入不同浓度的转化生长因子-β_1或碱性成纤维细胞生长因子或两者联合加入,通过四唑盐比色法观察细胞增殖情况。结果转化生长因子-β_1或碱性成纤维细胞生长因子单独作用后,人牙周膜成纤维细胞较对照组有显著的增殖,而两者联合作用后的增殖较各自单独作用时明显(P<0.05)。结论转化生长因子-β_1和碱性成纤维细胞生长因子两者联合具有促进人牙周膜成纤维细胞增殖的作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响,探讨bFGF在牙周组织再生中的意义.方法 体外培养人牙周膜成纤维细胞,分别用质量浓度0.1、1.0、10.0ng·mL-1的bFGF刺激细胞,培养24、48、72 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA表达的变化.结果 bFGF可促进入牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA的合成,在培养24、48、72 h时,1.0 ng·mL-1组整合素β1亚单位表达均明显高于对照组;培养72 h时各实验组整合素β1亚单位表达均明显高于培养24、48 h时..结论 bFGF通过提高整合素β1亚单位mRNA的表达,促进牙周膜成纤维细胞的黏附,在牙周组织修复再生中起作用.     

白细胞介素—1β,转化生长因子—β对人牙周膜成纤维细胞D…

观察白细胞介素－１β和转化生长因子－β单儿作用、组合后对人牙周膜成纤维细胞的ＤＮＡ合成量的影响。用＾３Ｈ胸腺嘧啶脱氧核苷细胞内掺入法。结果ＤＮＡ合成量显著增多。     

机械压力对人牙周膜成纤维细胞增殖活力的影响

目的:探讨不同力值和不同时间的压力对人牙周膜成纤维细胞增殖活力的影响。方法:采用细胞加载装置,对细胞分别施加0、0.25、0.5、1.0 MPa的压力30 min;施加1.0 MPa的压力,分别持续10、30、50 min,通过四唑盐比色实验(MTT法)检测细胞受力后6、12、18、24、30、36 h的OD值。结果:0.25、0.5 MPa组的OD值与对照组无显著性差异(P>0.05);1.0 MPa压力下,加载30 min和加载50 min组有显著性差异(P<0.05),表现为受力后6 h细胞OD值即明显降低,12 h进一步降低,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),24 h后细胞OD值与对照组无差异。结论:人牙周膜成纤维细胞的增殖活力和压力值以及压力作用时间存在一定的关系;细胞的增殖活力随着压力值的增加、压力作用时间的延长而有所降低,但这种影响是可逆的。     

白细胞介素-1β对人牙周膜成纤维细胞中MCP-1表达影响的研究

目的:探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平的影响。方法:体外分离培养的人牙周膜成纤维细胞随机分为实验组和对照组,实验组细胞以不同浓度IL-1β(1、5、10、25 ng/mL)作用24 h;对照组细胞则不加IL-1β作用。分别采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测人牙周膜成纤维细胞中MCP-1 mRNA的表达;采用免疫荧光技术观察MCP-1的表达情况;采用Western blot方法检测其蛋白表达变化。结果:对照组hPDLFs中可见微弱的MCP-1表达;实验组hPDLFs经IL-1β刺激后,MCP-1在mRNA和蛋白水平表达都增强,这种调节作用在10 ng/mL IL-1β的作用浓度时最明显(P<0.05)。结论:在IL-1β介导环境下,hPDLFs中MCP-1的表达增高,而MCP-1表达增高可能是引起外周血单核细胞向局部炎症牙周组织募集的机制之一。     

模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞细胞周期的影响

临床常见咬合创伤引起牙齿松动、牙周膜腔增宽、牙槽骨吸收。牙周膜受损与牙周膜组织及人牙周膜成纤维细胞(hum an periodontal ligam ent fibrob last,HPLF)的生命活动异常有密切关系[1]。本组应用可控压力细胞加载装置,对HPLF加载不同大小的间断性压力[2],用流式细胞仪观察不同间断性模拟咬合压力对HPLF细胞周期的影响,推测50、100 kPa间断性压力对细胞分裂有抑制作用。1材料和方法1.1牙周膜成纤维细胞原代培养和细胞加载方法取青少年因正畸需要而拔除的前磨牙,组织块法[3]原代培养,反复贴壁纯化。置37℃,50 mL/L CO2,100%湿度CO2…     

模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响

目的：观察模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞环氧化酶-2(COX-2)基因表达的影响。方法：原代培养人牙周膜成纤维细胞，应用可控压力细胞加载装置模拟咬合压力，分别施加30、60、90kPa的间歇性压力，每次15min，每天3次，在3、5d后提取细胞总RNA，定量后点于尼龙膜上，同时利用引物扩增COX-2基因的一段特异性片段作为cDNA探针，将探针同位素标记后与膜杂交，以观察COX-2在mRNA水平表达的变化。结果：加载模拟咬合压力的人牙周膜成纤维细胞COX-2表达水平明显高于对照组，而且在一定范围内表达水平与加压力值成剂量依赖关系；各加压组加压3d与5d之间细胞COX-2mRNA表达无明显差异。结论：加载模拟咬合压力条件下培养的人牙周膜成纤维细胞COX-2基因表达增高。     

TGFβ和rhBMP2对人牙周膜成纤维细胞的作用

目的 研究转化生长因子β（TGFβ）和重组人骨形成蛋白2（rhBMP2)对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs)增殖和分化的作用。方法 观察TGFβ和rhBMP2单独、同时和相继应用对培养的HPDLFs增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性，骨钙素（OC）合成及矿化结节形成的作用。结果 TGFβ刺激HPDLFs增殖，对ALP活性，OC合成和矿化结节形成无明显影响；rhBMP2对HPDLFs增殖无明显作用。却显著提高其ALP活性，刺激OC合成和矿化结节形成；两者同时应用时对细胞增殖和分化的作用居于单独作用之间；先应用TGFβ对随后rhBMP2的促分化作用无明显影响；先应用rhBMP2再应用TGFβ对HPDLFs的分化具有显著的刺激作用。结论 RhBMP2能刺激HPDLFs表达成骨细胞表型，TGFβ对BMP2诱导的细胞分化具有明显的刺激作用。两者可能在促进HPDLFs向成骨细胞表型分化的不同阶段发挥作用。     

转化生长因子β对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

目的 研究转化生长因子β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－β,ＴＧＦ－β）对人牙周膜成纤维细胞（ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ,ＨＰＤＬＦｓ）的生物学作用。方法 原代培养ＨＰＤＬＦｓ,并观察ＴＧＦ－β对ＨＰＤＬＦｓ的增殖、碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ,ＡＬＰ）活性、骨钙素（ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ,ＯＣ）合成及矿化结节形成的作用。结果 ０．００５０～０．１０００ｍｇ／ＬＴＧＦ－β可明显刺激ＨＰＤＬＦｓ的增殖,０．００５０ｍｇ／ＬＴＧＦ－β可显著提高ＨＰＤＬＦｓ的ＡＬＰ活性,０．０００５～０．１０００ｍｇ／ＬＴＧＦ－β对ＨＰＤＬＦｓ合成ＯＣ和矿化结节的形成无明显影响。结论 ＴＧＦ－β对ＨＰＤＬＦｓ的作用呈剂量依赖性。ＴＧＦ－     

IL-1β对人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响

目的:以体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)为研究对象,观察不同浓度的白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化剂配体(RANKL)mR-NA表达的影响。方法:组织块法体外原代培养HPDLF并鉴定,以第5代HPDLF作为实验靶细胞,分别用不同浓度(0、0.01、0.1、1、10、100 ng/mL)的IL-1β进行干预,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HPDLF中OPG、RANKL mRNA的表达。结果:IL-1β在0.01～10 ng/mL浓度范围内能明显上调HPDLF中OPG mRNA的表达(P<0.05),并在0.1 ng/mL时上调作用达到最大(P<0.05)。此后,随着IL-1β浓度的增加,OPG mRNA的表达量逐渐减少。IL-1β在0.01～100 ng/mL浓度范围内均可明显上调HPDLF中RANKL、RANKL/OPGmRNA的表达(P<0.05),且呈剂量依赖性,即随着IL-1β浓度增加,HPDLF中RANKL、RANKL/OPG mRNA的表达也逐渐增加,各浓度组两两比较除10 ng/mL与100 ng/mL相比无显著性差异外,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-1β可促进HPDLF中RANKL mRNA的表达,上调RANKL/OPG mRNA的比值。     

雌激素受体β对牙周膜成纤维细胞OPG表达的影响

目的:研究雌激素受体β(ERβ)对人牙周膜成纤维细胞(HPLF)的骨保护因子(OPG)表达的影响.方法:合成ERβ基因的干涉载体,以脂质体法转染至HPLF中,Western blot及RT-PCR法检测转染效率.鉴定后用雌激素干预ERβ十涉载体转染和未经转染的HPLF,研究细胞OPG的表达情况.结果:ERβ干涉载体可特异地抑制HPLF中ERβ的表达.雌激素明显增强了未转染的HPLF的OPG表达,但对稳定转染的HPLF的OPG表达没有显著影响.结论:雌激素主要通过ERβ促进人牙周膜成纤维细胞OPG的表达.     

静态拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞的影响

目的：研究人牙周膜成纤维细胞(PDLF)在机械拉伸应变作用下，细胞和细胞核投影面积及其细胞骨架的改变情况，探讨PDLF的形态、功能和应变之间的关系。方法：采用自制的细胞体外静态机械加载装置用不同的拉伸应变量加力于细胞上，通过激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架的形态及其改变情况，并进行统计分析。结果：在8％、12％、16％力值组，细胞和细胞核投影面积随着加力时间和力值的增加而每天递增，肌动蛋白纤维也随之逐渐增粗，排列更有规律；而在20％力值组，其结果则反之。结论：静态拉伸应变可影响牙周膜成纤维细胞的骨架。     

牛血小板衍化生长因子对人牙周膜成纤维细胞超微结构的影响

目的：对经牛血小板衍化生长因子作用的人牙周膜成纤维细胞超微结构进行观察。方法：透射电镜观察。结果：发现细胞超微结构发生了明显的变化，包括粗面内质网扩张和增多，发达的线粒体与大量的多聚核糖体形成，胞核增大，核内常染色质增多等。结论：牛血小板衍化生长因子可促进人牙周膜成纤维细胞ＤＮＡ、ＲＮＡ、蛋白质合成旺盛，代谢、增殖活跃。提示这些变化可能与细胞在该因子作用下生物学功能增强有密切关系。     

IL-1β对人牙周膜纤维细胞ALP活性的影响

本实验中作者定量研究了人基因重组型IL—1对人体牙膜纤维细胞活性的影响,目的在于探讨IL-1β在尖周病,牙周病修复过程中的作用。结果显示,该细胞经IL-1β作用后,ALP活性显著低于空白对照组,随IL-1β作用浓度加大,ALP活性降低更力口显著。表明,IL-1β对人牙周膜衔纤维细胞的ALP活性有显著抑制效应,在尖周,牙周病变修复过程中可能具有阻碍硬组织钙化的作用。     

体外培养碱性成纤维细胞因子对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

目的：探讨体外培养过程中,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）生物学特性的影响。方法：体外分离培养人牙周膜成纤维细胞并鉴定,加入不同浓度bFGF（1ng／ml、10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml）培养,MTT方法检测细胞增殖情况;并对细胞进行矿化诱导,检测细胞的碱性磷酸酶活性。结果：hPDLFs呈星形或长梭形,免疫组化波丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证实该细胞来源可靠。bFGF在一定浓度范围内,与细胞增殖成正比,而在本实验培养条件下（10％FBS）bFGF最大效应浓度为10ng／ml。矿化诱导条件下,碱性磷酸酶活性明显增加,在联合应用bFGF的情况下,100ng／ml组碱性磷酸酶活性明显高于其他组。结论：不同浓度bFGF对人牙周膜成纤维细胞生物学行为的影响不同,在一定浓度条件下,低浓度bFGF促进人牙周膜成纤维细胞的增殖,而高浓度bFGF作用于人牙周膜成纤维细胞可能更易于分化。     

机械应力对人牙周膜成纤维细胞整合素β1mRNA表达的调节

目的观察机械力刺激对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的影响。方法用Forcel四点弯曲加载装置通过对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别施加不同动态张、压应力（强度为1 000、2 000、4 000 μstrain，加力时间为0、0.5、1、4、8、12 h），采用实时荧光定量PCR法研究机械力对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的影响。结果施加动态的张、压应力后，人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达量下调，这种下调变化与所施加应力的性质、大小和作用持续时间相关。人牙周膜成纤维细胞整合素β1对张、压应力刺激的感应不完全一致，机械力刺激越强，整合素β1表达越明显。结论动态张、压应力刺激在本实验提供的微应力范围内可以促进目的基因mRNA表达改变，不同的机械力对细胞整合素β1效应不同。