褪黑素对大鼠体温及活动度昼夜节律的影响

目的　了解外源性褪黑素对大鼠体温及活动度昼夜节律的影响及其可能的调节机制。方法　正常光照条件下,24h连续记录大鼠的体温及活动度的变化,以不同剂量褪黑素在不同的昼夜时间给药观察体温和活动度节律的变化。结果　大鼠的体温及活动度存在昼夜节律性,给药后昼夜节律性不消失;但体温振幅减小,中值降低。黑暗中期给药后,峰值位相显著延迟;活动度振幅增加,中值显著降低,峰值位相延迟。结论　外源性褪黑素不能使体温或活动度的昼夜节律消失,而只是改变昼夜节律的参数。褪黑素可分别调节体温和活动度的昼夜节律,但对活动度的调节作用更为明显。     

褪黑素对内源性生理节律的影响

目的为进一步确证褪黑素(Melatonin；MT)在内源性生物钟系统中的作用。方法笔者观察了切除松果腺及注射MT对糖皮质激素、氨基酸类神经递质、免疫功能、痛觉敏感性和体温等生理指标昼夜节律的影响。结果切除松果腺使皮质酮的昼夜节律曲线的中值升高，振幅变小，峰值位相后移；使下丘脑内r氨基丁酸、天冬氨酸昼夜节律的中值下降，振幅变小，使谷氨酸递质的峰值位相后移。振幅变小，使外周血WBC数、淋巴细胞百分率、T细胞百分率、血清溶血素昼夜节律的中值下降，振幅变小，峰值位相后移；使痛觉敏感性昼夜节律的中值升高，振幅变小。注射MT则对抗切除松果腺产生的影响，使正常鼠及松果腺切除鼠皮质酮的昼夜节律中值下降，达峰时间提前；使r氨基丁酸、天冬氨酸昼夜节律的中值升高，并使谷氨酸节律的峰值位相提前；使WBC、淋巴细胞百分率，T细胞百分率，血清溶血素昼夜节律的中值提高。结论MT对体内不同生理节律指标的节律参数产生影响，校准内源性固有节律，使其与环境周期一致，可能起到内源性授时因子功能。     

不同时辰针刺对"阴虚"、"阳虚"大鼠体温昼夜节律影响的研究

观察在子、午、卯、酉不同时辰电针"肾俞"穴对"阴虚"、"阳虚"大鼠体温昼夜节津的调整作用.结果发现,正常大鼠的体温具有明显的昼夜节律性变化,峰相位接近暗置期的中点;"阳虚"大鼠体温昼夜节律消失,节律中值显著降低,振幅下降,峰相位超前;"阴虚"大鼠的体温仍保持昼夜节律性波动,节律中值、振幅有升高趋势,峰相位迟后.不同时辰针刺对"阳虚"、"阴虚"大鼠体温昼夜节律的峰相位有不同的影响:酉时施刺能有效恢复"阳虚"大鼠的体温节律相位;卯时施刺对"阴虚"大鼠的体温节律相位的恢复作用最为明显.     

辰,戌时辰四君子汤治疗对“脾虚证”大鼠血清胃泌素昼夜节…

观察研究了四君子汤在辰、戌时辰治疗“脾虚证”对大鼠血清胃泌素含量及其昼夜节律性的影响。结果发现，正常大鼠血清胃泌素含量有明显的昼夜节律性，峰相位在０８：４０，“脾虚证”大鼠血清胃泌素含量下降，节律性消失，节律中值及振幅显著降低；辰时治疗能显著提高“脾虚证”大鼠血清胃泌素水平，恢复其节律性，提高节律中值及振幅；戌时治疗能够提高“脾虚证”大鼠血清胃泌素总体水平，但对其节律性的恢复作用不明显。     

加味四逆散分时给药对应激性抑郁症大鼠下丘脑SCN生物钟基因的表达及其昼夜节律的影响

目的:研究中药复方加味四逆散分时给药对应激性抑郁症大鼠下丘脑视交叉上核(SCN)生物钟基因的表达及其昼夜节律的影响。方法:采用慢性不可预计性轻度应激建立大鼠应激抑郁模型。采用RT-PCR法及余弦节律分析法观察分析抑郁症大鼠下丘脑SCN Bmal1、Clock的表达及其昼夜节律的变化。结果:大鼠下丘脑SCN Bmal1在3个时间点表达增强,SCN Clock在5个时间点表达增强,2~(-△△Ct)的中值、峰值、谷值均明显上升,振幅增大,时相提前。结论:加味四逆散卯、酉时给药主要是通过调节下丘脑SCN中Bmal1和Clock的表达及其时间节律达到抗抑郁的效应。     

辰、戌时辰四君子汤治疗对“脾虚证”大鼠血清胃泌素昼夜节律性的影响

观察研究了四君子汤在辰、戌时辰治疗“脾虚证”对大鼠血清胃泌素含量及其昼夜节律性的影响。结果发现,正常大鼠血清胃泌素含量有明显的昼夜节律性（Ｐ＜０．０１）,峰相位在０８：４０,“脾虚证”大鼠血清胃泌素含量下降（Ｐ＜０．０１）,节律性消失（Ｐ＞０．０５）,节律中值及振幅显著降低;辰时治疗能显著提高“脾虚证”大鼠血清胃泌素水平（Ｐ＜０．０５）,恢复其节律性（Ｐ＜０．０１）,提高节律中值及振幅;戌时治疗能够提高“脾虚证”大鼠血清胃泌素总体水平（Ｐ＜０．０５）,但对其节律性的恢复作用不明显。     

佐剂性关节炎家兔血浆5—HIAA昼夜节律的观察及针刺对其之影响

观察了佐剂性关节炎家兔血浆５－羟吲哚乙酸（５－ＨＩＡＡ）昼夜节律变化，以及即刻和疗程针刺对节律的影响。结果表明，正常家兔血浆５－ＨＩＡＡ含量存在着昼夜节律波动；模型动物血浆５－ＨＩＡＡ含量降低，峰值前移，呈病理性的昼夜节律波动；即刻针刺后５－ＨＩ－ＡＡ含量升高，但振幅降低，节律消失；疗程针刺后中值升高，振幅加大，峰相位出现，节律有所整复。     

摘除松果体对踏转轮运动昼夜节律及脑内c-fos表达的影响

目的　探讨松果体调节昼夜节律的作用机制。方法　在持续黑暗条件下 ,2 4h记录大鼠的踏转轮运动 ,观察其昼夜节律性变化 ,同时用免疫细胞化学方法 ,检测视交叉上核 (SCN)中光诱导的Fos蛋白的表达。结果　摘除松果体后 ,踏转轮运动白天少黑夜多的昼夜节律消失 ,Fos蛋白表达减少 ;补充褪黑素后能使之恢复。褪黑素 1(ML 1)受体拮抗剂Luzindole也能使踏转轮运动的昼夜节律消失和Fos蛋白表达减少。而ML 2受体拮抗剂Prazosin则不能。结论　松果体通过分泌褪黑素作用于SCN中的ML 1受体 ,从而调节踏转轮运动的昼夜节律性     

电针对慢性疲劳综合征病理节律的调整作用

目的：探讨电针对慢性疲劳综合征（CFS）病理节律的调整作用。方法：20例CFS患者与20例健康受试者进行对照，CFS患者采用电针肾俞、足三里进行治疗。应用时间生物学的研究方法对患者治疗前后以及健康受试者进行24h核心体温、心率、血压、唾液皮质醇和褪黑素的动态检测。结果：余弦法分析发现，健康组和CFS组治疗后各项指标都具有昼夜节律（P〈0．05）；CFS组治疗前舒张压昼夜节律消失（P〉0．05），其余指标具有昼夜节律（P〈0．05），但CFS组治疗前昼夜节律振幅低于健康对照组，且核心体温、心率、血压和褪黑素峰值相位后移而皮质醇峰值相位超前；电针治疗后，CFS组振幅明显提高，峰值相位接近于健康对照组（P〉0．05）。结论：CFS存在昼夜节律紊乱现象，电针对其具有良性调整作用。     

松果腺对血清皮质酮的影响及其作用部位分析

松果腺对血清皮质酮有抑制作用，对其昼夜节律的中值及峰值位相亦产生影响．松果腺抑制肾上腺增重，切除松果腺使血浆ＡＣＴＨ升高，注射地塞米松或戊巴比妥钠均阻断了松果腺激素褪黑素的降皮质酮作用。提示：松果腺对血清皮质酮的抑制作用是通过其激素——褪黑素实现的，而褪黑素则主要是通过下丘脑－垂体－肾上腺皮质轴起的作用．     

大鼠下丘脑褪黑素受体昼夜节律的研究

目的：研究大鼠下丘脑褪黑素受体（MR）是否存在昼夜节律以及作用机制和意义。方法：应用放射配体结合法检测大鼠MR。每4h处死一批动物,研究不同时间血浆褪黑素（Mel）及下丘脑MR的差异;分别持续光照及注射Mel21d,观察MR结合量及昼夜节律的改变。结果：大鼠血浆Mel尽夜节律研究显示,峰值在暗中期（MD）,谷值在光中期（ML）,注射Mel及持续光照后Mel节律消失。下丘脑MR昼夜节律研究显示,MR结合量峰值在12:00～16:00,谷值在0:00,注射Mel及持续光照后MR昼夜节律依然存在,F检验显示峰谷值间差异非常显。结论：大鼠下丘脑MR有昼夜节律变化,持续光照及Mel注射不影响MR节律,表明下丘脑MR昼夜节律的机制是自主的,具有生理学意义。     

摘除松果体对踏转轮运动昼夜节律及脑内c—fos表达的影响

目的 探讨松果体调节昼夜节律的作用机制。方法 在持续黑暗条件下，２４ｈ记录大鼠的踏转轮运动，观察其昼夜节律性变化，同时用免疫细胞化学方法，检测视交叉上核（ＳＣＮ）中光诱导的Ｆｏｓ蛋白的表达。结果 摘除松果体后，踏转轮运动白天少黑夜多的昼夜节律消失、Ｆｏｓ蛋白表达减少；补充褪黑素后能使之恢复。褪黑素１（ＭＬ－１）受体拮抗剂Ｌｕｚｉｎｄｏｌｅ了也能使踏转轮运动的昼夜节律消失和Ｆｏｓ蛋白表达减少。而ＭＬ     

治疗昼夜节律失调性睡眠障碍的研究进展

光照治疗和应用外源性褪黑素是近几年治疗昼夜节律失调性睡眠障碍的研究热点,然而不恰当的治疗时间不但不能缓解病情反而使病情加重,所以正确评估睡眠时相是决定治疗时间的前提。目前测量核心体温和掌握人在睡眠时内源性褪黑素的释放曲线是评估睡眠时相的主要手段,由于临床工作繁忙,这些方法很少被应用。本文将介绍一种评估睡眠时相的简便方法,以及用光照和褪黑素治疗最具代表性的昼夜节律失调性睡眠障碍,即睡眠时相延迟综合征和睡眠时相提前综合征,对其理论基础和研究进展进行综述。     

松果体对大鼠体温节律调节的研究

目的探讨大鼠体温调节的中枢机制。方法通过毁损ＳＣＮ和松果体以及在松果体中注入ＭＴＸ,观察大鼠一天中体温的变化规律。结果毁损ＳＣＮ后不影响大鼠的体温和昼夜节律性。毁损松果体以及在松果体中注入ＭＴＸ后,大鼠的体温明显下降,并且昼夜节律性也消失。结论松果体通过ＭＴ调节大鼠的体温节律。     

单色光对鸡视网膜钟基因和钟蛋白昼夜节律表达的影响

禽类具有优越的视觉机能,不仅具有明暗觉,还具有色觉。本实验室前期研究发现,单色光可影响家禽的生长发育、免疫机能和生产性能。视网膜作为禽类生物钟3大中枢振荡器之一,可以感受光照,自发产生分子昼夜节律震荡,与下丘脑和松果体共同调节机体的生物节律。因此,本试验采用红、绿、蓝和白光饲养AA肉鸡,研究单色光对视网膜钟基因昼夜节律表达的影响。结果发现,1不同光色下,鸡视网膜钟基因除Clock外,Bmal1、Bmal2、Cry1、Cry2、Per2和Per3均呈昼夜变化,其中Bmal1、Cry1、Per2和Per3呈昼夜节律性表达,而Bmal2、Clock和Cry2不具有节律性。在表达水平上,与白光相比,绿光使正调控基因Bmal1、Bmal2和Clock表达水平升高;而红光使负调控基因Cry1、Cry2、Per2和Per3表达水平升高。在昼夜节律性表达上,与白光相比,绿光使Bmal1中值升高,振幅增大,相位提前;红光则使Bmal1中值降低,振幅减小,相位提前;同时,红光使Cry1和Per3中值升高,相位延迟;蓝光使Cry1、Per2和Per3中值降低,振幅减小。2不同光色下,鸡视网膜钟蛋白BMAL1、CLOCK均呈现昼夜变化,其中BMAL1呈现昼夜节律性表达,CLOCK的表达不具有节律性。在表达水平上,与白光相比,绿光使BMAL1和CLOCK表达水平升高。在昼夜节律性表达上,与白光相比,绿光使BMAL1中值升高,振幅增大,相位提前,红光则使BMAL1中值降低,振幅减小,相位提前。以上结果表明,单色绿光促进鸡视网膜正调控钟基因Bmal1、Bmal2、Clock的表达,使正调控钟蛋白BMAL1和CLOCK水平升高;红光则促进负调控钟基因Cry1、Cry2、Per2、Per3的表达。     

大鼠松果体钟基因Clock的内源性昼夜表达

目的　探讨松果体钟基因Clock表达是否存在内源性昼夜节律。方法　持续黑暗 (DD)光制下饲养SD大鼠 8周后 ,在一昼夜内每隔 4h采集松果体组织 ,提取总RNA ,进行竞争性定量RT PCR ,测定不同昼夜时点(CT)样品中ClockmRNA的相对表达量 ,用余弦函数获取节律参数 ,并经振幅检验分析是否存在昼夜节律。结果　松果体Clock基因mRNA的表达呈现内源性节律振荡变化 (P <0 .0 5 ) ,峰值和谷值分别位于CT17和CT5 ,峰值相位 - 2 5 3.0 3± 15 .5 1,振幅 0 .30± 0 .10 ,中值 0 .87± 0 .0 9。结论　Clock基因在大鼠松果体中存在明显的内源性昼夜节律表达。     

实验性“脾虚证”大鼠脑内单胺递质的变化及其择时治疗效应

采用饥饿、酒醋及大黄等综合方法塑造“脾虚证”大鼠模型，并经四君子汤在辰、戌两时辰治疗，观察大鼠脑内单胺递质的昼夜节律变化，以便从时间生物学的角度，探讨“脾虚证”的时间病理学特征以及药物择时治疗的不同效应。结果显示，与对照组比较，造模组大鼠脑内单胺类递质总体水平下降（Ｐ＜０．０５）、单胺递质节律中值也明显降低（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５），且振幅降低、峰相位偏离正常，５－羟醋酸吲哚节律消失。经四君子汤在辰、戌两时辰治疗后，大鼠脑内单胺递质（多巴胺除外）总体水平较造模组明显提高（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５），其节律中值也显著上升（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。其中，辰时治疗组为部分单胺递质振幅升高，而戌时治疗组各单胺递质振幅均升高，峰相位也较辰时治疗组更接近对照组，其５－羟醋酸吲哚节律已基本恢复至正常。提示：造模组“脾虚证”大鼠脑内单胺递质总体水平低下，昼夜节律消失。予以四君子汤可使大鼠“脾虚证”大鼠模型复健，从择时治疗结果看，戌时比辰时治疗效果好     

单色光对鸡视顶盖生物钟基因昼夜节律表达的影响

生物体的行为活动与生理现象呈周期性波动,并与光照密切相关。本实验室前期研究发现光色能影响肉鸡和蛋鸡的生产性能,且禽类具有优越的视觉机能,视顶盖是禽类视觉信息加工和整合的部位,其结构复杂,那么在视觉传导通路中作为重要视觉中枢的视顶盖昼夜节律变化如何,为此我们将刚出壳的AA肉鸡分别饲养于白、红、绿和蓝光下,采用RT-PCR和Western blot等技术,研究鸡视顶盖是否存在生物钟基因的昼夜节律性表达,以及不同波长单色光对其昼夜节律表达的影响。研究发现,1除Per 2基因外,生物钟基因Clock、Bmal1、Bmal2、Per3、Cry1和Cry2的mRNA在鸡视顶盖中表达呈昼夜节律性。2相较于白光,红光和蓝光刺激使除Per 3外的其它钟基因Clock、Bmal 1、Bmal 2、Cry 1和Cry2昼夜节律性表达相位延迟,而绿光组钟基因相位与白光组相比无显著差异;单色光照射后,对钟基因产生的振幅改变不具有同向性,与白光相比,绿光刺激使Per3、Cry1和Cry2昼夜节律性表达振幅增强,红光组使Bmal1、Cry1和Cry2振幅减弱,而蓝光刺激后使Bmal2和Cry1振幅增加。3鸡视顶盖中BMAL1蛋白的昼夜节律性表达趋势与Bmal1基因mRNA表达相似。单色光照射后,其昼夜节律性不发生改变,但红光组比白、蓝光组相位发生了延迟,振幅降低,蓝光组的振幅较白、绿光组的提高。以上结果表明,除了Per2基因外,其余钟基因Clock、Bmal1、Bmal2、Per3、Cry1和Cry2在鸡视顶盖中表达均呈现昼夜节律性。不同单色光对生物钟基因和生物钟蛋白BMAL 1的昼夜节律性表达无影响,但在一定程度上影响其表达量、峰值以及相位。     

电针“足三里”对佐剂性关节炎家兔血浆去甲肾上腺素昼夜节律的影响

本研究观察了正常和佐剂性关节炎家兔血浆去甲肾上腺素（ＮＥ）昼夜节律的变化，观察即刻电针足三里后和疗程电针“足三里”后对其节律之影响，结果发现正常家兔血浆ＮＥ存在着一定的昼夜节律变化，模型家兔节律的中值、振幅、峰相位都有改变，呈病理性节律波动，即刻和疗程电针治疗后，上述参数均有不同程度的恢复，且疗程电针后节律恢复更好，正常家兔即刻电针后，节律消失，但疗程电针后节律恢复正常。说明针刺能影响外周ＮＥ的正常和病理性昼夜节律波动     

大鼠松果体N-乙酰基转移酶基因的内源性昼夜表达规律

目的探讨大鼠松果体N-乙酰基转移酶(NAT)基因的内源性昼夜节律表达。方法SD大鼠在持续黑暗(DD)光制下饲养8周后,在一昼夜内每隔4 h采集一组松果体组织,提取总RNA,进行竞争性定量RT-PCR,测定不同昼夜时点(CT)样品中NAT基因mRNA的相对表达量,用余弦函数软件获取节律参数,并经振幅F检验分析是否存在昼夜节律。结果松果体NAT基因mRNA的表达呈现明显的内源性节律振荡(P<0.05),峰值(mRNA水平为1.42±0.11)和谷值(mRNA水平为0.56±0.18)分别位于CT17和CT5,峰值相位-260.85±9.45,振幅0.44±0.09,中值0.99±0.12。结论大鼠松果体NAT基因存在明显的内源性昼夜节律表达,其转录水平在主观黑夜高于主观白天。