IL-12抗肿瘤基因治疗的研究进展

IL-12具有强大的抗瘤活性，在肿瘤生物治疗中占有重要地位。近年来IL-12基因疗法成为研究的热点，各国学者采用不同的治疗途径及基因联合方式进行了大量尝试，以求其最佳抗瘤效果，现就此作一综述。     

IL-12协同B7-1转基因细胞增强C57BL/6小鼠的抗肿瘤免疫

目的:应用逆转录病毒构建IL-12、B7-1表达载体,以研究基因修饰的肿瘤细胞的癌疫苗作用.方法:将两种表达载体分别转染EL-4胸腺瘤细胞,使该细胞能表达分泌B7-1或IL-12,并研究了该基因导入细胞的抗肿瘤免疫效果.结果当接种了EL-4/IL-12转染细胞后,在C57BL/6同系鼠中其基因导入细胞的肿瘤原性比较EL-4/Wt和EL-4/Neo组明显减少(P＜0.01),在EL-4/IL-12组的肿瘤被排斥后,实验动物体内诱发了抗EL-4/Wt的全身性、保护性免疫,用51Cr释放测定法证明有一个较强的抗EL-4/Wt和一个较弱的抗同系Lewis肿瘤细胞的CTL活性,体内淋巴细胞消除分析的结果提示减少的肿瘤原性主要与CD4+、CD8+和NK细胞有关.用EL-4/IL-12基因转染的瘤细胞进行疫苗治疗比较用EL-4/Neo瘤细胞作疫苗治疗能更加有效地延缓已建立的EL-4/Wt肿瘤的生长(P＜0.005),EL-4/IL-12和EL-4/B7-1基因联合转染组比用单一的转基因细胞增强了治疗效果(P＜0.005).结论:研究结果提示应用IL-12进行血液肿瘤的治疗是有效的,IL-12和B7-1联合使用在未来人类癌症的治疗中有一定的应用前景.     

IL—12协同B7—1转基因细胞增强C57BL／6小鼠的抗肿瘤免疫

目的应用逆转录病毒构建IL-12、B7-1表达载体,以研究基因修饰的肿瘤细胞的癌疫苗作用.方法将两种表达载体分别转染EL-4胸腺瘤细胞,使该细胞能表达分泌B7-1或IL-12,并研究了该基因导入细胞的抗肿瘤免疫效果.结果当接种了EL-4/IL-12转染细胞后,在C57BL/6同系鼠中其基因导入细胞的肿瘤原性比较EL-4/Wt和EL-4/Neo组明显减少(P＜0.01),在EL-4/IL-12组的肿瘤被排斥后,实验动物体内诱发了抗EL-4/Wt的全身性、保护性免疫,用51Cr释放测定法证明有一个较强的抗EL-4/Wt和一个较弱的抗同系Lewis肿瘤细胞的CTL活性,体内淋巴细胞消除分析的结果提示减少的肿瘤原性主要与CD4+、CD8+和NK细胞有关.用EL-4/IL-12基因转染的瘤细胞进行疫苗治疗比较用EL-4/Neo瘤细胞作疫苗治疗能更加有效地延缓已建立的EL-4/Wt肿瘤的生长(P＜0.005),EL-4/IL-12和EL-4/B7-1基因联合转染组比用单一的转基因细胞增强了治疗效果(P＜0.005).结论研究结果提示应用IL-12进行血液肿瘤的治疗是有效的,IL-12和B7-1联合使用在未来人类癌症的治疗中有一定的应用前景.     

脂质体介导Endostatin IL-12基因联合治疗移植型鼠肝癌的实验研究

目的:探讨脂质体介导Endostatin及IL-12基因联合治疗肝癌的可行性.方法:将已构建的Endostatin和IL-12真核表达载体给荷瘤BALB/c鼠瘤内注射,每周两次测量瘤体积.ELISA法检测肿瘤局部IL-12、IL-2、Endostatin含量,MTT法检测NK细胞杀伤活性,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡情况.结果:联合治疗组肿瘤体积明显小于其它各组(P＜0.05);肿瘤局部IL-12、IL-2、Endostatin的表达明显高于pVAX1空载体和生理盐水对照组(P＜0.05);NK细胞杀伤率和肿瘤细胞凋亡率分别为52.0%和48.2%.结论:联合应用Endostatin和IL-12基因可有效抑制鼠肝癌的生长.     

重组白介素-12治疗小鼠Lewis肺癌的实验研究

背景与目的:白介素-12(interleukin-12,IL-12)是具有抗瘤活性的细胞因子,本研究建立稳定表达小鼠IL-12(murineinterleukin-12,mIL-12)的小鼠Lewis肺癌(Lewislungcarcinoma,LLC)细胞系LLC/mIL-12,评估mIL-12重组质粒及LLC/mIL-12瘤苗治疗小鼠Lewis肺癌移植瘤的疗效。方法:脂质体转染LLC获得LLC/mIL-12瘤苗。于C57BL/6小鼠皮下接种LLC细胞2×106个,成瘤后将小鼠随机分成4组(n=10),第1、4、7天瘤内注射质粒或瘤苗,第14天处死小鼠,观察肿瘤生长曲线、脾细胞中CTL细胞和NK细胞活性以及肿瘤浸润淋巴细胞。结果:LLC/mIL-12瘤苗组和pcDNA3.1( )-mIL-12质粒组肿瘤体积显著缩小,mIL-12能增强NK细胞和CTL细胞活性,两者均以LLC/mIL-12治疗组更显著,LLC/mIL-12和pcDNA3.1( )-mIL-12治疗组有大量CD4 、CD8 淋巴细胞浸润。结论:mIL-12基因能增强NK细胞和CTL活性,LLC/mIL-12及pcDNA3.1( )-mIL-12均能产生抗瘤免疫反应,且前者作用更强。     

瘤体内/瘤周注射TNF重组腺病毒和/或IL-2重组腺病毒对肝癌小鼠的治疗作用研究

选择两种具有协同免疫调节作用的细胞因子进行联合基因治疗是提高肿瘤细胞因子基因治疗的有效途径之一.目前对IL-2/TNF-α联合基因方案,特别是瘤体内注射途径的抗肿瘤研究尚未见报道.IL-2与TNF-α具有协同作用.因此我们分别将携带TNF-α基因和IL-2基因的腺病毒(Ad-TNF,Ad-IL-2)联合或直接注射于BALB/c小鼠肝癌内,观察其抗瘤效果,并探讨其抗肿瘤免疫机制.结果表明:1.TNF治疗组脾细胞NK、LAK、CTL活性及Mφ杀伤活性明显高于对照组,诱生的细胞因子包括IL-2、GM-CSF、IFN-γ、TNF和IL-     

基础理论

人乳头状瘤病毒18型阳性肿瘤疫苗的构建及体外活性鉴定,淫羊霍苷体内抑瘤作用及其机制,基因佐剂的肿瘤疫苗对肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞功能的影响,三联菌苗对小鼠肉瘤180的抑制作用,IL-12基因重组腺病毒对不同肿瘤抗瘤作用的研究,冻融人树突状细胞基因疫苗体外抗肿瘤免疫效应,     

肿瘤疫苗与白介素-12联合免疫治疗小鼠肉瘤的研究

目的:探讨混合热休克蛋白(HSP)/肽与白介素-12(IL-12)和环磷酰胺(CTX)联合治疗小鼠肉瘤的作用及机制。方法:以S-180肉瘤为模型,将瘤组织剪碎,裂解,离心,取上清经Sephacryl S-200层析,截取相对分子质量(50～200)×103段,经SDS-PAGE电泳及Western-blot法鉴定。用提取的HSP/肽免疫小鼠后,再用低剂量CTX及IL-12治疗(强化疫苗),观察无瘤生存率、抑瘤生长率、抑制转移率和存活期。用流式细胞仪,ELISPOT及乳酸脱氢酶等方法检测免疫功能的变化。结果:HSP疫苗与IL-12和CTX联合治疗小鼠S-180肉瘤,80.0%肿瘤完全消退,且100.0%抑制了肺部转移,达长期生存,而对照组全部在40d内死亡。检测表明HSP/肽疫苗形成了免疫预存,从而使IL-12和CTX发挥了抗瘤作用。结论:HSP/肽与IL-12和CTX联合治疗诱发了机体细胞免疫功能,产生强大的抗瘤作用,可能具有临床应用前景。     

转人IL—2基因对原代肾细胞癌致瘤性的影响

目的研究转人IL-2基因对原代肾细胞癌(RCC)细胞致瘤性的影响,为RCC的基因治疗打下基础.方法将人IL-2基因与逆转录病毒载体pLNCX连接,转染包装细胞,经鉴定后,感染原代RCC细胞,采用MTT法检测转人IL-2基因的原代RCC的IL-2的活性.然后,将转人IL-2基因的原代RCC和未转基因原代RCC分别接种裸鼠,观测转IL-2前后RCC细胞致瘤性的变化.结果转人IL-2的RCC细胞IL-2的生物学活性平均为(244±52)U/ml,接种裸鼠后无肿瘤长出.结论转人IL-2基因使原代RCC失去了致瘤性,转人IL-2基因的RCC细胞可作为瘤苗用于肾细胞癌的治疗.     

双亚基共表达人白细胞介素12重组腺病毒载体的构建与表达

白细胞介素12(IL-12)是由p40和p35两亚基组成的异源二聚体,动物试验表明其抗肿瘤和抗感染疗效显著,同时也发现全身应用的毒副作用较重,因此寻找合适的局部应用途径具有重要的临床意义.将IL-12基因导人肿瘤局部,动物试验取得了显著的抗肿瘤效果;瘤体内注射逆转录病毒载体介导的人IL-12基因修饰的成纤维细胞已经FDA批准用于治疗晚期肿瘤患者.