嗅鞘细胞对神经干细胞增殖与分化的影响

BACKGROUND： Olfactory ensheathing cells can promote oriented differentiation and proliferation of neural stem cells by cell-secreted neural factors. OBJECTIVE： To observe the effect of olfactory ensheathing cells on the differentiation and proliferation of neural stem cells. DESIGN, TIME AND SETTING： Cytology was performed at the Department of Neurology, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, China, from September 2007 to October 2008. MATERIALS： Mouse anti-nestin polyclonal antibody （Chemicon, USA）, mouse anti-glial fibrillary acidic protein （GFAP） IgG1, mouse anti-2＇, 3＇-cyclic nucleotide 3＇-phosphodiesterase （CNPase） IgG1, mouse anti-Tubulin Class-Ill IgG1 （Neo Markers, USA）, Avidin-labeled Cy3 （KPL, USA）, and goat anti-mouse IgGl： fluorescein isothiocyanate （FITC） （Serotec, UK） were used in this study. METHODS：Tissues were isolated from the embryonic olfactory bulb and subependymal region of Wistar rats. Serum-free DMEM/F12 culture media was used for co-culture experiments. Neural stem cells were incubated in serum-free or 5% fetal bovine serum-containing DMEM/F12 as controls. MAIN OUTCOME MEASURES： After 7 days of co-culture, neural stem cells and olfactory ensheathing cells underwent immunofluorescent staining for nestin, tubulin, glial fibrillary acidic protein, and CNPase. RESULTS： Olfactory ensheathing cells promoted proliferation and differentiation of neural stem cells into neuron-like cells, astrocytes and oligodendrocytes. The proportion of neuron-like cells was 78.2%, but the proportion of neurons in 5% fetal bovine serum DMEM/F12 was 48.3%. In the serum-free DMEM/F12, neural stem cells contracted, unevenly adhered to the glassware wall, or underwent apoptosis at 7 days. CONCLUSION： Olfactory ensheathing cells promote differentiation of neural stem cells mainly into neuron-like cells, and accelerate proliferation of neural stem cells. The outcome is better compared with serum-free medium or medium containing 5% fetal bovine serum.     

嗅鞘细胞对神经干细胞向胆碱能神经元分化的影响

目的：研究不同浓度嗅鞘细胞（OECs）对神经干细胞（NSCs）向胆碱能神经元分化的影响,为细胞联合移植治疗阿尔茨海默病提供理论依据。方法：分别体外培养NSCs和OECs。将5×10^4/mL的NSCs分别与1×10^4/mL、1×10^6/ mL、1×10^8/mL OECs共培养7 d,同时设立对照组（不加OECs）。用免疫细胞化学法检测胆碱乙酰化酶阳性细胞表达。结果：共培养7 d后,OECs能促进NSCs向胆碱能神经元分化,以1×10^6/mLOECs与NSCs共培养作用最明显,与对照组比较差异有显著统计学意义（P〈0.01）。结论：OECs可促进NSCs向胆碱能神经元分化。     

神经干细胞与嗅鞘细胞联合移植的研究进展

神经干细胞（NSCs）能分化成神经元替代坏死,凋亡神经元,嗅鞘细胞（OECs）是一种特殊类型的胶质细胞,两种细胞联合移植能在中枢神经系统修复过程中起到互补作用,更好地修复损伤组织,改善宿主运动及认知功能。     

嗅鞘细胞与神经干细胞共培养后增殖及向神经元的分化

背景：影响神经干细胞增殖分化的外在因素包括细胞因子和微环境,嗅鞘细胞能分泌多种细胞因子,与神经干细胞共培养时改变其微环境。 目的：观察不同浓度嗅鞘细胞对神经干细胞增殖及分化的影响。 方法：体外分别培养Wistar大鼠神经干细胞和嗅鞘细胞,5×107 L-1神经干细胞分别和1×107 L-1,1×109 L-1,1×1011 L-1嗅鞘细胞共培养,同时设立正常对照组,不加嗅鞘细胞。倒置荧光显微镜下观察神经干细胞增殖情况,诱导7 d后行NSE免疫细胞化学染色,计算阳性细胞/细胞总数得出阳性细胞百分比。 结果与结论：①3种浓度嗅鞘细胞与神经干细胞共培养3 d后,均促进了神经干细胞增殖,以1×109 L-1嗅鞘细胞共培养组作用最显著,明显优于1×107 L-1嗅鞘细胞组、1×1011 L-1嗅鞘细胞组。②神经干细胞与1×109 L-1嗅鞘细胞共培养7 d后,神经干细胞分化为神经元样细胞的百分比最高,与正常对照组相比差异有显著性意义(P < 0.01)。     

嗅鞘细胞诱导神经干细胞分化后神经元电生理特性的研究

目的探索大鼠嗅鞘细胞对神经干细胞(NSC)分化的影响,以及分化后神经元电生理特性。方法取新生鼠大脑皮质,原代培养大鼠NSC。NSC分为实验组和对照组,实验组将无血清培养的NSC中加入嗅鞘细胞条件培养液,对照组单纯无血清培养NSC。光镜下观察细胞分化情况,免疫组化法分别检测巢蛋白(nestin)、神经生长因子受体(NGFRp75)、神经丝蛋白(NF200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,膜片钳检测神经元电生理特性。结果实验组嗅鞘细胞主要诱导NSC分化为神经元,少量分化为胶质细胞。对照组NSC逐渐萎缩,最终死亡。分化后的神经元记录到快速激活、快速失活能被河豚毒素特异阻断的钠电流,以及慢激活、慢失活能被四乙铵特异阻断的延迟整流性钾电流。结论嗅鞘细胞能诱导NSC分化成神经元,分化后的神经元具有活跃的电生理特性。     

大鼠嗅鞘细胞和星形胶质细胞对神经干细胞分化作用的比较研究

目的比较大鼠嗅鞘细胞与星形胶质细胞对神经干细胞分化的影响。方法分别从新生SD大鼠嗅球、海马、皮质分离、培养嗅鞘细胞、神经干细胞和星形胶质细胞。收集嗅鞘细胞、星形胶质细胞及其上清液,分别对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)进行诱导分化,倒置显微镜下观察细胞的生长情况,并采用免疫组化法对分化细胞鉴定和计数。结果嗅鞘细胞组分化为神经元比率高于星形胶质细胞组(P<0.01)。结论嗅鞘细胞较星形胶质细胞能更好地促进神经干细胞分化为神经元。     

嗅鞘细胞对脂肪干细胞诱导分化的影响

目的 比较2种不同方法共培养脂肪干细胞后神经元特异性核蛋白(neuron specific nuclear protein,NeuN)的表达.方法 以transwell小室为共培养载体,实验组中将脂肪干细胞接种于上室,嗅鞘细胞接种于下室,对照组下室无嗅鞘细胞,只加入嗅鞘细胞条件培养液,共培养12 d后观察脂肪干细胞NeuN的表达.结果 共培养12 d后2组都有部分脂肪干细胞表达NeuN,实验组NeuN阳性率为303/345(87.8%),而对照组为120/320(37.5%),差异有统计学意义(χ~2=181.6,P＜0.05).结论 脂肪干细胞在与嗅鞘细胞共培养时更容易向神经元样细胞分化.     

体外培养的嗅鞘细胞能够促进骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞

目的探讨体外培养的嗅鞘细胞(OECs)对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化的影响。方法实验分为OECs MSCs共培养组和MSCs单独培养组,在7d和14d两时间点观察MSCs的分化情况。用p75抗体免疫细胞化学染色鉴定OECs细胞的纯度;用巢蛋白(nestin)、神经丝蛋白(NF)、微管相关蛋白2(MAP2)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、突触后膜致密区蛋白(PSD)等抗体免疫细胞化学染色鉴定已分化的细胞表型。结果体外培养的MSCs经OECs诱导后分化为神经元样细胞,这些细胞能够表达NF、MAP2和PSD等神经元标记物,而不表达星形胶质细胞标记物GFAP。在培养7d,MSCs OECs7d组的MSCs分化为神经元样细胞的百分率与MSCs7d组比较有明显增高。在培养14d,MSCs OECs14d组的MSCs分化为神经元样细胞的百分率与MSCs14d组比较,也有明显增高。结论体外培养的嗅鞘细胞能够促进骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。     

嗅鞘细胞联合神经干细胞移植治疗小儿脑发育不全

背景：近年来,干细胞替代治疗为神经再生提供了新的方法,但干细胞移植治疗小儿脑发育不全的相关报道甚少。 目的：验证嗅鞘细胞联合神经干细胞移植治疗小儿脑发育不全的有效性。 方法：2009-10解放军第163医院收治了1例脑发育不全的患者,给予物理降温、神经营养、维持水电解质平衡、高压氧治疗的同时,以L3~4腰椎间隙为穿刺点,将配置好的神经干细胞约8×107个和嗅鞘细胞约4×107个缓慢注入蛛网膜下腔,每2周1次,2次为 1 个疗程,共治疗1个疗程。从体温恢复程度、双手精细动作、运动协调性、语言等方面来评价移植治疗效果。 结果与结论：与移植前比较,嗅鞘细胞联合神经干细胞移植1个月后患儿体温恢复正常,四肢肌力明显下降,2个月后可以独自端坐,3个月后可以扶梯行走,有简单的语言表达。提示嗅鞘细胞联合神经干细胞移植治疗小儿脑发育不全是有效的,能恢复其中枢神经功能。     

改良成年大鼠嗅鞘细胞的原代培养

目的研究成年大鼠嗅鞘细胞(OECs)分离与培养的方法,为进一步进行基础研究以及临床应用提供高纯度的细胞.方法采用改良差速贴壁法从成年大鼠的嗅球培养出OECs,并用Forskolin和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促增殖,最后进行OECs特异标记物NGFRp75、S-100的免疫细胞化学染色鉴定OECs.结果改良差速贴壁法成功培养出高纯度的OECs.结论此法简便、经济、纯化效率高,Forskolin和bFGF能够促进OECs的增殖.     

Effects of olfactory ensheathing cells on the proliferation and differentiation of neural stem cells

BACKGROUND:Olfactory ensheathing cells can promote oriented differentiation and proliferation of neural stem cells by cell-secreted neural factors. OBJECTIVE:To observe the effect of olfactory ensheathing cells on the differentiation and proliferation of neural stem cells. DESIGN,TIME AND SETTING:Cytology was performed at the Department of Neurology,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,China,from September 2007 to October 2008. MATERIALS:Mouse anti-nestin polyclonal antibo...     

嗅鞘细胞及其表达的NGF和BDNF对神经干细胞增殖的影响

目的 研究嗅鞘细胞及其表达的神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)对神经干细胞增殖的影响.方法 采用共培养液培养以及NGF或BDNF抗体封闭的方法,观察嗅鞘细胞对神经干细胞增殖的影响.免疫组化和RT.PCR半定量分析嗅鞘细胞表达的细胞因子及其受体的情况.结果 共培养液培养4d后,神经干细胞数量明显增多(P<0.05).免疫组化和RT-PCR半定量分析结果显示,嗅鞘细胞表达多种细胞因子及受体,共培养液培养2d后嗅鞘细胞表达NGF和BDNF mRNA的相对值明显高于对照组(P<0.05).抗体封闭培养液中的NGF或BDNF后,没有影响神经干细胞的增殖.结论 嗅鞘细胞表达大量细胞因子作用于神经干细胞,促进其增殖.在本研究条件下,神经干细胞的增殖可能与嗅鞘细胞表达的碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)有关,而与NGF和BDNF无关.     

NSCs在OECs诱导下定向分化及神经元电生理特性研究

目的探索大鼠嗅鞘细胞（OECs）对神经干细胞（NSCs）分化的影响,并记录分化后神经元电生理特性。方法在无血清改良Eagle培养基（DMEM／F12）培养的NSCs中,加入OECs条件培养基,观察分化情况,巢蛋白（nestin）鉴定NSCs、神经丝蛋白200（NF200）鉴定神经元、膜片钳检测神经元电生理特性。结果OECs能促进NSCs分化为神经元,分化后的神经元记录到快速激活快速失活、能被河豚毒素（TTX）特异阻断的钠电流及慢激活慢失活、能被四乙基氯化铵（TEA）特异阻断的延迟整流性钾电流。结论OECs能诱导NSCs分化,分化后的神经元具有活跃的电生理特性,具有替代凋亡、坏死神经元的潜能。     

葡萄糖浓度对原代培养神经干细胞增殖、分化的影响

目的探讨不同浓度葡萄糖对神经干细胞增殖、分化的影响。方法胚胎小鼠脑细胞原代培养并鉴定。生理浓度和高浓度葡萄糖培养及诱导分化后．四唑盐比色（MTT）法及免疫荧光法观察两组不同葡萄糖浓度对神经干细胞增殖、分化的影响。结果原代培养的神经球表达巢蛋白（hestin），神经球分化的细胞表达神经丝200（NF200）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。与生理浓度葡萄糖相比，高浓度葡萄糖降低了神经干细胞的增殖活力：分化3d后，高糖组的NF200阳性细胞和GFAP阳性细胞比例高于生理浓度组（P〈0．01），而nestin阳性细胞比例则反之（P〈0．01）；分化10d后，神经干细胞完全分化，免疫荧光检测发现生理浓度葡萄糖提高了NF200阳性细胞比例。结论高糖损害了神经干细胞的增殖活性。加速了神经干细胞的早期分化．降低了神经元的分化率。     

游离血红蛋白对体外培养成年大鼠嗅鞘细胞存活的影响

目的观察不同浓度游离血红蛋白（FHb）对体外培养大鼠嗅鞘细胞（OECs）存活的影响。方法采用成年大鼠（2．5月）嗅球培养OECs，培养第8天用S-100免疫组化鉴定纯度后，将培养的OECs根据加入的FHb浓度分为1，10，50，100μmol／L组及正常对照组，观察不同浓度FHb下OECs形态学变化；培养24h后采用MTT实验检测不同浓度FHb组细胞活力；并用碘化丙啶（PI）和Hocchst33342荧光双染色观察检测细胞死亡。结果大鼠OECs纯度为（72±6）％；MTT试验显示各组细胞活力随血红蛋白浓度的升高而降低；PI／Hoechst33342双荧光染色显示在对照组未见PI染色阳性细胞，各FHb组细胞PI／Hoechst33342比例随血红蛋白浓度增加而升高。结论FHb对OECs有毒性作用且随浓度的增加而增加。     

胚胎大鼠嗅神经干细胞的培养及分化特性

目的建立胚胎大鼠嗅神经干细胞(NSCs)体外培养方法,研究其增殖和分化特性.方法采用添加丝裂原的无血清培养基分离、培养胚胎14 d(E14)大鼠嗅球NSCs,应用免疫细胞化学方法鉴定培养的NSCs及自然分化为特异性神经细胞的类型,测定NSCs的生长曲线.结果从E14大鼠嗅球分离、培养出表达nestin,并能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的NSCs.嗅NSCs的增殖依赖表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),其中EGF的促分裂增殖作用明显优于bFGF.结论从E14大鼠嗅球培养出具有自我增殖和多向分化潜能的NSCs.