约氏疟原虫与伯氏疟原虫侵入期抗原的初步研究

目的　用针对鼠约氏疟原虫(Plasmodiumyoelii)侵入期的8种单克隆抗体,对约氏疟原虫和伯氏疟原虫(P.berghei)侵入期即动合子、裂殖子和子孢子棒状体和表面抗原检测分析。　方法　间接免疫荧光实验(IFA)对各侵入期抗原进行亚细胞结构定位,SDSPAGE及Western印迹对两种鼠疟原虫的不同侵入期进行抗原组分分析。　结果　经上述两种方法检测发现,顶端复合体抗原成分复杂,约氏疟原虫和伯氏疟原虫的棒状体有共同的抗原表位,约氏疟原虫的动合子与其自身的裂殖子有类似成分,也有各自独特的抗原。两种鼠疟原虫动合子抗原有类似成分。约氏疟原虫的子孢子具有与裂殖子、动合子不同的抗原成分。　结论　疟原虫侵入期棒状体和表面抗原在同一虫种的不同侵入期和不同虫种中有共同的抗原表位,也有各自的独特组分。     

伯氏疟原虫抗原免疫鼠攻击感染后存活时间的观察

近年来,疟原虫疫苗研究进展较快。Mitchell等报导了诺氏疟原虫裂殖子加弗氏佐剂疫苗,具有保护恒河猴抵抗致死感染的免疫作用。恶性疟原虫裂殖子疫苗则能使免疫夜猴产生种特异性的获得性免疫力。而有关伯氏疟原虫的免疫保护作用研究尚少。本文旨在用伯氏疟原虫的不同抗原加不完全或完全佐剂免疫小白鼠,比较观察其受攻击感染后的存活情况,以了解伯氏疟的免疫保护作用。 材料与方法 NIH小白鼠为实验动物,新鲜裂殖子抗原(M_2)的制备按李氏静止通气悬浮培养法培养、收集和纯化。冰冻裂殖子抗原(FM_2)按上述裂殖子抗原方法收集纯化后,冰冻备用,     

用双部位酶联免疫吸附试验鉴定感染疟原虫的蚊媒

鉴于应用免疫放射试验(IRMA)检测蚊体内子孢子要有较复杂的条件设备,本文报导试用双部位酶联免疫吸附试验(ELISA)微量法进行检测子孢子的研究。抗原为子孢子阳性蚊,以大劣按蚊叮咬感染诺氏疟原虫(H株)的恒河猴或弗氏按蚊叮咬感染伯氏疟原虫(ANKA株)的仓鼠后14～16天将蚊杀死而得,置室温干燥器内保存8周后使用。抗血清为对诺氏疟原虫子孢子特异的单克隆抗体(2G3),先以DEAE-Se-     

大鼠感染约氏疟原虫后的保护性免疫

前已报道,约氏疟原虫子孢子入侵大鼠肝细胞与枯氏细胞的吞噬活性水平呈正相关,而与其异化代谢水平呈负相关。体外试验证明,伯氏疟原虫子孢子可主动侵入小鼠腹腔巨噬细胞 在正常情况下,巨噬细胞很快死亡而子孢子则完好无损,但在免疫血清条件下,巨噬细胞中子孢子迅即退化。大鼠感染伯氏疟原虫急性期,其血清在体外有抑制腹腔巨噬细胞的吞噬作用。以往研究提示红内期感染条件下有可能通过抑制或刺激单核巨噬细胞系统而影响子孢子的入侵。现用对约氏疟原虫子孢子敏感的Wistar大鼠,观察其在感染约氏疟原虫急     

经冻融和加温灭活制备的伯氏鼠疟原虫子孢子抗原的亚显微结构分析

用经反复冻融和加温灭活制备的伯氏鼠疟原虫子孢子抗原作亚显微结构分析,同时用以免疫小白鼠作免疫学的研究。伯氏鼠疟原虫NK_(65)子孢子抗原是从800只斯蒂芬按蚊涎腺在玻璃容器中经人工研磨释出的。所得混合物经数次分层离心洗涤以尽量清除涎腺细胞残渣,最后的上清液分为3等分,作如下不同处理:第1个标本不经处理作为对照,     

用肝癌细胞系培养伯氏疟原虫红外期

为了进一步探讨疟原虫红外期培养,以类似肝细胞的肝癌细胞系(Hep G2-A16)培养伯氏疟原虫红外期。子孢子悬液的制备:取感染伯氏疟原虫 (ANKA株)后18～21天的斯氏按蚊唾腺,置于经加热灭活(56℃×30min)的鼠血清中(每5对唾腺加10μl鼠血清),用18G针反复抽吸捣碎备用。培养:将长有Hep G2-A16的盖玻片置于含10%小牛血清的MEM培养液中。另加50 IU/ml青霉素,50μg/ml链霉素,于37℃及含5%CO_2气体的条件下培养2～3天。然     

α-二氟甲基鸟氨酸诱导伯氏疟原虫子孢子接种小鼠的保护性免疫

本文报道经接种伯氏疟原虫子孢子的小鼠在经α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)治疗后产生的针对红外期裂殖子的保护性免疫,有效期长达6个月。以伯氏疟原虫Anka株子孢子悬液i. v.接种TB_(ESP)小鼠,每周1次共2～3次。为避免蚊体组织过敏反应导致动物死亡,另采     

以种特异性的放射免疫法测定蚊体内疟原虫子孢子的实验室评价

本文报道以单克隆抗体(Mab)放射免疫法(RIA)检测按蚊体内的疟原虫子孢子抗原。实验使用3种单克隆抗体,其中2种为抗诺氏疟原虫子孢子(2G3和8E11),另一种为抗食蟹猴疟原虫子孢子,实验蚊均自泰国分离的大劣按蚊。将受检蚊置塑料微量离心管内,用玻璃棒研碎,加入50μl蛋白酶抑制剂PBS,通过     

伯氏疟原虫类巨噬细胞移动抑制因子在红内期的表达

目的制备小鼠抗伯氏疟原虫类巨噬细胞移动抑制因子(PbMIF)的抗体,并检测PbMIF在伯氏疟原虫红内期的表达。方法用纯化的PbMIF蛋白免疫BABL/c小鼠,制备小鼠抗PbMIF的抗血清。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体的效价,用免疫印迹(Western blotting)-二氨基联苯胺(DAB)底物显色法检测抗体的特异性。采用免疫印迹增强化学发光(ECL)的方法,用上述制备的抗血清检测PbMIF在红内期伯氏疟原虫的表达情况。结果ELISA测得小鼠抗PbMIF抗体的效价>1∶106,Western blotting显示该抗体可与原核表达的PbMIF蛋白特异性结合。ECL结果表明感染的红细胞中存在PbMIF。结论成功制备了小鼠抗PbMIF的抗体。红内期伯氏疟原虫表达PbMIF。     

人疟和鼠疟之间的交叉免疫荧光反应

以恶性疟病人和感染伯氏鼠疟原虫的小白鼠的血涂片为疟原虫抗原,薄涂片上的疟原虫密度约为8%或以上。涂片在室温下用电扇吹干后,放在4℃丙酮液中固定30分钟,并再在4℃下吹干,按荧光抗体法进行染     

以间接免疫荧光试验或免疫过氧化物酶抗体试验检测体外培养的伯氏疟原虫红外期的血清反应性

以有人胎肺细胞的盖玻片置于含10%小牛血清的NCTC-135培养基培养至细胞生长接近汇合成片时,加入按蚊唾腺的伯氏疟原虫子孢子,放5%CO_2培养箱中37℃孵育,于不同时间,取培养物用Hanks缓冲盐水(HBSS)洗涤,以冷甲醇固定,再以HBSS洗后即成培养的红外期抗原片,存4℃备用。经84拉德~(60)Co照射的伯氏疟原虫子孢子,按每次30,000个子孢子的剂量静脉免疫小鼠3次,获得与红细胞期无交叉反应的抗子孢子血清。用氯喹控制小鼠的感染,取得抗红细胞期的血清。单克隆抗体有二:其一是能与伯氏疟原虫子孢子保护性表面抗原(Pb44)反应的,腹水液纯化的IgG_1,在体内可中和子孢子感染;另一种是能与子孢子表面抗原相反应并     

对氨基苯甲酸对斯氏按蚊传播约氏鼠疟原虫和伯氏鼠疟原虫的影响

作者实验室中的几种鼠疟原虫均以斯氏按蚊来进行生活史循环,但经常发现斯氏按??蚊的手孢子阳性率不稳定。作者通过研究证明,对氨基苯甲酸(PABA)是影响疟原虫在蚊体内孢子增殖的重要因素。作者用约氏鼠疟原虫17X株和伯氏鼠疟原虫NK65株和无球状附红细胞体感染的小鼠(Tucks TFW)在22±2℃、相对湿度     

伯氏疟原虫子孢子的能量代谢

本文通过对伯氏疟原虫子孢子能动性(能量的消耗和产生的标志)的观察,研究子孢子的能量代谢。材料和方法:解剖人工感染伯氏疟原虫后16～21天的斯氏按蚊涎腺分离子孢子。将摘出的涎腺放在不含氨基酸、谷酰胺和葡萄糖的不完全组织培养基199内研碎,子孢子悬液经4g离心沉淀1分钟,除去较大的蚊     

红内期恶性疟原虫的一种主要表面抗原—P190的加工、多晶形及生物学意义

Hold和Freenen成功地用单克隆抗体方法在约氏疟原虫中分离出了分子量为23.5万和23万的两种裂殖子蛋白,并用这二种蛋白做成疫苗预防约氏疟原虫的大量感染。同时也鉴定了分子量为4.2万和4.4万的诺氏疟原虫和伯氏疟原虫子孢子蛋白,其单克隆抗体对它们具有防止感染作用,由此可见,在疟疾研究中,单克隆抗体已作为一种工具用来鉴定抗原。本文报道有两种单克隆抗体     

含阿斯匹林的血清对恶性疟原虫连续培养的影响

本研究的目的是试验含阿斯匹林的血清对恶性疟原虫培养系统的影响。4名禁食的男性健康志愿者服用阿斯匹林单次量650mg之前及之后90分钟两次抽血,分离血清,经56℃40分钟热灭活后冰冻保存,在1周内用于培养试验。试验时微量滴定板的每个凹井内含有1%红细胞悬液200μl,并按10%的浓度加入服阿斯匹林前、后的血清或两者混合的血清。培养的恶性疟原虫来源于Trager     

用热处理的伯氏疟原虫子孢子接种小鼠

曾报道伯氏疟原虫子孢子用X线照射、加热或冻融方法处理后可作为虫(疫)苗,所产生的保护作用与处理方法、接种次数和途径有关。为了进一步探索伯氏疟原虫子孢子的免疫性,作者进行了以下试验。实验用同系A/J雌性小鼠按体重随机分成3组,第1组静脉注射41±1℃加热60     

氧自由基发生剂Tert-Butylhydroperoxide对大鼠体内约氏疟原虫红外期发育的影响

氧自由基发生剂Tert-Butylhydroperoxide(t-BHP)对小鼠体内文氏疟原虫(P.vinckei)红内期有显著的杀伤作用,但能否杀伤或抑制肝细胞内疟原虫红外期的发育,还不清楚。本文使用t-BHP处理感染约氏疟原虫子孢子的大鼠,观察该制剂对疟原虫红外期的发育有无抑制作用。     

伯氏疟原虫红外期体外培养的研究

本文报告在国内首次建成了胚肺细胞-伯氏疟原虫红外期体外培养系统.用胰酶消化法自人工流产胎儿分离出胚肺细胞后,建立Elu 8801细胞株。斯氏按蚊叮咬伯氏疟原虫ANKA株感染的昆明小鼠18～21d后,在无菌条件下解剖出唾腺,制备子孢子悬液,接种于单层培养的胚肺细胞。培养48h后,可见红外期裂殖体。72h后,部分裂殖体内已形成成熟的裂殖子,将培养上清经腹腔接种健康小鼠,可使之感染疟疾并可经血传感染其它小鼠。用第2代感染小鼠血饲喂按蚊,蚊体内可产生子孢子。表明本室建立的人胚肺细胞林对P.b.ANKA株易感染,并能支持其红外期发育成熟,产生有感染力的红外期裂殖子。     

鼠伯氏疟原虫裂殖子、红内期全虫抗原主动免疫的保护作用

体内外疟原虫获得性免疫作用机理研究表明,保护性抗体并不影响细胞内原虫,而只影响裂殖子释放至血浆中的这一生活史阶段,并且免疫血清可凝集游离裂殖子,阻止裂殖子与悬浮红细胞受体相结合。因此,有必要对鼠伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)裂殖子、红内期全虫可溶性抗原主动免疫的保护作用进行实验观察。我们于1990年12月～1991年3月进行了此工作,结果报告如下。一、材料与方法 (一)实验动物和疟原虫NIH小白鼠为实验动物,系本所饲养.引自中国预防医学科学院寄生虫病研究所的伯氏疟原虫ANKA株为实验原虫。 (二)裂殖子抗原感染血加3～5倍量磷酸缓冲     

研究疟疾的肾脏免疫病理的实验鼠疟模型

为提供一个动物实验研究疟疾的肾脏免疫病理机理的模型,作者进行了如下实验。实验用伯氏疟原虫NK65株,以血液转种保种,定期置于含10%甘油的Alsever氏液中在-70℃下冰冻、经处理的原虫可通过斯氏按蚊进行孢子生殖。实验动物为5周龄的雌性DDY小白鼠,感染的血液取自四天前接种的小白鼠。腹腔注射1,000万个感染的红细胞。在感染第3天开始,连续4天给一组小白鼠皮下注射4-磺胺-6-甲氧嘧啶(SMM)治疗。取小白鼠的脑、肺、心、肝、胸腺、胰、肾上腺、肾、腹腔内脂肪组织、腹腔内