骨髓干细胞动员疗法对心肌梗死大鼠心肌的促血管生成作用

目的探讨骨髓干细胞动员疗法对心肌梗死大鼠冠状动脉新生血管形成的影响。方法结扎Wistar大鼠左冠状动脉制作急性心肌梗死（AMI）模型,人参皂甙Rg1联用辛伐他汀动员自体骨髓干细胞,建模后第24h、1周和4周时杀死大鼠,取出心脏,HE染色检测梗死面积,免疫组化方法观察心肌梗死灶、边缘区和正常心肌组织CD34阳性细胞及Ⅷ因子表达。结果人参皂甙Rg1联用辛伐他汀治疗后,治疗组大鼠心肌梗死区可见CD34阳性细胞浸润;治疗组大鼠梗死面积明显减小;治疗组大鼠梗死灶及周围组织中微血管密度明显高于AMI组及假手术对照组。结论在大鼠AMI模型中,人参皂甙Rg1联用辛伐他汀治疗,可动员骨髓干细胞归巢于缺血心肌,有效促进微血管形成,促进缺血心脏功能恢复。     

雌激素调节肿瘤血管生成研究进展

妇科肿瘤已成为全球妇女的头号恶性肿瘤疾病。尽管医学界迄今为止尚未完全清楚其明确的发病机制,但有一点可以肯定:妇科肿瘤的发生与雌激素有关。近年来关于妇科肿瘤与雌激素分泌表达异常之间的分子调控机制已成为国内外研究的重点。临床及实验研究均认为雌激素可通过雌激素受体调节机体的多种信号途径,引起内皮细胞增殖、凋亡、运动、芽生、粘附等特性改变,导致肿瘤血管生成的异常,从而最终影响到肿瘤发生、发展、转移过程。现对近年来国内外有关雌激素调节肿瘤血管生成信号转导通路的研究进行概述,并提出其在中药抗肿瘤研究中的可能影响,期望对肿瘤临床及实验研究者有所借鉴。     

骨髓干细胞动员对心肌病心衰大鼠的心功能影响

目的:探讨骨髓干细胞动员对心肌病心衰大鼠的心功能影响。方法:选取20只心肌病心衰模型,随机分成两组,骨髓干细胞动员组(G组)为皮下注入重组人粒细胞刺激因子,心衰组皮下注入生理盐水。治疗前后采静脉血测外周血白细胞计数和单个核细胞数,将治疗5d后外周血分离出单个核细胞用流式细胞仪测CD34。四周后由彩色超声心动图评价心功能参数。结果:骨髓动员组外周血白细胞计数和单个核细胞数明显增高,流试细胞仪检查CD34阳性。在治疗4周后G组在超声心动图与心衰组有差异明显。结论:骨髓干细胞动员动员出造血干细胞,G组对心肌病心衰大鼠的心功能有明显改善。     

尼古丁对人外周血内皮干细胞数量和活性的影响

目的　观察尼古丁影响出生后的血管新生是否与其影响外周血内皮干细胞(EPC)的数量和活性有关。方法　采用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板,培养7d后,收集贴壁细胞,加入不同浓度尼古丁(分别为10 - 12 ,10 - 10 ,10 - 8,10 - 6 及10 - 4mol·L- 1)培养一定的时间(12 ,18,2 4 ,32及4 8h)。激光共聚焦显微镜鉴定FITC UEA Ⅰ和DiI acLDL双染色阳性细胞被认为是正在分化的EPC ,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPC ,倒置荧光显微镜下计数。然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、体外血管生成试剂盒和粘附能力检测实验,观察EPC的增殖能力、迁移能力、体外血管生成能力和粘附能力。结果　尼古丁在浓度为10 - 12 ～10 - 8mol·L- 1范围内显著增加外周血EPC数量,改善外周血EPC的粘附能力、迁移能力、增殖能力和体外血管生成能力,并且EPC数量随尼古丁浓度增加而增加,10 - 8mol·L- 1浓度尼古丁EPC影响最为显著(P <0 .0 1,n =6 )。另外,10 - 8mol·L- 1尼古丁呈时间依赖地增加外周血EPC数量,改善外周血EPC功能。而尼古丁在浓度>10 - 6 mol·L- 1却减少外周血EPC数量,损害外周血EPC功能。结论　尼古丁可增加EPC数量并改善其功能,然而高浓度尼古丁或许对EPC具有毒性     

CD34+细胞在急性心肌梗死周边区表达的研究

目的探讨动员骨髓干细胞后CD34 细胞在急性心肌梗死微环境周边区中的表达。方法制备大鼠心肌梗死模型,通过心肌病理组织学及免疫组织化学检测,评价动员的骨髓干细胞对心肌梗死后24h、7d及14d的治疗作用,并对其机制进行探讨。结果24h及7d动员组检测CD34 阳性心肌细胞(个/HP)与对照组相比,分别为(2.90±0.87比1.10±0.88;8.30±1.83比1.40±0.51,P<0.05),且动员组CD34 细胞数7d与24h比较(个/HP)(8.30±1.83比2.90±0.87,P<0.05)明显增加;7d时,动员组与对照组缺血周边区均有B r-dU免疫阳性细胞,与对照组比(个/HP),B rdU标记阳性细胞数明显增多(7.90±1.37比1.30±0.67,P<0.05);14d时,对照组可见大量心肌瘢痕组织;而动员组瘢痕组织面积明显小于对照组,部分血管壁上可见小核深染的细胞附着,并沿血管壁移行,14d时CD34 细胞均变为阴性反应。结论动员的骨髓干细胞对大鼠缺血心肌有治疗作用,其机制可能是在心肌微环境中,动员的骨髓干细胞(包括CD34 细胞)有向心肌细胞、血管内皮细胞分化的潜能。     

雌激素对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 :观察雌激素对血管平滑肌细胞 (SMC)凋亡的影响。方法 :以大鼠为对象 ,观察正常对照组、去卵巢组及去卵巢 +雌二醇治疗组大鼠血管平滑肌细胞凋亡的关系。结果 :雌二醇治疗组血管平滑肌细胞凋亡较去卵巢组相比明显减少(P>0 .0 5 ) ,与正常对照组比较差别无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 :雌二醇对血管平滑肌细胞的凋亡有抑制作用 ,可能是其预防动脉粥样硬化的机制     

血管内皮细胞生长因子-165和血管形成素-1促进干细胞动员

目的 研究缺血肌肉转染腺病毒(Ad-)携带人血管内皮细胞生长因子-165(VEGF-165)和人血管形成素-1(Ang-1)基因后引起的细胞动员效应。方法 制作大鼠下肢血管闭塞模型,肌肉内注射Ads-VEGF-165和／或Ad5-Ang-1,以Western法检测生长因子蛋白表达、免疫组化检测基因导入后在缺血肌肉引起的效应。结果(1)局部转基因肌肉组织高表达人VEGF-165蛋白和人Ang-1蛋白;(2)与对照组相比,接收两因子转染后的骨骼肌纤维间溴化脱氧尿嘧啶(BrdU)阳性的浸润细胞显著增多,呈协同效应。有细胞同时表达内皮细胞、骨骼肌细胞、平滑肌细胞标志性抗原。部分细胞表达CD117^ 并分化为新生微血管的内皮细胞。结论(1)两因子能促进CD117^ 骨髓干细胞动员到缺血组织部位并分化为内皮细胞参与血管新生;(2)两因子可能协同动员召集能在缺血部位聚集并分化为其它类型细胞的干／祖细胞;(3)两因子可能同时作为血管生成因子和细胞动员剂用于缺血性疾病的干细胞移植治疗中,以增强缺血损伤修复效果和节省干细胞用量。     

血管生成,抗血管生成及靶向血管的基因治疗

正常情况下人出生后只有在月经周期和创伤修复时方才有血管的增生；而在许多病理情况下，却发生持续性的、不能控制的血管生成。与此相反，血管生成不足也能导致溃疡愈合失败和心梗。因此调控血管生成是对上述疾病采用的新治疗手段。例如，目前正在用抗血管生成药进行癌症的临床治疗试验；而通过外源性生长因子回速血管生成，则能预防或限制创伤与十二指肠溃疡的损害。本文概述了这一方面的最近进展，并讨论了今后发展的趋势。     

骨髓动员后的自体骨髓血干细胞移植治疗糖尿病下肢血管病变疗效观察

目的观察骨髓动员刺激后的自体骨髓血干细胞移植治疗糖尿病下肢血管病变的临床疗效。方法应用骨髓动员后的自体骨髓血干细胞移植治疗远端流出道狭窄的糖尿病下肢血管病变患者共18例,男15例,女3例,年龄52—76岁,平均66．2岁,糖尿病病程4～22年,平均14．6年。18例患者中共有患肢33条。所有患者均予重组人粒细胞集落刺激因子150～300μg／d皮下注射,使手术日WBC达30．0×10^9／L（不超过50．0×10^9／L）。然后在严格无菌操作下,行局部麻醉,自髂后上棘抽取骨髓血200ml左右,在百级操作间,用密度梯度离心法分离提纯出自体骨髓干细胞悬液40～50ml,在硬膜外麻醉或静脉全麻下,于患肢小腿沿血管走行方向自上而下予以肌肉注射。结果观察3个月,33条患肢麻木、冷凉缓解率为100％;疼痛缓解率为89．7％;间歇性跛行缓解率为47．1％;行走间距延长率为52．9％;溃疡愈合率为66．7％;坏疽好转率为50％;有2例2条患肢坏疽截肢平面降低;踝肱动脉指数（ABI）改善率75．8％。本组病例未发现其他并发症及不良反应。结论骨髓动员刺激后的自体骨髓血干细胞移植治疗糖尿病下肢血管病变方法简便、安全、有效。     

骨髓间充质干细胞移植对急性心肌梗死中血管内皮功能及心功能的影响

目的：探讨骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的安全性和有效性,为临床应用提供些理论依据。方法收集40例急性心肌梗死的患者的临床资料,分为BMMSC移植组（ n ＝20）和PCI组（ n ＝20）,同时于本院健康体检者中选取20例为正常组（ n ＝20）。分别于干细胞移植术前、干细胞移植术后24 h、1月、3月、6月测定血管内皮功能激活的标志物ISCAM-1、SVCAM-1、SE-selection来评价内皮功能,用彩色多普勒超声仪器及6 min步行实验评定心功能。结果移植组和PCI组SICAM-1、SVCAM-1、SE-selection水平显著高于正常组（ P ＜0．05）,6个月后移植组SICAM-1、SVCAM-1、SE-selection水平显著低于PCI组（ P ＜0．05）,且2组均显著低于术前（ P ＜0．05）,高于正常组（ P ＜0．05）。6个月后移植组EF和6 min行走试验显著高于PCI组（ P ＜0．05）,且均低于正常组（ P＜0．05）。结论骨髓间充质干细胞移植对于患者心功能的恢复效果较为理想,表明骨髓间充质干细胞移植能够对心肌梗死患者的心室重构有促进作用,且显著优于冠状动脉介入方式。     

聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子对大鼠心肌梗死的影响

目的：研究聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF，商品名津优力)对大鼠实验性心肌梗死的影响。方法：应用冠状动脉结扎心肌梗死模型，通过心肌梗死面积的定量组织学测定、心肌酶学检查、心肌小血管密度及心肌免疫组化染色等观测指标，评价给予津优力24h和2周后的治疗作用。结果：津优力给药1次及给药2周后，心肌梗死范围减小，心肌CK和LDH降低，心肌梗死治疗2周后，在心肌梗死区及交界区有CD34^ 细胞的存在，心肌小血管的密度增加。结论：津优力对大鼠心肌梗死模型有明确的治疗作用。     

骨髓来源干细胞移植治疗急性心肌梗死患者的临床疗效和安全性的Meta分析

目的 对骨髓来源干细胞移植治疗急性心肌梗死患者的临床疗效和安全性进行系统评价。方法 计算机检索Pubmed、EMbase、Cochrane Library、维普数据库、万方数据库及CNKI数据库有关骨髓来源干细胞移植治疗急性心肌梗死患者的随机对照试验,检索时间为建库至2018年5月。经过两名系统评价员根据文献纳入与排除标准筛选文献,并提取资料中的相关重要信息,采用RevMan 5.2软件评价纳入文献的偏倚风险,采用Stata 14.0软件进行Meta 分析。结果 通过系统筛选共纳入 39 篇临床随机对照研究,总计 3 314 例急性心肌梗死患者（接受移植治疗 1 879例,对照1 435例）。异质性检验结果显示纳入的研究之间无明显异质性,Begg和Egger定量检验结果显示各研究间也不存在发表偏倚（P＞0.1）。与对照组相比,输注骨髓来源干细胞能有效改善左心室舒张末期容积（LVEDV）和左心室收缩末期容积（LVESV）,而左心室射血分数（LVEF）和心肌梗死面积（MIS）在输注骨髓来源干细胞之后与对照组之间差异无统计学意义。敏感性分析结果显示所纳入的39项研究对于各结局指标合并效应量的影响程度较小,稳定性好,结果较为可信。7项研究报道了后期随访期间出现了不同程度的不良反应,包括死亡、支架内再狭窄、冠状动脉闭塞,这些不良反应是否与细胞输注相关尚待进一步研究。结论 骨髓来源干细胞移植治疗急性心肌梗死有助于抑制患者左心室重构,临床应用的安全性需要进一步多中心临床试验及长期随访加以评估。     

Autologous transplantation of bone marrow mononuclear cells improved heart function after myocardial infarction

AIM: To investigate whether autologous transplantation of adult stem cells could improve post-infarcted heart function. METHODS: Bone marrow mononuclear cells (MNCs) were isolated from adult rabbits‘ tibias after coronary ligation. These cells were exposed to 5-azacytidine 10 μmol/L for 24 h on the third day of culture. After being labeled with bromodeoxyuridine (BrdU), the cells were auto-transplanted into bordering zone of the infarcted area at 2 weeks after injury. The animals were killed at 3 days, 2 weeks, 1 month, and 2 months after transplantation,respectively. The left ventricular functions, capillary density, and cardiac nerve density were measured and the differentiation of the engrafted cells was determined by immunostaining. RESULTS: BrdU-labeled MNCs were well aligned with the host cardiomyocytes. Parts of them were incorporated into capillary and arteriolar vessel wails. In addition to inducing angiogenic ligands (basic fibroblast growth factor, vascular endothelial growth factor) and imflammation cytokines (interleukin 1-β) during the early period of MNCs implantation, MNCs induced 2.0-fold increase in capillary density as well. Moreover, GAP43-positive and TH-positive nerve density were markedly higher in the MNCs-treated groups than that in the non-treated hearts. Left ventricular ejection fraction,LV dp/dtmax, and LV-dp/dtmax were 47 %, 67 %, and 55 % in MNCs-treated heart respectively, which was higher than that of the control heart, whereas left ventricular end-diastolic volume, left ventricular end-diastolic diameter,and left ventricular end-diastolic pressure were 45 %, 22 %, and 50 % respectively in MNCs-treated heart, which was lower than that of the control heart at 2 months after cell transplantation. CONCLUSION: Autologous transplantation of MNCs induced angiogenesis and nerve sprouting and improved left ventricular diastolic function.     

骨髓间充质干细胞治疗小型猪急性心肌梗死的实验研究

目的：研究自体骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）经冠脉内注射治疗急性心肌梗死的效果。方法：先以球囊阻塞法制成小型猪急性心肌梗死模型。取骨髓体外培养并扩增MSC，标记后经冠脉注入，1个月后核素心肌显像检测相对心肌梗死面积、心肌灌注评分和射血分数、经导管检测左室收缩压（LVSP）、左室舒张末期压（LVEDP）、压力升高最大速率（LV＋dp／dtmax）和压力下降最大速率（LV—dp／dtmin）。并以NOGA电机械标测细胞移植前和移植后心肌缺血面积，免疫荧光法分析MSC的植入和分化情况。结果：和对照组相比，细胞治疗组射血分数[（44．1±4．3）％ vs （39．0±5．2）％，P〈0．05]、心肌灌注评分[（30．0±5．3）vs（41.8±8．8），P〈0．01]、相对心肌梗死面积[（28．6±4．7）％ vs （33．5±3．4）％，P〈0．05]、LV＋dp／dtmax[（1818±117）mm Hg／s vs （1611±115）mm Hg／s，P〈0．01，mmHg=0．133kPa]、LV—dp／dtmin[（1801±89）mmHg／s vs （1618±66）mmHg／s，P〈0．01]均显著增加，LVEDP[（9．4±1．7）mmHg vs（12．6±2．8）mmHg，P〈0．05]显著降低。病理检查发现细胞移植术后1月，原梗死心肌相关区域即可见带MSC标记物的新生心肌和血管，且该部分心肌表达阳性的肌凝蛋白重链、连接蛋白43、平滑肌肌动蛋白和Ⅷ因子相关抗原。结论：MSC体外培养扩增后经冠脉植入可在心肌梗死小型猪心肌梗死相关区域分化为具有生理功能的新生心肌和血管组织，可改善急性心肌梗死猪的心功能。     

超声观察骨髓间充质干细胞移植对兔心肌梗死心功能的影响

目的应用超声评价体外不同处理方式兔骨髓间充质干细胞（MSCs）移植于缺血心肌后对心脏功能的影响。方法采用结扎冠状动脉左前降支的方法建立心肌梗死模型,2周后分别将自体MSCs、经5-aza诱导的MSCs、骨髓单个核细胞（BMMNCs）,Dil标记后用微量注射器注射于兔缺血心肌内,并以无血清培养基注射动物为对照组。分别在术前、细胞移植前、细胞移植后2、4周之后行M型超声心动测量：左室收缩末内径（LVESD）、左室舒张末内径（LVEDD）,计算左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）等指标。结果细胞移植后2、4周,超声心动检查发现MSCs组和5-aza诱导的MSCs组的兔心功能（LVEF、LVFS值）比对照组显著升高（P〈0.05）,而BMMNCs组仅在移植后4周明显改善（P〈0.05）;LVESD、LVEDD细胞移植组与对照组相比无显著差异（P〉0.05）。结论 MSCs、经5-aza诱导的MSCs、BMMNCs均能存活于梗死心肌中,从而改善缺血心肌后左室收缩功能。     

Differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells induced by myocardial medium under hypoxic conditions

AIM: To explore whether bone marrow mesenchymal stem cells (MSC) can differentiate into myocardial-like cells induced by myocardial medium, especially the hypoxia/reoxygenation-conditioned medium of cardiomyocytes. METHODS: Myocardial cells obtained from neonatal Sprague-Dawley rat ventricles were isolated and cultured in vitro and a hypoxia reoxygenation model was established. The MSC isolated from adult Sprague-Dawley rats were purified and then incubated with 3 different mediums: medium A- the conditioned medium of normal cardiomyocytes; medium B - the conditioned medium of cardiomyocytes after hypoxia reoxygenation; and the control medium - ordinary medium. The expressions of the cardiac myosin heavy chain (MHC), troponin T (TnT) and connexin 43 were investigated in the MSC after 24 h, 48 h and 72 h cultivation, respectively. RESULTS: The MSC expressed MHC and TnT when incubated with the conditioned medium of cardiomyocytes after hypoxia reoxygenation, but did not express connexin 43. None of MHC, TnT and connexin 43 was detected in the MSC incubated with the conditioned medium of normal cardiomyocytes. CONCLUSION: The results indicate for the first time that myocardial medium for hypoxic preconditioning can induce MSC differentiation into myocardial-like cells.     

经冠脉移植自体骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗死的实验研究

目的　观察骨髓间充质干细胞 (MSC)植入急性心肌梗死 (AMI)区的转归及治疗作用。方法　通过冠脉转运的方法将幼猪自体骨髓MSC移植至AMI区 ,8周后观察MSC的分化、促血管生长情况 ,用核素门控心肌灌注显像观察心肌灌注的改善及心脏功能变化。结果　移植的细胞表达β肌球蛋白重链 (β MHC)和连接蛋白Connexin4 3,8周后 ,治疗组心肌灌注显像明显改善 ,毛细血管密度、左室射血分数均明显高于对照组 (P <0 0 0 1)。结论　骨髓MSC经冠脉转运在心肌微环境下可向心肌细胞分化 ,并能促血管生成及改善心功能     

双龙方与自体骨髓单个核细胞经心导管移植对中国小型猪心肌梗死的影响

目的：研究中药双龙方与自体骨髓单个核细胞经心导管移植对中国小型猪心肌梗死的影响。方法：利用心导管技术建立中国小型猪冠状动脉栓塞心肌梗死模型，建立经心导管冠状动脉内骨髓单个核细胞移植的新方法，通过心电图、定量组织学、超声心动图、心肌酶及生化检查、心肌小血管密度、梗死区内骨髓单个核细胞观察等综合评价双龙方、自体骨髓单个核细胞经心导管移植及两者合用的疗效。结果：双龙方与自体骨髓单个核细胞经心导管移植可减小心肌梗死范围，超声心动图检查显示心功能明显改善，并可增加心肌梗死区小血管密度，对心肌酶及生化指标亦有不同程度改善作用。自体骨髓单个核细胞移植及合用双龙方后均有助于心肌侧枝循环的建立，心肌供血明显改善。自体骨髓单个核细胞可在移植区内存活，并部分分化为心肌细胞及心肌小血管，补充了心肌细胞的数量。结论：双龙方与自体骨髓单个核细胞移植对中国小型猪心肌梗死有明确的治疗作用。