EGF在胎儿晶状体上皮细胞中的表达

目的：观察表皮生长因子（EGF）在人胎儿晶状体上皮细胞的表达。方法：用SP免疫组织化学法对48例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞作EGF免疫组织化学染色。结果：EGF在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达。EGF阳性细胞胞浆为桔黄色或棕黄色的颗粒状或斑块状；免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少。结论：EGF在胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达；并且随着胎儿的增长而减少。     

PCNA在胎儿晶状体上皮细胞的表达

目的：观察增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在胎儿晶状体上皮细胞的表达。方法：用SP免疫组织化学法对48例人不同胎龄晶状体上皮细胞进行PCNA免疫组织化学染色。结果：PCNA在人不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达；PCNA阳性细胞核有桔黄色或棕黄色，免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少。结论：PCNA在人不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达，且随着胎龄的增加而减少。     

PCNA与EGF在人胎儿晶状体上皮表达的研究

目的：观察增殖细胞核抗原（PCNA）及表皮生长因子（EGF）在人胎儿晶关於 本上皮细胞的表达。方法：用SP免疫细胞化学法对48例人胎狼不同胎龄晶状体上皮细胞进行PCNA，EGF免疫细胞化学染色。结果：PCNA，EGF在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达；免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少。PCNA阳性细胞核为桔黄色或棕黄色；EGF阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的斑块状；经相关分析；EGF与PCNA呈正相关。结论：PCNA，EGF在人胎儿不同胎龄胎晶状体上皮细胞均有表达。且EGF促进晶状体上皮细胞的增殖。     

TGF—β1、EGF在人胎儿晶状体上皮细胞的表达

目的：观察转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）、表皮生长因子（ＥＧＦ）在人胎儿晶状体上皮细胞的表达。方法：用ＳＰ免疫细胞化学法对４８例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞进行ＴＧＦ－β１、ＥＧＦ免疫细胞化学染色。结果：ＴＧＦ－β１、ＥＧＦ阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的颗粒状或斑块状;并且阳性细胞随着胎龄的增加而减少。经相关分析：ＴＧＦ－β１与ＥＧＦ呈正相关。结论：ＴＧＦ－β１、ＥＧＦ在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达,并且随着胎龄的增加而减少;ＴＧＦ－β１与ＥＧＦ具有协同作用,共同促进晶状体上皮细胞的增殖。     

PCNA与TGF-β1在人胎儿晶状体上皮细胞的表达

目的：观察增殖细胞核抗原（PCNA）及转化生长因子β1（TGF－β1）在人胎儿晶状体上皮细胞的表达。方法：用SP免疫组织化学法对48例人胎儿不同龄晶状体上皮细胞进行PCNA,TGF－β1免疫细胞化学染色,结果：PCNA,TGF－β1在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达,免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少。PCNA阳性细胞核为桔黄色或棕黄色,TGF－β1阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的颗粒状或斑块状,经相关分析,TGF－β1与PCNA呈正相关。结论：PCNA,TGF－β1在人胎儿不同胎龄胎晶状体上皮细胞均有表达,TGF－β1促进晶状体上皮细胞的增殖。     

同源盒基因Pax-6在鼠晶状体上皮细胞中的表达分析

[目的]检测体外培养的鼠晶状体上皮细胞LECs,内Pax-6基因的表达,探讨维持晶状体上皮细胞特性的基因因素.[方法]利用免疫组织化学法和免疫印迹法,检测培养的LECs中Pax-6基因的表达状况.[结果]在原代培养细胞、传第1代及传第2代的LECs中明显检测到Pax-6的阳性表达.免疫印迹同样发现在原代培养细胞、传第1代及传第2代的LECs中均能检测到Pax-6蛋白水平的表达,传第3代细胞表达微弱.阴性对照在各阶段点未见Pax-6的表达.[结论]晶状体囊膜上的LECs具有Pax-6基因,该基因的正常表达是维持LECs特性的必要条件.     

TGF-β1在人胎儿晶状体上皮细胞的加龄变化

目的：观察转化生长因子－β（TCF－β1）在人胎儿晶状体上皮细胞的表达。方法：用SP免疫组织化学法对48例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞进行TGF－β1免疫组织化学染色。结果：TGF－β1在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达。免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少。TGF－β1阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的颗粒状或斑块状。结论：TGF－β1在人胎儿不同胎龄胎晶状体上皮细胞均有表达。     

透明晶状体和老年性白内障晶状体上皮细胞水通道蛋白1的表达

目的　探讨透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞水通道蛋白 1(aquaporin 1,AQP1)的表达水平。方法　收集 5例透明晶状体和 4 0例老年性白内障患者的前囊膜。应用免疫组织化学方法和计算机图像分析技术对前囊膜下晶状体上皮细胞AQP1进行检测。结果　AQP1阳性表达在透明晶状体和老年性白内障患者前囊膜下晶状体上皮细胞的细胞膜。图像分析透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞AQP1平均吸光度值差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。老年性白内障患者晶状体上皮细胞AQP1平均吸光度值低于透明晶状体上皮细胞AQP1平均吸光度值。结论　透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞的细胞膜表达AQP1,AQP1可能在老年性白内障发生发展中起一定作用。     

晶状体上皮细胞与多肽生长因子

晶状体是一种无血管且与周围组织联系较小的透明组织 ,具有复杂的代谢过程 ,其营养主要来自房水。晶状体的病变主要表现为透明性改变及位置的异常 ,二者均可引起显著视力下降。晶状体混浊亦称白内障 ,是致盲的首要因素。尽管白内障的发病率高 ,对健康影响大 ,但对其病因及发病机理却知之甚少。流行病学研究表明 :很多因素均可增加患白内障的危险性 ,如 :年龄增大、糖尿病、营养不良、受紫外线照射过多、青光眼和其它眼外伤[1 ] ;而抗氧化剂、维生素及矿物质对白内障有保护作用。近年来 ,随着细胞生物学和分子生物学技术与临床研究的结合 ,推…     

PCNA与TGF-β_1胎儿晶状体上皮细胞的表达

目的 :观察增殖细胞核抗原 (PCNA)及转化生长因子 -β1(TGF-β1)在人胎儿晶状体上皮细胞的表达。方法 :用 SP免疫组织化学法对 4 8例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞进行 PCNA、TGF- β1免疫细胞化学染色。结果 :PCNA、TGF-β1在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达 ;免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少。PCNA阳性细胞核为桔黄色或棕黄色 ;TGF- β1阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的颗粒状或斑块状 ;经相关分析 ,TGF-β1与 PCNA呈正相关。结论 :PCNA、TGF-β1在人胎儿不同胎龄胎晶状体上皮细胞均有表达 ;TGF-β1促进晶状体上皮细胞的增殖     

碱性成纤维细胞生长因子促体外培养人晶状体上皮细胞株增殖及细胞周期的研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）与体外培养的人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cells,HLECs）株增殖之间的关系及其对细胞周期的影响.方法 对人晶状体上皮细胞株（SRA01/04）进行无血清培养液培养,取对数生长期细胞进行实验,分别加入不同终浓度的bFGF （0.01、0.10、1.00、10.00及100.00μg/ L） ）共同培养24、48、72 h后MTT法测定细胞增殖情况,以流式细胞仪分析bFGF对细胞增殖周期的影响.结果 bFGF浓度为0.1μg/L、1.00μg/ L、10.0μg/ L、100.00μg/ L时,对HLEC细胞有明显的促增殖作用,与阴性对照组比较差异具有统计学意义（P＜0.01）;100.00μg/ L作用24h増殖率最大112.78%,作用强度呈浓度时间依赖性; bFGF促进HLEC细胞周期发生变化,S期和G2/M期细胞比例增加,G0/G1期细胞减少,说明bFGF通过促进HLEC细胞越过G1期限止点进入增殖状态.结论 bFGF可促进HLEC的增殖,改变细胞周期,是HLECs强有力的促增殖因子.     

Caspase-3及Bax在人晶状体上皮细胞中的表达

目的 :观察Caspase 3及Bax在人晶状体上皮细胞中的表达 .方法 :收集 30只白内障晶状体前囊膜以及胚胎晶状体 (6只 )和成人透明晶状体 (4只 )的前囊膜 ,采用免疫组织化学的方法观察Caspase 3及Bax的表达情况及染色强度 .结果 :Caspase 3及Bax在各型白内障中均有很好的表达 ,在年龄相关性白内障中Caspase 3及Bax的表达为 11/ 12 ,10 / 12 ,在高度近视性白内障中Caspase 3及Bax的表达为 7/ 8,6 / 8,在外伤性白内障中Caspase 3及Bax的表达为 5 / 6 ,5 / 6 ,在并发性白内障中Caspase 3及Bax的表达为 3/ 4 ,4 / 4 ;在各型白内障中Caspase 3及Bax的表达没有显著性差异 (P >0 .0 5 ) .结论 :在白内障的发生中存在晶体上皮细胞的凋亡     

体外培养人胚晶状体上皮细胞生长特性的研究

目的观察体外培养人胚晶状体上皮细胞的生物学特性。方法组织块贴壁法培养人胚晶状体上皮细胞,通过倒置相差显微镜、透射电子显微镜,采用免疫细胞化学法分析人胚晶状体上皮细胞的生长特性。结果体外培养的原代人胚晶状体上皮细胞在组织块贴壁48～72 h后从组织块边缘长出,具有上皮细胞的形态特点,第10天达到融合。第二代人胚晶状体上皮生长曲线近＂S＂形,经过1～2 d的潜伏期后进入对数生长期,需10 d左右达到融合,细胞形态呈六角形或椭圆形、超微结构保持正常,免疫细胞化学SABC法染色结果显示细胞浆内α-晶状体蛋白染色阳性。结论人胚晶状体上皮细胞具有增殖能力,第二代人胚晶状体上皮细胞是进行白内障相关研究的合适实验对象。     

全反式维甲酸抑制晶体上皮细胞增殖的实验研究

目的 :研究全反式维甲酸 (ATRA)对晶体上皮细胞 (LECs)增殖的抑制作用。方法 :取体外培养的第 2代兔晶体上皮细胞 (RLECs) ,分为正常培养 (对照组 )和加入不同浓度 (1× 10 - 8～ 1× 10 - 5mol/L)ATRA的实验组 ,分别于培养后 2 4h和 4 8h观察各组晶体上皮细胞的形态学改变 ,计算各浓度ATRA的增殖抑制率。结果 :各种浓度的ATRA对兔晶体上皮细胞均有明显的抑制作用。随浓度升高 ,细胞形态异常改变趋于明显 ;其抑制率由低浓度时的 14 .0 %增至高浓度时的 75 .7% ;1× 10 - 6 mol/L为最高有效浓度 ,半效量 (LD50 )浓度为 0 .85× 10 - 6 mol/L。结论 :ATRA对体外培养的兔晶体上皮细胞增殖有明显抑制作用     

应用台盼蓝-茜素红联合染色实时观察晶状体上皮细胞形态与活性的研究

目的:探讨台盼蓝-茜素红染色应用于晶状体上皮细胞形态及活性研究的可行性。方法:取大耳白兔、正常人、白内障患者的晶状体前囊膜,行台盼蓝-茜素红染色,光镜下观察细胞的形态、染色效果并判断其活性。结果:兔、正常人、白内障患者晶状体上皮细胞通过台盼蓝-茜素红联合染色均可获得良好的染色效果。光镜下可清楚显示晶状体上皮细胞的形态并能区分正常与死亡的细胞。结论:台盼蓝-茜素红活性染色可用于观察晶状体上皮细胞的形态、密度、面积以及细胞的活力,是研究晶状体上皮细胞的一种良好而实用的方法。     

不同浓度EGF对体外培养人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 探索表皮生长因子(EGF)培养体外人视网膜色素上皮细胞(hRPE)的最佳浓度和最佳作用时间.方法 用CCK-8法观察EGF对体外hRPE增殖调控的剂量-效应关系、时间-效应关系.结果 在相同浓度EGF作用下,hRPE吸光度值(A值)随作用时间延长而增加;在相同培养时间条件下,hRPE A值随EGF浓度增加而增加,...     

中药秦艽提取物抑制人品状体上皮细胞迁移的研究

目的为了验证中药秦艽提取物抑制培养的人晶状体上皮细胞迁移的作用,寻找防治后发障的新药物。方法晶状体上皮细胞长成单层后,分别加入1000、500、250、125和62．5mg／L的秦艽提取物,培养24h,观察细胞毒性,确定药物的半数毒性浓度。细胞用1mL加样器枪头划痕,分别加入100、10、1、0．1mg／L秦艽提取物,培养24h。对细胞进行照像,测出实验前后的细胞痕的宽度,计算出细胞迁移距离,测定药物的半数有效浓度及计算秦艽提取物的治疗指数。结果秦艽提取物半数细胞毒性浓度为421．7mg／L。以秦艽提取物浓度对数与迁移距离做回归分析,结果显示相关系数为-0．966,有显著性差异（P=0．034）。秦艽提取物的半数有效治疗浓度为0．38mg／L。秦艽提取物治疗指数为1110。结论秦艽提取物可抑制晶状体上皮细胞的迁移,具有低毒、高效的特点。有望成为防治后发障的有效药物     

硫氧还蛋白-2 在氧化损伤的人晶状体上皮细胞中的表达及其意义

目的：探讨硫氧还蛋白-2(thioredoin-2,Trx-2)是否参与白内障的发病过程及其对过氧化氢(H2O2)诱导的 人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响。方法：选取志愿者(因外伤行透明晶状体取出术患者)10例和行超声乳化白内 障手术患者(年龄大于60岁)30例的晶状体前囊膜,采用链霉素亲生物素蛋白-过氧化物酶标免疫组织化学法检测志 愿者和白内障患者晶状体上皮细胞中Trx-2蛋白的表达情况。体外培养SRA01/04细胞,根据不同处理分为空白对照 组、20 μmol/L H2O2组、50 μmol/L H2O2组、100 μmol/L H2O2组、阴性对照组(转染对照空pCMV6质粒并用100 μmol/L H2O2处理)和过表达Trx-2组(转染pCMV6-Trx-2过表达质粒并用100 μmol/L H2O2处理)。采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2- thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法检测各组细胞活力;采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡;采用 化学比色法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性,谷胱甘肽 (glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用Western印迹检测各组细胞中Trx-2以及B细胞淋巴瘤/白 血病-2蛋白(B-cell lymphoma 2 protein,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸 蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)的表达。结果：与志愿者相比,白内障患者晶状体上皮 细胞中Trx-2蛋白表达明显减少(P<0.05)。与空白对照组比较,20, 50,100 μmol/L H2O2组Trx-2蛋白表达量均明显降低 (均P<0.05)。与空白对照组相比,100 μmol/L H2O2组和阴性对照组细胞存活率降低、凋亡率增加,细胞内SOD和CAT 活性降低、GSH含量减少、MDA含量增加,Trx-2和Bcl-2蛋白表达降低,Bax和caspase-3蛋白表达增加(均P<0.05)。与 阴性对照组比较,过表达Trx-2组细胞存活率增加、凋亡率降低,SOD和CAT活性增加、GSH含量升高、MDA含量降 低,Trx-2和Bcl-2蛋白表达增加,Bax和caspase-3蛋白表达减少(均P<0.05)。结论：Trx-2参与白内障发病中上皮细胞的凋 亡,过表达Trx-2能够减少H2O2诱导的细胞凋亡,这可能与拮抗H2O2诱导的氧化损伤有关。     

核因子E2相关因子2在晶状体上皮细胞抗氧化损伤中的作用*

目的 探讨核因子E2相关因子2（Nrf2）在晶状体上皮细胞抗过氧化氢（H2O2）氧化损伤和凋亡中的作用。方法 通过MTT测定不同浓度H2O2对人晶状体上皮细胞（HLECs）活力的影响;流式细胞术检测正常对照组（不加H2O2）,不同浓度H2O2处理组（100、200及300?μmol/L）和Nrf2抑制组（GSK-3β+H2O2 300?μmol/L）活性氧（ROS）及超氧化物酶歧化酶（SOD）的含量;Western blotting检测凋亡相关蛋白剪切型Caspase-3（Cleaved-Caspase-3）、Bax、Bcl-2、Nrf2总蛋白、Nrf2核蛋白及Nrf2浆蛋白的表达;免疫荧光法检查Nrf2在晶状体上皮细胞的表达和定位。结果 当H2O2浓度为400?μmol/L时,晶状体上皮细胞不可逆死亡。细胞经H2O2处理48?h后,各组ROS的表达量比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,与正常对照组比较,各处理组ROS含量升高（P?<0.05）,Nrf2抑制组与H2O2高浓度组比较,差异无统计学意义（P?>0.05）。处理48 h后,各组SOD的含量比较,差异有统计学意义（P?<0.05）;与正常对照组比较,各处理组的SOD含量降低（P?<0.05）,与H2O2高浓度组比较,Nrf2抑制组SOD含量下降（P?<0.05）。处理48?h后,各组Cleaved-Caspase-3、Bax、Bcl-2表达的比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,与正常对照组比较,H2O2各个浓度组Caspase-3、Bax降低（P?<0.05）,Bcl-2升高（P?<0.05）,与H2O2高浓度组比较,Nrf2抑制组的Cleaved-Caspase-3、Bax升高（P?<0.05）,而Bcl-2降低（P?<0.05）;H2O2各浓度组中Nrf2相对表达相应增多且有核内转移的趋势,Nrf2抑制组无Nrf2表达。结论 Nrf2在人晶状体上皮细胞中的表达及核易位能增加抗氧化酶和抗凋亡蛋白的含量,降低促凋亡蛋白含量,从而起到自身抗氧化损伤和抗凋亡的作用。