反义技术治疗自体移植静脉再狭窄的研究

利用自体静脉作旁路转流术是血管外科临床广泛应用的术式,为血管闭塞性疾病患者提供了有效的治疗手段.但由于移植静脉再狭窄的发生,降低了远期通畅率.因此,研究再狭窄的发生机理和防治手段,是当前面临的主要课题.     

自体静脉移植后再狭窄发病机理

尽管近年内膜增生的研究已迅速深入至分子水平，但自体静脉移植后再狭窄发病机理迄今仍未明确，目前，异常血流动力学及损伤因素的影响已趋于公认，对血小板作用有新认识，而各种生长因子对促进平滑肌细胞增殖和管腔再狭窄的作用则得到广泛重视。     

自体移植静脉再狭窄的反义基因治疗现状

利用自体静脉旁路转流术是血管外科广泛应用的术式，为血管闭塞性疾病病人提供了有效的治疗手段。但由于移植静脉再狭窄的发生，降低了远期通畅率。因此，研究再狭窄的发生机理和防治手段，是当前面临的主要课题。１自体移植静脉再狭窄的形成机制自体移植血管主要来源于自...     

局部应用紫杉醇预防兔移植静脉再狭窄

目的探讨局部应用紫杉醇对移植静脉再狭窄的预防作用。方法将96只兔随机分为3组，对照组，组Ⅰ，组Ⅱ，每组32只。3组兔均行颈外静脉与颈总动脉旁路移植术，紫杉醇与生物蛋白胶混合物局部喷涂于组Ⅰ（紫杉醇1μg）和组Ⅱ（紫杉醇8μg）移植血管表面，对照组单纯喷涂生物蛋白胶。分别于术后1，2，4和6周采集颈静脉标本，进行形态学和免疫组织化学分析。结果术后1，2，4和6周组Ⅱ移植血管内膜厚度均较对照组减少（30．10±4．50pmVS．48．20±9．16μm，40．70±6．91μmVS．54．20±8．67μm，54．70±7．11FmVS．68．60±13．72μm，68．70±8．24μmVS．76．40±12．98μm，P〈0．05）；组Ⅰ和组ⅡCD8和金属硫蛋白阳性细胞表达在各时间段均较对照组显著减少（P〈0．05）。结论在兔颈动脉旁路移植模型中，静脉移植血管周围应用紫杉醇可以抑制移植血管新生内膜的增生。     

自体静脉移植后再狭窄发病机理(综述)

尽管近年内膜增生的研究已迅速深入至分子水平,但自体静脉移植后再狭窄发病机理迄今仍未明确.目前,异常血流动力学及损伤因素的影响已趋于公认;对血小板作用有新认识;而各种生长因子对促进平滑肌细胞(SMC)增殖和管腔再狭窄的作用则得到广泛重视.     

三七总皂苷通过血管生成改善绝经后骨质疏松机制探析

骨质疏松症是危害人类生命和健康的重大疾病,而具有"四高一低"特点的绝经后骨质疏松症的发病率呈逐年攀升趋势,该病的防治研究日益引起医学界的关注。瘀血是绝经后骨质疏松症的重要机理之一,而微血管的改变则是瘀血证的病理基础。血管生成在生理性骨生长和骨重建,以及在病理性骨疾病中均具有重要作用,并能够一定程度上反映骨局部再生过程,因此血管生成与骨质疏松症存在密切关联。活血化瘀中药能够直接或间接的刺激血管生成,三七总皂苷具有独特的药理活性,能够通过促进血管生成治疗缺血性疾病,相关研究报道日渐积累。但以三七总皂苷为研究对象,以血管生成为治疗靶点,挖掘并阐释药物通过促进血管新生治疗绝经后骨质疏松症,尚未见国内外相关报道。本文旨在以血管生成为靶点挖掘三七总皂苷改善绝经后骨质疏松症的新途径,以期为同道进一步深入研究及其临床应用参阅。     

三七总皂苷对大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：研究三七总皂苷（PNS）对大鼠肾小球系膜细胞（MC）增殖以及细胞周期的影响。方法：用不含或含有高、中、低浓度PNS的RPMI-1640细胞培养液刺激体外培养的正常大鼠MC。于实验终点,运用MTT比色法测定细胞增殖情况以及PNS的细胞毒性作用;运用流式细胞术测定细胞周期。结果：PNS能够显著抑制血清诱导的大鼠MC的增殖;通过减少MC进入S＋G2/M期,从而抑制MC的有丝分裂;且在本实验浓度内（100-400μg/ml）不具有明显的诱导凋亡作用和细胞毒性。结论：PNS能通过抑制MC的有丝分裂而抑制其活化、增殖,在慢性肾脏疾病的治疗中具有一定得应用价值。     

扩张压力对兔颈外静脉移植物再狭窄的影响

目的　研究不同扩张压力对兔颈外静脉内皮完整性及颈外静脉桥再狭窄的影响。方法　 1 8只NZW兔 ,随机分为A、B、C组。每组兔颈外静脉分别以 50、1 0 0和 2 0 0mmHg(1mmHg=0 .1 33kPa)扩张 ,静脉内银染铺片法和扫描电镜进行内皮完整性评分。扩张后行颈外静脉颈总动脉移植 ,2 8d后测定静脉桥管腔面积和内膜厚度。结果　A组内皮完整性评分 (1 .42 )显著低于B组 (2 .67,P <0 .0 1 )和C组 (3 .83 ,P <0 .0 1 )。A组的静脉桥的管腔面积 (1 1 .3± 2 .0 )mm2 显著大于B组 [(6 .0± 1 .7)mm2 ,P =0 .0 0 1 ]和C组 [(4.5± 1 .2 )mm2 ,P <0 .0 0 1 ] ;A组的静脉桥的内膜厚度 (36 .2± 3 .4) μm显著小于B组 [(52 .3± 7.7) μm ,P =0 .0 0 1 ]和C组 [(53 .1± 5 .8) μm ,P <0 .0 0 1 ]。结论　 50mmHg的扩张压力引起的兔颈外静脉桥再狭窄的程度明显轻于 1 0 0mmHg和2 0 0mmHg,其原因在于能较好地保存静脉内皮完整性     

移植损伤对移植静脉影响的实验研究

目的探讨移植静脉再狭窄的机制,明确移植损伤对移植静脉的影响。方法健康新西兰大白兔36只,随机选取一侧将股静脉翻转后移植于同侧股动脉缺损(静-动组),另一侧将同等长度股静脉截取后行原位缝合(静-静组),另取正常股静脉作为对照组(取自静-动组移植前静脉的一部分)。均于术后4周取移植静脉段,行HE染色、弹力纤维的维多利亚蓝染色观察移植静脉管壁组织学变化;增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)免疫组织化学染色观察管壁细胞增殖情况;电镜观察管壁细胞超微结构改变。结果静-静组血管壁中膜平滑肌细胞增殖,但内膜(3.50±0.41μm)、中膜(12.23±1.59μm)厚度无明显变化;静-动组内膜、中膜细胞均增殖,内膜(25.60±3.21μm)、中膜(21.30±2.47μm)厚度较对照组、静-静组均增加,差异有统计学意义(P<0.01)。对照组未见PCNA阳性细胞,静-静组内膜(5.9%±1.3%)、中膜(23.4%±3.4%)PCNA阳性细胞百分比均小于静-动组内膜(16.4%±1.9%)、中膜(36.5%±3.7%),差异有统计学意义(P<0.01)。静-静组透射电镜下可见内皮细胞扁平,游离端有绒毛样突起,细胞排列紧密,中膜平滑肌细胞增殖;静-动组透射电镜下可见内皮细胞增殖明显,增殖的内皮细胞形态不规则,细胞间隙增宽,内膜中可见大量平滑肌细胞,基底膜不完整,中膜平滑肌细胞明显增殖;对照组内皮细胞形态及排列与静-静组相似,只是中膜平滑肌细胞未见增殖。结论静脉移植后可导致血管管壁细胞增殖,如合并血流动力学变化则会发生更严重的细胞增殖和迁移,导致管腔狭窄;减少移植损伤,改善移植静脉的微循环,成为预防移植静脉再狭窄的理论基础之一;静-静移植的动物模型,有助于探寻静脉移植后再狭窄的机制。     

三七总皂甙对鼠脊髓损伤早期病理变化影响的观察

Allen氏法250g·cm致伤60只Wistar大鼠T13～L1脊髓节段。伤后30min、2h、4h、第二及第三个24h分别腹腔注射三七总皂甙（PNS）100mg／kg及50mg／kg体重；另设二甲亚砜对照组及空白对照组。伤后30min、2h、6h、24h、1周及6周各取伤区脊髓组织送光、电镜检查。结果显示PNS治疗组脊髓灰质出血坏死较轻，周围白质大部存留，髓鞘残留，大量毛细血管和少突胶质细胞增生。提示PNS可减轻脊髓损伤后的灰质坏死，调节微循环和减轻继发性病理损害，为白质存活创造条件。     

三七总皂甙对大鼠肝脏低温保存再灌注期间肝细胞凋亡的影响

目的　研究三七总皂甙 (PNGS)对大鼠肝脏低温保存再灌注期间肝细胞凋亡的影响及其机制。方法　采用大鼠离体肝脏再灌注模型 (IPRL) ,用Fura 2法测定低温保存 2h后肝细胞内钙离子浓度 ;经乳酸林格氏液 (LR)低温保存 2 4h的肝脏再灌注 30min后进行肝脏功能检测、氧自由基代谢产物、肝细胞凋亡、Bcl 2蛋白表达及形态学观察。LR和DMEM液中加入不同浓度PNGS。结果　大鼠肝细胞内钙离子浓度、MDA、SOD、肝细胞凋亡及Bcl 2蛋白表达阳性率等项指标各实验组明显好于对照组 (P <0 0 1) ,PNGS对大鼠肝细胞凋亡的保护作用显示出剂量依赖性 ,在 2 0 0～ 6 0 0mg范围内随剂量增加保护作用随之增强 (P <0 0 1) ,在 80 0～ 10 0 0mg范围内虽有增强 ,但无明显差别 (P >0 0 5 )。结论　PNGS减轻了大鼠肝脏在低温保存再灌注期间肝细胞凋亡 ,可能与通过抑制钙超载、抗氧自由基损伤、提高Bcl 2蛋白表达作用有关。     

组织型纤溶酶原激活因子基因对移植静脉再狭窄的影响

目的探讨组织型纤溶酶原激活因子(t-PA)局部转基因表达对移植静脉血栓形成和内膜增生的影响。方法 72只兔建立颈外静脉-颈总动脉移植模型,并随机分为基因治疗组(n= 24)、载体对照组(n=24)和空白对照组(n=24),进行局部基因转染,于术后不同时点取材,逆转录 -聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹(Western blot)和底物发色法分别检测移植静脉t-PA基因表达和活性变化,放射标记计数观察其对血小板沉积的影响,病理形态学观察移植血管新生内膜增生情况。结果术后2、5、14、28 d,转基因组检测到移植静脉外源性t-PA mRNA的转录和蛋白表达,其活性分别为(370．63±59．44)、(344．13±48．47)、(252．87±51．80)和(161．75±68．94)U／g,对照组各时点则未检测到纤溶酶活性。术后2 d,转基因组、载体组和空白对照组平均血小板沉积数分别为(85．04±21．58)×10 6,(225．87±85．13)×10 6和(211．57±78．02)×10 6,转基因组明显少于载体组和空白对照组(P<0．05)。术后5、14、28、60 d,转基因组新生内膜面积、内膜中膜面积比均明显小于对照组。结论局部转染t-PA基因,能抑制移植静脉血栓形成,减轻新内膜的增殖,从而有效预防再狭窄的发生。     

脊髓损伤早期三七总皂甙抗氧自由基作用的实验研究

Ｗｉｓｔａｒ大鼠４８只随机分三组，Ａｌｌｅｎ＇ｓ脊髓损伤（ＳＣＩ）模型２５０ｇ·ｃｍ致伤Ｔ_（１３）～Ｌ_１脊髓节段，腹腔注射三七总皂甙（ＰＮＳ），伤后３０ｍｉｎ时１００ｍｇ／ｋｇ，２ｈ及４ｈ各５０ｍｇ／ｋｇ；以二甲亚砜（ＤＭＳＯ）为抗氧自由基阳性对照药物，并设立空白对照。伤后１ｈ及４ｈ取伤区脊髓组织测定丙二醛（ＭＤＡ）及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ），发现ＰＮＳ显著减少ＭＤＡ的生成，保护ＳＯＤ活力降低。组织形态学观察到灰质区出血坏死，髓鞘分离及线粒体水肿较轻。提示ＳＣＩ早期ＰＮＳ具有明显的抗氧自由基反应和减轻继发性损害的作用。     

剪切力对静脉移植后再狭窄的影响

自体静脉移植术是目前医学界普遍采用的治疗血管狭窄、改善组织缺血的重要手段和基本方法,是血管外科最常见的术式之一.然而,由于移植损伤、静脉与动脉的组织结构、血流动力学差异,自体静脉移植术后的通畅率仍不容乐观.本文将从血液流变学的角度对自体静脉移植术后再狭窄的形成过程进行研究.     

Extravascular perivenous fibrin support leads to aneurysmal degeneration and intimal hyperplasia in arterialized vein grafts in the rat

Background and aims  External support of vein grafts by fibrin glue possibly prevents overdistension, vascular remodeling, and neointimal hyperplasia. Previous animal models of neointimal hyperplasia showed conflicting results. Here, long-term effects of external fibrin glue support were studied in a new rat model of jugular vein to abdominal aorta transposition. Materials and methods and methods  In male Wistar rats (250–300 g) right jugular vein (1.0–1.5 cm) was transposed to the infrarenal aorta. Fibrin glue (0.25 ml) covered the vein before releasing the vascular clamps (n = 6). Control vein grafts were exposed directly to blood pressure. After 16 weeks vein grafts were pressure-fixed for histology. Intima thickness, luminal and intimal area were measured by planimetry and elastic fibers demonstrated by Elastica van Giesson staining. Results  Intimal thickness (74.04 ± 6.7 μm vs 1245 ± 187 μm, control vs fibrin treatment; p < 0.001), intimal area (2517.16 ± 355 mm² vs 18424 ± 4927 mm², control vs fibrin treatment; p < 0.05) and luminal area (2184.75 ± 347 mm² vs 7231.85 ± 1782 mm², control vs fibrin treatment; p < 0.05) were significantly increased, elastic fibers in the vessel wall were diminished and the vessel wall infiltrated by mononuclear cells in fibrin glue supported veins. Conclusion  External support of vein grafts by fibrin glue leads to aneurysmal degeneration and intimal hyperplasia, thereby possibly jeopardizing long-term graft patency.     

微泡造影剂结合超声介导一氧化氮合成酶基因转染防治移植静脉再狭窄

目的 探讨微泡造影剂及超声辐照介导内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因转染防治移植静脉血管桥再狭窄的可行性.方法 重组真核表达载体pcDNA3.1-eNOS经微泡造影剂及超声辐照介导体外转染大鼠颈外静脉,再将静脉段间置植入颈总动脉,建立SD大鼠颈外静脉-颈总动脉移植模型.于术后4周取移植静脉标本分别进行苏木素-伊红(HE)染色,免疫组织化学染色及Western blot法分析,观察eNOS基因在静脉桥中的功能表达和静脉桥新生内膜的增生.结果 Western blot法分析表明微泡造影剂及超声辐照介导eNOS基因转染组的移植血管桥内eNOS表达最明显;增殖细胞核抗原( PCNA)检测阳性率为(21.04±3.51)％,细胞凋亡指数为(12.11±1.23)％,新生内膜厚度(25.0±3.5) μm,内膜/中膜比值为0.43,均明显低于其他组(P＜0.05).结论 微泡造影剂及超声辐照介导eNOS基因转染可以有效抑制移植静脉桥新生内膜的增生.     

纤维蛋白胶联合转染金属蛋白酶组织抑制剂-1预防自体移植静脉再狭窄

目的 为减少冠状动脉旁路移植术后移植静脉再狭窄,探讨术中应用纤维蛋白胶联合转染金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)对自体移植静脉再狭窄的影响及其作用机制.方法 将24只新西兰大耳白兔随机分为3组,每组8只,即非支架组(NS组)、纤维蛋白胶外支架组(FS组)、纤维蛋白胶联合转染TIMP-1组(TS/FS组) 建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植术模型.术后28 d取出移植静脉桥,进行组织病理分析移植静脉内膜厚度、中膜厚度及内膜面积、中膜面积,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测各组移植静脉中TIMP-1基因的表达.结果 术后28d,TS/FS组移植静脉内膜厚度及内膜面积分别为(37.98 ±4.19) μm及(0.557±0.049) mm2,与NS组的( 76.87±4.32) μm、(1.025 ±0.103)mm2及FS组的(50.28 ±4.69) μm、(0.743±0.052) mm2比较,明显减少(P＜0.05);TS/FS组移植静脉中膜厚度及中膜面积分别为(28.45 ±3.01) μm及(0.458 ±0.053) mm2,与NS组的(55.98±4.33) μm、(0.944±0.084) mm2及FS组的(36.46±4.36) μm、(0.643 ±0.056)mm2比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与NS组和FS组比较,TS/FS组TIMP-1基因的mRNA和蛋白表达明显增强,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 纤维蛋白胶联合血管外膜TIMP-1转染能够实现移植静脉TIMP-1基因的过表达;纤维蛋白胶外支架联合TIMP-1对移植静脉内膜和中膜增生有协同抑制作用.     

肝素对自体移植静脉内膜增殖的影响

目的 探讨肝素对移植静脉内膜增殖的影响。方法 建立大鼠自体静脉移植模型;将颈静脉内侧支移植于髂总动脉,应用肝素,每日２次,皮下注射５天。移植后２８天,应用病理形态学及ＰＣＮＡ免疫组织化学,通过计算机图像定量分析,观察其对移植静脉内膜平滑肌细胞增殖的影响。结果 肝素治疗组和空白对照组移植静脉段内膜增厚程度,ＰＣＮＡ阳性细胞数无差异。结论 肝素对移植静脉内膜增殖无作用,对受损的动脉内膜平滑肌细胞增殖有