载肝细胞生长因子的纳米粒子治疗急性肝衰竭大鼠

目的 观察载肝细胞生长因子(HGF)的聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖(PLA-O-CMC)纳米粒子培养的大鼠肝细胞腹腔内移植对急性肝衰竭(ALF)大鼠的治疗效果.方法 分别将5 ml培养24 h的大鼠肝细胞(5.0×107个)(Ⅰ组)、PLA-O-CMC纳米粒子培养的大鼠肝细胞(Ⅱ组)、载HGF的PLA-O-CMC纳米粒子培养的大鼠肝细胞(Ⅲ组)移植到ALF大鼠腹腔内,以PLA-O-CMC纳米粒子培养的大鼠肝细胞腹腔移植加每天静脉注射HGF 10 μg/kg×7 d(Ⅳ组)和5 ml RPMI 1640培养基腹腔内注射(Ⅴ组)作为对照.观察受体大鼠存活率、肝功能、肝组织光镜和电镜变化.结果 移植后14d大鼠的存活率Ⅰ～Ⅴ组分别为50.00％、68.75％、81.25％、75.00％和18.75％,各移植组高于对照组,Ⅲ组最高.移植后24 h,Ⅱ～Ⅳ组各项肝功能指标开始好转,至移植后7d,各组间除谷丙转氨酶(ALT)外,差异无统计学意义(P＞0.05).Ⅲ组的肝功能和肝脏病理损害恢复最快,其次为Ⅳ、Ⅱ、Ⅰ组,Ⅴ组恢复最慢、最差.结论 应用载HGF的PLA-O-CMC纳米粒子培养的大鼠肝细胞腹腔内移植治疗ALF大鼠能逆转肝功能,提高生存率,较静脉途径给予HGF的治疗效果更好.     

聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子培养的猪肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝再生的影响

我们将聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖（PLA-O-CMC）纳米粒子培养的猪肝细胞移植到急性肝衰竭（ALF）大鼠腹腔内，观察移植后血浆中肝细胞生长因子（HGF）、血管内皮生长因子（VEGF）的变化及受体肝脏病理改变，探讨其对ALF大鼠肝再生的影响。     

肝细胞脾脏移植代谢性支持大鼠急性缺血性肝衰竭

目前对急性重型肝炎尚缺乏十分有效的治疗手段，往往需接受肝移植，然而肝供体的缺乏及治疗费用昂贵而限制了肝移植的应用。近年来，Mito等报道肝细胞脾脏移植可延长重型肝炎的生存期，为此，本实验以大鼠急性肝衰竭模型探讨了肝细胞脾脏移植术能否代谢性支持治疗急性肝衰竭。     

微囊化猪肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭

目的探讨微囊化猪肝细胞移植(HTx)治疗大鼠急性肝衰竭(ALF)的效果。方法采用原位胶原酶循环肝灌注法分离中国实验用小型猪肝细胞,海藻酸钠-氯化钡法微囊化。应用 D-氨基半乳糖(D-gal)1．2 g／kg体重腹腔内注射制作SD大鼠ALF模型。ALF大鼠随机分为3组。注药24 h后分别将PRMI 1640培养液2 ml腹腔注射为对照(I组)、2 ml游离猪肝细胞(2×107个／ml)腹腔内移植(Ⅱ组),以2 ml微囊化猪肝细胞腹腔内移植(2×107个／ml,Ⅲ组)。观察移植后大鼠14 d存活率、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)、血氨(NH3)的改变和肝脏的病理变化。结果肝细胞移植后大鼠14 d存活率:I组为20．0％(5／25),Ⅱ组为66．7％(16／24),Ⅲ组为76．0％(19／ 25),3组间差异有统计学意义(P<0．05)。移植后第1天I组ALT、TB和移植前相比差异无统计学意义,Ⅱ、Ⅲ组ALT、TB下降。第4天3组ALT、TB均继续下降,Ⅱ、Ⅲ组低于I组(P<0．05), Ⅱ、Ⅲ两组间差异无统计学意义(P>0．05)。移植后第7天,ALT进一步下降,3组间差异有统计学意义(P<0．05);TBⅢ组显著低于Ⅱ组和I组(P<0．05),Ⅱ组低于I组但差异无统计学意义 (P>0．05)。移植后第14天,肝功能均明显恢复,ALT、TBⅡ、Ⅲ组均低于I组(P<0．05),Ⅱ、Ⅲ两组间差异无统计学意义(P>0．05)。各组治疗前后NH3有所改善,但各时间段及各组之间差异无统计学意义(P>0．05)。微囊组和游离肝细胞组移植后肝脏病理损害修复较快,而阴性对照组肝脏再生修复较差。结论微囊化猪肝细胞腹腔内移植可以提高药物诱导急性肝衰竭大鼠的存活率,改善急性肝衰竭大鼠的肝功能,有利于受体受损肝脏的再生修复,但对降低血氮的效果不明显。     

PLA O CMC纳米粒子培养的猪肝细胞大鼠腹腔内移植后凋亡相关蛋白的变化

目的:探讨聚乳酸 O 羧甲基壳聚糖（PLA O CMC）纳米粒子培养的猪肝细胞大鼠腹腔内移植后移植肝细胞凋亡相关蛋白Bcl 2，Bax和Fas表达的变化。方法:原位胶原酶循环肝灌注法分离猪肝细胞。D 氨基半乳糖腹腔内注射制作大鼠急性肝衰竭模型。随机分为2组，48 h后分别将5 mLⅠ型胶原凝胶包埋的PLA O CMC纳米粒子黏附培养24 h的猪肝细胞（A组），5 mLⅠ型胶原凝胶固定培养24 h的猪肝细胞（B组）移植至急性肝衰竭大鼠腹腔内。移植量均为5.0×107个肝细胞。采用免疫组化法检测移植后3 d内移植肝细胞Bcl 2，Bax和Fas的表达情况。结果:移植后1，2，3 d，A组Bcl 2阳性细胞百分数明显高于B组（P＜0.05），Bax和Fas阳性细胞百分数明显低于B组（P＜0.05）。结论:PLA O CMC纳米粒子能上调移植猪肝细胞的抗凋亡蛋白的水平和下调凋亡蛋白的水平，具有良好的抗凋亡作用。     

重组肝细胞生长因子促进大鼠移植肝细胞的再生

目的探讨术后应用重组肝细胞生长因子(r HGF)对大鼠移植肝细胞再生的促进作用。方法采用改良“二袖套法”建立SD大鼠原位部分肝移植模型,受鼠分为实验组和对照组,术后经尾静脉分别给予r HGF和相同体积的生理盐水,2次/d。两个组分别在术后第1、2、4、7d时随机挑取5只大鼠处死,称取移植物湿重,采血检测血清丙氨酸转氨酶及白蛋白,流式细胞仪检测移植肝的增殖活性,免疫组织化学法检测移植肝Ki-67的表达情况。结果术后第1、2d,实验组移植物湿重较对照组同时间段明显增加;术后第4、7d,实验组血清丙氨酸转氨酶水平较对照组同时间段明显降低,而白蛋白水平较对照组同时间段明显增高;术后第2、4d,实验组的移植肝增殖指数和Ki-67表达较对照组高(P<0.05)。结论大鼠部分肝移植后使用r HGF能够明显促进移植肝细胞的再生。     

急性肝功能衰竭肝细胞移植后的肝再生研究进展

急性肝功能衰竭（acute liver failure，ALF）的治疗十分棘手。自1985年开始采用急诊行原位肝移植治疗以来，术后一年生存率已提高至83％。但是急诊行原位肝移植存在供体短缺等缺点，其应用受到一定限制。近年肝细胞移植的研究取得很大进展。有望成为治疗ALF的另一种有效手段。由于肝脏的再生潜力很大．移植肝细胞所提供的暂时、有效的肝功能支持．为受体肝脏的再生恢复赢得了时间，从而可使ALF病人有时间等待肝移植，甚至有可能避免肝移植。研究ALF肝细胞移植后的肝再生及其机制．探讨其影响因素．对肝细胞移植的临床应用具有重要的意义。本文就有关ALF肝细胞移植后肝再生的研究进展综述如下。     

MSCs移植治疗肝切除术后肝衰竭的应用及进展

肝大部切除术后肝衰竭的病死率极高,是非常危重的肝脏手术并发症,并且尚无有效治疗手 段,目前仍然以控制症状为主。间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）因免疫调节、减轻炎症反应 能力被广泛研究。此外,MSCs具有促增殖和抗凋亡的特性,可以促进肝脏的修复和再生。综上,MSCs移 植成为治疗肝大部切除术后肝衰竭的研究热点,本文对MSCs的治疗效果及其促进肝脏修复的机制作一综 述。     

冷冻肝细胞移植治疗大鼠肝硬化和急性肝衰竭效果的比较

目的探讨冷冻肝细胞移植治疗大鼠肝硬化和急性肝衰竭的可行性,并比较其对该两种疾病的治疗效果。方法通过原位两步灌流法分离大鼠肝细胞,采用程序冷冻法冷冻肝细胞。利用四氯化碳(CCl4)及D-氨基半乳糖分别建立大鼠肝硬化及急性肝衰竭模型。实验分组:Ⅰ组为正常对照组;Ⅱa为肝硬化门静脉注射生理盐水组;Ⅱb组为肝硬化肝细胞移植组。Ⅲa组为肝衰竭门静脉注射生理盐水组,Ⅲb组为肝衰竭肝细胞移植组。检测各组门静脉压力、肝功能及病理学变化,并行统计学分析。结果冷冻的肝细胞复苏率为50%～70%。Ⅱb组,移植7 d与未移植0 d比较,肝功能、病理检查、门静脉压力等无显著变化。Ⅲb组,移植7 d与未移植0 d比较,ALT下降,总蛋白及清蛋白升高(P0.05)。结论冷冻肝细胞移植有助于急性肝衰竭大鼠肝功能的恢复,对肝硬化大鼠未发现明显疗效。     

活体转染肝细胞生长因子基因对小鼠急性肝功能衰竭的治疗作用

目的 研究肝细胞生长因子（HGF）基因治疗对小鼠急性肝衰模型的治疗作用。方法 构建人肝细胞生长因子（hHGF）表达载体，利用脂质体介导法在活体内转染肝细胞生长因子基因，利用荧光显微镜检测肝组织内绿色荧光蛋白（GFP）表达了解目的基因的表达，用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清中人肝细胞生长因子的含量，通过观察小鼠急性肝衰模型的生存率、肝功能变化、肝组织病理改变来检测肝细胞生长因子基因对急性肝衰的治疗作用，通过检测肝组织中PC—NA指数的变化了解肝脏的增殖能力的变化。结果 荧光显微镜下可见肝组织内有绿色荧光蛋白的表达，转染人肝细胞生长因子基因后在血清中可检测到hHGF的表达，而且可持续1周以上，与对照组相比。转染hHGF基因组的生存率明显提高（40．0％vs11．5％，P〈0．05），血清ALT、TBi明显降低，肝组织中PCNA指数也明显升高。结论 活体转染肝细胞生长因子基因可获得表达，而且肝细胞生长因子基因对急性肝衰小鼠有治疗作用。     

Roles of vascular endothelial growth factor in acute rejection reaction following liver transplantation

The presently known cytokines that participate in acute rejection of organ transplantation include four categories by order of function: inflammatory cytokines, immunospecific cytokines, inflammatory cell activating cytokines and growth cytokines. Of them, growth cytokines that directly induce division, proliferation and migration of endothelial cells mainly include the vascular endothelial growth factor (VEGF) family and the fibroblast growth factor (FGF) family [1]. Recent studies [2] showed that interactions and time overlap of inflammatory cell infiltration and angiogenesis are the main mechanisms that induce acute rejection (AR) following organ transplantation, which has been demonstrated by the clinical fact that AR symptoms after liver transplantation could only be relieved by combination use of drugs for improving micro vessels and those for improving micro bile ducts. This article is a review of VEGF that mediates inflammatory cell infiltration and angiogenesis in the portal area [3].     

大鼠原位辅助性肝移植治疗急性肝功能衰竭

为了评价大鼠原位辅助性部分肝移植（ＡＰＯＬＴ）对急性肝功能衰竭的支持作用。切除７５％的肝脏并阻残余肝脏的血供５０分钟导大鼠急性肝功能衰竭。治疗组受体计切除７５％并将３０％的供肝植于原位，然后阻断残余的右上叶的右下叶之血供５０分钟。结果显示，大鼠急性肝功能衰竭的５天生存率仅３３％，而接受ＡＰＯＬＴ者５天生存率和移植肝存活率分别为８０％和７３％，术后第５天肝功能基本恢复正常。可见，大肝切除和余肝缺血诱     

血管内皮生长因子改善大鼠肝移植术后肝功能

目的 探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)对大鼠部分肝移植术后肝功能的影响.方法 建立大鼠30%肝移植模型.分实验组、对照组,每组60只,分别于术后注射鼠重组VEGF、生理盐水.在术后0、12、24、72、168h监测血清ALT、AST、透明质酸(hyaluronic acid, HA)变化.光镜下观察肝窦结构破坏及炎性细胞浸润程度.结果 在72h,实验组血清ALT、AST、HA较对照组明显降低(t=4.681,4.252,2.853,P<0.05).实验组肝窦内皮细胞结构破坏及炎性细胞浸润程度均较对照组明显减轻.结论 VEGF能明显改善大鼠部分肝移植术后肝功能.这可能与其减轻肝窦内皮细胞损害和炎性细胞浸润程度有关.     

nodosin促进大鼠部分肝移植肝细胞再生的实验研究

目的  探讨溪黄草有效成分nodosin对大鼠减体积肝移植术后肝细胞再生的影响。方法  以Wistar大鼠作为供体, SD大鼠作为受体, 采用改良的二袖套法建立大鼠部分肝移植模型, 将24只受体大鼠随机分为nodosin组和对照组。nodosin组于肝移植术后经尾静脉注射nodosin 100μg/ml。在术后3 d和7 d分别处死大鼠取外周血浆及肝脏组织标本。分光光度法检测外周血浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和白蛋白(ALB)含量; 光学显微镜下观察肝组织形态学改变; 采用免疫组织化学法检测肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)抗体的表达水平; 采用蛋白印迹法(Western blot)检测肝组织中磷酸化蛋白激酶(p-AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、细胞周期素D1(cyclin D1)、血红素加氧酶(HO)-1蛋白的表达水平; 采用磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V法)和dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测肝细胞的凋亡情况。结果  术后3 d和7 d, 与对照组比较, nodosin组大鼠血清中ALT、AST含量较低, ALB含量较高(均为P < 0.05), 同时nodosin能够减轻大鼠肝移植术后肝组织病理损伤。nodosin组的PCNA阳性表达细胞数明显多于对照组(P < 0.05)。nodosin组增殖相关蛋白p-AKT、p-mTOR、cyclin D1和HO-1蛋白表达水平均明显高于对照组(均为P < 0.05)。nodosin组发生凋亡的肝细胞数量和比例明显低于对照组(P < 0.05)。结论  大鼠肝移植术后应用nodosin具有减少肝细胞凋亡数量, 促进肝细胞增殖的作用。     

人肝细胞生长因子修饰的BMSCs对大鼠同种异体肝移植免疫排斥的影响

目的观察肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)修饰的BMSCs对大鼠同种异体肝移植后免疫排斥反应的影响,探讨其诱导免疫耐受的机制。方法 3～4周龄清洁级雄性SD大鼠8只,体重75～85 g,用于分离培养BMSCs;成年清洁级雄性SD大鼠64只,体重200～250 g,作为供体;成年清洁级雄性Wistar大鼠64只,体重230～280 g,作为受体。建立稳定的同种异体肝移植动物模型并随机分为4组(n=16),A、B、C、D组分别立即经门静脉注入1 mL生理盐水、1 mL细胞密度为2×106个/mL的BMSCs、1 mL细胞密度为2×106个/mL的BMSCs/绿色荧光蛋白、1 mL细胞密度为2×106个/mL的BMSCs/hHGF。术后作实验动物生存曲线分析;术后7 d检测实验动物肝功能,并取肝脏组织行病理组织学观察,RT-PCR检测肝组织内hHGF mRNA表达,ELISA法检测血清中hHGF、IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ细胞因子的表达,TUNEL法检测肝组织内细胞凋亡情况,免疫组织化学方法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在肝组织内的表达。结果 D组生存时间显著高于A、B、C组(P<0.01);B、C组生存时间明显高于A组(P<0.01),但B、C组间生存时间差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR示检测D组肝组织内有hHGF mRNA表达,ELISA检测血清中hHGF水平达(6.2±1.0)ng/mL。相比B、C组,D组疗效更显著,肝功能明显改善,病理学无急性排斥反应或仅为轻度;IL-2、IFN-γ水平降低,IL-4、IL-10水平升高,细胞凋亡明显减少,PCNA表达显著升高,除IL-4水平比较差异无统计学意义(P>0.05)外,其余指标比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论通过门静脉输注BMSCs/hHGF至大鼠同种异体肝移植模型能成功诱导免疫耐受。与单纯应用BMSCs相比,BMSCs/hHGF在移植肝局部形成高浓度hHGF免疫抑制微环境,能更显著抑制急性排斥反应,延长移植受体存活时间。BMSCs/hHGF的免疫抑制作用与诱导Th1细胞向Th2细胞偏移、减少肝细胞凋亡、促进肝细胞增殖有关。     

Results of liver transplantation in acute liver failure caused by viral hepatitis

Abstract Fulminant liver failure due to acute viral hepatitis is the most common emergency indication for liver transplantation. The postoperative course is highly correlated with the type and duration of infection. The complication rate is lowest in fulminant hepatitis B patients and highest in subacute hepatitis C/NANB patients.     

The importance of orthotopic liver transplantation in acute hepatic failure

Selection of patients with acute hepatic failure for liver transplantation remains difficult, and there is no definite proof of a survival effect. We therefore did a retrospective study in 75 consecutive patients referred over a 12-year period. In two-thirds we identified a cause, mostly viruses or drugs. Patients were grouped by the Clichy and King's College criteria. In 20 there was no indication for transplantation. Of the 5 with autoimmune hepatitis, 3 died, significantly differing from the other 15 ( P = 0.009). The remaining 55 met our criteria, except 1. All 9 patients with absolute contraindications died. Of the 46 enlisted, 7 died without transplantation. One-year survival after transplantation was 69%, compared with 58% by "intention to treat." For patients enlisted, transplantation reduced mortality by 78% ( P = 0.069). The Clichy and King's College criteria reliably predict survival without transplantation, except in autoimmune hepatitis. Our study strongly suggests that transplantation improves survival.