上调基因-4对结肠癌细胞增殖的影响

目的 探讨上调基因-4(URG-4)对结肠癌细胞增殖的影响.方法 筛选高表达URG-4的结肠癌细胞.构建URG-4基因siRNA的逆转录病毒载体及阴性对照,经PT67细胞包装后,获得可表达人URG-4基因siRNA逆转录病毒及阴性对照.RT-PCR和Western blot法检测MKN45、SW480、LoVo、HCT116、HT29细胞中URG-4 mRNA和蛋白表达水平,筛选稳定转染细胞株.分别使用重组病毒(干扰组)、原始病毒(阴性对照组)和等量PBS(空白对照组)转染结肠癌LoVo细胞.MTT法检测各组结肠癌LoVo细胞生长情况.计量资料比较采用单因素方差分析和t检验.结果 测序结果证实表达siRNA的逆转录病毒成功构建.URG-4 mRNA在MKN45、SW480、LoVo、HCT116和HT29细胞中的相对表达量分别为0.58±0.02、0.63 +0.03、0.81±0.01、1.01±0.02和0.91±0.04;URG-4蛋白相对表达量分别为0.73±0.02、0.85士0.03、1.42 +0.01、0.80 +0.03和0.80+0.04.结肠癌LoVo细胞高表达URG-4.干扰组中URG-4 mRNA表达为0.55±0.03,显著低于阴性对照组的1.15±0.02和空白对照组的1.15±0.01(t=-5.179,-9.285,P＜0.05).干扰组URG-4 mRNA的抑制率为52.6％.干扰组中URG-4蛋白表达为0.82 +0.05,显著低于阴性对照组的1.46士0.07和空白对照组的1.54 ±0.04(t=-4.239,-3.704,P＜0.05).干扰组URG-4蛋白的抑制率为43.6％.各组结肠癌LoVo细胞呈指数生长.与阴性对照组比较,第3～6天干扰组细胞增殖受到明显抑制,差异有统计学意义(t=-6.436,-6.045,-6.434,-4.285,P＜0.05).结论 干扰URG-4表达能够抑制LoVo细胞的生长.     

麻醉对生长激素的影响

生长激素(GH)是人体重要的激素之一,在麻醉和手术时,血浆浓度常常增加。本文就麻醉对GH的影响综述如下。生长激素的生理作用 GH是分子量20000的糖蛋白,半衰期20分,在体内分布不与载体蛋白相结合。GH的生理作用有①促进组织对氨基酸的摄取和合成,引起氮、磷、钾的正平衡;②有致糖尿病和抗胰岛素的作用,减少外周组织对糖的利用和摄取,降低糖耐量,抑制糖元分解,增加糖元贮备;③刺激细胞间的甘油三酯溶解,增加脂肪酸从脂肪组织的动员,提高血浆游离脂肪酸。这种脂肪分解作用可被胰岛素阻断;④引起血浆钾向肌肉内易位,随着氮的潴留,其他组织成分,如钠、钾、钙也增加。因此,GH可视为合成激素,在应激反应中,发挥保护作用,增加脂肪的动员,防止机体的破     

小干扰RNA沉默生长激素受体对肝癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的观察小干扰RNA(si RNA)技术沉默生长激素受体(GHR)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及侵袭能力的影响。方法预先合成特异性干扰GHR表达的si RNA,通过Gen Mute TM外转染至人肝癌细胞SMMC-7721中,将细胞分为空白对照组(未转染si RNA)、阴性对照组(转染非特异性的si RNA)和特异转染组(转染特异性干扰GHR表达的si RNA)3组。分别利用real-time PCR方法和Western blot技术检测GHR m RNA和蛋白在3组细胞中的表达,用CCK-8法检测3组细胞的增殖能力,用Transwell法检测3组细胞的侵袭迁移能力。结果GHR m RNA及蛋白在特异转染组细胞中的表达均明显低于空白对照组及阴性对照组(P0.05);GHR沉默后,与空白对照组及阴性对照组比较,特异转染组肝癌细胞SMMC-7721中的吸光度值明显降低(P0.05),Transwell穿透的细胞数明显减少(P0.05)。结论 si RNA干扰GHR表达后,肝癌细胞SMMC-7721的增殖及侵袭迁移能力减弱。     

基因重组人生长激素对体外培养的肝癌细胞增殖的影响及配体调控

目的 了解基因重组人生长激素(rhGH)对体外培养的Bel-7402细胞增殖的影响,并探讨rhGH对肝癌细胞生长激素受体(GHR)的调控作用.方法 分别采用肿瘤细胞计数、MTT比色法和集落形成实验等方法 了解Bel-7402细胞株在不同浓度rhGH(0、1、10、100、1000、10 000 ng/ml)作用下的药物敏感性,计算细胞生长率;用3H-TdR掺入法研究肿瘤细胞DNA代谢情况;应用放射配体法了解Bel-7402细胞GHR的表达,以及rhGH在上述浓度下对肝癌细胞GHR的影响.结果 rhGH对体外培养的Bel-7402细胞的生长有一定程度促进作用,表现为rhGH在100 ng/ml浓度下促进肝癌细胞增殖较为显著,rhGH在其他浓度(1、10、1000、10000 ng/ml)的部分时段,对肝癌细胞的增殖虽亦有一定程度的促进作用,但总体效果较rhGH在100 ng/ml浓度时弱;放射配体法发现Bel-7402细胞表达GHR,在rhGH作用后24 h,Bel-7402细胞GHR的位点数量(103个/细胞)在10、100 ng/ml组较对照组显著增加,在10000ng/ml组较对照组显著减少.结论 一定浓度范围rhGH对Bel-7402细胞的增殖有促进作用,原因可能与Bel-7402细胞表达GHR有关;同时rhGH对Bel-7402细胞的GHR有一定调控作用.     

生长激素改变对生殖的影响

一些证据表明除了下丘脑 垂体 性腺轴外,生长激素轴,即生长激素(GH)和胰岛素样生长因子 I(IGF I)在垂体和性腺功能的调控方面也起重要作用。GH缺乏、GH耐受、实验改变IGF -I分泌可影响女性卵泡增殖、成熟、排卵和受孕;对男性而言,GH/IGF I在精子发生和Leydig细胞功能中扮演重要角色。一些研究显示,GH缺乏的侏儒和IGF I基因敲除小鼠的生育能力受到影响,究其原因可能是垂体和性腺功能异常。GH受体基因敲除雌性小鼠的卵泡成熟、排卵率、性成熟、生育、对信息素(pheromonal)信号的反应性、黄体功能均受损。IGF I缺乏的雄性GH受体…     

shRNA-CXCR4对人胃癌BGC823细胞增殖迁移的影响

目的 构建针对人CXCR4基因的shRNA干扰表达载体,观察CXCR4基因表达对人胃癌细胞株BGC823细胞增殖和迁移能力的影响.方法 根据人CXCR4序列设计并构建CXCR4基因的shRNA真核表达载体,以脂质体转染的方法将CXCR4干扰质粒转染至人胃癌细胞株BGC823,经G418筛选出稳定转染的阳性细胞,应用流式细胞仪技术检测其细胞周期变化,噻唑蓝(MTT)比色法检测CXCR4干扰对胃癌细胞增殖的影响,采用Trans-well小室法检测细胞体外迁移能力.结果 经测序证明CXCR4的shRNA基因已成功插入Psilencer4.1质粒中,构建的干扰质粒能够显著抑制CXCR4的表达,CXCR4 mRNA被抑制了(2.7±0.2)倍(P＜0.01).CXCR4基因的表达下调将胃癌细胞阻滞在G1期(由84.2％升至94.1％),MTT法检测CXCR4-shRNA干扰细胞增殖(P＜0.05),且穿过Trans -well小室膜的细胞数显著下降(P＜0.05).结论 干扰CXCR4的表达可显著抑制胃癌细胞的增殖和迁移能力.     

三参数流式细胞术分析紫外线诱导的MOLT-4细胞旁观者效应

目的 应用三参数流式细胞术探讨紫外线(UV)诱导的MOLT-4细胞的旁观者效应(BSE).方法 以人类T细胞白血病细胞株MOLT-4为对象,以紫外线为诱导剂.将经UV照射的MOLT-4细胞与DiD荧光阳性的MOLT-4细胞联合培养作为试验组,未经任何打击的DiD阳性细胞为对照组.用FITC-Annexiu V/PI法检测细胞凋亡率,用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察其荧光及形态学改变,以检测其旁观者效应.结果 实验组中旁观者细胞凋亡及坏死比例在0、2、4、8、12、18、24 h分别为6.84%、8.09%、9.88%、13.50%、22.50%、30.99%、37.93%.而对照组为4.28%、4.93%、5.22%、5.39%、6.54%、6.77%、7.14%.试验组旁观者细胞的凋亡及坏死比例随着时间的延长而逐步增高.LSCM观察可见部分旁观者细胞出现磷脂酰丝氨酸(PS)翻转、核边集、核浓集、核碎裂等形态学改变.结论 在MOLT-4细胞株,用非离子射线--UV诱导的凋亡细胞对联合培养的旁观者细胞具有旁观者效应.     

生长激素对外科病人营养代谢的影响

严重创伤、感染或大手术等往往导致机体高分解代谢状态和负氮平衡，这是外科危重病人并发MOSD和高死亡率的主要原因，本文就近年来关于生长激素（GH）对外科病人营养代谢影响的研究加以综合介绍。     

生长激素对应激下代谢的影响

如何逆转和改善创伤，感染应激后的高分解代谢，仍是目前营养支持中有待解决的重要课题，本文不生长激素在应激病人的应用加以综合介绍。     

重组人生长激素对烧伤创面愈合和生长激素水平的影响

人生长激素 (ｈＧＨ)又名促生长素 (ｓｏｍａｔｒｏｐｉｎ) ,是脑垂体前叶分泌的由 191个氨基酸组成的肽链。其主要功能为间接的促生长作用及直接的增强代谢 ,增加机体细胞和体液免疫等。为了探讨成人烧伤后生长激素含量的变化以及应用ｒｈＧＨ对烧伤创面愈合的影响 ,笔者进行了如下临床研究。资　料　与　方　法1.临床病例及分组 :按 1970年全国烧伤会议制定的烧伤严重程度分类标准 ,选择 1997年 11月 1998年 11月间入院治疗的 30例成年特重烧伤患者 ,随机分为ｒｈＧＨ组 :平均年龄 (32± 14)岁 ,烧伤总面积 (74.2± 10 .5 ) % ,Ⅲ度面积(5…     

生长激素受体在胰腺癌细胞的表达及生长激素对胰腺癌细胞周期的影响

目的　观察生长激素受体 (GHR)在胰腺癌细胞的表达及生长激素 (GH)对胰腺癌细胞周期的影响。方法　用免疫组织化学方法检测胰腺癌细胞SW 1990中的GHR ;SW 1990中加入GH(5 0、10 0 μg/L)培养 2 4、48、72h后计数细胞 ,2 4h后以流式细胞仪测定细胞周期 ;裸鼠成瘤后分为实验组 (GH组 ,按剂量及时间分为 4mg 2周、2mg 2周、2mg3周 3个亚组 )及对照组 (NS组 ) ,用药期间测体重及瘤大小。结果　GHR在SW 1990上有低度表达 ;加入GH培养 2 4、48、72h后细胞数增加 ,2 4h后细胞S %及增殖指数 (PI)提高 [5 0 μg/L组的S % (5 2 .0 0± 14 .83 )及PI(0 .72±0 .0 9)、10 0 μg/L组的S % (5 3 .2 1± 15 .49)及PI(0 .70± 0 .0 9)均分别高于对照组 (S % :3 0 .15± 6.2 2 ;PI :0 .5 2± 0 .13 )(P <0 .0 5 ) ] ;GH不加速种植瘤生长。结论　少量GHR存在于SW 1990细胞 ,GH在体外能促进SW 1990细胞增殖 ,但在体内不刺激肿瘤生长。     

人工气腹对结肠癌细胞增殖的影响

目的探讨不同气体介质对人结肠癌细胞增殖的影响。方法建立体外模拟人工气腹的环境。通过MTT法、软琼脂克隆形成试验、免疫组织化学（免疫组化）、丫啶橙/溴乙啶双荧光染色、流式细胞仪等方法对比不同气腹介质对人结肠癌细胞增殖、细胞因子表达、凋亡及细胞周期的影响并作相关统计学分析。结果体外试验中,由MTT法可以看出,人结肠癌细胞LS-174T经CO2气腹作用后,细胞生存率高于对照组,He组较对照组低[吸光度（A）：0.37±0.02比0.33±0.01和0.30±0.01;P〈0.01]。克隆形成试验结果显示,CO2组细胞的增殖能力高于对照组和He组,差异有统计学意义[形成率：（32.8±3.6）%比（28.4±2.3）%和（23.5±2.7）%;P〈0.05],He组较对照组细胞增殖能力明显降低（P〈0.01）。免疫组化结果显示结肠癌细胞中HIF-1α在CO2组的阳性表达率明显高于He组和对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）,He组高于对照组（P〈0.01）。血管内皮生长因子（VEGF）的阳性表达CO2组、He组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,CO2组高于He组差异有统计学意义（P〈0.01）。双荧光染色结果可以看出He组凋亡百分率明显高于CO2组和对照组（P〈0.01）,CO2组和对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。流式细胞仪结果显示CO2组G0/G1期细胞比例少于对照组、He组（P〈0.01）,He组G0/G1期细胞比例高于对照组（P〈0.01）。结论体外实验中CO2气腹可促进结肠癌细胞LS-174T的生长,He气腹相对抑制其生长。     

生长激素治疗对烧烫伤小儿生长发育的影响

目的：评价短期应用重组人生长激素（rhGH）对小儿烧烫伤的治疗效果及治疗后对其生长发育的影响。方法：选取82例住院烧烫伤患儿,随机分为rhGH治疗组58例和对照组24例。rhGH治疗组在常规治疗的基础上给予rhGH皮下注射0．3IU／kg,每晚1次,连续使用10d。对照组只给予常规治疗,于相应时间皮下注射2m1生理盐水。另选30例发育正常的整形患儿作为正常对照。动态观察应用rhGH（或生理盐水）前1d、应用后5d后,出院时及出院后6、12、18、24个月两组患儿血生长激素、血糖水平;患儿于入院时测量身高、体重,计算体质指数（BMI）,出院后6～24个月进行追踪性观察,与同时期同年龄段北京市正常小儿生长指标进行对比,评价影响。结果：rhGH治疗组创面愈合速度较对照组明显加快;创面愈合后瘢痕增生及痛痒程度明显轻于对照组,差异有显著性（P〈O．05）。rhGH治疗前两组血生长激素水平均明显低于正常水平。rhGH治疗第5天患儿的生长激素水平明显高于正常组水平和对照组（P〈0．001）,至出院时两组均趋于正常。伤后两组血糖水平均有轻度升高,激素治疗第5天恢复正常,但差异无显著性,两组之间各时间比较差异均无显著性。两组出院时体重和BMI均低于北京市儿童正常标准,但两组间身高、体重和BMI差异均无显著性。结论：临床短期小剂量使用生长激素治疗小儿烧烫伤能够加速创面愈合,提高创面愈合质量。创面愈合后小剂量短期应用的生长激素不会对小儿的生长发育造成后续影响。     

雄激素对Smad4在前列腺细胞增殖与凋亡作用中的影响

目的探讨雄激素对Smad4在前列腺细胞增殖与凋亡作用中的影响。方法选取前列腺增生和前列腺癌去势术后病人分成两组(设正常前列腺对照组),分别测定血清总睾酮水平,采用Western印迹法及酶链式反应(RT-PCR)方法检测前列腺组织中Smad4蛋白和mRNA的表达,采用流式细胞术对增生前列腺细胞和去势后一周正常的前列腺组织中DNA含量和细胞凋亡情况进行定量对比分析。结果两组Smad4表达均明显增加。前列腺增生组血清总睾酮正常,Smad4表达与细胞增殖指数呈显著正相关,但与对照组之间无统计学差异;去势术组血清总睾酮明显下降,Smad4表达与凋亡率呈正相关,与前列腺组合对照组之间存在明显统计学差异。结论Smad4最主要的功能应该是对细胞的抑制作用,雄激素对Smad4在前列腺细胞增殖与凋亡作用可能发挥调控作用。     

一氧化氮抑制ghrelin诱导的生长激素腺瘤GH3细胞生长激素分泌和细胞增殖及其机制

目的 检测一氧化氮(NO)对ghrelin诱导的大鼠GH3细胞的生长激素(GH)分泌和细胞增殖的影响,探讨NO的作用机制.方法 首先应用ghrelin在不同浓度分别作用2 h;应用ghrelin在工作浓度1×10-7mol/L,分别作用不同时间,检测对GH3细胞GH分泌的影响;然后检测NO的供体(SNAP,1×10-5 mol/L)和NO合成酶的抑制剂(NAME,1×10-5mol/L)对ghrelin诱导的GH分泌和细胞增殖的影响;用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测GH水平,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,Western免疫印迹法检测细胞内信号通路蛋白的活性变化.结果 ghrelin刺激GH3细胞分泌GH呈时间和浓度依赖性(P＜0.01),ghrelin明显刺激GH3细胞的增殖(P＜0.05);SNAP可抑制基础的和ghrelin刺激的GH分泌(P＜0.01),对细胞增殖也有明显影响(P＜0.01),而NAME对GH的分泌和细胞增殖无影响;ghrelin可诱导细胞外信号调节激酶(ERK)的活化,SNAP可以抑制这种效应.结论 NO抑制ghrelin诱导GH3细胞GH分泌和细胞增殖,其机制可能阻断了ghrelin激活的ERK信号通路.     

生长激素对胰腺癌细胞株端粒酶活性的影响

目的　探讨生长激素对胰腺癌细胞株Bxpc 3端粒酶活性的影响。方法　MTT法检测生长激素对胰腺癌细胞株Bxpc 3增殖活性的影响 ,RT PCR ELISA法检测端粒酶活性变化。结果　10 -7M、10 -8M、10 -9M浓度的生长激素在第 2天均明显地抑制胰腺癌细胞生长且降低端粒酶活性 ,伴随作用时间的延长这种抑制作用逐渐减轻但端粒酶活性逐渐升高 ,且出现了加速胰腺癌细胞生长的作用 ,第 4天、第 5天胰腺癌细胞的端粒酶活性同第 2天、第 3天相比有非常显著性差异 (P <0 0 1)。结论　从细胞学的角度证实生长激素在开始阶段具有抑制胰腺癌细胞生长的作用并降低端粒酶活性 ,但是这种作用伴随时间的延长逐渐消失 ,胰腺癌细胞恢复端粒酶活性且出现加速了肿瘤细胞的生长的现象 ,本实验研究为临床肿瘤病人应用生长激素提供了一定的理论依据。     

神经递质对肝细胞增殖的影响

目的：探讨自主神经控制对人肝细胞增殖的影响及其机理，并对增殖相关受体定位。方法：用去甲肾上腺素（NE）及其拮抗剂及激动剂和乙酰胆碱（Ach）及其阻滞剂作用于人传代正常肝L02细胞及肝癌Bel-7402细胞，分别于4h、24h、48h及72h用改良MTT法检测上述药物对细胞增殖的影响；免疫组织化学染色法对肝L02细胞的肾上腺素受体（α1B-AR及β2－AR）和表皮生长因子受体（EGFR）定位。结果：NE对人正常肝细胞及肝癌细胞具有促增殖作用，且随浓度增加其促增殖作用也增加，4h的增殖率较其它时间点显著增高（P＜0．05）；NE＋心得安组的作用与NE组间差异无显著性意义；二羟苯基异丙氨基乙醇的作用不明显；Ach对人正常肝细胞的增殖具有抑制作用，且随浓度增加其抑制作用也增加，加用阿托品在24h及48h与Ach比抑制率显著降低（P＜0．05）；玻珀胆碱组在24h、48h及72h对细胞的增殖也具有抑制作用（P＜0．05，P＜0．01）。所有人肝L02细胞都呈α1B-AR、β2-AR及EGFR免疫反应阳性，主要定位于胞膜及胞浆。结论：血清存在下，交感神经递质NE早期对人正常肝细胞L02及人肝癌细胞Bel-7402具有促增殖作用，其作用是通过激动α-AR实现的，β－AR对人肝细胞增殖无影响。副交感神经递质Ach对人正常肝细胞L02的增殖具有抑制作用，其作用是通过激动M及N型胆碱受体实现的。