PKC在脑损伤后血脑屏障损害中的作用

目的:探讨PKC在脑损伤后血脑屏障损害中的作用。方法:雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组、假手术组、脑损伤组和H7治疗组。治疗组于伤后0.5h腹腔注射PKC阻断剂H7 1mg/kg,12h重复注射一次,荧光显微镜定性观察,分光光度计定量检测伊文氏兰渗出。结果:脑损伤后伊文氏兰明显渗出,治疗组渗出明显减少。结论:应用PKC阻断剂H7能明显阻止血脑屏障开放,表明PKC在脑损伤后血脑屏障损害中起重要作用。     

神经生长因子在大鼠脑损伤后血脑屏障的通透性

目的研究神经生长因子（NGF）在大鼠创伤性脑损伤后血脑屏障（BBB）中的通透性，寻找NGF通过BBB进入受伤脑组织的时间窗。方法采用液压打击造成大鼠中、重度颅脑创伤，尾静脉注射伊文蓝（EB），分别于伤后1h，3h，6h，12h，24h，72h，168h测量伤侧脑组织中的EB含量。将纯化的NGF用^125I标记，在上述时间段分别从尾静脉注射碘化NGF，用γ-counter计数仪测量伤侧脑组织的放射活性。结果重度脑创伤后EB值在伤后1h立即快速上升，并在3h达到高峰，峰值持续到72h，随后缓慢下降，在168h EB值仍较对照组明显增高。中度脑创伤后脑组织中的EB的含量在1h开始缓慢升高，6h达到高峰，峰值持续到12h随后下降，在168h基本恢复正常。重度脑创伤后脑组织中^125I—NGF在1h明显升高，在3h达到高峰，峰值持续约24h，在72h明显下降，在168h时仍比对照组高。中度脑创伤后^125I—NGF在1h脑组织中即能检测到，并缓慢升高，在6h即达到高峰，随后下降，至168h时其剂量同正常对照组相仿。结论脑创伤后BBB开放，其开放程度与颅脑创伤程度呈正相关。在脑创伤后NGF能随着BBB的开放而进入脑组织，NGF进入脑组织的量与BBB的开放程度及脑损伤程度呈正相关。     

尼莫地平对大鼠脑损伤后血脑屏障保护作用的定量研究

<正> 脑损伤后血脑屏障(BBB)通透性增加,脑水肿的发生、发展,加剧脑继发性损害。细胞内钙离子增加,超载是BBB通透性增加的直接原因。伊文兰与血浆蛋白结合的特性,用于定性观察血脑屏障通透性变化。本文采用分光光度计法,检测大鼠脑损伤后皮质、海马伊文氏兰含量,定量评价钙离子拮抗剂尼莫地平对血脑屏障的保护作用。 材料方法:雄性SD大鼠48只,体重250±30g,随机分为正常对照组、假手术组、脑损伤组和治疗组。每组12只。 脑损伤模型采用改良的Feeney’s自由落     

颅脑损伤后血脑屏障的损伤机制与检测方法新进展

<正>颅脑损伤(traumatic brain injury,TBI)是外伤导致死亡和残疾的主要原因。最近的研究显示TBI继发性损伤与血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的功能障碍相关^[1,2]。TBI后BBB损伤的机制包括细胞内信号的改变和BBB内细胞-细胞相互作用。许多生物学标志物和放射学改变与TBI后BBB功能障碍相关^[3]。     

颅脑损伤后血脑屏障通透性的MRI评估

颅脑损伤后的血脑屏障（blood—brain barrier,BBB）破坏早已被证实。颅脑损伤使毛细血管内皮细胞损伤、星形胶质细胞肿胀,直接导致了BBB、脑血流和大脑代谢过程的异常。目前,颅脑损伤后的BBB通透性增加正越来越受到重视,甚至有学者提出将针对BBB破坏的治疗作为治疗颅脑损伤的新目标。因此,如何准确高效地定量检测BBB通透性备受关注。     

脑出血后血脑屏障损害研究进展

脑水肿是脑出血的严重并发症之一,其中血脑屏障损害导致的血管源性脑水肿是脑出血 后脑水肿的主要类型。凝血酶、炎症因子、基质金属蛋白酶、补体、血红蛋白降解产物、水通道蛋白4 等以及这些因子间的相互作用都可能在脑出血后血脑屏障损害病理过程中发挥重要作用,本文对此 做一综述。     

大鼠脑损伤后暴露于冷环境下血脑屏障通透性变化的研究

目的 探讨大鼠颅脑损伤后暴露冷环境下血脑屏障通透性的变化.方法 用硝酸镧示踪法在电镜下观察血管紧密连接开放状态的改变,用干-湿重法计算脑组织含水量的变化.结果 常温对照组、冷环境对照组镧颗粒没有通透到血管外周,且血管内皮细胞无损害.伤后常温组与伤后冷环境组同时段镧通透到血管外周明显,但伤后冷环境组透过量要比伤后常温组多(P＜0.05).伤后冷环境组和伤后常温组脑组织含水量增加,且伤后冷环境组比伤后常温组在同时段脑组织含水量明显增加,且有统计学意义(P＜0.05).结论 颅脑损伤后血脑屏障破坏可能机制是由于增加血管内皮细胞紧密连接的开放,脑损伤后4℃冷环境下可增加脑组织含水量及镧颗粒的通透性,促进血管紧密连接的开放.     

血脑屏障连接复合体与脑损伤

脑微血管内皮细胞及其连接复合体是血脑屏障结构和功能的主要基础。血脑屏障连接复合体是由紧密连 接和粘附连接构成的一个复杂的、具有主动调节性的细胞系统。近年的研究表明,炎症介质如细胞因子、血管内皮 细胞生长因子、金属基质蛋白酶、组胺和缓激肽等,通过影响血脑屏障连接复合体的结构和分布,是导致脑损伤的 重要环节。深入探讨血脑屏障连接复合体的分子结构、在脑损伤时的变化以及对血脑屏障通透性调节的可能机制 为脑损伤的临床防治提供了一个全新的思路。     

大鼠脑损伤后谷氨酸引起乳酸含量变化的作用机制

目的探讨大鼠脑损伤后谷氨酸引起乳酸含量变化的作用机制。方法28只大鼠随机分为对照组、犬尿烯酸（KYN）灌注组、Ouabain灌注组及Ba^2＋灌注组,每组7只。在建立大鼠局部脑损伤模型前后,应用微透析技术将格林液、KYN、Ouabain和Ba2＋分别灌注到各组大鼠致伤脑区,在致伤前45min开始和致伤后90min内,观察3种药物对脑损伤后乳酸含量的影响。结果对照组伤前乳酸含量为（0.28±0.07）mmol/L,脑损伤后引起乳酸含量迅速升高,伤后15min达到峰值（0.75±0.18）mmol/L,乳酸含量持续升高60min后逐渐下降至接近伤前水平。Ouabain灌注组及KYN灌注组伤后乳酸含量升高幅度减弱,持续时间缩短。Ba^2＋灌注组乳酸含量升高幅度增加,持续时间延长。结论脑损伤后异常增加的谷氨酸作用于兴奋性氨基酸受体偶联离子通道,引起细胞外K^＋增加,使Na^＋-K^＋泵活性增强,继而导致糖酵解代谢水平增高,乳酸含量增加。     

血脑屏障基础与临床的某些新进展

中枢神经系统一旦受到有害多因素侵袭,血脑屏障被破坏,可引起局部或广泛的血脑屏障通透性改变。脑外伤、脑肿瘤均可导致血脑屏障开放。掌握严重颅脑损伤时血脑屏障开放的范围和时间,对临床治疗中避免使用加重脑组织损伤的药物非常重要。血脑屏障的控制可能在治疗脑肿瘤及中枢神经系统基因疾病方面起重要作用。有关血脑屏障的中枢神经系统药物与放射影像学研究对临床诊断和治疗具有实用价值。     

脑血疏口服液对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响

目的 探讨脑血疏口服液对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响。方法 将120只SD大鼠随机分为3组:假手术组、对照组,脑血疏组; 采用线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞再灌注模型,缺血2 h后拔出线栓,恢复灌注24 h; 采用Longa FZ 5级评分法进行大鼠神经功能缺损评分; TTC染色计算脑梗死体积百分比; 运用干-湿重法测脑含水率; 通过伊文思蓝( EB)含量反映血脑屏障的损伤程度; 免疫组化检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平。结果(1)假手术组大鼠在神经功能缺损评分、脑梗死体积、脑含水率均低于对照组(P<0.01); 脑组织中EB含量和MMP-9表达水平较对照组低(P<0.01);(2)脑血疏组大鼠的神经功能缺损评分较低、脑梗死体积较小,脑水肿程度较轻; EB含量和MMP-9表达水平均较对照组明显减少(P<0.01)。结论 脑血疏口服液对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障具有保护作用,其机制可能是通过抑制MMP-9的表达。     

钙拮抗剂对大鼠脑缺血后血脑屏障通透性的影响

目的 研究钙离子拮抗剂对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障(BBB)通透性和脑梗死灶体积的影响. 方法 插线法制作大鼠脑缺血再灌注模型.缺血2 h后再灌注.将150只大鼠按随机数字表法分尼莫地平组和对照组,每组分再灌注6h、12h、24 h、48h、72 h五个时间段,再灌注后尼莫地平组和对照组立即分别腹腔注射尼莫地平和生理盐水2 mg/kg.每12小时注射一次,用甲酰胺荧光法及透射电镜观察不同时段BBB通透性破坏的情况,TTC染色后计算梗死灶体积百分比.结果 大鼠脑缺血再灌注后BBB通透性和梗死灶体积百分比随时间延长逐渐增加.且BBB通透性的增加呈现两个高峰,第一个高峰在再灌注后12 h,第二个高峰在再灌注后48 h.尼莫地平组BBB通透性及脑梗死灶体积百分比的增加均较对照组明显,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 脑缺血再灌注增加BBB的通透性和脑梗死灶体积百分比.再灌注后给予尼莫地平可加重这些病理变化.     

阿托伐他汀对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障通透性的影响

目的 评估阿托伐他汀对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障通透性的影响。方法 采用常规尼龙线栓法制备SD大鼠脑缺血再灌注模型,并将大鼠随机分为假手术组、大脑中动脉阻断再灌注(Middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)(对照)组和MCAO/R阿托伐他汀(治疗)组; 对照组和治疗组分别于脑缺血2 h再灌注24 h处死; 标准湿干法测定脑组织含水量; 实时聚合酶链反应(Real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases-9,MMP-9)的mRNA表达水平; 应用免疫组化法测定Ⅳ型胶原蛋白(Ⅳ type collagen,CoⅣ)水平; 电镜观察显示血脑屏障超微结构的改变。结果 治疗组与对照组比较,脑组织含水量减少(P<0.01); 阿托伐他汀治疗显著降低了MMP-2和MMP-9的mRNA表达水平; 治疗组脑组织CoⅣ水平高于对照组(P<0.01); 电镜观察显示治疗组血脑屏障超微结构的改变明显好于对照组。结论 阿托伐他汀可以降低脑缺血再灌注大鼠血脑屏障的通透性,从而减轻脑水肿。     

尼膜同对大鼠脑缺血再灌注后血-脑屏障通透性和脑梗死体积的影响

目的　研究尼膜同对大鼠脑缺血再灌注后血 脑屏障 (BBB)通透性和脑梗死体积的影响。方法采用插线法制作脑缺血再灌注的大鼠模型 ,缺血 2h后再灌注。实验分尼膜同组和生理盐水对照组 ,每组分再灌注 6h、12h、2 4h、4 8h、72h 5个时段 ,再灌注后立即分别腹腔注射尼膜同 2mg/kg或等量的生理盐水 ,每12h注射 1次。用荧光法及透射电镜观察不同时段BBB通透性破坏的情况 ,TTC染色后计算梗死体积百分比。结果　脑缺血再灌注后随时间延长 ,BBB通透性和梗死体积百分比逐渐增加 ,且BBB通透性的增加呈现两个高峰 ,分别为再灌注后 12h和 4 8h ;尼膜同组BBB通透性及脑梗死体积百分比明显高于生理盐水对照组 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　脑缺血再灌注增加BBB的通透性和脑梗死体积百分比 ,再灌注后给予尼膜同可加重这些病理变化。     

缝隙连接对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障通透性的影响

目的 探讨缝隙连接(GJ)在脑缺血再灌注血脑屏障通透性变化中的作用及其可能机制.方法 ①应用激光共聚焦显微镜技术观察GJ蛋白Cx43在缺血再灌注半暗带区脑毛细血管周终足上含量及分布情况的变化.②将Wistar大鼠随机分成假手术组,手术组.线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.通过荧光分光光度定量的方法测定不同时间点脑组织中的伊文蓝含量来观察血脑屏障的通透性的改变.③取伊文蓝漏出最多的时间点,增设辛醇干预组和DMSO溶剂对照组,与相同时间点手术对照组比较,观察辛醇对血脑屏障通透性的影响.结果 缺血2 h再灌注3 h脑组织伊文蓝含量开始增加,再灌注24 h达高峰.激光共聚焦显微镜发现GJ蛋白Cx43在脑内毛细血管周围的星形胶质细胞终足上分布密集.在缺血2 h再灌注24 h半暗带内,终足上的Cx43分布发生变化,聚集成较大斑块.在缺血2 h再灌注24 h组术前给予辛醇干预,脑组织伊文蓝含量[(4.924±0.296)μg/g]低于手术对照组[(5.543±0.506)μg/g],二者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 GJ在脑缺血再灌注后半暗带终足上分布变化明显,可能加重了血脑屏障通透性的增加;辛醇阻断GJ可以降低脑缺血再灌注血脑屏障的通透性,从而起到减轻脑水肿的作用.     

缺血再灌注大鼠脑内MMP-2、MMP-9与血脑屏障的关系

目的明确脑缺血再灌注后MMP-2、MMP-9与血脑屏障的关系。方法健康雄性SD大鼠54只,线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。应用含明胶的定量酶谱技术检测再灌注3h到7d内MMP-2、MMP-9的表达,用甲酰胺浸泡法检测大鼠脑内EB含量。结果 (1)缺血再灌注24h后,大鼠缺血侧脑内MMP-9表达明显升高,48h到达顶峰,4d后显著下降,7d后水平更低。24h组和48h组与其它各组相比,有显著性差异(P<0．05)。 0MMP-2缺血再灌注48h后明显升高,7d到达高峰,7d组大鼠缺血侧脑内MMP-2水平与3h组和24h组相比,有显著性差别(P<0．01)。(2)再灌注24h大鼠缺血侧脑内EB含量最高,显著高于3h及7d组(P<0．05),但与48h无显著差别(P>0．05)。结论缺血再灌注后出现了MMP-2、MMP-9和血脑屏障的动态变化,血脑屏障损伤与MMP-9 的升高相关,而与MMP-2关系不大。     

Time- and pressure-dependent changes in blood-brain barrier permeability after temporary middle cerebral artery occlusion in rats

Summary After 180 min of temporary middle cerebral artery occlusion in rats, the affect of phenylephrine-induced hypertension on blood-brain barrier permeability was assessed. One of the following blood-pressure regimens was maintained during either a 30- or 120-min period of reperfusion: (a) 30/Norm, 30 min of normotensive reperfusion was allowed; (b) 30/HTN, mean arterial blood pressure was increased by 35 mm Hg during 30 min of reperfusion; (c) 120/Norm, 120 min of normotensive reperfusion was allowed; or (d) 120/HTN, mean arterial blood pressure was increased by 35 mm Hg during 120 min of reperfusion. Evans blue (30 mg/kg) was given, and brains were analyzed for Evans blue by spectrophotometry. Evans blue (g/g brain tissue, mean ± SD) was greater (P<0.05) in both hypertensive groups versus their time matched normotensive groups (30/HTN: 80±16 versus 18±6 in the 30/Norm group; 120/HTN: 17±6 versus 8±3 in the 120/Norm group). In addition, Evans blue was greater (P<0.05) in both 30-min groups versus their pressure matched 120-min groups (30/Norm: 18±6 versus 8±3 in the 120/Norm group; 30/HTN: 80±16 versus 17±6 in the 120/HTN group). The data are consistent with previous studies which have demonstrated an opening of the blood-brain barrier at the onset of reperfusion. In addition, the data support a hypothesis that changes in blood-brain barrier permeability are more sensitive to hypertension in the early period of reperfusion.     

Stereoselective blood-brain barrier transport of histidine in rats

The transport characteristics of - and -histidine through the blood-brain barrier (BBB) were studied using cultured rat brain microvascular endothelial cells (BMEC). -Histidine uptake was a saturable process. A decrease in incubation temperature from 37 to 0°C or the addition of metabolic inhibitors (DNP and rotenone) reduced the uptake rate of -histidine. Ouabain, an inhibitor of (Na⁺, K⁺)-ATPase, also reduced uptake of -histidine. Moreover, the substitution of Na⁺ with choline chloride and choline bicarbonate in the incubation buffer decreased the initial - and -histidine uptake rates. These results suggested that -histidine is actively uptaken by a carrier-mediated mechanism into the BMEC, with energy supplied by Na⁺. However, -histidine uptake at 0°C was not completely inhibited, and it was reduced in the presence of an Na⁺-independent System-L substrate, BCH, suggesting facilitated diffusion (the Na⁺-independent process) by a carrier-mediated mechanism into the BMEC. -histidine uptake in rat BMEC also appeared to be System-N mediated since uptake was inhibited by glutamine, aspargine and -glutamic acid γ-monohydroxamate. System-N mediated transport was not pH sensitive. -histidine transport was also studied in rat BMEC. -histidine transport by rat BMEC has similar characteristics to -histidine. However, System-N transport did not play a role in -histidine uptake. The uptake of -histidine was also greater than that of the -isomer, indicating the stereoselective uptake of histidine in rat BMEC.     

凝血酶抑制剂nexin-1对脑出血大鼠脑神经损伤和血脑屏障通透性的影响

目的探讨凝血酶抑制剂nexin-1对脑出血大鼠脑神经损伤和血脑屏障通透性的影响。方法将大鼠随机分为对照组、模型组和干预组,采用尾状核注射自体动脉血的方法复制脑出血模型,在造模的过程中往干预组尾状核部位注射凝血酶抑制剂nexin-1,其余组注射生理盐水。在给药12h、24h和36h后分别进行脑组织形态学检查、脑组织神经细胞凋亡检查、脑组织含水量检查和脑组织血脑屏障通透性检查。结果干预组脑神经细胞排列有轻微紊乱,形态结构异常的程度较轻,细胞核仍然有胞核固缩和胞质凝集的现象,但程度与模型组相比显著降低;干预组脑组织凋亡神经细胞数显著低于模型组(P0.05);干预组脑组织含水量显著低于模型组(P0.05);干预组大鼠脑组织皮层和基底节的血脑屏障通透性显著低于模型组(P0.05)。结论凝血酶抑制剂nexin-1对脑出血后的脑神经损伤、血脑屏障通透性起保护作用。     

Moderate hypothermia reduces blood-brain barrier disruption following traumatic brain injury in the rat

Summary The effects of moderate hypothermia on blood-brain barrier (BBB) permeability and the acute hypertensive response after moderate traumatic brain injury (TBI) in rats were examined. TBI produced increased vascular permeability to endogenous serum albumin (IgG) in normothermic rats (37.5°C) throughout the dorsal cortical gray and white matter as well as in the underlying hippocampi as visualized by immunocytochemical techniques. Vascular permeability was greatly reduced in hypothermic rats cooled to 30°C (brain temperature) prior to injury. In hypothermic rats, albumin immunoreactivity was confined to the gray-white interface between cortex and hippocampi with no involvement of the overlying cortices and greatly reduced involvement of the underlying hippocampi. The acute hypertensive response in normothermic rats peaked at 10 s after TBI (187.3 mm Hg) and returned to baseline within 50 s. In contrast, the peak acute hypertensive response was significantly (P<0.05) reduced in hypothermic rats (154.8 mm Hg, 10 s after TBI) and returned to baseline at 30 s after injury. These results demonstrate that moderate hypothermia greatly reduces endogenous vascular protein-tracer passage into and perhaps through the brain. This reduction may, in part, be related to hypothermia-induced modulation of the systemic blood pressure response to TBI.Supported by Grants NS 12587 (BGL), NS 29469 (JTP), NS 19550 (LWJ) from the National Institutes of Health and Grant H133B80029 (BGL) from the National Institute on Disability and Rehabilitation Research, the U.S. Department of Education