p53、Ki-157、c-Myc在大肠癌手术切缘组织中的联合检测及其意义

我们应用组织芯片技术和免疫组织化学方法观察110例大肠癌组织和相应切缘(癌旁5 cm)组织中p53、Ki-67、c-Myc的表达进行检测~([1-2]),探讨它们作为大肠癌手术切缘联合检测分子标记物的特异性. 一、材料与方法1.材料:随机调取南京大学医学院附属鼓楼医院病理科2002至2004年存档的各类大肠癌组织和相应切缘组织标本各110例.所有病例临床资料完整,所有标本均经10%福马林固定,常规处理后石蜡包埋,保存完好.p53兔抗人单克隆抗体工作液和Ki-67鼠抗人单克隆抗体工作液购自北京中杉公司;c-Myc鼠抗人单克隆抗体浓缩液购自美国Thermo Fisher-Scientific公司,稀释成浓度为1:300的工作液.     

大肠癌肿瘤浸润CD4和CD8 T淋巴细胞的表达与预后的关系

目的 探讨大肠癌肿瘤浸润淋巴细胞(TTL)表达的变化与预后的关系.方法 收集16年间收治的生存期≥5年及≤3年的大肠癌患者标本各30例,采用免疫组化方法及流式细胞术检测大肠癌组织中肿瘤浸润CD4和CD8 T淋巴细胞的表达情况,并分析它们与临床病理参数及患者预后的关系.结果 免疫组化法检测CD4和CD8 T淋巴细胞在大肠癌组织内表达率分别为28.3％(17/60)及41.6％(25/60),大肠癌癌巢内的CD4和CD8表达均明显低于间质内(均P＜0.05),癌组织中CD4和CD8表达与患者年龄、性别、淋巴结转移及组织分化程度无关,而与患者肿瘤Dukes分期及预后相关;A+B期患者CD4和CD8阳性表达率均明显高于C+D期患者;而生存期≥5年组CD4和CD8表达率均明显高于≤3年死亡组(均P＜0.05).流式细胞术检测显示大肠癌组织中浸润淋巴细胞CD4/CD8比值与肿瘤Dukes分期及预后有关(P＜0.05).结论 大肠癌组织肿瘤浸润CD4和CD8 T淋巴细胞可以作为患者预后的指标;癌组织中TTL低密度浸润提示预后不良.     

Kiss-1和KAI-1在大肠癌组织中的表达及临床意义

目的:研究转移抑制基因Kiss-1和KAI-1在大肠癌组织中的表达水平及临床意义.方法:采用原位杂交技术检测61例大肠癌组织和20例癌旁正常组织中Kiss-1和KAI-1的表达情况.结果:大肠癌组织中Kiss-1和KAI-1的阳性表达率明显低于癌旁正常组织(P<0.05),无淋巴结转移和高分化的大肠癌组织中Kiss-1和KAI-1的阳性表达率及评分显著高于有淋巴结转移和低分化病例.DukesA、B期的大肠癌组织中Kiss-1和KAI-1的阳性率显著高于DukesC、D期.二者表达与大肠癌其他病理特征无明显相关性.大肠癌组织中Kiss-1和KAI-1表达评分呈正相关(f=0.98,P<0.01).结论:Kiss-1和KAI-1可能在大肠癌的发生、发展和转移过程中起着重要作用,二者表达水平可作为反映大肠癌侵袭、转移及预后的重要生物学标志,同时可用于评价大肠癌侵袭、转移风险.     

大肠癌C-myc基因转录水平及细胞动力学研究

我们采用定量逆转录多聚酶链式反应、免疫组织化学和流式细胞计等方法对大肠癌标本进行检测 ,探索大肠癌发生的细胞分子生物学机制 ,为指导大肠癌的切端提供依据。材料与方法1.实验标本 :大肠癌手术切除标本 30例 ,结肠癌 2 1例 ,直肠癌 9例 ,其中ＤｕｋｅｓＢ期 17例 ,Ｃ期 13例。每例标本分别取材于肿瘤组织 (Ｔ)、癌旁 2ｃｍ(Ｐ2 )、癌旁 5ｃｍ(Ｐ5)及切端正常结肠组织 (Ｎ)。2 .定量逆转录多聚酶链式反应 (Ｑ ＲＴ ＰＣＲ)检测转录水平 :ＴＲＩｚｏｌ提取细胞总ＲＮＡ ,逆转录合成ｃＤＮＡ。以 β ａｃｔｉｎ为内参照 ,其上游引物 :5’…     

利用组织芯片研究VEGF-C和MMP-9在大肠癌中的表达及其意义

目的:探讨VEGF-C和MMP-9在大肠癌中的表达及其意义。方法:利用免疫组化技术检测组织芯片(包括110例大肠癌组织和20例癌旁正常组织)中VEGF-C及MMP-9的表达。结果:VEGF-C和MMP-9在大肠癌中表达的阳性率分别为82.7%和80.0%,明显高于两者在癌旁正常组织中的表达(5.0%,10.0%)(P<0.05)。VEGF-C和MMP-9在Dukes C/D期大肠癌中表达的阳性率分别为90.7%和88.9%,明显高于两者在Dukes A/B期大肠癌中的表达(73.2%,69.6%)(P<0.05)。在大肠癌组织中,VEGF-C与MMP-9的阳性表达呈低度正相关(r=0.253,P<0.05)。结论:VEGF-C和MMP-9的表达与大肠癌的发生发展及浸润转移密切相关,两者的高表达提示大肠癌恶性程度较高。     

P57蛋白在胃癌中的表达及其临床意义

P57是一种候选的肿瘤抑制基因。我们通过检测P57蛋白在胃癌中的表达,探讨其与胃癌病理学各因素之间的关系及其临床意义。1.材料与方法:选用我院2002年1月至2003年1月胃癌根治标本30例。其中男18例、女12例,年龄24～74(平均52.8)岁。高、中分化胃癌11例,低分化胃癌19例。早期原发癌7例,进展期胃癌23例。选12例胃正常黏膜组织标本为对照组。组织标本经10%甲醛固定,石蜡包埋,常规切片,采用免疫组化SP法进行染色。一抗为鼠抗人P57单克隆抗体,二抗为生物素标记的羊抗鼠抗体。所用的抗体及SP免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物…     

Smad4mRNA、TGF-β1在骨肿瘤中的表达及意义

本研究旨在观察Smad4mRNA、TGF β1在骨肿瘤中的表达及意义,现将结果报道如下。一、材料与方法收集我院及中南大学湘雅二院手术切除骨软骨瘤标本15例和骨恶性肿瘤标本45例。病理类型包括成骨肉瘤2 0例、软骨肉瘤15例,其他类型10例(恶性纤维组织瘤3例、软骨母细胞瘤4例和滑膜肉瘤3例) ;组织学分级I级2 0例、Ⅱ级13例和Ⅲ级12例;骨恶性肿瘤中发生原发灶外转移3 2例(71% )。Smad4原位杂交试剂盒及DAB显色试剂盒均购自武汉博士德公司;兔抗人TGF β1多克隆抗体、生物素标记羊抗兔IgG和SABC试剂购自Sigma公司。TGF β1染色方法为常规AB…     

大肠良恶性肿瘤PTEN/MMAC1/TEP1肿瘤抑制基因的蛋白表达研究

目的 :探讨 PTEN/ MMAC1/ TEP1与大肠癌的发生 ,发展的相关性。方法 :应用 S- P免疫组织化学方法检测 2 3例正常大肠粘膜、 2 8例大肠腺瘤和 75例大肠癌组织中 PTEN/ MMAC1/ TEP1蛋白的表达情况。结果 :2 3例正常大肠粘膜组织中PTEN蛋白表达阳性率为 91.3% (2 1/ 2 3) ,2 8例大肠腺瘤组织中 PTEN蛋白表达阳性率均为 89.3% (2 5 / 2 8) ,75例大肠癌组织中 PTEN蛋白表达阳性率为 6 8% (5 1/ 75 ) ,与正常大肠粘膜及大肠腺瘤差异有显著意义 (P <0 .0 1) ;有淋巴结转移的2 8例大肠癌阳性率为 43% (12 / 2 8) ,无淋巴结转移的 47例大肠癌阳性率为 83% (39/ 47) ,两者差异有显著意义 (P <0 .0 1) ;有远处器官转移的 2 3例大肠癌中阳性率为 43.5 % (10 / 2 3) ,无远处器官转移的 5 2例大肠癌阳性率为 78.8% (4 1/ 5 2 ) ,差异有显著意义 (P〈0 .0 1) ;6 0例大肠腺癌中蛋白表达阳性率为 81.2 % (4 9/ 6 0 ) ,15例粘液癌蛋白表达阳性率为 13.3% (2 / 15 ) ;两者之间有显著性差异 (P <0 .0 1) ;6 0例大肠腺癌中高 /中分化大肠腺癌 37例表达阳性率为 97.3% (36 / 37) ,低分化大肠腺癌 2 3例中表达阳性率为 5 6 .5 % (13/ 2 3) ,两者差异有显著意义 (P <0 .0 1)。结论 :PTEN/ MMAC1/ TEP1与大肠癌的发生、发展有相关     

胆囊癌血管生成关系与一氧化氮及碱性成纤维生长因子的研究

我们检测胆囊癌组织及正常胆囊组织中诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)及碱性成纤维生长因子 (bFGF)的表达及测定胆囊癌组织中微血管密度 (MVD) ,探讨一氧化氮 (NO)及bFGF与胆囊癌血管生成的关系。一、材料和方法1.临床材料 :收集本院 1997年 6月～ 2 0 0 1年 2月间经手术切除的胆囊癌标本 40例。标本经福马林固定 ,石蜡包埋 ,所有标本均经苏木素 伊红 (HE)染色病理证实。男 11例 ,女 2 9例 ,年龄(5 8.6± 12 .6)岁。另取正常胆囊组织 8例标本作为对照。2 .实验试剂 :兔抗人F Ⅷ相关抗原多克隆抗体购自美国Sigma公司 ,兔抗人iNOS多克…     

食管癌组织的Th2漂移研究

我们应用即用型SABC免疫组织化学法(SP法)研究食管癌上皮细胞及其浸润淋巴细胞(TIL)白细胞介素2和白细胞介素10的表达,探讨Th1和Th2的意义。一、材料和方法1.材料:20例食管癌组织及其对照癌旁组织,均为石蜡标本,所有标本术前未经放疗、化疗和免疫治疗。试剂:鼠抗人IL2、IL10单克隆抗体,为荷兰IQproduct公司产品,SABC免疫组织化学药盒为美国Maxim公司产品。2.方法SP法:石蜡切片经高压预处理修复抗原,以PBS和正常鼠血清代替一抗作阴性对照,以已知阳性标本做阳性对照。检测IL2、IL10在食管癌组织及其对照癌旁组织中的表达。结果判…     

α-catenin在大肠癌表达及与转移相关性的分析

目的 检测粘附分子α-catenin的表达与人大肠癌转移的关系。方法 应用免疫组化SABC方法,测定45例经病理证实的大肠癌标本中α-catenin的表达。结果 α-catenin表达与大肠癌淋巴结转移和远处转移明显相关。α-catenin在大多数正常粘膜上皮细胞呈阳性表达,而在大肠癌标本中阳性率仅为44.44％。在有转移的病例中阳性率为21.05％。结论 α-catenin与大肠癌转移明显相关。     

25 大肠癌p27kip1，Skp2蛋白表达及临床意义

为探讨p27kip1和Skp2在正常大肠黏膜、大肠腺瘤、大肠癌之间的表达差异及其表达与大肠癌临床病理特征的关系,笔者采用免疫组化S P法检测15例正常大肠黏膜、15例大肠腺瘤、50例结直肠癌组织中p27kip1和Skp2的表达情况。结果示,（1）p27kip1在大肠癌组织中的表达明显低于大肠黏膜、大肠腺瘤组（P<0.05），在各病理分化程度的大肠癌组织中表达无明显差异（P>0.05），在有淋巴结转移的大肠癌组织中p27kip1表达明显低于无淋巴结转移组（P< 0.05），DukesC，D期大肠癌组织中p27kip1表达明显低于DukesA，B期大肠癌组织（P< 0.05）;（2）Skp2在大肠癌组织中的表达明显高于正常大肠黏膜、大肠腺瘤组（P< 0.05），在低分化大肠癌组织中的表达明显高于高分化大肠癌组织（P< 0.05），在有无淋巴结转移大肠癌组织中，在DukesA，B期及C，D期大肠癌组织表达均无明显差异（P> 0.05）;（3）在大肠癌中p27kip1与Skp2表达呈显著负相关(r＝－0.470，P<0.01)。 提示 (1) p27kip1的低表达与大肠癌淋巴结转移、Dukes分期有关，p27kip1低表达可能合并淋巴结转移或高Dukes分期。 (2) 在大肠癌组织中Skp2与p27kip1的表达呈负相关。     

抑癌基因P53突变与肾细胞癌关系的研究

我们采用Southern杂交和DNA聚合酶链反应一单链构象多态性（PCR－SSCP）分析等方法检测27例肾细胞癌P53基因突变，以探讨肾细胞癌的发生与P53基因突变的相关性。现报告如下。1材料与方法1．1实验材料从本院手术切除的27例经病理诊断的肾细胞癌标本中提取DNA。2例正常肾组织作为对照。5对P53引物由军事医学科学院生物工程研究所合成。peR扩增试剂盒、限制性核酸内切酶和缺口翻译试剂盒均购自华美生物工程公司．α－32P－dCTP购自福瑞生物工程公司。1．2分析方法Southem杂交分析：取10μg组织标本DNA，用限制性内切酶HindⅢ1消化，…     

大肠癌患者中调节性T细胞的表达及其临床意义

目的 观察CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)及其特异性标志物叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)蛋白在大肠癌患者外周血及淋巴组织中的变化情况,以了解Tregs在肿瘤免疫中的作用.方法 流式细胞仪检测30例大肠癌患者术前7 d、术后14 d外周血Tregs及CD4+、CD8+T细胞比例.应用免疫组织化学染色定性分析大肠癌患者手术切除标本中淋巴结组织Foxp3蛋白的表达水平.结果 大肠癌患者术前外周血中Tregs比例显著高于对照组(t=2.843,P<0.01).术前外周血CD8+T细胞比例与Tregs比例呈负相关(rs=-0.849,P<0.01).术后Tregs比例明显降低(t=6.16,P<0.01).淋巴结转移患者术前Tregs比例及Foxp3蛋白淋巴结检出率明显高于未转移者(Z=-2.56,P<0.01;χ2=4.474,P<0.05).TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者外周血Tregs比例明显高于Ⅱ期患者(Z=1.818,P<0.01).结论 大肠癌患者外周血Tregs比例显著增高,提示与肿瘤患者细胞免疫功能抑制有关.并且可能与肿瘤的转移有关.大肠癌患者淋巴结中特异性Foxp3蛋白表达,提示其在体内与抗肿瘤免疫有关.     

Fas配体mRNA在大肠癌组织的表达及其临床意义

目的研究Fas配体mRNA表达与大肠癌生物学行为及临床预后的关系.方法应用原位杂交方法检测Fas配体mRNA在52例大肠癌组织中的表达.结果大肠癌Fas配体mRNA表达阳性率为58%(30/52).存在癌周炎性反应的大肠癌组织中FasLmRNA阳性率为25%(3/12),而无癌周炎性反应的大肠癌阳性率为68%(27/40),两者差异有显著性意义(P＜0.05).Fas配体mRNA表达在DukesB期组38%(10/26),C期组为73%(16/22),D期组为100%(4/4),差异有显著性(P＜0.05).FasLmRNA阳性组术后5年累积生存率为50%(15/30),明显低于阴性组86%(19/22),两者差异有显著性意义(P＜0.05).结论Fas配体对大肠癌临床分期和预后起重要作用.     

Kiss-1在大肠癌中表达的研究及其与NF-κB的关系

目的 探讨Kiss-1与NF-κB在大肠癌中的表达及其与生物学行为的关系,并分析两者的关系.方法 应用免疫组化SP法检测Kiss-1、NF-κB在103例大肠癌及正常大肠黏膜组织中的表达.结果 (1)Kiss-1蛋白在大肠癌中的阳性率为43.69%(45/103),在正常组织中的阳性率为79.61%(82/103),两者间的差异有统计学意义(P<0.05),Kiss-1在癌组织的表达明显低于对照组;NF-κB蛋白在大肠癌中的阳性率为66.02%(68/103),在正常组织中的阳性率为22.33%(23/103),两者间的差异有统计学意义(P<0.05),NF-κB在癌组织的表达明显高于对照组.(2)Kiss-1在大肠癌中的表达与淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05).(3)NF-κB在大肠癌中的表达与淋巴结转移、临床分期及浸润深度有关(P<0.05),Kiss-1及NF-κB与性别、年龄等其他临床病理参数无关.(4)Kiss-1与NF-κB在大肠癌中的表达呈负相关(χ2=6.7811,P<0.05).结论 Kiss-1和NF-κB的异常表达可能与大肠癌的发生发展密切相关,两者在肿瘤的恶性进程中扮演重要角色.     

Lxn,bcl-2,c-myc在胰腺癌干细胞中的表达及意义

本研究通过免疫磁珠分选技术分选出胰腺癌细胞株Miapaca-2中的CD133+细胞,并检测lxn,bcl-2,c-myc在CD133+与CD133-细胞中表达,探讨其可能的生物学意义. 材料与方法 1.主要试剂:免疫磁珠分选设备及试剂(CD133Microbead Kit,human),流式抗体[CD133/2(293c3)-PE]均购自德国Miltenyi公司,兔抗人lxn多克隆抗体(ab103485),兔抗人bcl-2多克隆抗体(ab18210),鼠抗人c-myc单克隆抗体(ab32)均购自英国Abcam公司;鼠抗人β-actin单克隆抗体购自碧云天;Trizol试剂购自美国Invitrogen公司;逆转录试剂盒(RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit)购自美国的Fermentas(MBI)公司;荧光实时定量PCR试剂盒(SYBR(R)Premix Ex TaqTM)购自大连宝生物公司;PCR引物序列由上海基康生物公司设计合成.     

血管内皮细胞生长因子与增殖细胞核抗原联合检测用于大肠癌临床预后判定

目的　探讨大肠癌血管内皮细胞生长因子 (VEGF)及增殖细胞核抗原 (PCNA)与大肠癌术后有无潜在性转移及复发的关系。方法　对 5 9例已获确诊的大肠癌石蜡标本作免疫组化SP法染色 ,检测其VEGF及PCNA的表达 ,并与 12例正常大肠组织和 16例大肠腺瘤进行比较。结果　大肠癌VEGF的表达明显高于大肠腺瘤 (P<0 .0 5 ) ;DukesA +B期大肠癌VEGF的表达与DukesC +D期比较 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;术后复发组VEGF的表达明显高于无复发组 (P<0 .0 5 )。增殖活性表达提示 ,大肠癌分化程度越低 ,有淋巴结或肝转移时 ,其PCNA指数增高 ;术后有、无复发者之间 ,其PCNA指数差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论　大肠癌VEGF与PCNA的表达与肿瘤的浸润、转移密切相关。手术时虽然无明显转移灶 ,VEGF阳性及PCNA活性增强时仍可能有潜在的转移存在。     

PTEN蛋白在肾癌组织中的表达及意义

与张力蛋白在 10号染色体同源缺失的磷酸酶 (ＰＴＥＮ)可抑制酪氨酸去磷酸化 ,对细胞增殖起负调控作用。我们采用免疫组化方法检测 44例肾癌组织中抑癌基因ＰＴＥＮ蛋白表达 ,并分析其临床意义。材料与方法　手术切除并经病理证实的肾癌标本 44例。男 2 3例 ,女 2 1例。平均年龄 5 4岁。病理类型 :透明细胞癌3 3例 ,颗粒细胞癌 4例 ,混合细胞癌 7例。Ｒｏｂｓｏｎ分期 :Ⅰ期 8例 ,Ⅱ期 2 2例 ,Ⅲ期 10例 ,Ⅳ期 4例。 15例癌旁肾组织及 10例因其它疾病切除的正常肾组织作对照。抗ＰＴＥＮ多克隆抗体购自ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司 ,工作浓度 1∶…     

核不均一性核糖核蛋白和C-myc在大肠癌中的表达及其相关性

目的 检测大肠癌组织中核不均一性核糖核蛋白(hnRNPA1)和原癌基因(C-myc)的表达,探讨两者在转录调控通路中的相互作用.方法 收集60例大肠癌组织标本,免疫组织化学及半定量聚合酶链反应法(RT-PCR)检测hnRNPA1和C-myc蛋白及基因表达情况.结果 60例大肠癌标本中有35例(58.3%)hnRNPA1蛋白阳性表达,且表达强度随大肠癌分化程度降低而递增(P<0.05);C-myc蛋白共有38例(63.3%)阳性表达;RT-PCR见hnRNPA1阳性标本占96.7%(58/60),C-myc基因阳性标本占91.7%(55/60),两者表达均随大肠癌的分化程度递减而增加(P<0.05);hnRNPA1和C-myc在基因和蛋白质水平呈正相关,r值为0.32和0.42.结论 hnRN-PA1和C-myc在不同分化程度的大肠癌中表达差异有统计学意义,两者在基因和蛋白表达水平上均呈正相关.